期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到6篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
骨桥蛋白短发卡样RNA质粒载体的构建与筛选 被引量：2
1
作者 孙玉梅 郑向阳 +4 位作者 周颖 别爱桂 姜凤平 闫继锋 刘启功 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2010年第2期103-107,共5页
目的 构建携带骨桥蛋白双链小干扰RNA（OPN-siRNA）的质粒表达载体,筛选出基因沉默效果最明显的短发卡样RNA（shRNA）质粒表达载体.方法 设计并合成2个针对OPN的shRNA寡核苷酸片段（shRNA1,shRNA2）,退火形成双链并分别克隆进入载体pGen... 目的 构建携带骨桥蛋白双链小干扰RNA（OPN-siRNA）的质粒表达载体,筛选出基因沉默效果最明显的短发卡样RNA（shRNA）质粒表达载体.方法 设计并合成2个针对OPN的shRNA寡核苷酸片段（shRNA1,shRNA2）,退火形成双链并分别克隆进入载体pGenesil-1.酶切鉴定后,采用LipofectamineTM2000介导的转染方法将重组的shRNA质粒转入大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,筛选出稳定转染株.采用RT-PCR及Western免疫印迹检测其对OPN表达的抑制效果.结果 shRNA质粒成功转染入VSMC且效率达50%以上.转染含OPN shRN A1的VSMC的OPN mRNA和蛋白的表达分别为0.16±0.04和0.30±0.09,含OPN shRNA2分别为0.23±0.06和0.44±0.06,两组之间及分别与正常细胞组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）.空载体组和阴性对照组与正常细胞组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 成功构建了靶向OPN基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为shRN A1质粒. 展开更多
关键词 rna干扰 骨桥蛋白质 质粒 短发卡样rna 血管平滑肌细胞
原文传递
转导骨桥蛋白短发夹状RNA预防动脉粥样硬化模型兔血管成形后的再狭窄 被引量：5
2
作者 孙玉梅 张金盈 +4 位作者 闫继锋 袁斌 杨鹏伟 李文 于运福 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第18期2801-2805,共5页
背景:血管成形后再狭窄严重限制了经皮冠状动脉介入治疗的应用和远期疗效。平滑肌细胞的表型转变,增殖是血管成形后再狭窄的重要机制。目的:探讨利用球囊在体转导骨桥蛋白短发夹状RNA,通过抑制实验性动脉粥样硬化模型兔损伤血管部位骨... 背景:血管成形后再狭窄严重限制了经皮冠状动脉介入治疗的应用和远期疗效。平滑肌细胞的表型转变,增殖是血管成形后再狭窄的重要机制。目的:探讨利用球囊在体转导骨桥蛋白短发夹状RNA,通过抑制实验性动脉粥样硬化模型兔损伤血管部位骨桥蛋白的表达,预防血管成形后再狭窄。方法:构建动脉粥样硬化模型兔20只,随机等分成空质粒组和OPN-shRNA质粒组,分别利用球囊在腹主动脉导入OPN-shRNA质粒和空载体。结果与结论:2组兔球囊扩张后血管平滑肌层出现特异性绿色荧光,且随转染后时间的延长荧光强度逐渐降低,与空质粒组相比,OPN-shRNA质粒组兔扩张动脉的管腔面积明显增加,而斑块负荷明显减小。提示在动脉粥样硬化兔模型局部血管利用球囊导管能成功地转导OPN-shRNA质粒,被扩张血管的再狭窄程度减轻,血栓负荷减轻。这对于预防模型兔血管成形后再狭窄的发生具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 动物模型 组织工程 rna干扰 短发卡样rna 骨桥蛋白 再狭窄 基因治疗 动脉粥样硬化 血管成形 平滑肌细胞
在线阅读 下载PDF
携带靶向干扰VEGF基因shRNA重组腺相关病毒载体的构建和制备 被引量：3
3
作者 王卫东 陈长生 +1 位作者 蒋立新 陆兵勋 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第22期2025-2028,共4页
目的:构建并制备携带靶向干扰VEGF165基因shRNA的重组腺相关病毒载体.方法:将PCR法扩增所得EGFP-U6-shRNA(VEGF165)片段插入载体质粒pSNAV2.0-lacz-α的EcoRI和SalI酶切位点,构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-U6-shRNA(VEGF165).以HSV1-RapCap... 目的:构建并制备携带靶向干扰VEGF165基因shRNA的重组腺相关病毒载体.方法:将PCR法扩增所得EGFP-U6-shRNA(VEGF165)片段插入载体质粒pSNAV2.0-lacz-α的EcoRI和SalI酶切位点,构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-U6-shRNA(VEGF165).以HSV1-RapCap/ΔUL2为辅毒,包装rAAV2-EGFP-U6-shRNA(VEGF165)病毒.对所获病毒载体进行PCR,SDS-PAGE鉴定分析、滴度测定和EGFP的活性检测.结果:PCR,SDS-PAGE鉴定分析结果表明靶向干扰VEGF165基因的shRNA片段成功包装入重组AAV2载体,病毒纯度在98%以上.点杂交法测定重组病毒载体基因组滴度约为3×1014v.g.(vector genomes)/L.EGFP活性检测显示重组AAV2感染细胞阳性率在30%以上.结论:成功制备了rAAV2-EGFP-U6-shRNA(VEGF165)病毒载体,为通过RNA干扰技术特异性抑制VEGF基因的表达来阐明VEGF在缺血性脑损伤后各种生物学事件中的作用奠定了实验基础. 展开更多
关键词 血管内皮生长因子类 腺相关病毒 遗传载体 rna干扰 短发卡样rna
在线阅读 下载PDF
RNA干扰Twist基因对人膀胱癌T24细胞化疗敏感性的影响 被引量：2
4
作者 沈彬 管旌旌 +1 位作者 胡敬海 王春喜 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期952-953,共2页
目的构建转录因子Twist基因的短发卡状RNA(shRNA)质粒,转染人膀胱癌T24细胞株后检测T24细胞对羟基喜树碱(HCPT)的敏感性。方法体外构建Twist基因shRNA的表达质粒,脂质体法介导将其转染入T24细胞。实验分为正常对照组、非特异性转染组和... 目的构建转录因子Twist基因的短发卡状RNA(shRNA)质粒,转染人膀胱癌T24细胞株后检测T24细胞对羟基喜树碱(HCPT)的敏感性。方法体外构建Twist基因shRNA的表达质粒,脂质体法介导将其转染入T24细胞。实验分为正常对照组、非特异性转染组和特异性转染组。采用RT-PCR法和Western印迹法检测转染后Twist mRNA及蛋白的表达。使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)及流式细胞术(FCM)测定Twist shRNA转染T24细胞后细胞对HCPT敏感性的改变。结果Twist shRNA转染组细胞Twist mRNA和蛋白的表达与其他两组相比明显下调(P<0.05);HCPT敏感性与正常对照组相比明显提高(P<0.05)。结论靶向Twist基因的序列特异性shRNA可增强T24细胞对HCPT的敏感性。 展开更多
关键词 rna干扰 羟基喜树碱 短发卡样rna TWIST基因
在线阅读 下载PDF
RNA干扰Twist基因真核表达载体的构建与筛选 被引量：1
5
作者 沈彬 胡敬海 +1 位作者 管旌旌 王春喜 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期59-63,195,共6页
目的:构建编码Twist mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:以Twist mRNA编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体... 目的:构建编码Twist mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:以Twist mRNA编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,构建后通过PCR酶切电泳和质粒测序进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达Twist基因的膀胱癌T24细胞,RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果:构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出400 bp的目的条带,插入片段测序结果与合成的shRNA结果一致。靶向Twist基因的shRNA对膀胱癌T24细胞中Twist基因mRNA抑制率为90%,蛋白质抑制率为86%,两种干扰质粒中shRNA1干扰效果最明显。结论:成功构建了靶向Twist基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGenesil-shRNA1质粒。 展开更多
关键词 rna干扰 质粒 表达载体 短发卡样rna TWIST基因
在线阅读 下载PDF
靶向hVEGF165基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选
6
作者 王卫东 蒋立新 +1 位作者 徐江平 陆兵勋 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期30-33,共4页
目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进... 目的构建编码hVEGF165mRNA的shRNA质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法以hVEGF165mRNA编码区中第5和第7外显子序列作为RNA干扰靶点,分别构建3个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体并通过PCR进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出预期条带,构建成功。靶向hVEGF165基因的shRNA对所转染稳定表达hVEGF165基因的BHK细胞中hVEGF165基因mRNA和蛋白质表达均有抑制作用,其中shRNA2最为明显。结论成功构建了靶向hVEGF165基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pDC316-EGFP-U6-shRNA2质粒。 展开更多
关键词 rna干扰 质粒表达载体 短发卡样rna hVEGF165基因
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部