葡萄球菌肠毒素B基因原核表达系统的构建及其表达产物促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的研究 被引量：1

1

作者 毛亚飞 徐水凌 +1 位作者 罗冬娇 严杰 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期553-558,共6页

构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SE... 构建葡萄球菌肠毒素B（staphylococcal enterotoxins B，SEB）基因原核表达系统，了解重组表达产物rSEB促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用．采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌FRIS6B株DNA中扩增全长SEB基因片段，T—A克隆后测序，构建SEB基因原核表达系统pET32α-SEB—E．coliBL2IDE3．采用SDS-PAGE检测rSEB表达产量，Ni—NTA亲和层析法提纯rSEB．采用TCID50法测定rSEB对Vero细胞的细胞毒性作用并计算TCID50值．采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEB体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞（PBMC）的促增殖作用以及对HepG2细胞（人肝腺癌细胞）、HeLa细胞（人宫颈癌上皮细胞）的生长抑制作用．与公布的相关序列比较，所克隆的SEB基因核苷酸序列相似性为100％．rSEB表达量约为细菌总蛋白的40％．rSEB对Vero细胞的TCIC50为3．02μg．5．0～20．0μg／ml的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用（P〈0．05）．5．0～20．0μg／ml rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长（P〈0．05）．本研究成功地构建了rSEB高效原核表达系统．rSEB仍然具有生物学活性．所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法，为以后减毒rSEB突变体的筛选奠定了基础． 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素B SEB基因/克隆 原核表达系统/构建 重组蛋白/表达 细胞毒性 淋巴细胞/增殖 肿瘤细胞/抑制

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金黄色葡萄球菌肠毒素C促进异基因骨髓移植小鼠早期T细胞重建 被引量：1

2

作者 陈镜如 梁惠 +3 位作者 陈欣林 石明 黎诚耀 张玉明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第15期2365-2369,共5页

目的通过建立异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT)小鼠模型联合腹腔给药,探讨金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphylococcal enterotoxin C,SEC)对allo-BMT小鼠的T细胞早期重建的影响。方法以BALB/C雄性小鼠为受... 目的通过建立异基因骨髓移植(allogeneic bone marrow transplantation,allo-BMT)小鼠模型联合腹腔给药,探讨金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphylococcal enterotoxin C,SEC)对allo-BMT小鼠的T细胞早期重建的影响。方法以BALB/C雄性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,在移植前12 h对受鼠进行全身性照射的预处理,进行异基因骨髓内骨髓移植(intra-bone marrow bone marrow transplantation,IBM-BMT)后将其随机分为两组腹腔给药。实验组给予SEC 100μL/(g·d),对照组给予同剂量的生理盐水,每组10只。每天检测受鼠的体质量变化情况,并于移植2周后应用流式细胞仪检测两组外周血及脾脏T淋巴细胞重建情况,采用ELISA检测血浆IFN-γ、IL-2、TNF-α的分泌水平。结果实验组、对照组外周血CD8^+T细胞比例(12.63±1.33)%、(6.67±0.53)%,组间差异有统计学意义(P <0.01)。实验组脾脏和外周血的CD4^+T细胞比例分别为(1.798±0.110)%、(1.470±0.075)%,高于对照组(1.418±0.069)%、(1.112±0.064)%,差异有统计学意义(P <0.05)。实验组血浆中分泌的细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α水平分别为(383.7±49.22)pg/mL、(17.49±1.434)pg/mL和(144.9±14.38)pg/mL,高于对照组(230.0±13.17)pg/mL、(12.38±0.759)pg/mL和(102.0±7.58)pg/mL,组间差异有统计学意义(P <0.05)。结论腹腔注射SEC能有效促进移植后T细胞早期重建。 展开更多

关键词 异基因骨髓移植 金黄色葡萄球菌肠毒素C T细胞重建

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葡萄球菌肠毒素A基因原核表达系统的构建及其表达产物的鉴定 被引量：2

3

作者 徐水凌 毛亚飞 +2 位作者 张梅光 罗冬娇 严杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期163-167,共5页

目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统pET32a-S... 目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物rSEA促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建SEA基因原核表达系统pET32a-SEA-E.coliBL21DE3。采用SDS-PAGE检测rSEA表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rSEA。采用TCID50法测定rSEA对Vero细胞的细胞毒性并计算TCIC50值。采用MTT比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对HepG2细胞(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用。结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基因核苷酸序列相似性为100%。rSEA表达量约为细菌总蛋白的25%。rSEA对Vero细胞的TCIC50为3.14μg。1.0-20.0mg/L的rSEA对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05)。5.0-20.0mg/LrSEA作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05)。结论:成功地构建了rSEA原核表达系统。rSEA仍然具有生物学活性。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒rSEA突变体的筛选奠定了基础。 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素A 基因表达 原核表达 HEPG2细胞 HELA细胞 Veto细胞

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成纤维细胞可以经基因改造成为可兴奋细胞

4

作者 余国膺 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2005年第2期154-154,共1页

关键词 可兴奋细胞 成纤维细胞 基因改造 兴奋性 基因工程 心律失常 决定因子 细胞形成 特异蛋白

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嗜水气单胞菌外毒素和外膜蛋白双基因融合表达载体的构建和高效表达 被引量：8

5

作者 何鸣筱 叶巧真 +2 位作者 陈诚 谢俊锋 何建国 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期169-173,共5页

用基因融合方式 ,以嗜水气单胞菌基因组DNA为模板 ,设计引物通过聚合酶链式反应 (PCR)把去除部分毒性活性编码区的细胞毒肠毒素基因 (act)与去除信号肽的外膜蛋白基因 (OmpTS)连接一起 ,两基因之间插入一个link er(Gly4Ser) 3 经BamHⅠ... 用基因融合方式 ,以嗜水气单胞菌基因组DNA为模板 ,设计引物通过聚合酶链式反应 (PCR)把去除部分毒性活性编码区的细胞毒肠毒素基因 (act)与去除信号肽的外膜蛋白基因 (OmpTS)连接一起 ,两基因之间插入一个link er(Gly4Ser) 3 经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,得到 2 .1kb的双基因融合片段 ,克隆于表达质粒pQE 30中 ,构建了双基因重组表达载体pQE30 /act GS ompTS ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,经IPTG诱导 ,表达出预期大小 (81.0kD)的融合蛋白Act GS OmpTS ,此蛋白占菌体总蛋白的 4 2 %。Westernblot检测结果显示 ,该蛋白与抗Act兔血清和抗OmpTS兔血清都呈阳性反应 ,表明融合蛋白保留了外毒素和外膜蛋白的反应原性 。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 细胞毒肠毒素基因 外膜蛋白基因 融合基因表达

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金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用 被引量：10

6

作者 蔡朝阳 马筱玲 +1 位作者 纪冰 赵燕 《蚌埠医学院学报》 CAS 2008年第1期9-12,共4页

目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点。方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、... 目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点。方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、B基因,TSST-1以及PVL。结果:116株金黄色葡萄球菌中,85株为HA-SA,检出肠毒素A基因6株,肠毒素C基因1株,肠毒素D基因1株,PVL2株;31株为社区获得性金黄色葡萄球菌,检出肠毒素A基因1株,肠毒素B基因1株,肠毒素D基因1株,PVL7株;所有菌株均未检测到肠毒素E、ETs A、B和TSST-1基因。CA-SA PVL检出率显著高于HA-SA,两者比较差异有统计学意义(P<0.005),而肠毒素、ETs和TSST-1基因检出率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:金黄色葡萄球菌可分泌多种毒素,在分离金黄色葡萄球菌的同时,应注意其毒素检测。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 肠毒素 表皮剥脱性毒素 中毒性休克综合征毒素-1 杀白细胞素 基因

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肠毒素大肠杆菌CFA/1重组质粒的高效表达及其结构与功能分析

7

作者 张兆山 李淑琴 +1 位作者 黄翠芬 陈添弥 《传染病信息》 1995年第2期85-86,共2页

肠毒素大肠杆菌(ETEC)是婴幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。每年因 ETEC引起腹泻而死亡的婴幼儿多达百万人。ETEC 腹泻主要是由于细菌通过菌体表面定居因子定居于宿主小肠上皮细胞上,然后大量繁殖产生肠毒素而引起的。定居因子抗原1(... 肠毒素大肠杆菌(ETEC)是婴幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。每年因 ETEC引起腹泻而死亡的婴幼儿多达百万人。ETEC 腹泻主要是由于细菌通过菌体表面定居因子定居于宿主小肠上皮细胞上,然后大量繁殖产生肠毒素而引起的。定居因子抗原1(CFA/1)是一种优势血清型菌毛,其相应抗体在阻止病原菌在宿主小肠上定居起十分重要的作用。CFA/1基因位于60MDa 的质粒上,在此质粒上有两个区域为 CFA/1表达和菌毛装配所必需。含有 CFA/1结构基因的区域称之 CFA/1-1区,含有调节基因的区域称之 CFA/1-2区。由于 CFA/1-1区和CFA/1—2区相距25MDa。 展开更多

关键词 肠毒素大肠杆菌 高效表达 结构基因 婴幼儿腹泻 定居因子抗原 小肠上皮细胞 调节基因 大量繁殖 旅游者腹泻 优势血清型

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密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平

8

作者 黄鹏 孙红颖 陈枢青 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期297-303,共7页

目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码... 目的:优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。方法:将带H is标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上,采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变,将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),并进行蛋白表达及活性鉴定。结果:通过稀有密码子优化,重组肠毒素O的表达量由菌液总蛋白的7.49%提高至19.8%;小鼠淋巴细胞增殖试验表明,通过密码子优化的肠毒素O具有刺激淋巴细胞增殖的作用,并且其增殖作用与未优化前的肠毒素O相当。结论:稀有密码子优化能够有效增加肠毒素O的表达量。 展开更多

关键词 葡萄球菌 金黄色/免疫学 肠毒素类/免疫学 密码子 基因表达 遗传载体 质粒 突变 细胞增殖 淋巴细胞

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用作脲酶直肠免疫佐剂的大肠杆菌肠毒素的安全性和效力

9

作者 黄雪萍 《国外医学（预防．诊断．治疗用生物制品分册）》 2004年第1期34-34,共1页

关键词 幽门螺杆菌 脲酶 大肠杆菌肠毒素 安全性 基因工程 外周血 淋巴细胞

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嗜水气单胞菌毒力因子检测及不同毒力基因型菌株对剑尾鱼的致病性研究 被引量：7

10

作者 任燕 孙承文 +3 位作者 石存斌 潘厚军 陶家发 吴淑勤 《广东农业科学》 CAS 2015年第17期113-117,共5页

选取嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)的4种主要胞外毒力因子(气溶素、溶血素、胞外蛋白酶和细胞毒性肠毒)设计合成4对引物,对2008—2009年广东、江西两省的临床分离菌株进行检测,评价菌株毒力基因的分布特征及其毒力强弱。60株... 选取嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)的4种主要胞外毒力因子(气溶素、溶血素、胞外蛋白酶和细胞毒性肠毒)设计合成4对引物,对2008—2009年广东、江西两省的临床分离菌株进行检测,评价菌株毒力基因的分布特征及其毒力强弱。60株临床分离株中,具有4种毒力基因(aer+hly A+epa+act+)的菌株占58.33%(35/60),是主要毒力基因型;其他25株的毒力基因有不同数量缺失。不同基因型的代表菌株对剑尾鱼攻击试验结果表明,嗜水气单胞菌毒力因子之间表现出协同作用,aer+hly A+epa+act+型的毒力最强,对剑尾鱼的致死率最高。 展开更多

关键词 嗜水气单胞菌 气溶素 溶血素 胞外蛋白酶 细胞毒性肠毒素 毒力基因 剑尾鱼

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BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达 被引量：2

11

作者 田红霞 林晨 +4 位作者 查显丰 周羽竝 黄欣 高永鹏 李扬秋 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期336-340,共5页

目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒。方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点... 目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒。方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒。将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况,SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达。结果:成功扩增出BCR/ABL和SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白。结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白。 展开更多

关键词 BCR/ABL融合基因 金黄色葡萄球菌肠毒素A 慢性粒细胞白血病 DNA疫苗

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重组腺病毒介导金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在小鼠B16黑素瘤细胞中的表达 被引量：2

12

作者 牟霞 陆洪光 +2 位作者 余德厚 吴承龙 汪宇 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期365-367,共3页

目的研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因通过重组腺病毒介导转染入B16黑素瘤细胞中的表达情况。方法用RT-PCR和流式细胞仪检测SEA基因在B16黑素瘤细胞中的表达。结果在转染SEA基因的B16黑素瘤细胞中检测到SEA基因的转录,并于转染后24h... 目的研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因通过重组腺病毒介导转染入B16黑素瘤细胞中的表达情况。方法用RT-PCR和流式细胞仪检测SEA基因在B16黑素瘤细胞中的表达。结果在转染SEA基因的B16黑素瘤细胞中检测到SEA基因的转录,并于转染后24h开始有SEA蛋白的表达,到72h表达量达最高值87.22,之后减弱,直到168h仍有少许表达。结论SEA基因可以在B16黑素瘤细胞中表达,为下一步黑素瘤的基因治疗奠定基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌肠毒素 重组腺病毒介导 黑素瘤细胞 B16 SEA基因 流式细胞仪检测 小鼠 表达情况 基因治疗 转染 PCR 最高值 表达量 72h A蛋白 24h

原文传递

低剂量辐射诱导人骨髓间充质干细胞的增殖反应 被引量：2

13

作者 徐晓华 徐前 +1 位作者 佟丽芳 张东 《中国实验诊断学》 2008年第11期1443-1445,共3页

关键词 人骨髓间充质干细胞 低剂量辐射诱导 增殖反应 DNA损伤修复 兴奋性反应 细胞生物学效应 基因蛋白 代谢活性

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金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在C57BL/6小鼠淋巴细胞中的表达 被引量：1

14

作者 汪宇 陆洪光 +2 位作者 程波 麦跃 余德厚 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期297-299,共3页

目的通过复制缺陷型腺病毒载体的介导,将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因转染入C57BL/6小鼠淋巴细胞中,观察基因表达产物对B16细胞的作用。方法通过MTT法直接测定重组腺病毒颗粒感染的淋巴细胞的增殖情况,采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测... 目的通过复制缺陷型腺病毒载体的介导,将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因转染入C57BL/6小鼠淋巴细胞中,观察基因表达产物对B16细胞的作用。方法通过MTT法直接测定重组腺病毒颗粒感染的淋巴细胞的增殖情况,采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定淋巴细胞培养上清液中白介素2的水平。MTT法测定活细胞数目,以了解活化的C57BL/6小鼠淋巴细胞对B16细胞的杀伤效应。结果加入不同滴度的重组腺病毒颗粒后,C57BL/6小鼠淋巴细胞明显增殖;同时淋巴细胞培养上清液中白介素2水平也明显增加。重组腺病毒颗粒转染的C57BL/6小鼠淋巴细胞可明显杀伤B16细胞,效/靶比越高,杀伤效应越明显。结论SEA基因可以在C57BL/6小鼠淋巴细胞中表达,并且表达产物能够活化C57BL/6小鼠淋巴细胞,进而杀伤B16细胞。 展开更多

关键词 C57BL/6小鼠 金黄色葡萄球菌肠毒素 淋巴细胞 细胞培养上清液 C57BL/6小鼠 B16细胞 缺陷型腺病毒载体 基因表达产物 病毒颗粒 MTT法 白介素2 杀伤效应 双抗体夹心 SEA基因 基因转染 直接测定 细胞数目 重组 ABC 增殖 水平

原文传递

表达葡萄球菌肠毒素A基因的溶瘤腺病毒激活T淋巴细胞靶向治疗鼠膀胱癌

15

作者 郝林 陈猛 +6 位作者 赵岩 张治国 梁清 史振铎 张俊杰 韩从辉 吴永平 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2524-2524,共1页

我们根据端粒酶高表达于人恶性肿瘤和缺氧诱导因子（HIF）-1α在膀胱癌中表达上调的特点构建了携带超抗原葡萄球菌肠毒素A（SEA）基因的人端粒酶逆转录酶（hTERT）/HIF双调控溶瘤腺病毒PPE3-SEA,并已报道该腺病毒可以在鼠膀胱癌细胞内表... 我们根据端粒酶高表达于人恶性肿瘤和缺氧诱导因子（HIF）-1α在膀胱癌中表达上调的特点构建了携带超抗原葡萄球菌肠毒素A（SEA）基因的人端粒酶逆转录酶（hTERT）/HIF双调控溶瘤腺病毒PPE3-SEA,并已报道该腺病毒可以在鼠膀胱癌细胞内表达SEA蛋白[1].本研究旨在观察该腺病毒对膀胱癌的抑制效果,并初步观察其不良反应.一、材料与方法1.动物模型的建立、分组和治疗：采用皮下成瘤的方法建立荷瘤鼠模型.对照组瘤内注射生理盐水0.1 ml,实验组注射溶瘤腺病毒1×108 PFU/0.1 ml,连续治疗3d. 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素 溶瘤腺病毒 靶向治疗 膀胱癌 鼠模型 A基因 T淋巴细胞 缺氧诱导因子(HIF)-1α

原文传递

SEB基因定位突变体构建及其重组表达产物生物学活性研究

16

作者 范芳华 严杰 +1 位作者 毛亚飞 于小妹 《浙江医学》 CAS 2010年第12期1741-1746,共6页

目的 构建葡萄球菌肠毒素B（SEB）基因及其突变体原核表达系统,了解突变前、后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用突变引物PCR构建SEB基因定位突变体,建立SEB基因及其定位突变体原核表达系统;... 目的 构建葡萄球菌肠毒素B（SEB）基因及其突变体原核表达系统,了解突变前、后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用突变引物PCR构建SEB基因定位突变体,建立SEB基因及其定位突变体原核表达系统;同时采用Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的 重组蛋白;采用TCID50法测定目的 重组蛋白对Vero细胞的毒性;采用MTT比色法分别检测不同浓度的目的 重组蛋白促使小鼠脾细胞增殖及对抑制KB和HL-60癌细胞株生长的作用.结果 所克隆的SEB基因核苷酸序列与各项研究报道的相似性为100%,3种突变体均在既定位置获得预期的密码子突变.rSEB和各突变体重组蛋白表达量约为细菌总蛋白的40%;rSEB对Vero细胞TCIC50为3.4μg,其突变体重组蛋白分别为3.2～16.8μg;1和5μg/ml的rSEB及突变体重组蛋白rSEB/D9N对小鼠脾细胞均有明显的促增殖作用（P＜0.05）,10和20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N促进小鼠脾细胞增殖活性与100μg/ml植物血凝素PHA相似（P＞0.05）.5～20μg/ml的rSEB及rSEB/D9N作用的小鼠脾细胞上清液及其上清液与脾细胞混合物均能有效抑制KB和HL-60细胞生长（P＜0.05）.结论 本研究成功构建了SEB基因突变体及其高效原核表达系统;其中突变体重组蛋白rSEB/D9N细胞毒性较低,促脾细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长活性较强,可作为研制升高白细胞、抗肿瘤的SEB相关药物的候选突变体. 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素B SEB基因/定位突变原核表达系统/构建重组蛋白/细胞毒性

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钙通道阻断剂硝苯吡啶抑制马桑内酯癫痫大鼠脑内c—fos基因表达增强

17

作者 邬丽莎 郭亮 +3 位作者 柴慧霞 谢杨高 杨小东 陈俊杰 《四川生理科学杂志》 1994年第4期16-17,共2页

c—fos基因为原癌基因中的即早基因之一。近年的研究证明,在电和各种化学刺激造成的癫痫样活动中,c—fos基因能快速而短暂地表达,其表达产物Fos蛋白则作为细胞核其它相应基因转录的调制物引起其他相应基因表达的改变,进而引起细胞功能... c—fos基因为原癌基因中的即早基因之一。近年的研究证明,在电和各种化学刺激造成的癫痫样活动中,c—fos基因能快速而短暂地表达,其表达产物Fos蛋白则作为细胞核其它相应基因转录的调制物引起其他相应基因表达的改变,进而引起细胞功能的长时程变化。还有实验提示癫痫所致c—fos基因表达的增加,与神经细胞内Ca²⁺浓度增高有关。胞浆内高浓度Ca²⁺与钙调蛋白结合形成的复合物,对转录因子磷酸化修饰而启动c—fosmRNA的转录。 展开更多

关键词 癫痫大鼠 fos 钙通道阻断剂 硝苯吡啶 神经元兴奋性 调制物 细胞分子水平 基因表达 原癌基因 化学刺激

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超抗原SEB可以活化NKT细胞

18

作者 陈钰 《中华临床医学杂志》 2007年第1期57-57,共1页

NKT细胞是一群表达NK1．1＋TcRαβ＋抗原的淋巴细胞亚群，最初是在那些NK1．1＋的小鼠中发现，2000年被命名为第四类的淋巴细胞。小鼠的NKT细胞主要是CD4^＋或者CD4～CD8^-细胞。大量的NKT细胞存在于肝脏，大约占T淋巴细胞的30％，外... NKT细胞是一群表达NK1．1＋TcRαβ＋抗原的淋巴细胞亚群，最初是在那些NK1．1＋的小鼠中发现，2000年被命名为第四类的淋巴细胞。小鼠的NKT细胞主要是CD4^＋或者CD4～CD8^-细胞。大量的NKT细胞存在于肝脏，大约占T淋巴细胞的30％，外周血、脾脏中很少，只占2％前后。NKT细胞的作用主要有两个方面，效应功能和调节功能；它可以抑制Th1细胞的过激，控制IL-2，IFN-γ的产生和后期的细胞增殖，可以调节Th2细胞的细胞因子产生，使T细胞分化朝Th2方向偏移；它也可以在Th1细胞抵抗感染和肿瘤时提供帮助以及可以阻止部分细胞的分化，控制自身免疫病的发生和发展。NKT细胞的活化主要依靠类脂多肽类抗原如半乳糖神经酰胺（alpha-galactosylceramide，简称α-Galcer）和类似于MHCI类抗原的CDId递呈抗原。目前还无法证明其它脂类或糖脂类抗原能否激活NKT细胞，并使其发挥功能。我们以往的研究发现葡萄球菌肠毒素B（SEB）作为耐受原不仅能诱导淋巴细胞的耐受，在异基因骨髓移植、皮肤移植和角膜移植中都显示出明显抗排斥效应。在外周淋巴细胞移植中，用SEB可诱导带有供体淋巴细胞表面分子特征的微嵌合体形成； 展开更多

关键词 超抗原SEB NKT细胞 活化 淋巴细胞亚群 半乳糖神经酰胺 葡萄球菌肠毒素 异基因骨髓移植 CD4^+

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脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及针灸干预机制的研究进展 被引量：2

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作者 庞瑞康 冯卓 +4 位作者 何列涛 邹卓成 许富 何就杰 覃宁婧 《世界中医药》 CAS 2023年第4期576-582,共7页

脑缺血再灌注损伤(CIRI)是指在梗死区缺血脑组织的血管重新恢复血流灌注后所产生的一系列级联反应而造成的损害,其症状可较前期加重,表现为脑神经细胞凋亡、坏死或者组织形态学改变等。神经细胞凋亡在CIRI病理过程中发挥关键作用。现通... 脑缺血再灌注损伤(CIRI)是指在梗死区缺血脑组织的血管重新恢复血流灌注后所产生的一系列级联反应而造成的损害,其症状可较前期加重,表现为脑神经细胞凋亡、坏死或者组织形态学改变等。神经细胞凋亡在CIRI病理过程中发挥关键作用。现通过国内外文献总结了脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的相关因素,主要包括兴奋性氨基酸/氧自由基、钙超载、线粒体损伤、凋亡基因、内质网应激、炎症反应。溶栓治疗是目前缺血性脑血管病(IVCD)最有效、最常用的治疗方式,但存在过程复杂化、操作不便利等缺点,而针灸疗法对于IVCD治疗具有操作方便、不良反应少等优点,能很好地弥补溶栓疗法操作复杂、易受时间地点等客观因素限制的不足,有较佳的辅助治疗效果。目前经大量基础研究发现,针灸疗法可介导包括兴奋性氨基酸毒性、钙超载、炎症反应、凋亡基因等方面对神经细胞凋亡进行治疗,但目前在内质网应激、线粒体损伤的针灸疗法研究较少,故加强对于这2个方向的研究可为针灸治疗IVCD取得新的突破。 展开更多

关键词 脑缺血再灌注损伤 神经细胞凋亡 兴奋性氨基酸毒性 钙超载 炎症反应 凋亡基因 针灸 研究进展

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仔猪断奶前腹泻抗病基因育种技术的创建及应用

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《养猪》 2012年第2期59-59,共1页

产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4ac是引起仔猪断奶前腹泻最主要的细菌性病原，仔猪小肠上皮细胞有无ETECF4ac受体是仔猪被感染时是否发病的关键。任军等（2012）利用大规模资源家系群体和远缘群体，通过全基因组连锁定位分析、目的区域的重... 产肠毒素大肠杆菌（ETEC）F4ac是引起仔猪断奶前腹泻最主要的细菌性病原，仔猪小肠上皮细胞有无ETECF4ac受体是仔猪被感染时是否发病的关键。任军等（2012）利用大规模资源家系群体和远缘群体，通过全基因组连锁定位分析、目的区域的重组断点事件分析和远缘群体高通量SNP标记的关联性分析等严谨的遗传学分析手段，确定了ETECF4ac受体基因为MUC13， 展开更多

关键词 断奶前 仔猪 育种技术 抗病基因 腹泻 产肠毒素大肠杆菌 应用 小肠上皮细胞

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