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新型单分散聚合物基质高效疏水作用色谱填料的合成及性能研究 被引量:3
1
作者 龚波林 任丽 强克娟 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期809-812,共4页
以自行合成的8.0μm大孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球为基质,采用化学改性方法合成了邻二醇配基新型高效疏水作用色谱填料。详细评价了该填料对蛋白质的分离性能、动力学吸附容量、质量回收率、硫酸铵起始浓度和流动相pH... 以自行合成的8.0μm大孔单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯微球为基质,采用化学改性方法合成了邻二醇配基新型高效疏水作用色谱填料。详细评价了该填料对蛋白质的分离性能、动力学吸附容量、质量回收率、硫酸铵起始浓度和流动相pH值对蛋白保留的影响。结果表明,这种高效疏水作用色谱填料的分离性能优良,分离了5种标准蛋白,对溶菌酶的活性回收率为96%±5%,吸附容量高达36.5 g/L。 展开更多
关键词 单分散聚合物填料 疏水作用色谱 固定相
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高效疏水作用色谱分离高原春小麦淀粉酶 被引量:2
2
作者 师治贤 胡风祖 邵云 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期368-369,共2页
疏水作用色谱是色谱学科的一个分支.它与反相色谱一样都具有疏水性的特点.因此,疏水性活性蛋白在疏水柱上比较强的保留,而亲水性的活性蛋白不保留或保留很弱.采用盐溶液作为流动相,在疏水柱上活性蛋白不会产生不可逆吸附,活性蛋白的三... 疏水作用色谱是色谱学科的一个分支.它与反相色谱一样都具有疏水性的特点.因此,疏水性活性蛋白在疏水柱上比较强的保留,而亲水性的活性蛋白不保留或保留很弱.采用盐溶液作为流动相,在疏水柱上活性蛋白不会产生不可逆吸附,活性蛋白的三维结构不被破坏,失活率低,一般不超过10%,所以,高效疏水作用色谱对活性蛋白的分离和测定是比较理想的方法. 展开更多
关键词 春小麦 淀粉酶 疏水作用色谱 分离
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高效疏水作用色谱填料的合成及其在重组人干扰素纯化中的应用 被引量:2
3
作者 郭立安 朱宝泉 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第9期1462-1464,共3页
The synthesis of packing of oxygen-ethane as end-ligand bonded to silica andseparation for recombinant human interferons(rhIFN) in high-performance hydrophobicinteraction chromatography has been studied in this paper.... The synthesis of packing of oxygen-ethane as end-ligand bonded to silica andseparation for recombinant human interferons(rhIFN) in high-performance hydrophobicinteraction chromatography has been studied in this paper. It was showed that the packingsynthesized was not only suitable for separating standard proteins, but also for different rhIFNs,i. e., rhIFN-αA expressed in yeast, rhIFN-αA and rh1FN-γ in E. colt. The purify of threerhIFNs purified by one-step HPHIC, which rhIFN-γ expressed in E. colt was recognized as80%, rhIFN-αA expressed in yeast as 70%, and rhIFN-αA expressed in E. colt as 30%, wasmore than that of other chromatography besides affinity chromatography. 展开更多
关键词 高效 疏水作用色谱 干扰素 HPHIC 填料 人干扰素
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疏水作用色谱中流动相组成对溶质保留行为的影响 被引量:1
4
作者 赵建国 姚丛 +1 位作者 卫引茂 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期481-484,共4页
首次研究了疏水作用色谱 (HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为。以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别 ,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响。与反相色谱... 首次研究了疏水作用色谱 (HIC)中芳香醇同系物在不同种类盐流动相中的保留行为。以计量置换保留模型中的参数Z分析了HIC中小分子与生物大分子保留行为的差别 ,以及不同流动相组成对两种类型溶质的洗脱范围及洗脱能力的影响。与反相色谱相似 ,芳香醇在HIC中的保留仍存在同系物规律。比较了小分子和生物大分子在不同盐溶液中的Z值变化 ,表明流动相中的盐仅改变小分子与固定相的水合程度 ,而对生物大分子 ,除改变其和固定相水合程度外 。 展开更多
关键词 疏水作用色谱 芳香醇同系物 生物大分子 保留行为 分离 流动相 蛋白质 保留机理
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疏水作用色谱法同时纯化及复性基因重组人干扰素-α 被引量:5
5
作者 郭立安 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-303,共3页
使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进... 使用高效疏水作用色谱直接从大肠杆菌表达的基因重组人干扰素 α(rhIFN α)包涵体的裂解液中纯化了rhIFN α ,并在纯化的同时获得了高的复性效率 ,使复性和纯化一步完成 ,大大地简化了操作步骤。用凝胶排阻色谱对该法纯化的rhIFN α进行了纯度测定 ,纯度达到 95 %以上。该法的活性回收率分别比稀释法和透析法高 1 0倍和 1 展开更多
关键词 高效液相 纯化 重组蛋白质 基因重组人干扰素-α 高效疏水作用色谱
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疏水作用色谱用球状交联聚乙烯醇的制备 被引量:1
6
作者 匡科 钟振声 穆筱梅 《广东化工》 CAS 2001年第5期16-17,25,共3页
采用悬浮聚合法成功地制备了PVA白球。本文对水溶液中PVA含量、甲醛用量、表面活性剂、油水体积比、搅拌速度及反应温度等影响因素进行了研究和探索。实验得到了最佳工艺条件为:50ml 15%PVA分散在300ml的油相中,以3.0g油酸钠和5.0ml Sp... 采用悬浮聚合法成功地制备了PVA白球。本文对水溶液中PVA含量、甲醛用量、表面活性剂、油水体积比、搅拌速度及反应温度等影响因素进行了研究和探索。实验得到了最佳工艺条件为:50ml 15%PVA分散在300ml的油相中,以3.0g油酸钠和5.0ml Span-80作表面活性剂,用10 ml甲醛溶液作交联剂,在88℃和400 r/min的条件下进行悬浮聚合,制备得到了缩醛化度为30%的球状PVA颗粒,其中粒径0.30~0.45mm(40~60目)者约占80%。 展开更多
关键词 疏水作用色谱 填料 PVA白球 球状交联聚乙烯醇颗粒
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疏水作用色谱介质的合成及色谱特性研究
7
作者 李华儒 陈国亮 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1995年第11期1685-1689,共5页
利用国产大孔硅胶作基质合成了疏水填料.按照高效疏水作用色谱法,采用梯度洗脱方式分离了6种标准蛋白及唾液中α-淀粉酶和基因工程生产的γ-干扰素.柱子不可逆吸附小、被试验的α-淀粉酶和溶菌酶活性几乎定量被回收.应用合成的... 利用国产大孔硅胶作基质合成了疏水填料.按照高效疏水作用色谱法,采用梯度洗脱方式分离了6种标准蛋白及唾液中α-淀粉酶和基因工程生产的γ-干扰素.柱子不可逆吸附小、被试验的α-淀粉酶和溶菌酶活性几乎定量被回收.应用合成的色谱填料研究了洗脱剂中盐浓度和温度对蛋白质保留行为的影响,论证了合成填料的色谱属性. 展开更多
关键词 疏水作用色谱 特性 聚醚 疏水介质
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RNase等10种标准蛋白质在高效疏水作用色谱上的复性
8
作者 黄亚渝 童卫 郭立安 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第8期682-684,共3页
目的: 研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPH IC)上的保留行为及复性效率. 方法: 分别用盐酸胍(Gu HCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将核糖核酸酶(RNase)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为硫酸铵的条件下,用HPHIC对变性蛋白... 目的: 研究变性蛋白质在高效疏水作用色谱(HPH IC)上的保留行为及复性效率. 方法: 分别用盐酸胍(Gu HCl)、尿素(Urea)和十二烷基磺酸钠(SDS)将核糖核酸酶(RNase)等10种标准蛋白质变性,然后在流动相为硫酸铵的条件下,用HPHIC对变性蛋白质进行复性,并测定其保留时间、Z值、质量及活性回收率. 结果: 在10种变性蛋白质中有5种在HPHIC上得到复性,其保留时间、峰形、Z值与天然蛋白基本一致,其中溶菌酶和核糖核酸酶的质量和活性回收率高,复性效果好. 结论: 用HPHIC对变性的标准蛋白质进行复性,得到较好的复性效果. 展开更多
关键词 蛋白质变性 蛋白质复性 高效疏水作用色谱
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疏水作用色谱用球状交联聚乙烯醇的制备
9
作者 匡科 钟振声 穆筱梅 《精细化工中间体》 CAS 2001年第4期19-20,34,共3页
采用悬浮聚合法成功地制备了PVA白球 ,对水溶液中PVA含量、甲醛用量、表面活性剂配伍和用量、油水体积比、搅拌速度及反应温度等影响因素进行了研究和探索。优惠工艺条件为 :5 0ml 15 %PVA分散在 3 0 0ml的油相中 ,以 3 .0 g油酸钠和 5 ... 采用悬浮聚合法成功地制备了PVA白球 ,对水溶液中PVA含量、甲醛用量、表面活性剂配伍和用量、油水体积比、搅拌速度及反应温度等影响因素进行了研究和探索。优惠工艺条件为 :5 0ml 15 %PVA分散在 3 0 0ml的油相中 ,以 3 .0 g油酸钠和 5 .0mlspan -80作表面活性剂 ,用 10ml甲醛溶液作交联剂 ,在 88℃和 40 0r/min的条件下进行悬浮聚合。制备得到了缩醛化度为 3 0 %的球状PVA颗粒 ,其中粒径为 0 2 4~ 0 .3 5mm的约占 80 %。 展开更多
关键词 悬浮聚合 聚乙烯醇 缩醛化度 球状交联 制备 疏水作用色谱
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疏水作用色谱进展
10
作者 练鸿振 茅力 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期150-153,共4页
疏水作用色谱是利用样品中各组分不同的疏水性质来进行分离的方法,主要分离对象为蛋白质,而蛋白质分子量一般较大,生物活性又不稳定,因此寻找快速、高效且不损伤蛋白质活性的分离方法就显得十分重要。
关键词 疏水作用色谱
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无机基质疏水作用色谱填料的研制及扩试 被引量:1
11
作者 何秀娟 赵睿 +3 位作者 吴晓军 乔桂娟 王萍 刘国诠 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期225-227,共3页
以无机基质可控孔径玻璃(CPG)和大孔硅胶为基质、聚乙二醇(PEG1000)为配基,利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱(HIC)填料,并进行了150g/批的扩大试验,用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明,... 以无机基质可控孔径玻璃(CPG)和大孔硅胶为基质、聚乙二醇(PEG1000)为配基,利用改进的合成方法制备了疏水作用色谱(HIC)填料,并进行了150g/批的扩大试验,用标准蛋白为样品进行了色谱行为的研究。结果表明,此类填料对蛋白质的分离性能良好,对胰蛋白酶的活性回收率大于95%。 展开更多
关键词 高效液相 疏水作用色谱填料 蛋白质
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α-淀粉酶在疏水作用色谱中保留的热力学研究(英文)
12
作者 冯小艳 耿信鹏 +3 位作者 戴丽 吴丹 郑长征 耿信笃 《西安工程大学学报》 CAS 2009年第4期71-78,共8页
研究了经不同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶(α-Amylase)在疏水作用色谱(HIC)中的保留行为.结果表明,天然及经盐酸胍变性的α-淀粉酶在HIC中的保留行为都很好地遵循非线性Van′t Hoff方程,且由所计算出的α-淀粉酶在HIC中保留的热力学参数... 研究了经不同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶(α-Amylase)在疏水作用色谱(HIC)中的保留行为.结果表明,天然及经盐酸胍变性的α-淀粉酶在HIC中的保留行为都很好地遵循非线性Van′t Hoff方程,且由所计算出的α-淀粉酶在HIC中保留的热力学参数发现,在实验温度范围内,α-淀粉酶的保留为熵驱动,焓变(ΔH0)、熵变(ΔS0)和热容量变(ΔCP0)3个热力学参数都分别与绝对温度及其倒数之间存在线性关系.同时,对部分胍变α-淀粉酶的折叠自由能ΔΔGF进行了测定,发现变性α-淀粉酶在HIC固定相表面的折叠自由能远比在溶液中的高,且对于相同浓度盐酸胍变性的α-淀粉酶,均以298K时的折叠自由能为最大. 展开更多
关键词 Α-淀粉酶 疏水作用色谱 折叠自由能 热力学
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高效疏水作用色谱法对还原变性溶菌酶的折叠研究 被引量:3
13
作者 王彦 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期218-221,共4页
首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性... 首次用高效疏水相互作用色谱(HPHIC)研究了还原变性溶菌酶(Lys)的复性。对还原变性Lys在3种疏水性不同的色谱柱上的复性情况进行了考察,发现还原变性Lys在疏水性最弱的XDM GM1型色谱柱上的复性效率最高,当Lys质量浓度为2 0g/L时,其复性效率可达到94 6%。 展开更多
关键词 高效疏水相互作用 还原变性 溶菌酶 蛋白质 折叠 复性
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采用柔性分子对接技术模拟蛋白质在疏水作用色谱上的保留行为
14
作者 周鹏 田菲菲 李志良 《中国科学(B辑)》 CSCD 北大核心 2007年第3期267-273,共7页
将蛋白质与疏水作用色谱(HIC)固定相相互作用分为直接非键/构象作用和蛋白质表面疏水效应两个热力学过程,从而定量给出了处于浓盐析盐水溶液中HIC保留时间与配基/蛋白质结合自由能之间的二元线性关系.通过ICM柔性分子对接策略及遗传算法... 将蛋白质与疏水作用色谱(HIC)固定相相互作用分为直接非键/构象作用和蛋白质表面疏水效应两个热力学过程,从而定量给出了处于浓盐析盐水溶液中HIC保留时间与配基/蛋白质结合自由能之间的二元线性关系.通过ICM柔性分子对接策略及遗传算法(GA)对27个已知晶体结构的蛋白质与疏水配基的可能结合方式进行模拟和分析,所得结果与实验观测情况吻合良好.研究表明,蛋白质局部疏水效应以及配基与蛋白质的非键/构象作用皆对HIC色谱保留行为影响显著,且作用区域多集中于蛋白质表面突出部位. 展开更多
关键词 疏水作用色谱 柔性分子对接 遗传算法 蛋白质 盐溶因子
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采用不同疏水相互作用色谱柱从包涵体中快速制备重组人干细胞因子(英文) 被引量:2
15
作者 王骊丽 王超展 耿信笃 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期36-41,共6页
为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基... 为了提高重组人干细胞因子(rhSCF)的复性效率,改进了高效疏水相互作用色谱(HPHIC)纯化和复性rhSCF的方法。首先将目标蛋白溶解于8.0mol/L脲中,然后将rhSCF包涵体的提取液直接进样到不同规格的HPHIC柱进行纯化和复性。优化了固定相配基结构和流动相组成等实验条件,结果表明,本方法可以快速地获得高质量回收率和高生物活性的rhSCF,rhSCF在40min内即可完成复性与纯化,目标蛋白的纯度在95.5%以上,质量回收率高于49.6%。通过体积排阻色谱和基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的分析,确认rh-SCF以单体存在。结果进一步证明HPHIC法是同时复性和纯化重组蛋白的有效工具。 展开更多
关键词 高效疏水相互作用 重组人干细胞因子 包涵体
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疏水相互作用与亲水相互作用组合色谱纯化缩宫素 被引量:2
16
作者 张晓鸥 宋茂谦 +2 位作者 王长海 Jan-Christer Janson 顾铭 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期598-602,共5页
将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面... 将疏水相互作用色谱与亲水相互作用色谱结合,建立了用于化学合成缩宫素粗品分离纯化的两步纯化工艺.先以纯水为流动相,采用Nylon6疏水相互作用色谱对粗品进行脱盐与富集,后以Superose12亲水相互作用色谱进行进一步纯化,两步纯化后,峰面积纯度达93.5%,提高了5.96倍,总回收率为50.1%,与用C18为介质的传统两步反相色谱纯化的结果相当.本方法有机溶剂用量仅为传统反相色谱的1/7,且两种介质都能耐受极端pH值清洗条件,重复利用率高. 展开更多
关键词 聚己内酰胺 琼脂糖凝胶 疏水相互作用 亲水相互作用 缩宫素 纯化
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一种疏水色谱填料的特性及应用的研究 被引量:7
17
作者 王云 郭敏亮 +3 位作者 姜守磊 陈天 姜涌明 陈云 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期354-356,共3页
以交联壳聚糖为基质 ,正戊醛为配基 ,利用改进的方法制备了疏水作用色谱 (HIC)填料 ,并对该色谱填料的吸附行为和应用作了研究。结果表明 ,此类填料对蛋白质的吸附行为符合疏水相互作用理论 ,对α 淀粉酶的纯化活性回收率大于 80 %。
关键词 疏水作用色谱 填料 壳聚糖 吸附行为
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新型疏水色谱填料—丁基交联壳聚糖的合成 被引量:7
18
作者 王峥 郭敏亮 +3 位作者 姜涌明 王云 姜守磊 陈云 《功能高分子学报》 CAS CSCD 2001年第1期81-84,共4页
合成了一种以壳聚糖为载体 ,以正丁基为配基 ,并以戊二醛交联提高其机械强度的新型疏水色谱填料—丁基交联壳聚糖 ,并对其合成条件的控制进行了研究。结果表明 :交联剂用量、反应物比例以及反应物浓度决定了合成填料的疏水性能。为保证... 合成了一种以壳聚糖为载体 ,以正丁基为配基 ,并以戊二醛交联提高其机械强度的新型疏水色谱填料—丁基交联壳聚糖 ,并对其合成条件的控制进行了研究。结果表明 :交联剂用量、反应物比例以及反应物浓度决定了合成填料的疏水性能。为保证良好的操作性、实用性及较佳的分离效果 ,比较合适的合成条件是 :戊二醛浓度 0 .1 % (V/V ) ,正丁醛浓度 0 .1 3 %~ 0 .2 6% (V/V ) ,壳聚糖浓度 2 g/L~ 1 0g/L。不同条件下合成的色谱填料对枯草杆菌α-淀粉酶粗品的分离提纯效果明显不同 ,进一步说明合成条件对色谱填料性能的影响。 展开更多
关键词 丁基交联壳聚糖 疏水填料 疏水作用色谱 合成
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用参数Z表征疏水色谱中脲浓度与蛋白质分子的构象变化 被引量:8
19
作者 卫引茂 常晓青 耿信笃 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 1997年第4期396-399,共4页
研究了5种标准蛋白在流动相中含有不同脲浓度条件下的疏水色谱保留行为。当脲 浓度不变时,蛋白质的保留仍然服从计量置换保留模型,并可测定在该特定脲浓度条件下蛋白质的Z值。计量置换参数Z可作为疏水色谱中生物大分子构象变化的... 研究了5种标准蛋白在流动相中含有不同脲浓度条件下的疏水色谱保留行为。当脲 浓度不变时,蛋白质的保留仍然服从计量置换保留模型,并可测定在该特定脲浓度条件下蛋白质的Z值。计量置换参数Z可作为疏水色谱中生物大分子构象变化的表征。蛋白质的Z值随脲浓度的增大而减小。除分子构象变化的因素外,Z值变化与脲参与置换剂分子间的计量置换过程有关。Z值变化的连续性与否直接反映了蛋白质分子构象的连续性变化或突变。 展开更多
关键词 蛋白质 疏水作用色谱 构象变化 HIC
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高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用 被引量:1
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作者 刘威 翁凌霄 +1 位作者 高明霞 张祥民 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期601-612,共12页
蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究... 蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。 展开更多
关键词 高效液相 反相液相 亲水相互作用 疏水作用色谱 离子交换 体积排阻 蛋白质组学
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