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采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 被引量:7
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作者 蔡宏 李淑霞 +3 位作者 呼西旦 李君莲 许苗 朱玉贤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期175-179,共5页
5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌... 5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后 ,用来自IS10 81中的 2 48bp荧光探针杂交后进行限制性酶切片段长度多态性 (RFLP)分型 ,5株牛分离株中有 4株具有相同杂交带型 ,剩余的 1株在 3.6kb处多了 1条带。将 2 48bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现 :5株牛结核分枝杆菌分离株中有 2株具有相同的PCR指印带型 ,剩余 3株牛结核分枝杆菌分离株则PCR指印带型各不相同 ,上述结果显示出 ,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出 ,PCR指印带型中带数较少 ,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 插入序列 限制性酶切片段长度多态性 直接反向PCR 分型
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牛结核分枝杆菌Mce4E蛋白对牛肺泡巨噬细胞iNOs、TNF-α、IL-6和IL-12表达的影响 被引量:3
2
作者 徐广贤 赵德明 +2 位作者 周向梅 尹晓敏 杨建民 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期1-6,共6页
探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P<0.05);用重组表达的Mce4E蛋白、人分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein... 探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P<0.05);用重组表达的Mce4E蛋白、人分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of M.tuberculosis,MtbPPD)、牛结核分枝杆菌纯化蛋白衍生物(Purified Protein Derivative of M.bovis,MbPPD)、卡介苗(Bacille Calmette Guerin,BCG)和刀豆蛋白A(con-canavalin A,ConA)分别刺激肺泡巨噬细胞48h后,real-time PCR方法检测显示,Mce4E蛋白能够促使牛肺泡巨噬细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达上调(P<0.05)、抑制肺泡巨噬细胞iNO的mRNA表达(P<0.05)而对IL-12表达没有影响(P>0.05)。Mce4蛋白能够促使肺泡巨噬细胞分泌炎性细胞因子,并对肺泡巨噬细胞有抑制作用,证实Mce4蛋白在分枝杆菌中具有重要的作用。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 Mce4E蛋白 肺泡巨噬细胞 real—time PCR
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牛结核分枝杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:4
3
作者 程振涛 岳筠 +6 位作者 张华 周碧君 文明 王开功 欧德渊 覃岚 徐春志 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期1979-1985,共7页
为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究... 为建立可应用于快速检测奶牛结核病、评估鲜乳污染状况、追溯传播途径的试验方法,本研究根据牛结核分枝杆菌基因组设计合成特异性引物,建立实时荧光定量PCR方法,并对反应条件进行优化,构建标准曲线,评价该方法的性能。结果显示,本研究所建立的实时荧光定量PCR方法能有效检测牛结核分枝杆菌目的基因,其最佳引物浓度为400nmol/L,最佳退火温度为52℃。所构建的标准曲线相关性好,可用于样本的定量检测。该方法的性能评价显示,其最小检出模板浓度为80.24ng/L,且该方法具有较好的特异性、可重复性,可对鲜乳样本进行检测。试验结果表明,本研究所建方法可用于牛结核分枝杆菌的定性和定量检测,这为奶牛结核病的诊断与净化及鲜乳食品安全评估提供重要技术。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 实时荧光定量PCR 建立 应用
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应用噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌的方法研究 被引量:5
4
作者 刘子芝 赵勇 +5 位作者 刘纪艳 杨建华 尹望中 王颖 赵晶 周永燚 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第10期20-21,共2页
建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在... 建立噬菌体生物扩增技术检测牛结核分枝杆菌试验方法,探讨最佳检测条件。比较各种检测方法对测定结果的影响。结果:噬菌体工作浓度为1×108PFU/ml、37℃感染2h,杀毒剂浓度在100mmol/L、室温作用10min为最佳检测条件。指示细胞浓度在1×106条/ml时,形成噬菌斑清晰,便于计数。结论:在选择最佳测定条件下,噬菌体生物扩增法检测牛结核分枝杆菌,快速、简便、灵敏。 展开更多
关键词 噬菌体 牛结核分枝杆菌 检测方法
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牛结核分枝杆菌MPB70蛋白分泌性载体的构建与蛋白表达 被引量:3
5
作者 贾浩 周晶 +4 位作者 徐广贤 李娟 张艳 许涛 王玉炯 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第6期13-15,共3页
为了研究牛结核病新型诊断抗原,试验根据GenBank中Mycobacterium bovis基因序列设计1对引物,将牛结核分枝杆菌MPB70基因构建到pET22b(+)原核表达载体上,将重组载体转到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导获得高效表达,并进行SDS-PAGE和Westen... 为了研究牛结核病新型诊断抗原,试验根据GenBank中Mycobacterium bovis基因序列设计1对引物,将牛结核分枝杆菌MPB70基因构建到pET22b(+)原核表达载体上,将重组载体转到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导获得高效表达,并进行SDS-PAGE和Westen-blot分析。结果表明:MPB70蛋白以可溶形式在细胞周质中表达,有部分蛋白以包涵体形式在细胞质中表达,其分子质量约为30ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;重组MPB70蛋白可与牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应。说明重组MPB70蛋白能够作为诊断抗原。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 MPB70 表达 WESTERN-BLOT
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荧光原位杂交在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测中的应用 被引量:3
6
作者 孙明军 王萍 +3 位作者 张喜悦 孙翔翔 孙世雄 魏荣 《中国动物检疫》 CAS 2019年第9期69-73,共5页
荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测... 荧光原位杂交技术可快速鉴定病原菌,较传统病原分离鉴定方法具有明显优势。针对我国动物布鲁氏菌病和牛结核病这两个重要的人兽共患病,目前还没有标准的荧光原位杂交检测方法可供参考。为建立布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌荧光原位杂交检测方法,快速诊断动物布鲁氏菌病和牛结核病,利用布鲁氏菌探针Bru-996和结核分枝杆菌探针MTB770,通过优化杂交温度、杂交时间和样品处理等关键条件,确定最佳检测程序;根据已知背景的菌株和临床样品,对Bru-996和MTB770探针的特异性和敏感性进行评价,最终建立了荧光复位杂交诊断方法。结果显示:反应条件优化后,该方法可在4h内完成布鲁氏菌检测;荧光标记Bru-996探针与布鲁氏菌待检菌株的杂交结果均为阳性,而与结核分枝杆菌、禽结核分枝杆菌和大肠杆菌杂交结果均为阴性,并从5个已知背景的组织病料中成功检出布鲁氏菌。牛结核分枝杆菌检测则需要6~8h,杂交前必须对样品用二甲苯和溶菌酶进行处理;MTB770探针可特异性识别并能从牛肺部结节中检出牛结核分枝杆菌。结果表明,荧光原位杂交方法快速、简便,而且Bru-996和MTB770探针分别在布鲁氏菌和牛结核分枝杆菌检测上具有较高的特异性,可替代传统的病原分离鉴定,作为动物布鲁氏菌病和牛结核病的实验室确诊方法。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 布鲁氏菌 牛结核分枝杆菌 人兽共患病
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奶牛结核分枝杆菌的分离与鉴定 被引量:1
7
作者 韩坤 谢琴 +5 位作者 王玉炯 李敏 王东 徐广贤 周栋 郭邦成 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期82-83,共2页
关键词 牛结核分枝杆菌 分离培养 奶制品 鉴定 临床样品 分枝杆菌 结核 人畜共患
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牛结核分枝杆菌PstS3基因克隆与序列分析 被引量:1
8
作者 周晶 贾浩 +1 位作者 徐广贤 王玉炯 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2010年第3期273-274,279,共3页
以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)基因组DNA为模板,克隆PstS3基因,并进行序列测定,然后利用生物信息学软件对其序列进行分析.结果显示,PstS3基因全长1 113 bp,编码370个氨基酸,与GenBank所发表的人结核分枝杆菌PstS3基因的核苷酸... 以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)基因组DNA为模板,克隆PstS3基因,并进行序列测定,然后利用生物信息学软件对其序列进行分析.结果显示,PstS3基因全长1 113 bp,编码370个氨基酸,与GenBank所发表的人结核分枝杆菌PstS3基因的核苷酸同源性为99.82%,氨基酸同源性为99.4%,有1处位点发生有义突变. 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 PstS3 序列分析
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牛结核分枝杆菌抗原蛋白Ag85B的表达及纳米疫苗的制备 被引量:1
9
作者 杜军 邓光存 《湖北农业科学》 2015年第6期1421-1424,1429,共5页
以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以... 以牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis,MTB)C68001株基因组DNA为模板,克隆免疫优势抗原基因Ag85B,构建重组表达质粒p ET-28a-ag85b,转化入大肠埃希菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。以明胶为佐剂,Ag85B为目的抗原制备纳米疫苗,并对其进行了相关的工艺检测。以BCA法建立测定蛋白质含量的标准曲线,在此基础上检测纳米疫苗的载药率和包封率。结果显示,明胶佐剂疫苗的载药率为71.83%,包封率为41.03%,符合纳米疫苗的工艺要求。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis MTB) Ag85B抗原 原核表达 纳米疫苗
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牛结核分枝杆菌LppA基因克隆与序列分析
10
作者 徐广贤 李娟 +1 位作者 李勇 王玉炯 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期16-17,共2页
牛结核分枝杆菌LppA基因是一个编码磷脂蛋白的基因,为了研究牛结核分枝杆菌LppA基因的多态性,试验以牛结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆LppA基因,并进行序列测定,然后利用DNAMAN软件对其序列进行分析。结果表明:LppA基因全长564b... 牛结核分枝杆菌LppA基因是一个编码磷脂蛋白的基因,为了研究牛结核分枝杆菌LppA基因的多态性,试验以牛结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆LppA基因,并进行序列测定,然后利用DNAMAN软件对其序列进行分析。结果表明:LppA基因全长564bp,编码187个氨基酸,与Gen—Bank所发表的牛结核分枝杆菌LppA基因的核苷酸同源性为99.47%,氨基酸同源性为98.40%,有3处位点发生有义突变。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 LppA 序列分析
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天津市牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验 被引量:2
11
作者 孙涛 《畜牧兽医科技信息》 2017年第12期26-27,共2页
皮内变态反应是我国标准规定的牛结核病检测方法,而γ-干扰素检检测试验是O1E规定的国际贸易指定使用的检测方法,为了验证此方法在实际工作中的检测效果,我市分别对静海区、武清区皮内变态反应试验阳性牛和宝坻区待检牛进行了检测比... 皮内变态反应是我国标准规定的牛结核病检测方法,而γ-干扰素检检测试验是O1E规定的国际贸易指定使用的检测方法,为了验证此方法在实际工作中的检测效果,我市分别对静海区、武清区皮内变态反应试验阳性牛和宝坻区待检牛进行了检测比对试验。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 皮内变态反应 Γ-干扰素 比对试验 天津市 检测试验 结核 国际贸易
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牛结核分枝杆菌γ-干扰素在牛结核病检测中的优势 被引量:2
12
作者 孙涛 《现代畜牧科技》 2015年第1期52-53,共2页
牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来,人结核病阳性检出率逐年上升,世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”,1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”,并将每年3月24日定为“世界防治结... 牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来,人结核病阳性检出率逐年上升,世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”,1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”,并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。根报道,约有10.6%的人结核是由牛分枝杆菌引起的,牛结核病中的7%是由人结核杆菌引起。WHO同时指出,在那些还存在牛结核病的国家中,人类始终受到牛结核病的威胁,除非着手将其消灭,否则人类结核病的防治是不会成功的。因此,控制牛结核病的是关系到控制人类结核病能否成功的重要因素。1.流行特点 牛结核分枝杆菌可以感染不同种属的温血动物,甚至包括一些禽类,其中牛是家畜中最易感的,特别是奶牛。该病主要通过呼吸道和消化道传播,也可通过交配传播。结核病牛可通过痰液、奶、粪便等向外排出结核杆菌污染环境,吸入被污染的飞沫是牛结核病传染的最主要方式,且少量牛分枝杆菌即可引起感染。采食有传染的粘液、粪便、尿液甚至牛奶都可引起感染。人类多因牛结核分枝杆菌或结核分枝杆菌感染而致病,其感染途径主要是食入未经检疫的畜产品,尤其是饮用未经巴氏消毒或煮沸的患有结核牛的奶而经消化道感染,犊牛感染牛结核分枝杆菌者最多。另外,经常与患结核病牛接触的人员,可由于病畜的咳嗽而经呼吸道感染结核病。牛结核病不仅古老,而且分布很广,世界各地都有发生。美国是世界上第1个消灭牛结核病的国家,美国早在1957年就宣布为无结核病牛群,但由于其他动物感染结核杆菌,特别是野生动物和观赏动物的结核病以及人类结核病的存在,有感染牛的可能性,所以美国的牛群仍在不断地接受检疫并被处于高度戒备之中。在广大的第三世界国家仍严重地流行,感染率在5%-10%不等,高者可达20%,严重影响着人类的健康和养牛业的发展。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 结核 Γ-干扰素 世界卫生组织 慢性传染病 感染途径 分枝杆菌 消化道感染
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牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌三重PCR快速检测方法的建立 被引量:13
13
作者 杨莉 余波 +10 位作者 张涛 姜玲玲 刘镜 杨丽娟 孙启跃 徐景峨 龙玲 唐远江 余国富 邹茂华 吴位珩 《贵州农业科学》 CAS 2020年第5期92-96,共5页
为建立快速、准确的检测牛呼吸道主要病原菌牛支原体(Mycoplasma bovis)、牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)及牛结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的方法,对牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm-kmt基因序列、牛结核分枝杆菌I... 为建立快速、准确的检测牛呼吸道主要病原菌牛支原体(Mycoplasma bovis)、牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)及牛结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的方法,对牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm-kmt基因序列、牛结核分枝杆菌IS6110基因序列分别设计特异性引物,对单一PCR检测方法进行优化后建立三重PCR检测方法。结果表明:三重PCR的最佳扩增条件为94℃预变性10min;94℃1min,60℃50s,72℃1min,循环30次;72℃延伸10min。建立的三重PCR方法能对同一样本中的3种病原菌进行扩增,特异性强。牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌的最低检测DNA浓度分别为5.306×10^-3ng/μL、3.075×10^-2ng/μL和1.605×10^-4ng/μL。建立的三重PCR方法临床检测牛支原体肺炎鼻拭子、牛结核分枝杆菌、结核菌素与单一PCR检测方法的阳性符合率为100%。三重PCR检测方法可用于牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌、牛结核分枝杆菌的单一和混合感染鉴别诊断,具有快速、准确、简便的特点。 展开更多
关键词 支原体 多杀性巴氏杆菌 牛结核分枝杆菌 三重PCR
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用酶免疫法检测牛结核分枝杆菌的IgG抗体 被引量:8
14
作者 简敏华 徐肇华 +6 位作者 邵维杰 邱留娣 胡畅中 陈慧英 王永康 叶元亨 孙泉云 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第2期81-82,共2页
目的 建立一种酶免疫法检测牛血清中牛结核分枝杆菌的IgG抗体。方法 从牛结核分枝杆菌中分离牛结核菌糖脂抗原 ,并固相在聚苯乙烯微量反应板上 ,将抗牛IgG单克隆抗体标记在辣根过氧化物酶。 结果 皮肤试验阳性 46头牛中 ,酶标阳性 3... 目的 建立一种酶免疫法检测牛血清中牛结核分枝杆菌的IgG抗体。方法 从牛结核分枝杆菌中分离牛结核菌糖脂抗原 ,并固相在聚苯乙烯微量反应板上 ,将抗牛IgG单克隆抗体标记在辣根过氧化物酶。 结果 皮肤试验阳性 46头牛中 ,酶标阳性 30头牛。皮肤试验阴性 750头牛中 ,酶标阴性为 70 7头牛。 展开更多
关键词 酶免疫法 检测 牛结核分枝杆菌 IGG抗体
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牛结核分枝杆菌株快速培养方法的对比
15
作者 古努尔.吐尔逊 努尔拜合提 +2 位作者 沙依兰.卡依扎 王俊伟 呼西旦.阿巴拜克力 《中国动物检疫》 CAS 2015年第12期56-58,共3页
[目的 ]应用引进的Va间接培养方法、传统的丙酮酸钠、L-J培养基直接培养方法对牛结核分枝杆菌生长时间进行对比试验。[方法 ]将牛型结核分枝杆菌接种于含0.1%琼脂Va培养基中预培养24 h,转接到含0.3%琼脂Va培养基中培养6 d后分别转接到... [目的 ]应用引进的Va间接培养方法、传统的丙酮酸钠、L-J培养基直接培养方法对牛结核分枝杆菌生长时间进行对比试验。[方法 ]将牛型结核分枝杆菌接种于含0.1%琼脂Va培养基中预培养24 h,转接到含0.3%琼脂Va培养基中培养6 d后分别转接到丙酮酸钠培养基和L-J培养基上(间接法);同时牛型结核分枝杆菌接菌于丙酮酸钠培养基和L-J培养基培养,在37℃培养箱内孵育(直接方法),每天观察,并记录出现菌落时间。[结果]接种Va培养基的菌株分别转接丙酮酸钠培养基和L-J培养基后第3 d可见菌落,第12 d培养基斜面可见典型的牛型结核分枝杆菌菌落;而直接接种于丙酮酸钠培养基与L-J培养基后分别于第26 d和第31 d可见典型的牛型结核分枝杆菌菌落。[结论 ]引进的Va牛型结核分枝杆菌间接培养方法可以缩短菌落培养时间,为牛型结核杆菌病提供早期诊断依据。 展开更多
关键词 丙酮酸钠培养基 L-J培养基 牛结核分枝杆菌 Va培养基 早期诊断
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牛结核分枝杆菌临床分离株rpoB、KatG基因突变分析
16
作者 郭邦成 周学章 王玉炯 《中国奶牛》 2009年第6期7-10,共4页
为了解牛结核分枝杆菌临床分离菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)的分子耐药机制,本研究采用噬菌体生物扩增法对分离并鉴定的25株牛结核分枝杆菌进行药敏分析,筛选出9株耐利福平、异烟肼菌株,PCR扩增耐药株的rpoB基因片段(213bp)和KatG基... 为了解牛结核分枝杆菌临床分离菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)的分子耐药机制,本研究采用噬菌体生物扩增法对分离并鉴定的25株牛结核分枝杆菌进行药敏分析,筛选出9株耐利福平、异烟肼菌株,PCR扩增耐药株的rpoB基因片段(213bp)和KatG基因片段(458bp)并测序。通过对耐药基因的测序分析,5株利福平耐药株的rpoB基因在531位点(RNA聚合酶β-亚基编码基因起始密码子起,下同)、526位点、511位点发生突变,其中有3株rpoB基因531位点发生突变,1株rpoB基因526位点突变;1株rpoB基因在531位点和511位点发生了较为少见的联合突变;4株异烟肼耐药菌株,其中2株在315位点(KatG蛋白编码基因起始密码子起,下同)发生碱基突变,2株在463位点发生碱基突变。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 RPOB基因 KATG基因 耐药性
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牛结核分枝杆菌PCR检测方法的建立
17
作者 刘忠发 张华 +5 位作者 李涛 沙祖敏 杜春林 姜德荣 周碧君 程振涛 《贵州畜牧兽医》 2014年第2期1-4,共4页
随着牛结核病疫情日趋严重,快速、高效的分子生物学检测方法建立显得十分必要。试验设计合成了牛结核分枝杆菌特异性引物,优化反应条件,建立了牛分枝杆菌PCR检测方法。结果显示,所建立的牛结核分枝杆菌PCR检测方法可有效检测牛结核分枝... 随着牛结核病疫情日趋严重,快速、高效的分子生物学检测方法建立显得十分必要。试验设计合成了牛结核分枝杆菌特异性引物,优化反应条件,建立了牛分枝杆菌PCR检测方法。结果显示,所建立的牛结核分枝杆菌PCR检测方法可有效检测牛结核分枝杆菌,在模板浓度、引物浓度和退火温度分别为1.32μg/mL、0.5μm/L、54℃时最佳;性能评估显示,该方法具有较好的特异性、敏感性和临床应用性,为我省牛结核病的综合防控提供关键技术。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 PCR检测 方法建立
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牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA试验和牛结核菌素PPD试验检测奶牛结核病的探讨 被引量:2
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作者 朱建华 王冰 +3 位作者 李然 韩平 曾繁钢 律伟 《兽医导刊》 2021年第11期134-135,共2页
本试验利用牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA试剂盒对同一奶牛养殖小区经牛结核菌素试验(PPD)阳性牛及同群牛结核菌素检测阴性牛进行检测。结果发现,两种试验结果符合率为86.25%。牛结核菌素试验用于奶牛结核病,虽然操作简便、价格低廉,但... 本试验利用牛结核分枝杆菌γ-干扰素ELISA试剂盒对同一奶牛养殖小区经牛结核菌素试验(PPD)阳性牛及同群牛结核菌素检测阴性牛进行检测。结果发现,两种试验结果符合率为86.25%。牛结核菌素试验用于奶牛结核病,虽然操作简便、价格低廉,但存在假阴性和假阳性的现象,直接影响了我县奶牛结核病确诊工作。本文旨在指导我县奶牛结核病诊断提供科学依据。 展开更多
关键词 结核 牛结核分枝杆菌 γ-干扰素ELISA试验
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牛结核分枝杆菌的生物学性状
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作者 卜文甲 《养殖技术顾问》 2012年第11期137-137,共1页
1形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌,牛分枝杆菌则比较粗短,细菌细胞壁脂质含量较高,约占干重的60%,特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面,可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法,以5%石炭酸复红加温... 1形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌,牛分枝杆菌则比较粗短,细菌细胞壁脂质含量较高,约占干重的60%,特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面,可影响染料的穿入。分枝杆菌一般用齐尼抗酸染色法,以5%石炭酸复红加温染色,但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染,则分枝杆菌呈红色,而其他细菌和背景中的物质为蓝色。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 生物学性状 分枝杆菌 染色法 脂质含量 细胞壁 肽聚糖 石炭酸
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深圳某养殖场奶牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测与皮内变态反应比对试验 被引量:1
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作者 黄沁 《畜牧兽医科技信息》 2018年第4期27-28,共2页
牛结核病是一种人畜共患传染病,被我国列为二类动物疫病,给牛业生产特别是奶牛养殖业造成巨大危害,并对人类的健康也造成了严重的威胁。为加强奶牛养殖场结核病的高效监测,我实验室人员严格按照农业部发布的动物疫病监测计划,每年定期... 牛结核病是一种人畜共患传染病,被我国列为二类动物疫病,给牛业生产特别是奶牛养殖业造成巨大危害,并对人类的健康也造成了严重的威胁。为加强奶牛养殖场结核病的高效监测,我实验室人员严格按照农业部发布的动物疫病监测计划,每年定期对辖区内的奶牛进行结核病检疫监控。近年来,随着全球科技的高速发展,牛结核病的检测方法也逐步完善,现行的检测方法包括结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素检测试验。其中皮内变态反应是我国标准(GB/T 18645-2002)规定的牛结核病检测方法,而γ-干扰素检测试验是OIE规定的国际贸易指定使用的检测方法,为了验证此两种方法在实际工作中的检测效果,我实验室运用两种检测方法对辖区内A,B奶牛养殖场的12月龄以上奶牛进行了检测比对试验。 展开更多
关键词 牛结核分枝杆菌 皮内变态反应 养殖业 Γ-干扰素 养殖场 检测试验 比对试验 动物疫病监测
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