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新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建 被引量:9
1
作者 仲大莲 余为一 +2 位作者 刘兢 李向明 郭霄峰 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期34-37,共4页
应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3... 应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-HN基因片段。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 免疫 真核表达重组质粒 构建 NDV 禽病
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新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建 被引量:7
2
作者 许发芝 仲大莲 余为一 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期280-284,共5页
应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向... 应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 真核表达重组质粒 构建
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弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建 被引量:10
3
作者 吴昆 陈晓光 +1 位作者 李华 支国舟 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第7期620-623,共4页
目的 构建弓形虫棒状体蛋白2(POP2)基因真核表达重组质粒。方法 根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构... 目的 构建弓形虫棒状体蛋白2(POP2)基因真核表达重组质粒。方法 根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR I、Not I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果 ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论 在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 ROP2基因 体外扩增 真核表达重组质粒 DNA疫苗
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日本血吸虫真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26的构建及其在树突状细胞中的表达 被引量:1
4
作者 沈定文 李雍龙 +2 位作者 刘文琪 龙小纯 刘娟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第2期65-70,共6页
本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧... 本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定。用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3- Sj2 6转染DC ,G4 18加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT PCR检测Sj2 6mRNA的转录水平,用SDS- PAGE、Westernblot和间接免疫荧光法检测Sj2 6蛋白在DC中的表达。结果PCR扩增得到特异的Sj2 6基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3 -Sj2 6重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj2 6的一致性均为99% ;RT PCR结果显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6基因mRNA的表达,SDS -PAGE和Westernblot、间接免疫荧光法显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6的表达。结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3- Sj2 6成功的转染至DC中并在DC中获得表达。 展开更多
关键词 日本血吸虫 真核表达重组质粒 pcDNA3-Sj26 树突状细胞 基因转染 免疫功能
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恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒的构建 被引量:1
5
作者 单志新 余新炳 +3 位作者 卞国武 马长玲 陈守义 周永安 《中国热带医学》 CAS 2001年第4期294-298,共5页
目的 构建包含恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。方法 从FCC1/HN株基因组DNA中PCR扩增Pf332基因片段 ,P332 -RO、P332 -R1和P332 -R2 ;用PCR扩增法合成鼠IgG轻链隹号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建... 目的 构建包含恶性疟原虫Pf332基因片段的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。方法 从FCC1/HN株基因组DNA中PCR扩增Pf332基因片段 ,P332 -RO、P332 -R1和P332 -R2 ;用PCR扩增法合成鼠IgG轻链隹号肽的编码序列。用定向克隆法分别构建分泌型重组质粒pcDNA3 -s -P332 -R0、pcDNA3 -s -P332 -R1、pcDNA3 -s -P332 -R2和非分泌型重组质粒pcDNA3 -s -P332 -R0、pcDNA3 -s -P332 -R1、pcDNA3 -s -P332 -R2。阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf332基因片段 ,P332 -R0、P332 -R1、P332 -R1,大小分别为 489、42 9和 393bp。用PCR扩增法合成 6 3bp的Balb/c小鼠IgG轻链信号肽的编码序列。酶切、PCR及测序鉴定表明获得了正确的含Pf332基因片段的分泌型、非分泌型重组质粒。结论 成功构建分别包含恶性疟原虫Pf332基因片段—P332 -R0、P332 -R1和P332 -R2的分泌型、非分泌型真核表达重组质粒。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 Pf332 基因片段 分泌型 非分泌型 真核表达重组质粒
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恶性疟原虫海南株CTP基因测序重组质粒及真核表达重组质粒的构建
6
作者 陈慧红 余新炳 +1 位作者 吴忠道 徐劲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期22-24,共3页
目的 构建恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 ,以便进一步研究CTP基因的结构与功能。方法 根据已发表恶性疟原虫CTP基因的序列〔1〕,设计并合成一对引物。将扩增的CTP基因的PCR产物连接于测序载体pUC19上 ,经测序反... 目的 构建恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 ,以便进一步研究CTP基因的结构与功能。方法 根据已发表恶性疟原虫CTP基因的序列〔1〕,设计并合成一对引物。将扩增的CTP基因的PCR产物连接于测序载体pUC19上 ,经测序反应确定无误。用HindⅢ和BamHⅠ双酶切将CTP基因从测序载体中切下 ,构建于真核表达载体pcDNA3上。 结果 构建了恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒 ,并对其进行了测序。并将恶性疟原虫的CTP基因从测序重组质粒中切下 ,克隆进真核表达重组质粒 pcDNA3。 结论 成功地构建了恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 聚合酶链式反应 基因克隆 基因测序 CTP基因 真核表达重组质粒 疟疾
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Homer1基因真核表达重组质粒构建及HT22细胞转染鉴定 被引量:2
7
作者 曹敏 张晓敏 +1 位作者 王培昌 刘静 《山东医药》 CAS 2020年第22期44-47,共4页
目的构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定。方法提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1%琼脂糖凝胶电泳分离后,将Homer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆... 目的构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定。方法提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1%琼脂糖凝胶电泳分离后,将Homer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序。取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染。采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达。结果成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致。p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均<0.05),而p3×FLAG-CMV-10空载体组与空白对照组Homer1蛋白相对表达量比较P>0.05。结论本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 Homer1基因 真核表达重组质粒 瞬时转染
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弓形虫GRA8基因真核表达重组质粒的构建、鉴定及测序 被引量:4
8
作者 杨慧龄 肖建华 +3 位作者 刘彦 杨秋林 张愉快 刘传爱 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期324-326,共3页
目的 构建弓形虫RH株 pcDNA3 .1( + ) GRA8真核表达重组质粒 ,为进一步DNA免疫做准备。方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码致密颗粒蛋白(GRA8)的基因片段 ,纯化后重组入 pUC 19克隆载体 ,再经含IPTG ,XGal... 目的 构建弓形虫RH株 pcDNA3 .1( + ) GRA8真核表达重组质粒 ,为进一步DNA免疫做准备。方法 用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码致密颗粒蛋白(GRA8)的基因片段 ,纯化后重组入 pUC 19克隆载体 ,再经含IPTG ,XGal氨苄培养基蓝白筛选 ,挑选白色克隆酶切 ,低溶点琼脂糖纯化 ,回收目的基因亚克隆入pcDNA3 .1( + ) ,经氨苄培养基过夜培养挑选 6个克隆提纯酶切 ,PCR鉴定和测序。结果 从RH株基因组DNA中扩增出特异的GRA 8基因片段 ,克隆成功pcDNA3 .1( + ) GRA 8重组质粒。测序表明GRA8这部分基因与GENEBANK相应基因序列完全一致。 展开更多
关键词 弓形虫 GRA8基因 真核表达重组质粒 构建 鉴定 测序
原文传递
真核表达NDV F基因重组质粒的构建及其在CEF细胞中的转染
9
作者 刘兆球 姜世金 常维山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期444-446,共3页
通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将... 通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将该重组质粒命名为pcDNANDVZF。将pcDNANDVZF在脂质体作用下转染CEF细胞 ,用间接免疫荧光试验检测 ,结果证明pcDNANDVZF可在CEF细胞中大量表达F蛋白。 展开更多
关键词 真核重组表达质粒 新城疫病毒F基因 转染
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哈维氏弧菌FlaA基因的克隆、序列分析及真核表达质粒的构建 被引量:3
10
作者 庄轩 覃映雪 +2 位作者 苏永全 王军 丁少雄 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期74-79,共6页
哈维氏弧菌是水产病害中常见的致病菌.参照基因库上登录的弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因序列设计简并引物,PCR扩增哈维氏弧菌TS-628株的FlaA全基因,并克隆到pMD 18-T载体中测序,经序列分析该基因全长1 140 bp,编码379个氨基酸.与基因库中其他... 哈维氏弧菌是水产病害中常见的致病菌.参照基因库上登录的弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因序列设计简并引物,PCR扩增哈维氏弧菌TS-628株的FlaA全基因,并克隆到pMD 18-T载体中测序,经序列分析该基因全长1 140 bp,编码379个氨基酸.与基因库中其他弧菌的同源基因序列比较显示,哈氏弧菌FlaA基因与霍乱弧菌FlaA基因的同源性最高(79.5%),该基因编码的多肽缺乏半胱氨酸,并在N-,C-两端的氨基酸序列较为保守,中间区域的变异较大.对该蛋白的氨基酸组成及空间结构进行了分析和预测,并推测该蛋白质的平均分子量为40.6 kDa.在该基因末端加上一段编码Flag短肽的核苷酸序列后克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),获得带哈氏弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因的真核表达重组质粒pcDNA-FlaA-tag,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础. 展开更多
关键词 哈维氏弧菌 FlaA基因 基因克隆 序列分析 真核表达重组质粒
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MDR1基因shRNA真核表达质粒的构建
11
作者 李旭艳 邵淑丽 恽冬泽 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第2期38-40,206,共4页
为了构建靶向MDR1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达重组质粒,试验针对MDR1基因序列选取3个干涉靶点,设计合成3条编码shRNA的DNA模板,分别定向克隆到真核表达质粒pSilencer 3.1-H1中构建重组质粒,再进行菌落PCR扩增和测序鉴定。结果表明:... 为了构建靶向MDR1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达重组质粒,试验针对MDR1基因序列选取3个干涉靶点,设计合成3条编码shRNA的DNA模板,分别定向克隆到真核表达质粒pSilencer 3.1-H1中构建重组质粒,再进行菌落PCR扩增和测序鉴定。结果表明:菌落PCR扩增得到与预期大小相同的阳性带,经DNA测序证实插入片段完全符合设计要求,序列无突变。说明成功构建了3个靶向MDR1基因的真核表达重组质粒pSilencer 3.1-H1 shRNA。 展开更多
关键词 MDR1基因 短发夹RNA(shRNA) 真核表达重组质粒 H1启动子
原文传递
pEGFP/MOMP真核表达重组体的构建及表达
12
作者 粟盛梅 李忠玉 +2 位作者 余敏君 占利生 唐双阳 《中国麻风皮肤病杂志》 2005年第7期509-511,共3页
目的:克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建pEGFP/MOMP真核表达重组质粒,为沙眼衣原体核酸疫苗的研制提供依据。方法:用PCR方法从D型Ct基因组中扩增MOMP全基因片段,克隆入真核表达载体pEGFP相应的酶切位点中,阳性重组子经BamHI、K... 目的:克隆沙眼衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因,构建pEGFP/MOMP真核表达重组质粒,为沙眼衣原体核酸疫苗的研制提供依据。方法:用PCR方法从D型Ct基因组中扩增MOMP全基因片段,克隆入真核表达载体pEGFP相应的酶切位点中,阳性重组子经BamHI、KpnI双酶切、PCR扩增及测序鉴定;并经脂质体介导转染HeLa细胞,36h后观察瞬时表达情况。结果:PCR扩增得到约1.2kb的特异性MOMP基因片段;序列测定证实与GenBank登录的D型沙眼衣原体一致;筛选鉴定出真核表达重组体pEGFP/MOMP。结论:成功地构建了pEGFP/MOMP真核表达重组体,并在HeLa细胞中表达了MOMP。 展开更多
关键词 真核表达重组 PEGFP MOMP 真核表达重组质粒 HeLa细胞 沙眼衣原体 PCR扩增 主要外膜蛋白 真核表达载体 全基因片段 PCR方法 阳性重组 脂质体介导 核酸疫苗 表达情况 序列测定 基因组 克隆人 Kpn 特异性 D型 酶切 鉴定
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弓形虫表面抗原P30、P22与霍乱毒素A_2/B复合基因真核表达质粒的构建
13
作者 江渊 古钦民 《热带病与寄生虫学》 2004年第2期77-80,共4页
目的选择弓形虫 RH 株主要表面抗原 P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素 A_2/B 亚基共同构建在同一真核表达载体 pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确。方法用PCR 技术分别从弓形虫 RH 株基因组 DNA 和 pUAB024-CTXA_2/B ... 目的选择弓形虫 RH 株主要表面抗原 P30、P22的有效基因片段和霍乱毒素 A_2/B 亚基共同构建在同一真核表达载体 pcDNA3.1(-)上,并保证其连接方向和开放读码框的正确。方法用PCR 技术分别从弓形虫 RH 株基因组 DNA 和 pUAB024-CTXA_2/B 质粒中扩增编码 P30、P22基因片段和 CTXA_2/B,定向重组入 pUC18克隆载体,然后酶切释放 P30-P22-CTXA_2/B 复合基因片段,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,再经含氨苄青霉素的 LB 培养基筛选、酶切及测序鉴定。结果酶切产物经电泳显示条带清晰,P30、P22和 CTXA_2/B 基因片段的泳动位置分别在786bp、492bp、512bp 的位置,与预计结果一致;测序结果表明插入的基因片段方向及序列均正确。结论成功地构建了真核表达重组质粒 pcDNA3.1-P30-P22-CTXA_2/B,保证了三个基因连接方向,序列及开放读码框的正确,为下一步融合蛋白 P30-P22-CTXA_2/B 在哺乳动物细胞中的表达及动物实验奠定了基础。 展开更多
关键词 表面抗原P30 A2/B P22 弓形虫 真核表达质粒 复合基因 霍乱毒素 pcDNA3 真核表达重组质粒 真核表达载体 基因片段 开放读码框 基因组DNA 哺乳动物细胞 PCR技术 PUC18 LB培养基 氨苄青霉素 克隆载体 动物实验 融合蛋白
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RTN4-C基因在肝癌组织中的表达及其对SMMC7721细胞生长和凋亡的影响(英文) 被引量:2
14
作者 陈益存 陆东东 +1 位作者 曹祥荣 张锡然 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期891-897,共7页
RTN4-C属于编码内质网蛋白的基因家族(RTNs)。为研究RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达情况及其对SMMC7721肝癌细胞株的影响,利用RT-PCR检测RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达。构建RTN4-C-pcDNA3.1真核表达重组质粒,用脂质体介导转染SM... RTN4-C属于编码内质网蛋白的基因家族(RTNs)。为研究RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达情况及其对SMMC7721肝癌细胞株的影响,利用RT-PCR检测RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达。构建RTN4-C-pcDNA3.1真核表达重组质粒,用脂质体介导转染SMMC7721肝癌细胞,通过G418稳定筛选,建立转染RTN4-C/SMMC7721稳定细胞株。MTT法测定转染前后细胞生长改变、吖啶橙染色检测细胞凋亡改变、免疫细胞化学检测肿瘤相关蛋白p53、Hsp70和c-Fos表达改变。结果表明,RTN4-C/SMMC7721细胞生长减慢,与对照组相比,第2、3、4d细胞生长抑制率分别为33·8%±0·026、56·2%±0·094、34·8%±0·077;凋亡明显增多。突变型p53蛋白从核内转移到细胞质且表达减弱,c-Fos、Hsp70蛋白表达量明显减弱。提示RTN4-C基因在肝癌组织中存在表达差异,促进突变型p53的核转移并减少其表达量、抑制癌基因c-Fos和Hsp70的表达,从而抑制SMMC7721细胞的生长,促进其凋亡。 展开更多
关键词 RTN4-C SMMC7721 细胞凋亡 细胞生长 肝癌细胞 基因家族 癌组织 C-FOS表达 真核表达重组质粒 Hsp70
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hPOT1基因过表达对HeLa细胞细胞周期和凋亡的影响 被引量:2
15
作者 黄迪南 姜英华 侯敢 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第5期429-433,共5页
目的观察人POT1(protectionoftelomeres1)基因过表达对HeLa细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法利用本课题组构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;通过RT-PCR和EMSA法(电泳迁移率改变分析)检测... 目的观察人POT1(protectionoftelomeres1)基因过表达对HeLa细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法利用本课题组构建的hPOT1基因真核表达重组质粒pcDNA3-hPOT1,经脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;通过RT-PCR和EMSA法(电泳迁移率改变分析)检测外源基因的表达效果,流式细胞术分析细胞周期,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡。结果pcDNA3-hPOT1重组质粒转染HeLa细胞48h后,mRNA和蛋白质分析表明,外源性hPOT1基因能在HeLa细胞中有效表达,HeLa细胞阻滞于细胞周期S期,而对凋亡无明显影响。结论hPOT1基因可能参与了高等真核细胞细胞周期调控过程,但与细胞凋亡无密切关系。 展开更多
关键词 HELA细胞 基因过表达 HOECHST33342 电泳迁移率改变分析 真核表达重组质粒 细胞凋亡 RT-PCR 荧光染色检测 细胞周期调控 T1基因 脂质体介导 EMSA法 流式细胞术 蛋白质分析 瞬时转染 外源基因 mRNA 真核细胞 密切关系 hPO
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人BDNF重组逆转录病毒载体的构建 被引量:1
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作者 阳运康 林月秋 +1 位作者 汤逊 蔡培强 《中国骨肿瘤骨病》 2005年第4期224-227,共4页
目的构建PLEGFP—BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备。方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T... 目的构建PLEGFP—BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备。方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T—BDNF克隆,对该克隆进行限制性酶切分析和DNA序列测定;从阳性克隆中获取hBDNF全长编码片段,与真核表达载体PLEGFP质粒连接,构建PLEGFP—BDNF真核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌JM109,再经氨苄LB培养基筛选,酶切,PCR与测序鉴定。结果PLEGFP—BDNF重组逆转录病毒构建成功。结论hBDNF在大肠杆菌中的成功表达在转基因治疗CNS病变方面具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 HBDNF 基因克隆 重组逆转录病毒载体 质粒 BDNF基因 真核表达重组质粒 限制性酶切分析 全长编码序列 大肠杆菌菌株 真核表达载体
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表达H7N9AIVHA基因的DNA疫苗有望商品化应用
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《中国家禽》 北大核心 2014年第14期69-69,共1页
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所陈华兰课题组根据A/Anhui/1/2013(H7N9)株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7,将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量的pVAH... 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所陈华兰课题组根据A/Anhui/1/2013(H7N9)株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7,将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量的pVAH7单次或加强免疫3周龄SPF鸡; 展开更多
关键词 DNA疫苗 HA基因 商品化 真核表达重组质粒 中国农业科学院 应用 免疫保护 SPF鸡
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微小隐孢子虫P23基因真核表达质粒在HeLa细胞中的表达及其免疫小鼠血清抗体效价的检测 被引量:1
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作者 游艳敏 米荣升 +7 位作者 黄燕 杨衡 贾海燕 张烨华 张晓丽 刘辉 韩先干 陈兆国 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期566-573,共8页
为观察微小隐孢子虫P23基因真核重组质粒在He La细胞中的表达及免疫小鼠血清抗体产生情况,通过设计特异性引物,利用PCR技术,对微小隐孢子虫卵囊基因组DNA进行P23基因扩增;将扩增产物插入真核表达载体p VAX-1中,构建重组真核表达质粒p VA... 为观察微小隐孢子虫P23基因真核重组质粒在He La细胞中的表达及免疫小鼠血清抗体产生情况,通过设计特异性引物,利用PCR技术,对微小隐孢子虫卵囊基因组DNA进行P23基因扩增;将扩增产物插入真核表达载体p VAX-1中,构建重组真核表达质粒p VAX1-P23,转染He La细胞,运用间接免疫荧光法及Western-blot技术,验证重组质粒在He La细胞中的表达情况;将重组质粒p VAX1-P23免疫小鼠,用间接ELISA检测小鼠血清特异性抗体产生情况。结果显示,成功地扩增了长度约为336 bp的微小隐孢子虫P23基因;双酶切和序列测定结果显示,构建的真核重组表达质粒p VAX1-P23中外源基因序列和插入位置正确;间接免疫荧光法及Western-blot分析显示,p VAX1-P23真核重组表达质粒在He La细胞中被成功表达;小鼠免疫重组质粒2周后,即可检测到抗体产生,直至第8周试验结束。结果表明成功地构建了真核重组表达质粒p VAX1-P23,该重组质粒能在He La细胞和小鼠体内表达,并诱导小鼠产生显著的体液免疫反应,为进一步开展隐孢子虫P23蛋白特性研究、研制抗隐孢子虫病核酸疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 P23基因 真核重组表达质粒 表达 抗体
原文传递
H9亚型禽流感病毒血凝素特异性单因子血清制备 被引量:5
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作者 陈晓妹 王飞 +7 位作者 张翼 刘丽玲 田国斌 曾显营 管雪婷 程成 陈化兰 李雁冰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期439-442,共4页
为制备特异性的H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清,本研究分别将6株不同亚群的H9亚型AIV的血凝素(HA)基因以鸡偏嗜的密码子进行优化,经全基因合成插入高效真核表达载体pCAGGS中,构建的真核重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,间接免疫荧... 为制备特异性的H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清,本研究分别将6株不同亚群的H9亚型AIV的血凝素(HA)基因以鸡偏嗜的密码子进行优化,经全基因合成插入高效真核表达载体pCAGGS中,构建的真核重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,间接免疫荧光试验结果表明,重组质粒中的HA目的基因获得表达。将重组质粒以200μg/只的剂量免疫1月龄SPF鸡,6周后采血分离血清。交叉微量血凝抑制试验结果表明,血凝抑制效价可达8 log2~12 log2,灵敏度高,与其他AIV亚型抗原无交叉反应,型特异性强。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9亚型 真核表达重组质粒 单因子血清
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Science Letters:Construction of a eukaryotic expression plasmid of Humanin
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作者 罗本燕 陈祥明 +2 位作者 唐敏 陈峰 陈智 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2005年第1期11-13,共3页
Objective:To construct a eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(-)-Humanin.Methods:The recombinant plasmidpGEMEX-1-Humanin was digested with restriction endonucleases BamH Ⅰ and Hind Ⅲ and the Humanin gene fragments... Objective:To construct a eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1(-)-Humanin.Methods:The recombinant plasmidpGEMEX-1-Humanin was digested with restriction endonucleases BamH Ⅰ and Hind Ⅲ and the Humanin gene fragments,about100 bp length,were obtained.Then the Humanin gene fragments were inserted into eukaryotic expression vector pcDNA3.1(-)andthe recombinant plasmids pcDNA3.1(-)-Humanin were identified by sequencing.Results:Recombinant plasmid DNA success-fully produced a band which had the same size as that of the thimauin positive control.The sequence of recombinant plasmidsaccorded with the Humnain gene sequence.Conclusions:A eukaryotic expression plasmid of Humanin was successfully con-structed. 展开更多
关键词 HUMANIN Alzheimer's disease Eukaryotic expression
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