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红色亚栖热菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质分析 被引量：1
1
作者 王文文 张峻 +5 位作者 王宇凡 朱玥明 张娟 刘艳超 邢来君 李明春 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期90-97,共8页
利用前期克隆得到的红色亚栖热菌CBS-01(Meiothermus ruber CBS-01)的海藻糖合酶基因(TreS),构建天然蛋白异源宿主表达载体并在大肠杆菌中获得较高的表达量.经纯化后测定该酶在pH 6.5,反应温度为50℃时活性最高.酶学性质的研究表明,Tre... 利用前期克隆得到的红色亚栖热菌CBS-01(Meiothermus ruber CBS-01)的海藻糖合酶基因(TreS),构建天然蛋白异源宿主表达载体并在大肠杆菌中获得较高的表达量.经纯化后测定该酶在pH 6.5,反应温度为50℃时活性最高.酶学性质的研究表明,TreS的最适底物为麦芽糖,其对麦芽糖的转化效率约是海藻糖的2.5倍;该酶在30～60℃、pH 3.5～9.0范围内都保留较高的酶活;2 mmol/L的一价阳离子Na^+、K^+对TreS有激活作用;低温有利于反应向海藻糖方向进行,并能减少葡萄糖副产物的生成;20℃时,几乎没有葡萄糖生成,麦芽糖至海藻糖的转化率可达65%.为工业化大规模生产海藻糖奠定了理论基础. 展开更多
关键词 红色亚栖热菌 海藻糖合酶(TreS) 表达 酶学性质
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红色亚栖热菌耐热木聚糖酶的克隆表达及生物信息学分析 被引量：1
2
作者 俞洁琼 王洪成 +2 位作者 何正文 乐易林 邵蔚蓝 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期1242-1249,共8页
从自主分离的Meiothermus.rubber菌株的基因组中克隆到木聚糖酶基因,并进行了超量表达、重组酶的纯化和酶学性质研究。结果表明,重组木聚糖酶Mru是热稳定性酶,最适反应温度为65℃,能够有效降解木聚糖产生木糖和木二糖。生物信息学分析发... 从自主分离的Meiothermus.rubber菌株的基因组中克隆到木聚糖酶基因,并进行了超量表达、重组酶的纯化和酶学性质研究。结果表明,重组木聚糖酶Mru是热稳定性酶,最适反应温度为65℃,能够有效降解木聚糖产生木糖和木二糖。生物信息学分析发现,木聚糖酶Mru与数据库中来自亚栖热菌的木聚糖酶的同源性为60%~100%。在木聚糖酶Mru的结构模型中,GH10木聚糖酶的保守位点大多位于β折叠,α螺旋保守性很低。本研究揭示,木聚糖酶Mru代表一类新型热稳定性GH10木聚糖酶。 展开更多
关键词 红色亚栖热菌 木聚糖酶 生物信息学分析 高温酶
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红色亚栖热菌TPS/TPP海藻糖合成途径中相关基因的克隆、表达及功能鉴定
3
作者 朱玥明 唐亦辰 +4 位作者 徐恒毅 张娟 魏东盛 邢来君 李明春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期399-405,共7页
通过构建红色亚栖热菌(Meiothermus ruberCBS-01)的基因组DNA文库,克隆得到该嗜热菌海藻糖合成途径中的磷酸海藻糖合成酶(TPS)和磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP)基因。以pET21a为表达载体,将磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酯酶在大肠杆菌中... 通过构建红色亚栖热菌(Meiothermus ruberCBS-01)的基因组DNA文库,克隆得到该嗜热菌海藻糖合成途径中的磷酸海藻糖合成酶(TPS)和磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP)基因。以pET21a为表达载体,将磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酯酶在大肠杆菌中进行表达并纯化,利用薄层层析的方法验证了这两个酶的活性。同时,本研究检测了红色亚栖热菌在各种环境压力下细胞内含物成分的变化情况,发现在高渗环境压力的诱导下,该菌会在胞内积累大量的6-磷酸海藻糖,而并非海藻糖,这为进一步研究TPS/TPP和TreS途径在细胞体内的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 红色亚栖热菌 海藻糖 海藻糖合成途径 磷酸海藻糖合成酶(TPS) 磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP)
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分段DNA shuffling:一种大分子海藻糖合酶有效的定向进化方法 被引量：2
4
作者 刘艳超 王宇凡 +4 位作者 钱柯帆 张峻 肖辰鹏 邢来君 李明春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期362-372,共11页
【目的】红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)海藻糖合酶(Trehalose synthase,M-TreS)将麦芽糖转化生成海藻糖只需一步反应,且具有很好的热稳定性及pH耐受性,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。为了提高该酶的性能,有必要对其进行定向进化。... 【目的】红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)海藻糖合酶(Trehalose synthase,M-TreS)将麦芽糖转化生成海藻糖只需一步反应,且具有很好的热稳定性及pH耐受性,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。为了提高该酶的性能,有必要对其进行定向进化。【方法】M-TreS基因(M-treS)大小为2 889 bp。该蛋白质分子本身具有很大的进化空间,但是却不宜进行全长基因Shuffling。分段DNA shuffling是为大分子蛋白质(基因≥2 000 bp)的进化而设计的一种方法。该方法分为三步:(1)用两对引物分别扩增目的基因的上游片段和下游片段;(2)上下游片段各自进行Shuffling;(3)利用重叠延伸PCR连接上下游突变群,建立完整基因的突变文库。【结果】结合易错PCR,通过该方法经一轮进化获得一株酶活力是野生型1.6倍、催化效率是野生型2倍的突变株。序列分析表明,该突变株共有6个位点发生了氨基酸的替代,其中一个来自易错突变,2个来自同源重组,3个为随机突变。【结论】分段DNA shuffling是进化大分子蛋白质的有效方法。 展开更多
关键词 红色亚栖热菌 海藻糖合酶 定向进化 易错PCR 分段DNA SHUFFLING
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