敲除消皮素D对小鼠缺血再灌注损伤诱导的急性肾损伤炎症反应的保护效应

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作者 陈荣誉 贾静 +9 位作者 谭万林 梁露群 许晓晓 阮媛媛 余雄 王方芳 陈钰婷 彭玉琳 郭兵 王圆圆 《贵州医科大学学报》 2025年第1期1-8,38,共9页

目的探讨敲除消皮素D(gasdermin D,GSDMD)对小鼠缺血再灌注损伤诱导的急性肾损伤炎症反应的保护效应。方法10只雄性C57BL/6J小鼠随机均分为假手术组(sham)和I/R组,另5只GSDMD^(-/-)小鼠作为基因敲除组(I/R+GSDMD^(-/-));sham组小鼠仅钝... 目的探讨敲除消皮素D(gasdermin D,GSDMD)对小鼠缺血再灌注损伤诱导的急性肾损伤炎症反应的保护效应。方法10只雄性C57BL/6J小鼠随机均分为假手术组(sham)和I/R组,另5只GSDMD^(-/-)小鼠作为基因敲除组(I/R+GSDMD^(-/-));sham组小鼠仅钝性剥离肾蒂,另两组小鼠夹闭双侧肾蒂30 min构建I/R模型;术后24 h取血样和肾脏组织,检测各组血清肌酐含量;采用H&E染色观察肾组织病理改变,免疫组织化学(IHC)检测肾损伤因子-1(kidney injury molecule 1,KIM-1)表达,Western blot检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)、KIM-1、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、NOD结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、GSDMD、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果I/R组小鼠血清肌酐显著高于sham组(P<0.05),I/R+GSDMD^(-/-)组小鼠血清肌酐低于I/R组(P<0.05);H&E染色显示,sham组小鼠肾小管和肾小球形态结构清晰,I/R组肾小管上皮细胞出现肿胀、脱落、坏死,I/R+GSDMD^(-/-)组肾脏病变明显改善;免疫组织化学结果显示,与sham组相比,I/R组小鼠肾脏组织KIM-1蛋白水平上调,敲除GSDMD后KIM-1蛋白水平较I/R组降低;Western blot结果显示,与I/R组相比,I/R+GSDMD^(-/-)组小鼠肾脏组织NGAL、KIM-1、Caspase-1、NLRP3、GSDMD、IL-1β、MCP-1、IL-6蛋白水平下调(P<0.05)。结论敲除GSDMD可改善肾功能减轻缺血再灌注损伤诱导的急性肾损伤,其机制可能是通过抑制GSDMD介导的细胞焦亡和炎症反应来实现的。 展开更多

关键词 缺血再灌注损伤 消皮素d 细胞焦亡 炎症 急性肾损伤

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黄连大黄药对调控ROS/NF-κB/GSDMD信号通路对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞焦亡的影响 被引量：1

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作者 陈源 李振华 +1 位作者 岳仁宋 杨茂艺 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第11期61-66,I0019,I0020,共8页

目的基于活性氧(reactive oxygen species,ROS)/核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)焦亡信号通路探讨黄连大黄药对发挥2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)胰岛β细胞保护作用... 目的基于活性氧(reactive oxygen species,ROS)/核转录因子κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)焦亡信号通路探讨黄连大黄药对发挥2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)胰岛β细胞保护作用的分子机制。方法选取自发性T2DM大鼠—Goto-Kakizaki(GK)大鼠构建动物模型,24只符合成模标准的GK大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(0.1 g·kg^(-1)·d^(-1))、黄连大黄高剂量组(4.72 g·kg^(-1)·d^(-1))及低剂量组(2.36 g·kg^(-1)·d^(-1)),并随机选取6只正常Wistar大鼠设为正常组,连续灌胃干预8周后采用免疫荧光法检测大鼠胰腺组织胰岛素(insulin,INS)阳性表达,RT-PCR法检测细胞增殖相关细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)、髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-Myc)mRNA表达,TUNEL染色检测胰岛细胞死亡,流式细胞术检测ROS水平,Western blot法检测NF-κB p65、GSDMD及消皮素D N端片段(gasdermin D-N,GSDMD-N)蛋白的表达,ELISA法检测白介素1β(interleukin 1β,IL^(-1)β)水平。结果与正常组比较,模型组大鼠胰腺组织INS平均光密度值显著降低,CCND1、c-Myc mRNA表达显著下调,TUNEL阳性率、ROS水平和NF-κB p65、GSDMD-N蛋白表达以及IL-1β水平均显著升高(P均<0.01);与模型组比较,黄连大黄低剂量组INS平均光密度值有效升高,CCND1、c-Myc mRNA表达有效上调,TUNEL阳性率、ROS水平以及NF-κB p65、GSDMD-N蛋白表达、IL-1β水平均明显降低(P<0.01,P<0.05),黄连大黄高剂量组仅c-Myc mRNA表达有效上调,NF-κB p65蛋白表达明显降低(P均<0.05)。结论黄连大黄药对可能通过ROS/NF-κB/GSDMD信号通路抑制细胞焦亡,促进增殖进而起到保护T2DM大鼠胰岛β细胞的作用。 展开更多

关键词 2型糖尿病 胰岛Β细胞 焦亡 消皮素d 黄连大黄

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基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨清化饮对慢性萎缩性胃炎大鼠胃上皮细胞焦亡的影响 被引量：1

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作者 林翔英 王鑫 +2 位作者 钟国栋 黄铭涵 林建龙 《实用中医内科杂志》 2024年第11期32-35,I0016,I0028,共6页

目的观察清化饮对慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠胃上皮NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)细胞焦亡通路的影响,探讨清化饮治疗CAG的可能机制。方法随机将大鼠分为空白对照组(n=8)及... 目的观察清化饮对慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠胃上皮NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)细胞焦亡通路的影响,探讨清化饮治疗CAG的可能机制。方法随机将大鼠分为空白对照组(n=8)及造模组(n=28),采用“氨水+去氧胆酸钠+乙醇法灌胃+高脂高糖饮食+人工气候箱饲养”复合法建立病证结合CAG大鼠模型,造模成功后将其随机分为模型组、维酶素治疗组和清化饮治疗组(n=8)。采用HE染色观察大鼠胃黏膜病变情况,Real-time PCR法检测胃组织NLRP3、Caspase-1、β-catenin、GSDMD mRNA表达情况,ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、IL-18水平。结果与空白对照组相比,模型组大鼠炎症细胞浸润明显,胃黏膜固有腺体萎缩,胃黏膜组织中NLRP3、Caspase-1、β-catenin mRNA表达水平显著升高(P<0.01),GSDMD mRNA表达水平显著降低(P<0.01);血清IL-1β、IL-6、IL-18含量显著上升(P<0.01)。与模型组比较,清化饮治疗组胃黏膜固有腺体萎缩情况及炎症程度明显改善,NLRP3、Caspase-1、β-catenin mRNA表达蛋白表达水平均显著下降(P<0.01),GSDMD mRNA表达水平上升(P<0.01);血清IL-1β、IL-6、IL-18含量显著下降(P<0.01)。结论清化饮可有效改善CAG大鼠胃黏膜组织病理改变,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路,抑制细胞焦亡,从而降低胃黏膜炎症水平有关。 展开更多

关键词 清化饮 细胞焦亡 慢性萎缩性胃炎 NOd样受体蛋白3 胱天蛋白酶-1 消皮素d

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基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制 被引量：1

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作者 杨晨光 石玉姣 +6 位作者 乔文博 刘永成 刘思雨 梁小雨 李知轩 张贺 董国菊 《环球中医药》 CAS 2024年第6期999-1006,共8页

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated pr... 目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。 展开更多

关键词 射血分数保留心力衰竭 前临床心衰 射血分数保留心力衰竭早期 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1/消皮素d信号通路 苓桂气化方

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FTO、GSDMD在胃癌组织中的表达及其作用机制研究

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作者 黄珊珮 韦二丹 +7 位作者 朱丽叶 宁绮婷 陈形梅 陈妮 吴江妮 丘新泽 黄杰安 刘诗权 《中国临床新医学》 2024年第4期400-406,共7页

目的探讨肥胖相关蛋白(FTO)与消皮素D(GSDMD)在胃癌(GC)组织中的表达及其作用机制。方法通过TIMER 2.0数据库分析FTO及GSDMD在GC组织中的差异表达。收集2022年1月至2023年3月广西医科大学第二附属医院手术切取的GC组织及其对应癌旁组织... 目的探讨肥胖相关蛋白(FTO)与消皮素D(GSDMD)在胃癌(GC)组织中的表达及其作用机制。方法通过TIMER 2.0数据库分析FTO及GSDMD在GC组织中的差异表达。收集2022年1月至2023年3月广西医科大学第二附属医院手术切取的GC组织及其对应癌旁组织(距离肿瘤边缘3~5 cm)各45例,并收集患者的临床病理资料。采用免疫组织化学染色法检测组织中FTO、GSDMD的表达情况,分析其与患者临床病理特征的关联性。通过转染低表达FTO慢病毒构建低表达FTO的AGS细胞(FTO低表达组),并以转染空载体慢病毒的细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测两组细胞FTO mRNA、GSDMD mRNA的表达水平;采用细胞划痕实验及细胞迁移实验分析两组细胞迁移能力。结果基于TIMER 2.0数据库的分析结果及免疫组织化学染色结果显示,FTO、GSDMD在GC组织中呈高表达(P<0.05)。FTO和GSDMD高表达均与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。细胞实验结果显示,FTO低表达组的GSDMD mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),划痕愈合率更低,细胞迁移数更少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论FTO可能通过调控GSDMD表达促进GC细胞转移。 展开更多

关键词 胃癌 肥胖相关蛋白 消皮素d 细胞迁移

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基于Nrf2-NLRP3-GSDMD信号通路探讨肾消解毒通络方含药血清抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡的分子机制 被引量：6

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作者 李晓霞 马国平 +6 位作者 刘坤 丁宝珠 钟意 肖郁朋 田曦杰 梁文杰 杨帆 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第12期100-104,I0044-I0046,共8页

目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2 related factor2,Nrf2)-Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)信号通路,探究肾消解毒通络方(Shenxiao Jiedu Tongluo Recipe,SJTR)含... 目的基于核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid2 related factor2,Nrf2)-Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)信号通路,探究肾消解毒通络方(Shenxiao Jiedu Tongluo Recipe,SJTR)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1焦亡的影响及分子机制。方法金黄地鼠灌胃给药制备SJTR含药血清。体外常规培养HBZY-1细胞,随机分为对照组、模型组、抑制剂组及中药低中高剂量6组。对照组细胞加入正常血清在低糖培养液中培养,模型组加入正常血清在高糖培养液中培养,抑制剂组加入正常血清及MCC950在高糖培养液中培养,中药低中高剂量组分别加入SJTR含药血清在高糖培养液中培养,干预24 h后收集细胞及上清液,ELISA检测各组细胞上清液中白介素-1β(Interleukin,IL-1β)、IL-18(Interleukin,IL-18)、IL-6(Interleukin,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD);RT-PCR检测HBZY-1细胞Nrf2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β分子mRNA表达;Western blot法检测各分子蛋白的表达;免疫荧光法检测NLRP3分子蛋白的表达及分布;LDH释放实验检测细胞膜损伤情况;TUNEL染色检测DNA损伤情况。结果与对照组比较,模型组细胞上清液各炎症因子水平升高,MDA表达升高,SOD表达降低(P<0.05);细胞Nrf2分子呈低表达,IL-1β分子mRNA表达升高,NLRP3、Casepase-1、GSDMD分子mRNA及蛋白表达增强(P<0.05);上清液LDH含量增高(P<0.05);TUNEL阳性细胞增多。与模型组比较,中药中高剂量组及抑制组细胞上清液炎症因子含量下降,MDA水平降低而SOD升高(P<0.05);细胞Nrf2分子表达上调,而NLRP3、Caspase-1、GSDMD等分子表达明显降低(P<0.05);上清液LDH含量下降(P<0.05);TUNEL阳性细胞减少。结论SJTR含药血清可通过调控Nrf2-NLRP3-GSDMD信号通路各分子表达,抑制高糖诱导的HBZY-1细胞氧化应激及炎症反应,拮抗细胞焦亡,发挥细胞保护作用。 展开更多

关键词 肾消解毒通络方含药血清 HBZY-1细胞 焦亡 核因子E2相关因子2 Nod样受体蛋白3 消皮素d

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电针宁神穴对脑出血大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡的影响

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作者 茹宝清 宋春华 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第22期3101-3106,共6页

目的基于含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路介导的细胞焦亡途径,探讨电针宁神穴对脑出血大鼠的脑神经保护作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组、脑出血+电针... 目的基于含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)通路介导的细胞焦亡途径,探讨电针宁神穴对脑出血大鼠的脑神经保护作用。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组、脑出血+电针组,每组6只。脑出血组和脑出血+电针组大鼠采用脑内自体动脉血二次注射法制备脑出血模型,脑出血+电针组于术后12 h开始采用电针针刺双侧宁神穴,每次30 min,1次/d,连续干预7 d。假手术组仅模拟手术创伤过程,不注入自体血;正常组不给予任何干预手段。采用Longa评分法评定各组大鼠术后24 h、干预7 d后脑神经功能损伤程度;干预7 d后处死各组大鼠,采用干湿比重法测定脑组织含水量,HE染色观察脑组织病理形态,ELISA法检测脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)含量,Western blot法检测脑组织中NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD蛋白表达情况,免疫组化法检测脑组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白阳性表达情况。结果干预7 d后,脑出血组大鼠神经行为学评分、脑组织含水量、IL-1β和IL-18含量及脑组织中NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD蛋白相对表达量和NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白阳性表达平均积分光密度值均明显高于正常组、假手术组(P均<0.05),出血区及周围脑组织水肿、炎细胞浸润;脑出血+电针组大鼠上述各指标均明显低于脑出血组(P均<0.05),出血区及周围脑组织水肿和炎细胞浸润明显减轻。结论电针宁神穴可以明显减轻脑出血大鼠脑神经和脑组织损伤,机制可能与下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路相关蛋白表达,抑制细胞焦亡有关。 展开更多

关键词 脑出血 电针 宁神穴 细胞焦亡 含NLR家族Pyrin域蛋白3 半胱氨酸蛋白水解酶1 消皮素d

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瑞马唑仑调节NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路对LPS诱导的神经元焦亡的影响

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作者 耿长振 王利 叶兰 《检验医学与临床》 CAS 2024年第16期2436-2441,共6页

目的 探讨瑞马唑仑(REM)调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的神经元焦亡的影响。方法 将对数期小鼠海马神经元HT22细胞随机分为正常对照组(Ctrl组)、LPS诱导... 目的 探讨瑞马唑仑(REM)调节Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的神经元焦亡的影响。方法 将对数期小鼠海马神经元HT22细胞随机分为正常对照组(Ctrl组)、LPS诱导组(LPS组,10 mg/L LPS)、低浓度REM组(REM-低组,160μmol/L REM)、高浓度REM组(REM-高组,320μmol/L REM)和REM-高+NLRP3激活剂尼日利亚菌素组(REM-高+尼日利亚菌素组,320μmol/L REM+10μmol/L尼日利亚菌素)。除Ctrl组外,其余各组HT22细胞均使用LPS进行诱导。各组加药处理后,采用细胞计数试剂盒8测定HT22细胞的吸光度(A值)。采用Hoechst33342/碘化吡啶(PI)染色检测HT22细胞焦亡率。采用酶联免疫吸附试验检测HT22细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HT22细胞中NLRP3信使RNA(mRNA)、Caspase-1 mRNA、GSDMD mRNA表达水平。采用蛋白质印迹法检测HT22细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达水平。结果 LPS组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于Ctrl组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于Ctrl组(P<0.05)。REM-低组和REM-高组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著高于LPS组,且REM-高组高于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05),而REM-低组和REM-高组HT22细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平显著低于LPS组,且REM-高组低于REM-低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。REM-高+尼日利亚菌素组HT22细胞48、72 h的A_(450)值显著低于REM-高组(P<0.05),而细胞焦亡率、上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以及NLRP3、Caspase-1、GSDMD mRNA和蛋白表达水平、ASC蛋白表达水平均显著高于REM-高组(P<0.05)。结论 REM可能通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路减轻LPS诱导的神经元焦亡。 展开更多

关键词 瑞马唑仑 Nod样受体蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1/消皮素d信号通路 脂多糖 神经元 焦亡

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芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

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作者 史扬 董昭熙 +5 位作者 周盈 谢惠迪 郭燕 宿家铭 郑毅成 柳红芳 《现代中西医结合杂志》 CAS 2024年第1期1-7,共7页

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,... 目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号减弱,细胞骨架损伤状态改善。结论 芪地糖肾方可通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡相关通路激活改善高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤。 展开更多

关键词 糖尿病肾脏病 肾小球内皮细胞 芪地糖肾方 焦亡 NOd样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 消皮素d蛋白

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消皮素D在肝脏疾病病理进展中的作用

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作者 李飞燕 王明刚 +1 位作者 毛德文 桂雄斌 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期707-712,共6页

消皮素D(GSDMD)在免疫炎症反应效能放大及细胞焦亡过程中扮演重要角色。其被caspase-1切割活化后,GSDMD-N端快速释放,锚定在细胞膜上并形成孔隙,随即引发细胞焦亡,同时伴随强促炎因子IL-1β和IL-18大量释放。急/慢性肝脏炎症反应、细胞... 消皮素D(GSDMD)在免疫炎症反应效能放大及细胞焦亡过程中扮演重要角色。其被caspase-1切割活化后,GSDMD-N端快速释放,锚定在细胞膜上并形成孔隙,随即引发细胞焦亡,同时伴随强促炎因子IL-1β和IL-18大量释放。急/慢性肝脏炎症反应、细胞死亡是病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病、肝衰竭及肝细胞癌等肝脏疾病的共有病理特征。本文在概述GSDMD基本结构特点后,详细分析了其在多种肝脏疾病病理进展所扮演的重要角色。此外,提出了针对GSDMD为潜在治疗靶点的防治策略,可为肝脏疾病临床防治下一步研究的重点方向提供新的思路。 展开更多

关键词 肝疾病 消皮素d 病理过程 细胞死亡

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Ras鸟苷酸释放蛋白1、垂体同源框1、消皮素D在皮肤黑色素瘤中的表达及相关性研究 被引量：1

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作者 徐妍 张晓莉 +4 位作者 孙屏 陈许蕾 陈暑波 杭猛 徐伟 《国际检验医学杂志》 CAS 2022年第4期465-469,474,共6页

目的探讨Ras鸟苷酸释放蛋白1(RASGRP1)、垂体同源框1(PITX1)、消皮素D(GSDMD)在皮肤黑色素瘤中的表达及诊断价值。方法选取2013年1月至2019年12月在该院诊治的72例皮肤黑色素瘤患者为研究组,对其癌组织、癌旁组织标本进行免疫组化染色,... 目的探讨Ras鸟苷酸释放蛋白1(RASGRP1)、垂体同源框1(PITX1)、消皮素D(GSDMD)在皮肤黑色素瘤中的表达及诊断价值。方法选取2013年1月至2019年12月在该院诊治的72例皮肤黑色素瘤患者为研究组,对其癌组织、癌旁组织标本进行免疫组化染色,同时选取同期在该院进行整形手术的皮肤正常者40例为对照组。对待测标本中RASGRP1、PITX1、GSDMD表达进行检测,对比、分析RASGRP1、PITX1、GSDMD在不同临床特征皮肤黑色素瘤中的表达,探讨三者间的相关性及对皮肤黑色素瘤的诊断价值。结果与对照组比较,研究组癌组织中RASGRP1、PITX1表达降低,GSDMD表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。RASGRP1、PITX1、GSDMD的表达与皮肤黑色素瘤患者性别、年龄无关(P>0.05),与肿瘤最大径、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、其他部位转移、预后情况、临床分期有关(P<0.05),且肿瘤最大径≥2 cm、ClarkⅢ~Ⅴ期、低分化、淋巴结转移、其他部位转移、预后不良、Ⅳ期皮肤黑色素瘤患者RASGRP1、PITX1表达较低,GSDMD表达较高(P<0.05)。Pearson相关分析显示,RASGRP1与PITX1呈正相关(r=0.523,P=0.001),RASGRP1与GSDMD呈负相关(r=-0.612,P=0.001),PITX1与GSDMD呈负相关(r=-0.569,P=0.001)。RASGRP1、PITX1、GSDMD联合检测对皮肤黑色素瘤的诊断价值优于单项检测(P<0.05)。结论RASGRP1、PITX1在皮肤黑色素瘤组织中低表达,GSDMD呈高表达,RASGRP1、PITX1、GSDMD可作为皮肤黑色素瘤的检测指标。 展开更多

关键词 Ras鸟苷酸释放蛋白1 垂体同源框1 消皮素d 皮肤黑色素瘤

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寿胎丸通过调控Caspase-1/GSDMD通路发挥干预复发性流产的作用 被引量：10

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作者 乔宗惠 申思楠 +2 位作者 邓敦 张舒清 雷磊 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期2122-2125,共4页

目的基于蜕膜组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路,探讨寿胎丸对复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)小鼠的安胎机制。方法采用CBA/J×... 目的基于蜕膜组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路,探讨寿胎丸对复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)小鼠的安胎机制。方法采用CBA/J×BALB/c小鼠复制正常妊娠模型,作为空白组;CBA/J×DBA/2小鼠复制RSA模型,随机分为模型组,寿胎丸低、中、高剂量组。实验小鼠分别给予等体积蒸馏水和不同剂量寿胎丸药液(低剂量:3 g·kg^(-1)·d^(-1);中剂量:6 g·kg^(-1)·d^(-1);高剂量:12 g·kg^(-1)·d^(-1))治疗,连续灌胃14天,计算小鼠流产率;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠蜕膜组织病理形态;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中Caspase-1、白介素-1β(IL-1β)、白介素-18(IL-18)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠子宫蜕膜组织中Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白和mRNA表达情况。结果与空白组比较,模型组小鼠流产率明显增加,血清中Caspase-1、IL-1β、IL-18含量和子宫蜕膜组织中Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,寿胎丸中、高剂量均可有效降低小鼠流产率;降低小鼠血清中Caspase-1、IL-1β、IL-18含量以及子宫蜕膜组织中Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白和mRNA表达(P<0.01)。结论寿胎丸可能是通过抑制Caspase-1/GSDMD信号通路介导的子宫蜕膜细胞焦亡而发挥防治流产的作用。 展开更多

关键词 寿胎丸 复发性流产 子宫蜕膜 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素d(gsdmd) 细胞焦亡

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艾司洛尔通过阻断NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制早期脓毒症大鼠心脏炎症反应及焦亡 被引量：8

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作者 李盼 张欣桐 +2 位作者 刘景卓 马德胜 马莉 《中国急救医学》 CAS CSCD 2021年第9期790-796,共7页

目的研究艾司洛尔(Esmolol,ES)是否可通过抑制焦亡的经典通路进而发挥心脏保护作用。方法 72只大鼠随机分为假手术(sham operation,Sham)组、盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)组和ES组,每组24只。每组随机抽取8只大鼠观... 目的研究艾司洛尔(Esmolol,ES)是否可通过抑制焦亡的经典通路进而发挥心脏保护作用。方法 72只大鼠随机分为假手术(sham operation,Sham)组、盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)组和ES组,每组24只。每组随机抽取8只大鼠观察生存情况,剩余16只大鼠根据处理时间分为6 h和24 h两个亚组,每组8只。Sham组仅给予开腹,翻动盲肠处理;CLP组和ES组采用CLP法建立脓毒症大鼠模型。Sham组、CLP组持续经大鼠左颈内静脉泵入生理盐水6 h;ES组持续泵入艾司洛尔稀释液6 h。分别于相应时间点处死大鼠,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清IL-1β、IL-18水平,采用免疫印迹法(Western blot)检测心肌组织NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达水平;光学显微镜下观察心肌病理改变;荧光显微镜下观察心肌细胞焦亡情况。结果 (1)ELISA结果显示,与各时间点的Sham组比较,ES组大鼠血清IL-1β及IL-18水平均明显升高,24 h组最高;而与CLP组比较,上述因子水平在6 h与24 h均明显下降(P <0.05)。(2)Western blot结果显示,术后各时间点,大鼠心肌组织中焦亡经典通路相关蛋白[NOD样受体蛋白3(nucleotide-binding domain(NOD)-like receptor protein 3,NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1 (cysteinyl aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)、消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)]在CLP组均显示出高表达状态,较Sham组明显升高(P <0.05),24 h组表达量最高,而ES组各时间点上述蛋白表达水平均较CLP组有所减少,且差异统计学意义(P <0.05)。(3)病理结果显示,Sham组大鼠心肌组织可见轻微的病理损伤,CLP组心肌细胞损伤最重,ES组大鼠的心肌细胞破坏较CLP组减轻程度多,各组24 h损伤程度均较6 h重。(4)24 h Tunel与DAPI染色显示,与Sham组可见的少量阳性细胞比较,CLP组可见大量被染色的阳性细胞,且差异有统计学意义(P <0.05);而与CLP组比较,ES组心肌细胞阳性染色数量明显减少(P <0.05)。(5) 7 d生存分析显示,CLP组大鼠死亡率最高,ES组大鼠生存天数较CLP组明显延长,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 ES能减轻心肌损伤,提高脓毒症大鼠生存率,其机制可能与抑制焦亡经典通路中NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达及减少炎症因子释放有关。 展开更多

关键词 脓毒症 心功能障碍 艾司洛尔(ES) 细胞焦亡 信号通路 消皮素d(gsdmd) 天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1) NOd样受体蛋白3(NLRP3)

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清热消癥方对db/db糖尿病肾脏病小鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路的影响

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作者 高亚斌 王峥 +3 位作者 曹博宁 李丹婷 王耀献 王珍 《中华中医药杂志》 北大核心 2025年第1期159-163,共5页

目的:研究清热消癥方对db/db糖尿病肾脏病小鼠NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)焦亡通路的影响。方法:7周龄雄性db/db小鼠20只按体质量随机分为模型组及清热消癥方组,每组10只;另取雄... 目的:研究清热消癥方对db/db糖尿病肾脏病小鼠NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)焦亡通路的影响。方法:7周龄雄性db/db小鼠20只按体质量随机分为模型组及清热消癥方组,每组10只;另取雄性db/m小鼠8只为正常组。连续灌胃8周,监测小鼠体质量、血糖,ELISA法检测尿液尿微量白蛋白及肾损伤分子1(KIM-1)、血总胆固醇(TC)、血甘油三酯(TG)、血游离脂肪酸(NEFA)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血谷丙转氨酶(ALT)及血谷草转氨酶(AST);肾脏切片行HE及PAS染色;Western Blot及免疫组化检测肾组织NLRP3、GSDMD-N、Cleaved-Caspase1、IL-18及IL-1β蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血糖、体质量、8 h尿微量白蛋白定量、尿KIM-1、TC、TG、NEFA、Scr、ALT及AST均显著升高(P<0.01,P<0.05),肾脏病理表现为肾小球体积增大,系膜细胞增加及系膜基质增多,肾小管出现空泡变性及扩张,肾脏NLRP3、Cleaved-Caspase1及GSDMD-N蛋白表达均显著升高(P<0.01),免疫组化提示肾脏NLRP3、IL-18及IL-1β蛋白表达显著增加(P<0.01)。与模型组比较,清热消癥方组8 h尿微量白蛋白定量、KIM-1、TC、TG及NEFA均显著降低(P<0.05),肾脏病理损伤改善,NLRP3、Cleaved-Caspase1及GSDMD-N蛋白表达均显著下降(P<0.05),免疫组化提示NLRP3、IL-18及IL-1β蛋白表达均显著减少(P<0.05)。结论:清热消癥方可减轻db/db糖尿病肾脏病小鼠肾损伤,其机制可能与抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路相关。 展开更多

关键词 清热消癥方 糖尿病肾脏病 NOd样受体热蛋白结构域3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1 消皮素d 细胞焦亡

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子宫内膜异位症组织中HMGB1、GSDMD、IL-1β表达变化及其意义 被引量：1

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作者 侯岩岩 李曼 叶国柳 《山东医药》 CAS 2023年第36期53-55,共3页

目的观察子宫内膜异位症(EMS)组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达变化,并探讨其意义。方法EMS异位内膜组织80例份(观察组)及子宫平滑肌瘤正常内膜组织70例份(对照组),采用免疫组化法检测两组H... 目的观察子宫内膜异位症(EMS)组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达变化,并探讨其意义。方法EMS异位内膜组织80例份(观察组)及子宫平滑肌瘤正常内膜组织70例份(对照组),采用免疫组化法检测两组HMGB1、GSDMD、IL-1β阳性率,分析三者间及其与EMS临床病理特征的关系。结果观察组HMGB1、GSDMD、IL-1β阳性率分别为77.50%(62/80)、66.25%(53/80)、68.75%(55/80),对照组分别为32.96%(23/70)、22.86%(16/70)、17.14%(12/70),两组比较,P均<0.05。HMGB1、GSDMD、IL-1β表达与EMS临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、痛经程度和囊肿直径无关(P均>0.05)。观察组HMGB1与GSDMD、IL-1β表达呈正相关(r分别为0.577、0.717,P均<0.05),GSDMD与IL-1β表达呈正相关(r为0.797,P<0.05)。结论EMS异位内膜组织HMGB1、GSDMD、IL-1β表达上调,检测三指标有助于此病诊断及其临床分期的鉴别诊断,其可能会成为EMS的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 高迁移率族蛋白B1 消皮素d 白细胞介素1Β 子宫内膜异位症

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lncRNA MEG3调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路影响三阴性乳腺癌对紫杉醇的敏感性 被引量：3

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作者 于冰 杨旭 +1 位作者 陈之梦 雷萌 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第4期597-602,共6页

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)调控含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family,Pyrin domain containing protein 3,NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl a... 目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)母系表达基因3(maternally expressed gene 3,MEG3)调控含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family,Pyrin domain containing protein 3,NLRP3)/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)对紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响。方法:通过逐渐增加PTX剂量间歇作用的方法诱导TNBC耐药细胞MDA-MB-231/R,qRT-PCR检测lncRNA MEG3表达;将MDA-MB-231细胞分为对照组(未转染+PTX)、Vector组(空载体+PTX)、pcDNA3.1-MEG3组(pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX)、pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组(pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX+5μmol/L NLRP3抑制剂BAY11-7082),qRT-PCR检测转染后lncRNA MEG3表达;CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖情况;通过免疫荧光染色和扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察MDA-MB-231细胞焦亡情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞中NLRP3/caspase-1/GSDMD通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤质量。结果:与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/R细胞中lncRNA MEG3表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著增加,IC50、肿瘤质量显著降低(P<0.05);与pcDNA3.1-MEG3组相比,pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著降低,IC50、肿瘤质量显著增加(P<0.05)。结论:上调lncRNA MEG3表达可通过激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路,促进MDA-MB-231细胞焦亡,以此增加TNBC对PTX的敏感性。 展开更多

关键词 母系表达基因3 含NLR家族Pyrin域蛋白3/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶/消皮素d 三阴性乳腺癌 紫杉醇 敏感性

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车叶草苷调节NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路对脓毒症大鼠肺组织细胞焦亡的影响 被引量：7

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作者 孙立燕 刘泽茹 +1 位作者 苏永胜 艾宏亮 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第6期607-613,共7页

目的探讨车叶草苷调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脓毒症大鼠肺组织细胞焦亡的影响。方法取50只SD大鼠腹腔内注射5 mg/kg脂多糖建立脓毒症肺损伤模型,随机数字表法分为... 目的探讨车叶草苷调节核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)/消皮素D(GSDMD)信号通路对脓毒症大鼠肺组织细胞焦亡的影响。方法取50只SD大鼠腹腔内注射5 mg/kg脂多糖建立脓毒症肺损伤模型,随机数字表法分为模型(M)组、车叶草苷低剂量(AL)组(17.5 mg/kg)、车叶草苷中剂量(AM)组(35 mg/kg)、车叶草苷高剂量(AH)组(70 mg/kg)、车叶草苷高剂量(70 mg/kg)+尼日利亚霉素(NLRP3激活剂,1 mg/kg)组(AH+N组),每组10只;另取10只SD大鼠灌胃等剂量生理盐水作对照(C)组。分组干预后,检测各组大鼠肺功能指标[每分钟通气量(MV)、吸气阻力(Ri)]与动脉血氧分压[p(O_(2))];HE染色检测各组大鼠肺组织病理形态;瑞氏-姬姆萨染色分类计数各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清炎性细胞因子白细胞介素(IL)-6、IL-8及IL-1β水平;免疫荧光染色检测各组大鼠肺组织细胞焦亡情况,比较NLRP3与GSDMD在肺组织中表达情况;Western blot检测各组大鼠肺组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路相关蛋白表达。结果与C组比较,M组MV、p(O_(2))降低,Ri及BALF中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞数升高,血清IL-6、IL-8及IL-1β水平升高,肺组织NLRP3、GSDMD相对荧光强度和NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达升高(P<0.05);与M组比较,AL组、AM组、AH组MV、p(O_(2))均升高,Ri及BALF中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞数下降,血清IL-6、IL-8及IL-1β水平下降,肺组织NLRP3、GSDMD相对荧光强度和NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达均降低(P<0.05);与AH组比较,AH+N组MV、p(O_(2))降低,Ri及BALF中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞数升高,血清IL-6、IL-8及IL-1β水平升高,肺组织NLRP3、GSDMD相对荧光强度和NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达升高(P<0.05)。结论高剂量车叶草苷可通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路活性,抑制脓毒症大鼠肺组织炎症,减弱肺组织炎性损伤及肺组织细胞焦亡,修复肺功能。 展开更多

关键词 脓毒症 肺损伤 细胞焦亡 车叶草苷 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 胱天蛋白酶1 消皮素d

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METTL16通过调节消皮素D介导的细胞焦亡抑制胶质母细胞瘤细胞增殖和侵袭能力的实验研究

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作者 包洪恩 白慧茹 +5 位作者 刘凯 窦长武 姜粉军 高乃康 任佳星 王飞 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2024年第10期1056-1064,共9页

目的探讨甲基转移酶样蛋白16(METTL16)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖和侵袭能力的影响,并揭示其潜在的分子生物学机制。方法体外培养U87及U251人GBM细胞株,通过转染METTL16过表达载体获得过表达METTL16基因的U87及U251细胞株,并将实验细... 目的探讨甲基转移酶样蛋白16(METTL16)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖和侵袭能力的影响,并揭示其潜在的分子生物学机制。方法体外培养U87及U251人GBM细胞株,通过转染METTL16过表达载体获得过表达METTL16基因的U87及U251细胞株,并将实验细胞分为阴性对照(NC)、过表达阴性对照(OE-NC)及METTL16过表达(OE-METTL16)组;实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质免疫印迹实验(WB)检测METTL16基因过表达情况;CCK-8实验检测过表达METTL16基因对实验细胞株增殖能力的影响;细胞划痕实验及Transwell小室实验检测过表达METTL16对实验细胞株细胞迁移、侵袭能力的影响;流式细胞术检测过表达METTL16对实验细胞株凋亡及细胞周期的影响;WB实验检测过表达METTL16对实验细胞株焦亡标志物蛋白表达水平的影响。结果WB及qPCR实验表明,过表达METTL16基因的实验细胞株构建成功;CCK-8实验显示,与NC、OE-NC组相比,OE-METTL16组实验细胞株的细胞增殖能力均降低(均P<0.05);细胞划痕及Transwell实验表明,在U87、U251实验细胞株中,OE-METTL16组的细胞划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数量均低于NC、OE-NC组(均P<0.05);流式细胞术结果显示,与NC、OE-NC组相比,OE-METTL16组实验细胞株细胞凋亡率均增加(均P<0.01)。此外,OE-METTL16组较NC、OE-NC组的G2/M期细胞占比均增加(均P<0.01),过表达METTL16可以诱导实验细胞株的细胞周期在G2/M期停滞。WB实验可见OE-METTL16组实验细胞株中的焦亡相关标志物白细胞介素1β、核因子κB、髓样分化因子88、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3、消皮素D(GSDMD)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1的表达水平较NC、OE-NC组均增加(均P<0.05)。结论METTL16可通过调节GSDMD介导的细胞焦亡抑制GBM细胞的增殖、迁移、侵袭;其可作为潜在的靶向分子,为GBM治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 胶质母细胞瘤 细胞增殖 细胞焦亡 细胞侵袭 甲基转移酶样蛋白16 消皮素d

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高氧暴露BPD小鼠模型中巨噬细胞焦亡的检测及意义 被引量：1

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作者 涂子坤 高雅静 +2 位作者 韩晓 郭海艳 周玉峰 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期791-801,共11页

目的 探讨巨噬细胞焦亡是否参与支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的肺病理损伤。方法 40只足月新生小鼠随机分为空气(room air,RA)组和高氧(hyperoxia,HO)组,每组20只。建立慢性高氧诱导的BPD小鼠模型。HE染色评估小... 目的 探讨巨噬细胞焦亡是否参与支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)的肺病理损伤。方法 40只足月新生小鼠随机分为空气(room air,RA)组和高氧(hyperoxia,HO)组,每组20只。建立慢性高氧诱导的BPD小鼠模型。HE染色评估小鼠的肺泡化情况;CD31免疫组化检测肺血管发育状况;Masson染色分析肺组织的纤维化程度;qRT-PCR检测肺组织中的炎症因子和趋化因子(Il6、Il1b、Mmp12、Ccl2、Ccl5、Il8)基因表达水平;ELISA检测血清和肺组织匀浆中的IL-1β水平;Western blot检测细胞焦亡通路的关键蛋白NLRP3、Caspase-1 p20、N-消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β表达;流式分析支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞比例;免疫荧光检测F4/80与NLRP3/Caspase-1/IL-1β的共定位;免疫组化分析AQP5的表达水平。结果 与RA组相比,HO组小鼠的肺泡化阻滞和肺血管生成障碍,肺纤维化显著增加;肺组织中促炎细胞因子的表达显著上调,细胞焦亡相关蛋白表达水平显著增加,血清和肺组织匀浆中IL-1β水平显著升高;支气管肺泡灌洗液中巨噬细胞比例显著升高,肺组织中F4/80与NLRP3、Caspase-1、IL-1β均存在显著的免疫荧光共定位现象,AQP5阳性的肺泡Ⅰ型上皮细胞严重受损。结论 高氧诱导的BPD小鼠模型中,NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路过度活化,可能导致BPD的肺部病理损伤。 展开更多

关键词 支气管肺发育不良(BPd) 消皮素d(gsdmd) 巨噬细胞 焦亡 小鼠

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消皮素D蛋白介导的细胞焦亡在多种自身免疫病中的研究进展

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作者 李浩 姚血明 马武开 《中华医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第42期3931-3935,共5页

细胞焦亡作为一种特殊的细胞死亡形式广泛存在于真核细胞中,其与自身免疫病发生发展有着密切联系。近年来,研究发现位于焦亡轴下游的消皮素D(CSDMD)蛋白在细胞焦亡机制中发挥关键作用。该蛋白功能是通过激活信号通路上游的炎小体并将其... 细胞焦亡作为一种特殊的细胞死亡形式广泛存在于真核细胞中,其与自身免疫病发生发展有着密切联系。近年来,研究发现位于焦亡轴下游的消皮素D(CSDMD)蛋白在细胞焦亡机制中发挥关键作用。该蛋白功能是通过激活信号通路上游的炎小体并将其部分切割成活性片段,再与胞膜上多种成分组成环柱状细胞穿膜孔,改变胞膜通透性而加速胞内多种炎症因子大量释放,引发剧烈的免疫炎症反应。在多种疾病的发病机制中CSDMD蛋白均有参与。本文以细胞焦亡轴核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/半胱天冬酶‑1(caspase1)/GSDMD中的GSDMD蛋白作为切入点,从临床角度综述其与5种常见自身免疫病的关系,为后续研究细胞焦亡在自身免疫病发病机制中的作用提供借鉴与参考。 展开更多

关键词 细胞焦亡 消皮素d 炎症因子 自身免疫病

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