纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立 被引量：10

1

作者 周彬 高雷 +3 位作者 金坚 陈蕴 黄飚 赵卫国 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期338-342,共5页

目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测... 目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007～100ng/mL,批内批间变异系数均<5%。不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%～110%、67%～100%、74%～100%。结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 脱氧雪腐镰刀烯醇 生物毒素 纳米均相时间分辨荧光免疫法(alphalisa)

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一种新型多元均相时间分辨荧光免疫分析方法的建立 被引量：1

2

作者 陈振华 陈玫君 +3 位作者 侯经远 郑洁纯 吴英松 刘天才 《湖北大学学报（自然科学版）》 CAS 2013年第4期474-479,共6页

制备出具有光学特异性的3种不同颜色量子点纳米微球和铽螯合物,分别与CEA、AFP和HBsAg的两株抗体偶联,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与抗原的相互作用,通过采集不同量子点发出的荧光信号,根据其信号的强弱判定标记在量子点纳... 制备出具有光学特异性的3种不同颜色量子点纳米微球和铽螯合物,分别与CEA、AFP和HBsAg的两株抗体偶联,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与抗原的相互作用,通过采集不同量子点发出的荧光信号,根据其信号的强弱判定标记在量子点纳米微球上的抗体结合的抗原的量,从而实现多元待分析物的定性定量分析.结果表明,量子点的荧光信号与CEA、AFP和HBsAg抗原浓度呈线性关系,其函数分别为:lgY=2.791 73+0.915 84lgX(R=0.998 08)、lgY=3.695 43+0.456 44lgX(R=0.998 48)和lgY=4.128 98+0.409 45lgX(R=0.998 45),分析灵敏度分别为:0.44、0.24和0.02ng/mL. 展开更多

关键词 多元均相免疫分析 时间分辨荧光免疫分析 双抗体夹心法 荧光共振能量转移 量子点

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均相时间分辨荧光免疫法检测降钙素原的性能评价 被引量：1

3

作者 江长绿 刘结清 +3 位作者 陈飞宇 江文力 黄昊川 杜利军 《检验医学与临床》 CAS 2022年第12期1708-1711,1728,共5页

目的评价该科室新购置的赛默飞KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析仪检测降钙素原(PCT)的性能。方法依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP系列文件及我国卫生行业检验相关文件等要求,评价赛默飞KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析仪的精密度、准... 目的评价该科室新购置的赛默飞KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析仪检测降钙素原(PCT)的性能。方法依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP系列文件及我国卫生行业检验相关文件等要求,评价赛默飞KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析仪的精密度、准确度、正确度、稀释度、线性范围、干扰试验、携带污染率、参考区间等性能指标,并将其与雷度AQT90FLEX免疫分析仪进行比较。结果批内精密度的变异系数(CV)分别为0.51%、3.47%,批间精密度的CV分别为1.66%、5.14%,均<±7.5%[1/4系统总误差(TEa)];正确度:使用的参考物质水平均落在正确度验证区间内;准确度:2021年4月份上报的5份标本室间质评结果回报均通过国家临床检验中心室间质评标准,成绩为100%;稀释度偏倚在1∶50倍稀释时为±7.2%,1∶100倍稀释时为±7.4%,均<±10%(1/3 TEa);线性范围:0.02~50μg/L;常见潜在的内源性干扰物对PCT检测无明显影响(干扰均<±10%);携带污染率为0.03%,不会产生假阳性结果;参考区间:P_(95)为0.064μg/L;其与雷度AQT90FLEX免疫分析仪进行比较有良好的相关性(R^(2)=0.995),在医学决定水平0.5μg/L和2.0μg/L时相对偏差分别为8.83%和7.95%,均<±10%(CLIA88/2)。结论赛默飞KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析仪各参数性能验证均符合要求,其良好的稀释度性能可为临床提供更高水平的检测数据,与雷度AQT90 FLEX免疫分析仪具有良好的相关性,可以投入临床实验室使用。 展开更多

关键词 赛默飞KRYPTOR COMPACT PLUS-PCT分析仪 均相时间分辨荧光免疫法 降钙素原 性能验证

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均相时间分辨荧光法测定阿达木单抗结合活性 被引量：2

4

作者 邓春平 陈航 +1 位作者 谢建华 刘翠华 《中国医药生物技术》 2022年第2期132-137,共6页

目的建立一种基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术的分析方法,用于快速、简便、稳定地检测阿达木单抗与TNF-α抗原的结合活性。方法将检测试剂、梯度稀释的标准品及待测样品加入96孔板,孵育后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值和抗... 目的建立一种基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术的分析方法,用于快速、简便、稳定地检测阿达木单抗与TNF-α抗原的结合活性。方法将检测试剂、梯度稀释的标准品及待测样品加入96孔板,孵育后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值和抗体浓度进行四参数曲线拟合,根据标准品及待测样品的EC_(50)值计算样品的相对结合活性;同时对方法的专属性、准确性、精密度、线性与范围及稳定性指示能力进行验证;此外对该方法与常规酶联免疫吸附法(ELISA)进行了对比研究。结果建立的HTRF检测法呈典型的“S”型剂量-效应曲线;方法验证结果显示,本法专属性强,相对结合活性的检测范围为50%~150%,在此范围内线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0;平均回收率范围为92.5%~104.8%;重复性及不同人员之间精密度的CV均不超过15%;本法可反映加热破坏的单抗样品的结合活性变化趋势;对比研究显示,HTRF法与ELISA法测得的结果等效。结论建立了一种新的检测阿达木单抗与TNF-α结合活性的测定方法,该法经验证符合要求,可代替ELISA法用于该类单抗药物结合活性的测定,适用于细胞克隆筛选、原液或成品质量放行检测及稳定性研究等。 展开更多

关键词 均相时间分辨荧光 阿达木单抗 肿瘤坏死因子-Α 结合活性 酶联免疫吸附法

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微囊藻毒素-LR的纳米均相时间分辨荧光免疫分析法 被引量：2

5

作者 钮伟民 何恩奇 +1 位作者 张艺 黄飚 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期714-716,共3页

目的建立了微囊藻毒素-LR(MC-LR)的纳米均相时间分辨荧光免疫分析(nano-homogeneous time-resolvedfluoroimmunoassay,NHTRFIA)法。方法制备MC-LR抗原包被发光微粒[加入1 mg发光微粒、偶联MC-LR的牛血清白蛋白(MC-LR-BSA)、人工抗原0.05... 目的建立了微囊藻毒素-LR(MC-LR)的纳米均相时间分辨荧光免疫分析(nano-homogeneous time-resolvedfluoroimmunoassay,NHTRFIA)法。方法制备MC-LR抗原包被发光微粒[加入1 mg发光微粒、偶联MC-LR的牛血清白蛋白(MC-LR-BSA)、人工抗原0.05 mg、0.4 mol/L氰基硼氢化钠溶液10μl,于37℃避光振荡反应48 h;加入0.3 mol/L的羧甲氧基胺半盐酸盐溶液(pH=5.0)10μl,以封闭未结合位点,于37℃避光孵育1 h后离心];在微孔中加入上述发光微粒、MC-LR标准品或样品、生物素化抗MC-LR单克隆抗体各25μl,于37℃孵育30 min,然后加入175μl包被链亲和素的感光微粒于37℃孵育10 min,采用纳米均相时间分辨荧光检测仪进行检测。结果该方法所得回归方程为y=-1 812x2-6 075x+12 424(R2=0.997 6),检出限为0.02 ng/mL,批内RSD为5.8%～7.2%,批间RSD为9.5%～9.9%,平均回收率为85.0%～120.0%。结论该方法具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便、耗时短、测定范围宽、试剂寿命长的优点,尤其适合于生活饮用水中微量MC-LR的分析。 展开更多

关键词 纳米均相时间分辨荧光免疫分析法 微囊藻毒素-LR 单克隆抗体

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盐酸克伦特罗的AlphaLISA检测方法的建立 被引量：4

6

作者 赵芳 岳振峰 +5 位作者 吕敬章 洪丹漩 张恒 刘慧玲 黄欣迪 洪小柳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第2期497-502,共6页

目的：采用纳米均相时间分辨荧光免疫技术(amplified luminescent proximity homogeneous assay, Alpha-LISA)建立高灵敏检测盐酸克伦特罗(clenbuterol, CLB)残留的方法。方法在发光微粒上固定 CLB,与游离的CLB共同竞争固定在感光微粒上... 目的：采用纳米均相时间分辨荧光免疫技术(amplified luminescent proximity homogeneous assay, Alpha-LISA)建立高灵敏检测盐酸克伦特罗(clenbuterol, CLB)残留的方法。方法在发光微粒上固定 CLB,与游离的CLB共同竞争固定在感光微粒上的CLB单克隆抗体,优化检测条件并进行方法学考核。结果该方法的灵敏度为0.04 ng/mL。猪肉样品回收率在83%~109%之间,牛肉样品回收率在92%~112%之间；猪肉样品检测的批内变异系数CV<10%、批间变异系数CV<15%。与特布他林、沙丁胺醇的交叉反应率分别为34.5%、25.7%,与莱克多巴胺、妥布特罗、齐帕特罗无交叉反应。结论 CLB-AlphaLISA 检测肉类中克伦特罗残留具有简单、快速、灵敏性高、特异性强、稳定等特点,具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 纳米均相时间分辨荧光免疫技术(alphalisa) 竞争反应

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比较三种免疫分析法检测微囊藻毒素-LR 被引量：1

7

作者 张艺 黄飚 +2 位作者 赵春城 钮伟民 金坚 《环境卫生学杂志》 2015年第5期479-482,共4页

目的评估微囊藻毒素-LR(MC-LR)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、纳米均相时间分辨荧光免疫分析(NH-TRFIA)和酶联免疫分析(ELISA)三种免疫检测方法。方法通过比较包被板、反应步骤、信号系统和试剂用量,分析反应条件的差异;通过分析灵敏... 目的评估微囊藻毒素-LR(MC-LR)的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、纳米均相时间分辨荧光免疫分析(NH-TRFIA)和酶联免疫分析(ELISA)三种免疫检测方法。方法通过比较包被板、反应步骤、信号系统和试剂用量,分析反应条件的差异;通过分析灵敏度、精密度和准确性,比较上述方法的性能指标;通过检测实际样品,评估方法的可靠性。结果 NH-TRFIA反应时间最短,试剂消耗量最少,灵敏度最高,量程宽;TRFIA信号最强,稳定性佳;三种方法精密度高,相对标准差均小于15%。三种方法检测实际样品与高效液相色谱法的分析结果差异无统计学意义,认为可靠。结论 TRFIA和NH-TRFIA,技术优势明显,应用前景广阔。 展开更多

关键词 微囊藻毒素-LR 时间分辨荧光免疫分析 纳米均相时间分辨荧光免疫分析 酶联免疫

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小鼠肿瘤坏死因子ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测方法的建立及评估 被引量：3

8

作者 王柯 张艺 +4 位作者 张珏 周彬 马智鸿 朱岚 黄飚 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期152-155,166,共5页

目的分别建立ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测小鼠肿瘤坏死因子(mTNF-α)的方法,对3种检测技术进行评估。方法采用两株针对mTNF-α不同表位的单克隆抗体,分别构建双抗体夹心法mTNF-α-ELISA、mTNF-α-TRFIA、mT-NF-α-ALPHAScreen,对以上... 目的分别建立ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测小鼠肿瘤坏死因子(mTNF-α)的方法,对3种检测技术进行评估。方法采用两株针对mTNF-α不同表位的单克隆抗体,分别构建双抗体夹心法mTNF-α-ELISA、mTNF-α-TRFIA、mT-NF-α-ALPHAScreen,对以上3种检测方法进行反应动力学,方法学参数和相关性的比较。结果 ALPHAScreen采用均相反应系统,反应速度最快。TRFIA和ALPHAScreen由于采用了稀土离子作为标记物,其灵敏度和检测范围大大高于ELISA。样品检测结果表明,3种方法的相关性较好。结论本文建立的mTNF-α-TRFIA和mTNF-α-ALPHAScreen具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 酶联吸附分析 时间分辨荧光免疫分析 纳米均相时间分辨荧光免疫分析 肿瘤坏死因子

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AlphaLISA技术在食品安全检测中的研究进展 被引量：4

9

作者 洪小柳 吕敬章 +3 位作者 张恒 范放 刘慧玲 赵芳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第1期198-202,共5页

纳米均相时间分辨荧光免疫法(AlphaLISA)是一种基于纳米微珠的光激化学发光的新型均相检测技术,较传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)具有均相、免清洗、敏感度高、特异性强等特点。本文介绍了AlphaLISA的原理和特点,简要总结了近年来国内外... 纳米均相时间分辨荧光免疫法(AlphaLISA)是一种基于纳米微珠的光激化学发光的新型均相检测技术,较传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)具有均相、免清洗、敏感度高、特异性强等特点。本文介绍了AlphaLISA的原理和特点,简要总结了近年来国内外AlphaLISA技术的应用研究,重点综述了食品安全领域(包括生物毒素和药物残留)的研究进展,并对此技术的发展前景进行了展望。 展开更多

关键词 纳米均相时间分辨荧光免疫法 检测 食品安全

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3种mRNA疫苗dsRNA残留量检测方法的比较 被引量：1

10

作者 刘晶晶 李玉华 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1941-1946,共6页

目的:对mRNA疫苗dsRNA残留量的常用检测方法均相时间分辨荧光法(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF法)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)和斑点杂交法(Dot Blot法)进行比较研究,为mRNA疫苗质量控制... 目的:对mRNA疫苗dsRNA残留量的常用检测方法均相时间分辨荧光法(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF法)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)和斑点杂交法(Dot Blot法)进行比较研究,为mRNA疫苗质量控制提供技术支撑。方法:分别根据HTRF法、ELISA法和Dot Blot法特点,配制相应浓度标准品,通过建立标准曲线,计算样品dsRNA浓度,考察3种方法的适用性、准确度、精密度、定量限和曲线拟合关系。结果:HTRF法检测dsRNA残留量的回收率为110.7%,重复性的RSD为5.6%,中间精密度的RSD≤19.0%,在1.56~100.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9993);ELISA法检测dsRNA残留量的回收率为103.2%,重复性的RSD为19.5%,中间精密度的RSD≤11.7%,在7.81~500.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9998);Dot Blot法检测dsRNA残留量的回收率为101.5%,重复性的RSD为18.5%,中间精密度的RSD≤42.2%,在800.00~80000.00 ng·mL^(-1)的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.9992)。HTRF法和ELISA法的准确度和精密度良好,HTRF法可检测较低浓度的dsRNA残留量。结论:3种方法均可有效检测mRNA疫苗中的dsRNA残留量。 展开更多

关键词 mRNA疫苗 dsRNA残留量检测 均相时间分辨荧光法 酶联免疫法 斑点杂交法

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基于ELISA、TRFIA及AlphaScreen技术的血管内皮生长因子受体3拮抗剂筛选模型的构建及比较 被引量：2

11

作者 王柯 杨润林 +3 位作者 徐娟 周彬 朱岚 黄飚 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期238-243,共6页

血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)为淋巴管特异标记物,与肿瘤淋巴管生成和转移具有明显的相关性,VEGFR-3胞内域的酪氨酸激酶(TK)直接参与了胞内信号转导途径,因此VEGFR-3 TK抑制剂可能成为抑制肿瘤淋巴道转移的有效药物。采用大肠杆菌成... 血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)为淋巴管特异标记物,与肿瘤淋巴管生成和转移具有明显的相关性,VEGFR-3胞内域的酪氨酸激酶(TK)直接参与了胞内信号转导途径,因此VEGFR-3 TK抑制剂可能成为抑制肿瘤淋巴道转移的有效药物。采用大肠杆菌成功表达人源VEGFR-3酪氨酸激酶(VEGFR-3 TK),并以其为靶点,分别构建了基于ELISA,TR-FIA及AlphaScreen技术的高通量药物筛选模型,并从反应条件、方法学参数及相关性等方面对这三种模型进行了评估及比较。AlphaScreen采用均相反应系统,反应速度最快。TRFIA和AlphaScreen由于采用了稀土离子作为标记物,其灵敏度和检测范围大大高于ELISA,且自动化程度高。样品检测结果表明,三种方法的相关性较好,其中TRFIA和AlphaS-creen技术适用于大规模药物筛选,具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子受体3 酪氨酸激酶 酶联吸附分析 时间分辨荧光免疫分析 纳米均相时间分辨荧光免疫分析

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