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基于病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法的LsRGL1基因在生菜中的功能分析
1
作者 陈丽 范双喜 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期21-26,60,共7页
为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡... 为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡切片、实时荧光定量PCR(qPCR)方法、酶联免疫吸附法(ELISA)分别研究空白对照组(无TRV载体)、阴性对照组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2空载体)和试验组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2-LsRGL1重组载体)中植株表型、花芽分化、LsRGL1基因的相对表达量和内源激素质量分数的变化。结果表明:病毒侵染后,试验组植株的茎长相对于空白对照组和阴性对照组的茎长明显增大,且试验组各项表型数据均大于2个对照组的表型数据,而空白对照组与阴性对照组各项表型数据之间并未出现明显差异;石蜡切片结果表明试验组植株已经开始花芽分化,相较于对照组提前进入生殖生长时期;qPCR分析结果显示,试验组中LsRGL1基因的相对表达量相较于空白组和阴性对照组的显著下调,且下调幅度均超过50%。试验组中内源激素赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)的含量显著高于对照组的含量,而茉莉酸(JA)含量显著下降。综上可知,沉默LsRGL1基因加快了生菜的抽薹。 展开更多
关键词 生菜 表达分析 内源激素 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术及其在大豆基因功能研究和育种中的应用潜力 被引量：4
2
作者 王爽 郭兵福 +4 位作者 郭勇 张丽娟 金龙国 杨慧 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期536-540,共5页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观察表型等优点而被广泛应用于基因的功能鉴定。文章对VIGS技术的分子机理、病毒载体系统、稳定遗传VIGS植株的获得策略及其在大豆中的应用等内容进行了综述并对今后的发展趋势进行了讨论。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 病毒载体 功能基因 育种
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苏麦3号小麦穗部病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系的建立及验证 被引量：3
3
作者 吴磊 姜朋 +2 位作者 张瑜 马鸿翔 张旭 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共5页
为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗... 为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗中PDS基因表达量下调了77%(P<0.05)。接种BSMV∶00的小麦穗受到赤霉病菌侵染后,穗部平均病小穗数和DON毒素含量分别为2.75个和4.55μg/g,与接种无菌水对照无显著差异(P>0.05)。说明在苏麦3号穗部VIGS系统中,通过接种病毒能使靶标基因沉默;接种赤霉病菌后,苏麦3号病小穗数和DON毒素含量不受接种病毒的影响,对赤霉病菌的抗性保持不变,建立的VIGS体系可以应用于小麦赤霉病抗性候选基因的功能分析。 展开更多
关键词 小麦 赤霉病抗性 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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番茄SlERF-H6基因VIGS沉默载体构建
4
作者 李立霞 胡康棣 +1 位作者 姚改芳 张华 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第9期1232-1235,1242,共5页
番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信号转导和代谢物调节等多种生理过程中起重要的调节作用。文章以番茄的SlERF-H6(LOC101259323)基因为研究对象,通过对SlERF-H6的基因序列进行分析,获得该基因的特异性区域沉默序列。利用同源重组技术成功构建了番茄SlERF-H6病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。为进一步探究番茄SlERF-H6基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多
关键词 番茄 病毒诱导的基因沉默(vigs) SlERF-H6基因 同源重组 载体构建
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病毒诱导基因沉默(VIGS)在禾本科植物中的研究进展 被引量：2
5
作者 田焕焕 覃瑞 +2 位作者 刘虹 刘清云 李刚 《植物学研究》 2014年第3期91-104,共14页
病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)是近几年新发展起来的一种反向遗传学技术。它是通过将含有目的基因的重组病毒载体导入到宿主植物中,抑制植物内源基因表达,使其表现出目标基因功能丧失或表达水平下降的表型,属... 病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)是近几年新发展起来的一种反向遗传学技术。它是通过将含有目的基因的重组病毒载体导入到宿主植物中,抑制植物内源基因表达,使其表现出目标基因功能丧失或表达水平下降的表型,属于转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS)。与传统的技术相比,VIGS技术具有操作简便、无需构建转基因植株、能快速获得沉默表型等明显优点,现已被广泛应用于植物功能基因组学的研究。本文对VIGS的作用机制、操作过程、影响沉默效率的因素、应用领域各个方面进行阐述,其中会对禾本科植物中的可用载体、研究进展、前景展望进行重点介绍。 展开更多
关键词 病毒诱导基因沉默(vigs) vigs载体 沉默效率 禾本科
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RNAi介导SMV-P3基因沉默增强大豆对花叶病毒病的抗性 被引量：5
6
作者 杨向东 牛陆 +6 位作者 张伟 杨静 杜茜 邢国杰 郭东全 李启云 董英山 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1647-1655,共9页
大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,将编码参与... 大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,将编码参与SMV运动和影响宿主域范围的P3蛋白基因RNAi片段导入栽培大豆品种,研究RNAi介导SMV-P3基因沉默对大豆抗SMV的影响。Southern杂交检测结果表明,外源RNAi片段以低拷贝的形式（1~4个）整合至大豆基因组中。对T_1~T_3代转基因大豆喷施除草剂和PCR鉴定结果表明,外源T_-DNA插入片段在转基因大豆不同代际间能够稳定遗传。对T_2和T_3代转基因大豆接种SMV鉴定结果表明,转基因大豆对我国大豆产区主要流行SMV株系SC-3较非转基因对照受体品种Williams 82和SN9的抗性水平显著提高,病情指数降低至4.37~18.51,且抗性能够稳定遗传。综上所述,RNAi介导SM-P3基因沉默能够显著提高转基因大豆对SMV的抗性水平。 展开更多
关键词 大豆 大豆花叶病毒病 SMV-P3 RNAi介导基因沉默
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病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)在园林植物中的研究与应用
7
作者 张丽英 《河南林业科技》 2022年第2期32-34,共3页
基因沉默在基因功能验证中应用愈加广泛,而病毒诱导的基因沉默技术作为其主要的方法之一,对于基因验证具有重要作用。从VIGS的发展、原理、分类、效率及应用等方面梳理病毒诱导的基因沉默技术在园林植物中的研究与应用,以期为园林植物... 基因沉默在基因功能验证中应用愈加广泛,而病毒诱导的基因沉默技术作为其主要的方法之一,对于基因验证具有重要作用。从VIGS的发展、原理、分类、效率及应用等方面梳理病毒诱导的基因沉默技术在园林植物中的研究与应用,以期为园林植物的基因组研究夯实基础。 展开更多
关键词 基因沉默 vigs 园林植物 病毒诱导
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菊芋HtMYB2基因VIGS体系构建与功能验证
8
作者 王莹 李娟 孙雪梅 《中国农学通报》 2024年第24期116-121,共6页
颜色作为一种重要的农艺性状,影响作物的价值。紫皮菊芋与白皮菊芋相比,具有较好的外观颜色、营养价值和商品价值。本研究旨在探究菊芋块茎表皮颜色形成的潜在机制。通过前期转录组测序技术对紫皮和白皮菊芋块茎表皮分析,筛选得到与花... 颜色作为一种重要的农艺性状,影响作物的价值。紫皮菊芋与白皮菊芋相比,具有较好的外观颜色、营养价值和商品价值。本研究旨在探究菊芋块茎表皮颜色形成的潜在机制。通过前期转录组测序技术对紫皮和白皮菊芋块茎表皮分析,筛选得到与花青素合成代谢相关转录因子HtMYB2。本研究以紫皮菊芋品种为材料,利用VIGS技术将HtMYB2进行基因沉默,对其功能进行验证。结果表明侵染后的菊芋块茎表皮颜色变浅,花青素含量显著下降为15.34 mg/g;同时RT-PCR结果显示HtMYB2基因表达量为2.06,与对照组相比显著降低,沉默效率为73.96%,推测HtMYB2基因的沉默使菊芋块茎中花青素基因的表达受阻,花青素合成功能减弱,导致花青素含量降低,表明HtMYB2基因在花青素合成途径中起正调控作用。本研究为菊芋块茎表皮花青素的生物合成机理提供理论依据,并进一步揭示了该基因在调控块茎颜色和花青素合成途径中的重要性。 展开更多
关键词 菊芋 HtMYB2 花青素 病毒介导的基因沉默(vigs) 块茎表皮颜色 逆转录聚合酶链反应 基因表达 生物合成途径
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利用病毒介导基因沉默方法研究小麦抗光氧化相关基因 被引量：2
9
作者 陈坤梅 李宏伟 +4 位作者 林凡云 陈耀锋 李滨 郑琪 李振声 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1905-1913,共9页
为了鉴定可能的小麦抗光氧化基因,利用大麦条斑病毒(barley stripe mosaic virus,BSMV)介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)系统,对6个小偃54响应强光的基因进行了沉默表达研究。以BSMV:GFP植株为对照,分析了这些基因的... 为了鉴定可能的小麦抗光氧化基因,利用大麦条斑病毒(barley stripe mosaic virus,BSMV)介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)系统,对6个小偃54响应强光的基因进行了沉默表达研究。以BSMV:GFP植株为对照,分析了这些基因的减量表达植株在低温强光、DCMU、MV、H2O2等处理下的PSII最大光化学效率(F v/F m)和光合性能指数(P.I.)、MDA含量及整株生物量变化。结果显示,Ta23008和Ta92165均参与小麦对低温强光、DCMU、MV和H2O2等胁迫的响应过程;Ta106078参与小麦对DCMU、MV和H2O2等胁迫的响应过程;Ta27787参与小麦对低温强光、DCMU和H2O2等胁迫的响应过程;Ta24695参与小麦对低温强光和H2O2胁迫的响应过程;而Ta119251仅参与小麦对DCMU的响应过程。此外,Ta23008、Ta92165、Ta106078、Ta119251四个基因被抑制表达后,其转化株系的生物量比对照显著降低,推测其可能参与调控小麦生物量的积累。 展开更多
关键词 小麦 大麦条斑病毒(BSMV) 病毒介导的基因沉默 基因功能 光氧化
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基于VIGS的柑橘黄化脉明病毒防控技术研究
10
作者 李楚欣 宋晨虎 +4 位作者 周金环 李佳欣 王新亮 田旭斌 宋震 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第22期4473-4482,共10页
【目的】柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是一种严重危害柑橘产业的新发病毒,目前尚无有效的治疗药剂,主要通过使用无病毒苗木和严格防控传播虫媒进行防控。本研究旨在探索基于病毒介导的基因沉默(virus-ind... 【目的】柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是一种严重危害柑橘产业的新发病毒,目前尚无有效的治疗药剂,主要通过使用无病毒苗木和严格防控传播虫媒进行防控。本研究旨在探索基于病毒介导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)的CYVCV防控技术,以期获得抗病毒“疫苗”,为柑橘病毒病防控提供新思路。【方法】基于实验室前期构建的VIGS载体pCLBV201,针对CYVCV基因组ORF1(open reading frame 1)、ORF6、CP(coat protein)和TGB(triple gene block)的保守区域设计、构建一系列重组载体,通过农杆菌介导的真空浸润接种尤力克柠檬并进行RT-PCR检测。获得pCLBV201-ORF1、pCLBV201-ORF6、pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB阳性植株后,通过农杆菌介导的注射法接种CYVCV侵染性克隆,并以pCLBV201空载接种植株为对照,开展RT-qPCR、Western blot检测、症状观察和病情指数统计,从而明确不同VIGS重组载体对CYVCV的防控效果。【结果】构建了系列pCLBV201重组载体,接种后的RT-PCR检测结果表明,分别获得p CLBV201-ORF1、pCLBV201-ORF6、pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB阳性植株多株;注射接种CYVCV侵染性克隆,7、14、28、70和150 dpi(days post infection)的RT-qPCR检测结果显示,pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB处理组的CYVCV相对表达量均较对照显著降低;70和150 dpi Western blot检测结果表明,pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB处理组的CP蛋白表达量显著下降;症状观察显示,对照组表现为严重的脉明、叶片扭曲等CYVCV侵染典型症状,pCLBV201-CP处理组植株的症状轻微,pCLBV201-TGB处理组植株不表现明显症状;70和150 dpi病情指数统计显示,pCLBV201-CP和pCLBV201-TGB的病情指数最低,分别为17.6、41.2和15.6、29.1,而对照组为52.1、80.0,差异明显。【结论】研发了基于VIGS的CYVCV防控技术,明确了pCLBV201-CP、pCLBV201-TGB能够显著降低病毒滴度、减轻病毒引起症状,有用作CYVCV防控“疫苗”的潜力。 展开更多
关键词 柑橘黄化脉明病毒 pCLBV201 病毒介导的基因沉默 RNA干扰
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广藿香PcGA2ox1基因克隆、VIGS载体构建和表达分析
11
作者 严雅玲 曾晴 +2 位作者 严寒静 何梦玲 张宏意 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期19-26,共8页
赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学... 赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学分析结果表明,PcGA2ox1蛋白编码186个氨基酸,为亲水性蛋白,分子量为20.98 kDa,等电点为5.81,不含信号肽,无跨膜结构域,具有GA2ox超基因家族的保守结构域,主要定位在细胞核。系统发育分析结果显示,PcGA2ox1基因与丹参GA2ox7的亲缘关系最为密切。qRT-PCR结果显示,PcGA2ox1基因在广藿香中的表达具有组织特异性,叶中表达量最高,根中表达量最低。用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术侵染广藿香的结果显示,侵染两周后,PcGA2ox1基因表达量比阴性对照下降83%,比空白对照下降71%,沉默效果明显。本研究结果可为深入了解PcGA2ox1结构、功能和作用机理奠定基础,并为广藿香优良品种选育提供参考。 展开更多
关键词 广藿香 赤霉素2-氧化酶(GA2ox) 基因克隆 病毒诱导基因沉默(vigs) 表达分析
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利用VIGS技术在本氏烟中沉默枸杞PDS同源基因的研究 被引量：2
12
作者 曲玲 李彦龙 +6 位作者 焦恩宁 赵建华 秦垦 尹跃 周旋 安巍 曹有龙 《宁夏农林科技》 2021年第2期25-30,F0002,共7页
【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的V... 【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的VIGS空载体中,通过农杆菌介导的侵润接种,将重组的病毒沉默载体pTRV2-PDS转入本氏烟中。【结果】本氏烟幼苗被侵染接种后,沉默处理植株的叶片呈现整叶白化的表型,而阴性对照植株叶片一直未出现变白的症状,qRT-PCR检测表明,接种17 d后,与阴性对照植株相比,沉默处理植株PDS基因的表达显著地被抑制(P<0.05),说明枸杞PDS基因的同源基因在本氏烟中得到了有效沉默。【结论】该VIGS体系的构建,可用于对枸杞部分基因功能的快速初步鉴定和筛选,旨在提高枸杞基因功能研究的效率。 展开更多
关键词 枸杞 八氢番茄红素脱饱和酶基因(PDS) 病毒诱导基因沉默(vigs) 本氏烟
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VIGS:植物功能基因组学研究的革命 被引量：15
13
作者 姚丹青 张微微 +3 位作者 原丽华 潘俊松 何欢乐 蔡润 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期155-161,共7页
病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是一种RNA介导的抗病毒防御反应机制,目前在植物反向遗传学领域已经表现出巨大的潜力。VIGS技术不仅优于传统的植物转基因技术,方法简便,高效耐用,而且具有高通量特性。在功能... 病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术是一种RNA介导的抗病毒防御反应机制,目前在植物反向遗传学领域已经表现出巨大的潜力。VIGS技术不仅优于传统的植物转基因技术,方法简便,高效耐用,而且具有高通量特性。在功能基因组学领域的研究中,这些优越性已经使VIGS技术成为最具吸引力的首选技术手段。目前,VIGS体系应用最成功的植物是病毒学家常用的模式植物-本氏烟草(Nicotiana benthamiana),与此同时,也在努力改良VIGS技术,使其能够在包括单子叶植物在内的其它物种中得到广泛应用。我们讨论的重点是针对利用VIGS技术来确定基因功能,该技术已经在抗病性,逆境胁迫,细胞信号传导以及次生代谢生物合成途径研究中显示出相关基因功能的多样性,并随之构建出一系列新的相关模型。 展开更多
关键词 vigs 病毒载体 基因沉默 功能基因组学
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马铃薯Y病毒CP基因5′端和3′端反向重复结构介导的抗病性研究 被引量：16
14
作者 李鹏 宋云枝 +2 位作者 刘晓玲 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期69-76,共8页
本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)外壳蛋白(CP)基因(PVYNCP)5′端和3′端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKII-5′IR和pROKII-3′IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草。抗病性... 本研究克隆了来源于马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)外壳蛋白(CP)基因(PVYNCP)5′端和3′端的反向重复cDNA序列,并构建了植物表达载体pROKII-5′IR和pROKII-3′IR,利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草NC89,分别获得166和126株转基因烟草。抗病性试验表明,转化PVYNCP基因3′端茎50 bp(环50 bp)hp RNA(hairpin RNA)的烟草抗病率达69%,而转化PVYNCP基因5′端相同片段长度的hpRNA的烟草却全部发病。Southern blot结果表明,转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性;Northern blot结果表明,目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的抗病性。研究结果证明PVYNCP基因的3′端比5′端更能有效地诱发基因沉默,并且hpRNA茎部的长度可减少到50 bp。该结果为探索利用CP基因的最短长度和有效部位的基因片段来培育多抗病毒转基因植物提供了依据。 展开更多
关键词 RNA介导的基因沉默 反向重复结构 HPRNA 马铃薯Y病毒
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VIGS技术在植物基因功能研究中的应用 被引量：17
15
作者 杨迎伍 李正国 +1 位作者 宋红丽 杨平 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2007年第2期379-383,共5页
文章就病毒载体选择、目标基因插入片段设计、病毒嫁接技术、环境条件控制、沉默植株检测等方面对应用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术研究植物基因功能应遵循的基本原则进行介绍,并讨论了其在应用中存在的一些问题。
关键词 病毒诱导的基因沉默(vigs) 植物基因功能 应用 基本原则
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桑树PDS基因VIGS转化体系的构建与鉴定 被引量：7
16
作者 李瑞雪 王钰婷 +3 位作者 胡飞 夏家凤 汪泰初 赵卫国 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1432-1438,共7页
【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(T... 【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(TRV)连接构建重组病毒载体p TRV2-PDS,转化农杆菌GV3101后通过压迫注射方式侵染桑树幼苗叶片。【结果】克隆获得的桑树PDS基因干扰片段346 bp,与改造后的TRV质粒连接可成功构建携带桑树PDS基因的重组病毒载体p TRV2-PDS。桑树叶片被侵染15 d后,接种重组病毒载体p TRV2-PDS桑树的第二轮真叶开始出现叶片白化现象,侵染20 d后,白化现象沿叶脉向四周逐渐扩散,叶片呈现明显的白化表型。实时荧光定量PCR检测结果显示,重组病毒载体p TRV2-PDS侵染的桑叶PDS基因相对表达量仅为阴性对照(p TRV2)的58%,二者差异极显著(P<0.01),表明桑树PDS基因表达被有效抑制。【结论】利用TRV构建的桑树VIGS体系能有效沉默PDS基因,使桑树叶片呈现明显的白化症状,即可用于后续的桑树功能基因鉴定。 展开更多
关键词 桑树 八氢番茄红素脱氢酶(PDS) 病毒诱导的基因沉默(vigs) 烟草脆裂病毒(TRV) 白化表型
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转录后基因沉默与植物的病毒抗性 被引量：20
17
作者 温孚江 朱常香 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期231-235,共5页
转录后基因沉默 (PTGS)是近 10年发现的一种生物 (特别是真核生物 )细胞抵抗外来核酸入侵及保持生物自身基因组完整性的防御机制 ,特别是与生物的病毒抗性密切相关。PTGS最初在植物内发现 ,近几年又分别在真菌、动物等生物细胞内发现。... 转录后基因沉默 (PTGS)是近 10年发现的一种生物 (特别是真核生物 )细胞抵抗外来核酸入侵及保持生物自身基因组完整性的防御机制 ,特别是与生物的病毒抗性密切相关。PTGS最初在植物内发现 ,近几年又分别在真菌、动物等生物细胞内发现。经过 10年的研究 ,我们对PTGS的机制和特点有了相当的了解。这不但对深入地了解基因的表达调控机制意义重大 ,而且还可为人们如何调控和利用PTGS奠定了基础。本文从PTGS的特点、PTGS与病毒抗性、PTGS在真核生物内发生的广泛性等方面进行综述 。 展开更多
关键词 转录后基因沉默 转基因植物 RNA-介导 病毒抗性 RNA干扰
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黑籽南瓜NBS类基因CfRFN2的克隆及VIGS验证 被引量：2
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作者 丁玉梅 侯思名 +4 位作者 姚春馨 杨加珍 谢俊俊 曾亚文 杨正安 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期727-737,共11页
黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN 2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为40... 黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN 2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为4092 bp,编码1363个氨基酸残基,该基因注释为拟南芥抗病蛋白At4g27190类转录体X1的同源基因,含有1个NB-ARC和2个LRR结构域,属于具有信号肽的可溶性蛋白。核苷酸相似性分析显示,CfRFN 2与其他瓜类NBS类基因相似性在87%~98%之间;系统进化树分析表明,CfRFN2蛋白和瓜类的其他NBS类抗病蛋白聚为一个分支,其中CfRFN2蛋白与中国南瓜和美洲南瓜的RPS2、印度南瓜的RPS2-like亲缘关系最近,其次是黄瓜的At4g27190和苦瓜的At4g27220,与甜瓜的Atg27190亲缘关系相对较远;组织表达特性分析表明,CfRFN 2基因在黑籽南瓜叶片中表达量最高,其次是茎,而在果皮和根中表达量较低。该研究采用烟草脆裂病毒载体系统,构建了黑籽南瓜VIGS沉默载体pTRV2-CfRFN 2,含沉默载体的农杆菌侵染黑籽南瓜幼苗后接种枯萎病菌,qRT-PCR检测表明,接种后2 d和4 d的转pTRV2-CfRFN 2沉默组植株的CfRFN 2基因表达量比接种后同时期的野生型植株显著降低(分别下降34.75%和98.27%),病情指数增加为野生型的1.32倍,初步证明黑籽南瓜CfRFN 2基因具有抗枯萎病的功能,推测该基因可能在黑籽南瓜抗枯萎病防御过程中发挥着重要作用。该研究中NBS类基因CfRFN2的克隆和VIGS验证为黑籽南瓜更多优异基因的克隆和功能验证奠定了前期基础,也为发掘黑籽南瓜优异抗病基因和开展瓜类分子育种提供新信息。 展开更多
关键词 黑籽南瓜 NBS类基因 枯萎病 基因克隆 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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转录后基因沉默与植物抗病毒防卫机制 被引量：9
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作者 刘征 李润植 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2001年第3期274-279,共6页
介绍了转录后基因沉默及其作为植物一种抗病毒防卫机制的最新研究进展 ,并进一步探讨了植物与病毒互作及共进化过程、基因沉默及其诱导技术在植物基因调控表达、改良植物抗病性和植物功能基因组学等研究领域的应用前景。
关键词 转录后基因沉默 植物 RNA介导 抗病性 病毒诱导基因沉默 功能基因组学
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RNA介导的转录后基因沉默 被引量：2
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作者 余有本 江昌俊 李叶云 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第2期259-267,共9页
RNA介导的转录后基因沉默 (post transcriptionalgenesilencing ,PTGS)指一种普遍存在于生物界的 ,由双链RNA (doublestrandedRNA ,dsRNA)引起同源mRNA降解进而导致基因不表达的的生物学现象。其最重要的特点是只会特异性抑制同源性mRN... RNA介导的转录后基因沉默 (post transcriptionalgenesilencing ,PTGS)指一种普遍存在于生物界的 ,由双链RNA (doublestrandedRNA ,dsRNA)引起同源mRNA降解进而导致基因不表达的的生物学现象。其最重要的特点是只会特异性抑制同源性mRNA的表达 ,而不影响其他基因的表达 ,并能稳定地遗传到后代中。RNA介导的PTGS具有多种生物学功能 ,如抵御外来遗传物质的侵犯和病毒的侵染 ,控制生物体的生长发育等。RNA介导的PTGS将是目前分子生物学领域的研究热点之一 ,并在研究基因功能、基因治疗、抗病毒基因工程、剖析和调控次生代谢途径等方面有着广阔的应用前景。本文对RNA介导的PTGS的历史、机制、特点、相关酶类、生物学功能及应用作了比较详尽的综述。 展开更多
关键词 转录后基因沉默 RNA介导 生物学功能 发生机理 功能基因组研究 基因治疗 抗病毒基因工程
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