大鼠骨髓单个核细胞诱导扩增为内皮祖细胞的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件

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作者 孙白羽 陈静依 姜志超 《山东医药》 CAS 2024年第21期44-48,共5页

目的筛选大鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)诱导扩增为内皮祖细胞(BM-EPCs)的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件,构建一个高效、高产量、高纯度的骨髓来源BM-EPCs分离培养诱导扩增方法。方法取2周龄雄性SD大鼠,脱颈处死后分离大鼠双侧... 目的筛选大鼠骨髓单个核细胞(BMMNCs)诱导扩增为内皮祖细胞(BM-EPCs)的细胞分离方法、接种数目、培养瓶包被条件,构建一个高效、高产量、高纯度的骨髓来源BM-EPCs分离培养诱导扩增方法。方法取2周龄雄性SD大鼠,脱颈处死后分离大鼠双侧胫骨和股骨,收集骨髓细胞悬液。配制30%、50%、60%和70%浓度的Percoll细胞分离液,通过Percoll密度梯度离心法分离出大鼠BMMNCs种子细胞,并计算活细胞比例。将获得的BMMNCs分为1×10^(5)、5×10^(5)、1×10^(6)、2.5×10^(6)、5×10^(6)、1×10^(7)六个组别,分别接种于25 cm^(2)无菌培养瓶中,培养7 d后镜下观察各组细胞集落形成数目,并计算每10^(6)细胞的集落形成数。运用Graphpad prism9.5软件进行Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定相关性,根据其P值将有统计学差异的接种数目纳入范围,随后使用R语言编程定义计算函数,根据已知种子细胞总数及相关性函数限制下,通过迭代寻找最佳的BMMNCs细胞接种数目。分别配制20、50、100 nmol/L浓度的人纤连蛋白(FN)溶液,以不添加FN的空白溶液为对照,分别包被空白培养瓶2、6、12、24 h,将收集的48 h未贴壁BMMNCs接种于FN包被的各培养瓶中,静置培养3 d后计算各组集落形成数目,确定FN包被的最佳浓度与时间。接种48 h未贴壁BMMNCs于25 cm^(2)培养瓶底,使用EGM-2完全培养基定向诱导,于显微镜下观察集落形成及诱导扩增进程。取培养14 d的BM-EPCs,分别采用双阳性染色法和流式细胞术鉴定BM-EPCs的纯度。结果使用Percoll分离法可把BMMNCs细胞清晰的分为5层,其中30%与50%Percoll细胞分离层之间为BMMNCs活细胞比率最高。BMMNCs的最优接种数目为2.5×10^(6)个。以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h皆可有效促进细胞集落形成。细胞接种7 d后获得形态良好的铺路石样细胞并建立生长优势,表明BMMNCs已经诱导成为形态良好的BM-EPCs。Dil-Ac-LDL/FITC-UEA-1双阳性细胞占比为91.89%±5.77%,CD31+KDR阳性率为90.73%±0.61%、CD14阳性率为0.53%±0.17%、CD45阳性率0.77%±0.34%,说明获得的BM-EPCs纯度良好。结论大鼠BMMNCs诱导扩增为BM-EPCs过程中,可使用Percoll密度梯度离心法分离BMMNCs,BMMNCs的最优细胞接种数目为2.5×10^(6)个,细胞培养瓶包被条件为以50 nmol/L的FN溶液包被24 h或以100 nmol/L的FN溶液包被6 h,分离培养诱导获得的BM-EPCs形态和纯度均良好。 展开更多

关键词 内皮祖细胞 骨髓来源内皮祖细胞 单个核细胞 骨髓单个核细胞 Percoll密度梯度离心法 人纤连蛋白 骨组织工程 细胞分离方法 细胞培养方法

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高原体外肝细胞分离方法的研究 被引量：7

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作者 张明森 李素芝 +2 位作者 郭灵常 郑必海 聂中荣 《西南国防医药》 CAS 2002年第5期391-394,共4页

目的:探索高原环境下动物肝细胞的体外分离方法。方法:采用胶原酶体外两步灌流法先进行肝叶灌流,再将所得肝组织悬液分别置37℃温育不同时间,对比观测肝细胞产量、存活率、纯度及细胞接种后生长情况的差异。结果:未经温育组及温育10min... 目的:探索高原环境下动物肝细胞的体外分离方法。方法:采用胶原酶体外两步灌流法先进行肝叶灌流,再将所得肝组织悬液分别置37℃温育不同时间,对比观测肝细胞产量、存活率、纯度及细胞接种后生长情况的差异。结果:未经温育组及温育10min、30min、60min组肝组织悬液的肝细胞产量分别为0.85、2.67、3.84和4.29×105/g湿重肝组织;肝细胞存活率分别为97.6％、96.9％、88.3％及71.5％;肝细胞纯度分别为96.2％、95.4％、96.7％及 95.8％;前两组细胞贴壁生长和增殖情况较好,后两组则较差。结论:在高原环境下先采用肝叶体外两步灌流后冉行胶原酶短时间(10min左右)温育处理是一种既可获得较满意的细胞活性,同时又可显著提高细胞产量的分离肝细胞方法。 展开更多

关键词 高原 肝细胞 细胞分离方法

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大鼠生精细胞分离方法的研究 被引量：9

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作者 檀大羡 王植柔 +3 位作者 李莲军 刘锋 卢晟盛 卢克焕 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2005年第4期234-236,共3页

目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果... 目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果:组合酶法得到的睾丸生精细胞总数最多、分离所需时间最短;获得的细胞含杂质最少、细胞存活率最高;细胞培养48h后的存活率高,与其他两种分离方法比较有显著性差异(P<0.05)。结论:用组合酶法能在较短时间内获得数量较多的、比较纯化和存活率较高的生精细胞。 展开更多

关键词 细胞分离方法 大鼠 Percoll法 睾丸生精细胞 细胞总数 细胞培养 细胞存活率 显著性差异 动物睾丸 酶法制备 分析比较 方法比较 成熟期 时间 组合酶 研磨

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肿瘤干细胞分离方法的研究进展(文献综述) 被引量：3

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作者 陈颖 沈敏 刘宝林 《放射免疫学杂志》 CAS 2010年第3期312-314,共3页

关键词 恶性肿瘤细胞 细胞分离方法 文献综述 多向分化潜能 自我更新能力 干细胞 分子机制 细胞特点

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适用于彗星试验的神经细胞分离方法研究

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作者 项华 王衡 +3 位作者 潘劲草 查捷 俞国强 黄志成 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第1期62-62,81,共2页

关键词 彗星试验 神经细胞分离方法 乳动物细胞 DNA损伤 化学物质致突变性

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单细胞分离方法及仪器研究进展 被引量：8

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作者 黄彩虹 易定容 +1 位作者 金福江 叶一青 《仪器仪表学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期140-153,共14页

如何从复杂异质且数量众多的细胞背景中分离出具有某种特征的纯净细胞实验样本,是长期困扰生命科学和临床病理学研究者的难题。纯净无损高特异性的细胞分离方法对解析生命过程、研究病理机制、确定治疗方案、分析药物疗效具有重要的作... 如何从复杂异质且数量众多的细胞背景中分离出具有某种特征的纯净细胞实验样本,是长期困扰生命科学和临床病理学研究者的难题。纯净无损高特异性的细胞分离方法对解析生命过程、研究病理机制、确定治疗方案、分析药物疗效具有重要的作用。综述了单细胞分离方法及分离仪器的研究进展,重点梳理荧光激活细胞分选、微流体、激光显微切割、显微操作4种方法。首先,阐述方法的工作原理和部分理论模型。其次,分析几种典型仪器的结构、研究进展及主要性能参数。最后,讨论各种单细胞分离方法的优点和局限性,并展望单细胞分离仪器的发展趋势。 展开更多

关键词 单细胞分离方法 荧光激活细胞分选 微流体技术 激光显微切割

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小鼠心室肌细胞分离方法的改进

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作者 徐明 周士胜 +1 位作者 李龙天 迟庆 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第11期990-990,共1页

目的：探索更简单实用和重复性好的小鼠心肌细胞分离技术．方法：实验于2005～05／09在大连大学医学院医学研究中心完成．选择8～16周龄昆明小鼠150只，雌雄不拘，体质量30～40g，由大连大学医学院动物中心提供．采用原位主动脉插管和... 目的：探索更简单实用和重复性好的小鼠心肌细胞分离技术．方法：实验于2005～05／09在大连大学医学院医学研究中心完成．选择8～16周龄昆明小鼠150只，雌雄不拘，体质量30～40g，由大连大学医学院动物中心提供．采用原位主动脉插管和动脉夹固定法酶解分离小鼠心室肌细胞，并在室温下进行全细胞膜片钳记录．结果：可将主动脉插管的时间控制在1．5min内，所获心室肌细胞横纹清晰，一次性复钙可获得50％～60％的耐钙细胞，分离所得细胞可在全细胞膜片钳方式下记录到一过性外向钾电流（Ito）. 展开更多

关键词 细胞分离方法 心室肌细胞 昆明小鼠 全细胞膜片钳记录 大连大学医学院 一过性外向钾电流 主动脉插管 细胞分离技术 研究中心 小鼠心肌

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一种改进的简便经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法 被引量：3

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作者 王连才 马清涌 陈香丽 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2008年第3期220-222,共3页

目的:探索一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法,并探讨其对细胞功能的影响.方法:16只SD大鼠随机分成改进方法组和内灌注方法组,戊巴比妥腹腔麻醉后,其中8只按改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中,3... 目的:探索一种简单、经济和稳定的胰腺腺泡分离纯化的新方法,并探讨其对细胞功能的影响.方法:16只SD大鼠随机分成改进方法组和内灌注方法组,戊巴比妥腹腔麻醉后,其中8只按改进方法迅速切取并剪碎胰腺组织后置于新鲜配制的细胞分离液中,37℃,CO2孵箱中孵育30min,过滤获得细胞悬液,Hanks液(不含钙离子)清洗后获得胰腺腺泡细胞,另外8只采用内灌注方法获取胰腺腺泡细胞,然后进行细胞计数、活力测定、纯化鉴定和细胞内钙离子测定.结果:改进方法所获得的胰腺腺泡数量[(5.0±0.7)×106]、纯度[(78±6)%]与内灌注方法所获得的胰腺腺泡数量[(4.7±0.9)×106]、纯度[(79±7)%]比较无统计学意义(P>0.05),而细胞活力[(93±4)%]显著高于内灌注方法[(84±3)%](P<0.05),细胞内钙离子浓度(3.62±0.54)显著低于内灌注方法(5.31±0.37)组(P<0.05).结论:改进方法是一种稳定高效且对细胞活力及功能影响较小的胰腺腺泡细胞分离提纯方法. 展开更多

关键词 胰腺/细胞学 腺泡细胞 细胞分离/方法

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一种简易经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离提纯方法 被引量：3

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作者 何忠野 郭仁宣 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2006年第11期866-868,共3页

为探索一种简易而经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离、纯化的方法。笔者采用低浓度Ⅰ型胶原酶溶液作为细胞分离液，经胰胆管逆行注射，然后将剪碎的胰腺组织置于细胞分离液中消化；经过过滤、离心，提取胰腺腺泡细胞的单细胞悬液。结果示平均... 为探索一种简易而经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离、纯化的方法。笔者采用低浓度Ⅰ型胶原酶溶液作为细胞分离液，经胰胆管逆行注射，然后将剪碎的胰腺组织置于细胞分离液中消化；经过过滤、离心，提取胰腺腺泡细胞的单细胞悬液。结果示平均每只Wistar大鼠可获得4×10^6～5×10^6个细胞。纯度达70％～80％，与经典方法相比差异无晕盖性（P〉0.05）。这种方法具有耗酶量少、技术难度小的特点，可认为是一种简易、经济的大鼠胰腺腺泡细胞分离、纯化方法。 展开更多

关键词 胰腺/细胞学 腺泡细胞 细胞分离/方法

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一种快速分离C_2C_(12)细胞核仁的方法研究 被引量：1

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作者 邓恭华 王慷慨 +4 位作者 刘可 王浩 易宇欣 吴晓英 肖献忠 《医学临床研究》 CAS 2007年第4期529-531,共3页

【目的】探讨一种快速分离核仁且能保持其完整结构与功能的方法。【方法】采用低渗裂解分离细胞核,密度梯度离心分离细胞核仁,电镜、免疫印迹检测核仁的纯度。【结果】电镜检测发现在放大2000倍时C2C12肌源细胞核仁呈现为大小基本一致... 【目的】探讨一种快速分离核仁且能保持其完整结构与功能的方法。【方法】采用低渗裂解分离细胞核,密度梯度离心分离细胞核仁,电镜、免疫印迹检测核仁的纯度。【结果】电镜检测发现在放大2000倍时C2C12肌源细胞核仁呈现为大小基本一致、形态较为规则的黑色阴影,放大25000倍时可见单个网孔状的核仁,且核仁各组分清晰可见。免疫印迹检测发现核仁纯度较高,没有胞浆蛋白的污染。【结论】本研究建立了一种快速分离细胞核仁的方法。 展开更多

关键词 核仁组成区 细胞分离/方法

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3种方法分离脐血单核细胞的比较

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作者 陈金中 朱金琳 +1 位作者 刘华 吴同林 《湖北省卫生职工医学院学报》 1996年第1期11-12,共2页

造血干细胞移植是治疗骨髓功能低下及骨髓损害性疾病的根本方法,骨髓移植因骨髓源困难等原因而开展有限,成人外周血造血干细胞因其数量及特性应用亦受限制,脐血富含优质造血干细胞,且为一种废弃资源,最有可能广泛采集而构成品系完整之... 造血干细胞移植是治疗骨髓功能低下及骨髓损害性疾病的根本方法,骨髓移植因骨髓源困难等原因而开展有限,成人外周血造血干细胞因其数量及特性应用亦受限制,脐血富含优质造血干细胞,且为一种废弃资源,最有可能广泛采集而构成品系完整之造血干细胞库,但其单件采集量有限,确保能分离到足够多的单核细胞为成功的关键所在,本文对3种分离方法进行比较研究. 展开更多

关键词 单核细胞 造血干细胞 脐血采集 细胞分离方法 回收率 甲基纤维素 细胞移植 骨髓移植 职工医学院 细胞计数

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人卵巢颗粒细胞原代培养方法的比较 被引量：3

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作者 李佳琪 何远桥 +2 位作者 汪璇 胡佳 何林生 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第z1期14-18,共5页

目的对比5种不同方法分离人卵巢颗粒细胞的效果,并选择出高效、稳定的分离纯化、体外培养的有效方法。方法收集不孕症患者行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)穿卵时的卵泡液,采用裂解法、裂解+胰酶法、密度梯度离心法(包括Precoll+胰酶、Preco... 目的对比5种不同方法分离人卵巢颗粒细胞的效果,并选择出高效、稳定的分离纯化、体外培养的有效方法。方法收集不孕症患者行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)穿卵时的卵泡液,采用裂解法、裂解+胰酶法、密度梯度离心法(包括Precoll+胰酶、Precoll+Ⅰ型胶原酶、Precoll+透明质酸酶)分离颗粒细胞后进行活细胞计数,卵泡生成素免疫组化染色鉴定,MTT法检测细胞增殖能力,检测颗粒细胞体外分泌雌激素含量。结果在使用不同方法分离颗粒细胞时,Precoll+胰酶、Precoll+Ⅰ型胶原酶、Precoll+透明质酸酶3种方法得到细胞数量多于裂解法及裂解+胰酶法(P<0.05)。各种分离方法的细胞生长趋势并无明显差异。裂解法、裂解+胰酶法雌激素含量高于Precoll+胰酶、Precoll+Ⅰ型胶原酶、Precoll+透明质酸酶(P<0.05)。结论 5种方法均成功分离得到颗粒细胞,但每种方法各有优缺点,根据实验目的不同需选择不同的方法。 展开更多

关键词 卵巢颗粒细胞 细胞分离方法 细胞培养

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人卵巢颗粒细胞体外分离培养后连续传代的观察

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作者 袁涛 刘文杰 +7 位作者 辛志敏 宋蕊 王丽 李薇 王晓杰 高秀霞 王树玉 刘英 《生殖医学杂志》 CAS 2022年第2期220-226,共7页

目的观察两种方法分离的人卵巢颗粒细胞(GCs)体外培养后的连续传代情况。方法选取行辅助生殖技术治疗的不孕患者,收集促排卵后穿刺取卵获得的卵泡液(FF),分别用密度梯度离心法和红细胞裂解法分离人GCs,进行体外培养、扩增及连续传代,并... 目的观察两种方法分离的人卵巢颗粒细胞(GCs)体外培养后的连续传代情况。方法选取行辅助生殖技术治疗的不孕患者,收集促排卵后穿刺取卵获得的卵泡液(FF),分别用密度梯度离心法和红细胞裂解法分离人GCs,进行体外培养、扩增及连续传代,并用免疫荧光法对原代及传代后GCs进行鉴定。结果红细胞裂解法获得的GCs数量较密度梯度离心法显著增多(P<0.05),密度梯度离心法分离的GCs的24 h贴壁率显著高于红细胞裂解法(P<0.05)。两种方法分离的GCs均在7 d出现短梭形改变,10 d左右开始退化。两种方法分离的原代GCs在第3~5天为快速增殖期,第7天细胞增殖达到顶峰,第10天左右细胞量下降,每个时间点密度梯度离心法处理的细胞量均显著高于红细胞裂解法(P<0.05);传代后细胞1~5 d为快速增殖期,7 d左右达顶峰,10 d左右下降,各时间点两种分离方法所获GCs传代培养的细胞量均无统计学差异(P>0.05)。两种方法分离的GCs均可进行连续传代,细胞形态无明显差异,且连续传代后的GCs仍表达卵泡刺激素受体(FSHR)。结论密度梯度离心法较红细胞裂解法可获得生长情况更为良好的原代GCs;两种分离方法所获GCs均可体外连续传代。 展开更多

关键词 人卵巢颗粒细胞 细胞分离方法 细胞培养 连续传代

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美国研究开发出利用激光分离细胞的新系统

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《生物医学工程与临床》 CAS 2008年第1期F0003-F0003,共1页

据2007年12月15日的《分析化学杂志》报道，美国麻省理工学院利用造价低廉的激光开发出一种从样品中分离某些细胞的新系统。该系统能在普通的玻璃载玻片上分离出1万多种细胞，这将有助于研究人员轻松完成许多在以前看来不可能的生物实... 据2007年12月15日的《分析化学杂志》报道，美国麻省理工学院利用造价低廉的激光开发出一种从样品中分离某些细胞的新系统。该系统能在普通的玻璃载玻片上分离出1万多种细胞，这将有助于研究人员轻松完成许多在以前看来不可能的生物实验。而且，与其他细胞分离方法相比，该系统分离速度快、操作简单且价格便宜。 展开更多

关键词 美国麻省理工学院 分离细胞 系统 激光 细胞分离方法 分析化学 生物实验 研究人员

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昆虫中肠细胞的离体培养 被引量：4

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作者 童丹丹 吴艳蕾 +1 位作者 郑桂玲 李长友 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期390-398,共9页

中肠在昆虫生命活动中起着重要作用,同时是多种生物防治微生物作用的靶标,昆虫中肠细胞的离体培养一直受到国际上的广泛关注。本文对昆虫中肠细胞的类型、中肠细胞的分离方法、离体培养所需的培养基、细胞培养方法和条件以及中肠细胞的... 中肠在昆虫生命活动中起着重要作用,同时是多种生物防治微生物作用的靶标,昆虫中肠细胞的离体培养一直受到国际上的广泛关注。本文对昆虫中肠细胞的类型、中肠细胞的分离方法、离体培养所需的培养基、细胞培养方法和条件以及中肠细胞的鉴定等方面进行了综述,为昆虫中肠生物学功能的研究提供启示。 展开更多

关键词 中肠细胞 细胞分离方法 生长因子 培养条件

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四种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响 被引量：6

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作者 曾润铭 刘梦璋 林菁 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第18期67-69,共3页

目的:探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响,为类风湿性关节炎患者临床用药,改善其功能提供依据。方法:实验于2003-05/2004-02在的第一军医大学细胞生物实验室完成。类... 目的:探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响,为类风湿性关节炎患者临床用药,改善其功能提供依据。方法:实验于2003-05/2004-02在的第一军医大学细胞生物实验室完成。类风湿性关节炎及正常滑膜组织,分别来源于第一军医大学南方医院脊柱骨病科和汕头市第二人民医院外二科因类风湿性关节炎而行全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的患者和无关节炎病史的创伤性截肢患者,用原酶消化法获得成纤维样滑膜细胞。用第2～4代细胞在接种12h后分别加入上述药物处理24h,在第5和第10天分别用四甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖情况并统计分析。结果:雷公藤、甲氨蝶呤第5天对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制率分别为(46.14±4.20)%和(31.52±2.86)%,第10天分别(47.00±1.89)%和(46.73±3.83)%。消炎痛及地塞米松对成纤维样滑膜细胞增殖无明显抑制作用。这种抑制作用对于类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖尤为明显。雷公藤多甙比甲氨蝶呤对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制作用有更明显的时间依赖性。结论:雷公藤、甲氨蝶呤对于类风湿性关节炎的成纤维样滑膜细胞增殖有明显抑制作用,适当延长甲氨蝶呤用药间隔时间对于抑制滑膜组织过度增生及血管翳的形成效果可能相似。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 成纤维细胞 滑膜/细胞学 细胞分离/方法 细胞培养/方法

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人脐血造血干细胞液体培养初步报告

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作者 朱金林 陈金中 《湖北省卫生职工医学院学报》 1996年第2期5-6,共2页

人脐血富含造血干细胞,本文将人脐血造血干细胞用多种方法进行分离、提纯后,进行了液体培养,观察其生长情况。

关键词 造血干细胞 人脐血 液体培养 单核细胞 细胞液 甲基纤维素 细胞计数 细胞分离方法 单克隆抗体 倒置显微镜

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本期专题：肿瘤干细胞的分选

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《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第41期7636-7636,共1页

1前列腺癌干细胞分离方法的对比及筛选，见2012年16卷6期1011页。2人鼻咽癌CD133^＋干细胞的生物学特性及意义，见2012年16卷6期1007页。3胃癌肿瘤干细胞的分离与成脂分化．见2011年15卷36期6718页。4干细胞相关因子在大肠癌组织及SW62... 1前列腺癌干细胞分离方法的对比及筛选，见2012年16卷6期1011页。2人鼻咽癌CD133^＋干细胞的生物学特性及意义，见2012年16卷6期1007页。3胃癌肿瘤干细胞的分离与成脂分化．见2011年15卷36期6718页。4干细胞相关因子在大肠癌组织及SW620细胞株的表达，见2011年15卷6期1015。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞 细胞分离方法 分选 专题 生物学特性 SW620 大肠癌组织 前列腺癌

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气相色谱/质谱法检测壬基酚在大鼠睾丸支持细胞中的分布 被引量：1

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作者 潘旭萍 高子燊 +1 位作者 于红霞 韩晓冬 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期221-228,共8页

壬基酚(NP)是一种环境内分泌干扰物,具有类雌激素作用,它的高稳定性和脂溶性的特点使其能够在有机体,特别是脂肪组织内聚集,对人类的生殖系统产生毒害作用,因其分子结构与细胞膜的磷脂分子很相似,故与磷脂分子有很高的亲和力.为了探讨N... 壬基酚(NP)是一种环境内分泌干扰物,具有类雌激素作用,它的高稳定性和脂溶性的特点使其能够在有机体,特别是脂肪组织内聚集,对人类的生殖系统产生毒害作用,因其分子结构与细胞膜的磷脂分子很相似,故与磷脂分子有很高的亲和力.为了探讨NP对生殖细胞的毒理机制,了解其在细胞内的分布情况,建立大鼠睾丸支持细胞NP含量的高效气相色谱及质谱(即GC/MS)检测方法,观察NP在细胞中的分布.实验采用原代培养的大鼠睾丸支持细胞,通过带有CY3标记的抗体对其质膜上特异表达的卵泡刺激素受体(FSHR)进行免疫荧光染色,鉴定支持细胞.然后用10μmol/L和20μmol/L的NP分别作用细胞3 h6、h1、2 h2、4 h后,超声破碎,并对10μmol/L NP处理的样品用改进的三步离心法进行细胞质膜分离,GC/MS方法检测NP在细胞中的总含量,以及细胞膜中NP含量占细胞中的总含量的比例.结果显示培养的细胞均呈现绿色荧光,都表达FSHR.两步离心的质膜分离方法,膜纯度为33.22%,改进的三步离心法膜纯度为78.60%.另外,分别在10μmol/L和20μmol/L NP浓度下,随着作用时间的延长,NP在细胞中的总含量逐渐增加至12 h,在24 h时突然下降至3 h的水平.细胞膜中NP含量占细胞中的总含量的比例,随着作用时间的延长而降低.由此得出结论是:FSHR可以作为大鼠睾丸支持细胞的鉴定指标;三步离心的质膜分离方法得到的膜纯度远远高于两步离心法;虽然NP与磷脂分子有很高的亲和力,但随着作用时间的延长,NP并没有停留在细胞膜里,而是能够穿过细胞膜进入到细胞内,并主要分布在细胞内. 展开更多

关键词 卵泡刺激素受体 免疫荧光 壬基酚 高效气相色谱及质谱 支持细胞 细胞质膜分离方法

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两种离心法制备对年轻红细胞的研究

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作者 于新建 张红旗 《中国误诊学杂志》 CAS 2005年第2期320-321,共2页

关键词 红细胞 细胞分离/方法

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