BXSB狼疮小鼠胸腺上皮细胞培养方法的建立

1

作者 刘波 毕黎琦 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期81-83,F002,共4页

目的 :比较不同培养条件下原代狼疮小鼠胸腺上皮细胞生长情况。方法 :分别采用剪切法、剪切加胶原酶消化法、剪切加胰蛋白酶消化法建立培养体系获取自发性系统性红斑狼疮小鼠 (BXSB小鼠 )胸腺上皮细胞 ;用光镜、免疫细胞化学染色法进行... 目的 :比较不同培养条件下原代狼疮小鼠胸腺上皮细胞生长情况。方法 :分别采用剪切法、剪切加胶原酶消化法、剪切加胰蛋白酶消化法建立培养体系获取自发性系统性红斑狼疮小鼠 (BXSB小鼠 )胸腺上皮细胞 ;用光镜、免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定。结果 :含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出较纯的胸腺上皮细胞 ;剪切法成纤维细胞污染较多 ,剪切加胰蛋白酶消化法细胞生长状态较差 ,经剪切加胶原酶消化的BXSB胸腺植块 ,生长状态好 ,成纤维细胞污染少 ;当原代培养的细胞长满瓶壁的 90 %左右时可传代 ,角蛋白染色阳性细胞纯度达 95 %以上。结论 :剪切加胶原酶消化法仅用含血清的培养基即可培养出符合实验要求的 BXSB小鼠胸腺上皮细胞 ,是低成本、简便易行的系统性红斑狼疮模型鼠胸腺上皮细胞培养体系。 展开更多

关键词 红斑狼疮 系统性 胸腺上皮细胞 细胞培养/方法 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法:差速贴壁+阿糖胞苷+胰酶法 被引量：2

2

作者 殷义霞 李世普 +2 位作者 闫玉华 袁琳 王欣宇 《中国组织工程研究与临床康复》 CSCD 北大核心 2007年第7期1284-1286,共3页

目的:通过细胞形态学观察及生物学特性鉴定,建立一种经济实用的体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法。方法:实验于2006-06在武汉理工大学完成。①阿糖胞苷(Sigma,批号w10562);胎牛血清(杭州四季青产品);胰蛋白酶(Amresco);多聚赖... 目的:通过细胞形态学观察及生物学特性鉴定,建立一种经济实用的体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法。方法:实验于2006-06在武汉理工大学完成。①阿糖胞苷(Sigma,批号w10562);胎牛血清(杭州四季青产品);胰蛋白酶(Amresco);多聚赖氨酸(Sigma);胶质纤维酸性蛋白,神经生长因子受体蛋白抗体(博士德)。②选取出生3d内的Wistar大鼠5只,乙醇浸泡后断头处死,取嗅球的最外两层,通过1.25g/L胰蛋白酶消化分离嗅鞘细胞,体外原代培养。③采用Nash差速贴壁+阿糖胞苷+胰酶法纯化嗅鞘细胞。培养18h后将未贴壁的细胞悬液转种于另一未涂层的器皿中,再培养36h,重复上述步骤移入0.1g/L多聚赖氨酸包被的塑料培养瓶中进行培养,纯化后的细胞在24h内陆续贴壁,常规培养2d,加入终浓度为2mg/L的阿糖胞苷,作用48h后,换上新的培养基,继续培养1d,弃去培养基,用无钙镁的Hanks液清洗2次,然后用1.25g/L的胰酶消化10min,待细胞突起回缩、胞体变圆时,立刻加入纯血清终止,其血清终浓度为20%,制备单细胞悬液。④倒置显微镜下观察其形态变化,苏木精-伊红染色,同时行神经生长因子受体蛋白和胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定嗅鞘细胞,并计算嗅鞘细胞阳性百分率。结果:①活细胞形态观察:分离培养的嗅鞘细胞具有双极或多极突起,且突起细长,相互交织。②嗅鞘细胞的苏木精-伊红染色鉴定:细胞呈三角形或梭形,有长的突起,胞浆被染成粉红色,胞核呈蓝紫色,胞核内深染的为核仁,有1～3个核仁。③嗅鞘细胞的胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定:细胞呈现棕黄色,胞核淡染,阳性细胞成网状连接,胞体多为三角形,有细长突起,阳性率91.5%。④嗅鞘细胞的P75免疫组化染色鉴定:阳性细胞呈绿色,多数细胞染色阳性,阳性率89%。结论:实验所采用的Nash差速贴壁+阿糖胞苷+胰酶法分离纯化培养嗅鞘细胞切实可行,为神经诱导修复材料的研究提供种子细胞。 展开更多

关键词 细胞培养技术/方法 嗅球/细胞学 免疫组织化学

在线阅读 下载PDF 职称材料

人脑胶质瘤细胞的原代培养方法研究

3

作者 李海峰 万大海 郝解贺 《基层医学论坛》 2009年第1期5-8,共4页

目的探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,成功地建立细胞模型,为临床和实验研究提供良好的实验模型。方法分别采用酶消化法和组织块培养法对16例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果;通过倒置相差显微镜观察细胞的形态学... 目的探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,成功地建立细胞模型,为临床和实验研究提供良好的实验模型。方法分别采用酶消化法和组织块培养法对16例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果;通过倒置相差显微镜观察细胞的形态学特点;通过生长曲线的测定研究体外培养细胞的生长特性。结果人脑胶质瘤细胞原代培养成功,并可传代。经组织块培养法成功率较低为43.8%;经酶消化法短期培养成功率为87.5%,明显高于组织块培养法。培养成功的细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期。结论用酶消化法进行人脑胶质瘤短期体外培养,成功率较高,适宜建立体外细胞培养模型。 展开更多

关键词 人脑胶质瘤 细胞 培养的 细胞培养/方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

人脑胶质瘤细胞原代培养实验模型的构建 被引量：14

4

作者 姜政 江玉泉 +2 位作者 李新钢 李冰 周伟 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第10期744-747,共4页

目的:探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,提高原代培养的成功率,快速构建人脑胶质瘤细胞体外试验模型。方法:分别采用组织块培养法和酶消化法对12例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果;通过倒置相差显微镜和激光共聚焦... 目的:探索人脑胶质瘤细胞原代培养的方法,提高原代培养的成功率,快速构建人脑胶质瘤细胞体外试验模型。方法:分别采用组织块培养法和酶消化法对12例人脑胶质瘤细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果;通过倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞的形态学特点;通过生长曲线的测定研究体外培养细胞的生长特性。结果:原代人脑胶质瘤细胞短期培养成功,并可传代。经组织块培养法成功率较低为33.3%;经酶消化法短期培养成功率为83.3%,明显高于组织块培养法。培养成功的细胞状态稳定,增殖活跃,有明显的对数生长期。结论:用酶消化法可进行人脑胶质瘤短期体外培养,且成功率较高,适宜建立体外细胞培养模型。 展开更多

关键词 脑肿瘤/细胞学 神经胶质瘤/细胞学 细胞 培养的 细胞培养/方法 免疫组织化学

在线阅读 下载PDF 职称材料

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养 被引量：10

5

作者 郭新 赵东海 +2 位作者 何旭 李玉林 李一雷 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期469-471,F003,共4页

目的:建立分离和培养大鼠骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)的方法,观察大鼠MSCs(r MSCs)的生物学特性。方法:用Percoll分离液分离出骨髓中的单个核细胞,在含10 %限定性胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养,并传代扩增MSCs。结果:r MSCs是骨髓... 目的:建立分离和培养大鼠骨髓来源的间充质干细胞(MSCs)的方法,观察大鼠MSCs(r MSCs)的生物学特性。方法:用Percoll分离液分离出骨髓中的单个核细胞,在含10 %限定性胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养,并传代扩增MSCs。结果:r MSCs是骨髓粘附细胞中形态均一的同源细胞群,组织化学结果显示r MSCsPAS-过碘酸雪夫氏染色阳性,苏丹黑- B及碱性磷酸酶染色阴性。结论:所建立的大鼠MSCs的分离和培养条件可分选出骨髓粘附细胞中一组独特的同源细胞群,该细胞群有其特殊的代谢特点。 展开更多

关键词 骨髓 祖代细胞 细胞培养/方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

人和小鼠内皮细胞的分离、培养及鉴定 被引量：3

6

作者 寇伯君 李玉林 +2 位作者 石英爱 张丽红 王心蕊 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期155-156,F003,共3页

目的 :分离、培养并鉴定人和小鼠内皮细胞以建立稳定的细胞系 ,为研究肿瘤血管发生机制提供条件。方法 :应用胰蛋白酶消化法 ,分别进行人脐静脉和小鼠肺组织内皮细胞的分离、培养及鉴定。结果 :人、鼠原代培养的细胞接种后第 2天即贴壁... 目的 :分离、培养并鉴定人和小鼠内皮细胞以建立稳定的细胞系 ,为研究肿瘤血管发生机制提供条件。方法 :应用胰蛋白酶消化法 ,分别进行人脐静脉和小鼠肺组织内皮细胞的分离、培养及鉴定。结果 :人、鼠原代培养的细胞接种后第 2天即贴壁生长 ,第 7天后长至汇合 ,细胞经八因子相关抗原染色 ,证实是内皮细胞。结论 :胰蛋白酶消化法是一种简便可靠的分离、培养内皮细胞的方法。 展开更多

关键词 内皮 血管 内皮细胞 胰蛋白酶 细胞培养/方法 von WILLEBRAND因子

在线阅读 下载PDF 职称材料

连续外植块法培养SD大鼠成骨细胞及鉴定 被引量：2

7

作者 杨禾丰 丁仲鹃 胡瑜 《昆明医学院学报》 2009年第2期32-35,共4页

目的针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,探讨简便、经济、高效的原代成骨细胞培养方法.方法采用SD大鼠胎鼠颅盖骨培养原代成骨细胞,并收集1～3次连续植块进行培养,观察细胞形态、分裂增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化的变化.结果连续... 目的针对目前体外培养成骨细胞方法的不足,探讨简便、经济、高效的原代成骨细胞培养方法.方法采用SD大鼠胎鼠颅盖骨培养原代成骨细胞,并收集1～3次连续植块进行培养,观察细胞形态、分裂增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化的变化.结果连续植块培养收集的1～3次原代成骨细胞,在细胞贴壁、变形、铺展、汇合时间,细胞内碱性磷酸酶染色及矿化作用均无明显的区别.结论连续植块法用于培养SD大鼠成骨细包具有简便、经济高效的特点. 展开更多

关键词 成骨细胞 细胞培养/方法 SD大鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

肽类生长因子及苏拉明对体外培养人脐静脉内皮细胞生长的影响

8

作者 赵希义 王希兵 +3 位作者 许斐 窦建明 曹雪萍 张纯生 《肿瘤防治杂志》 2003年第3期289-292,共4页

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和苏拉明 (suramin)对体外培养人脐静脉内皮细胞生长 (HUVEC)的影响 ,旨在探讨他们在肿瘤血管生成和抗肿瘤血管生成中的作用。方法 :体外培养人脐静脉内皮细胞EV 30 4 ,一组用不同浓度的bFGF(0 ... 目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和苏拉明 (suramin)对体外培养人脐静脉内皮细胞生长 (HUVEC)的影响 ,旨在探讨他们在肿瘤血管生成和抗肿瘤血管生成中的作用。方法 :体外培养人脐静脉内皮细胞EV 30 4 ,一组用不同浓度的bFGF(0 0 1、0 1、1 0、10、10 0ng mL)进行培养 ,另一组在用不同浓度的苏拉明 (0 0 1、0 1、1 0、10、10 0 μmol L)培养 6h后加入浓度为 10ng mL的bFGF再进行培养。结果 :bFGF可明显刺激内皮细胞的生长 ,而Suramin可阻止bFGF对内皮细胞的生长刺激。结论 :苏拉明对体外培养内皮细胞的生长抑制作用可能是通过中和肽类生长因子如bFGF及引起内皮细胞凋亡来实现的。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子 碱性/药理学 舒拉明/药理学 内皮 血管/细胞学 脐静脉/细胞学 细胞培养/方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

差速贴壁法分离培养早期人胚骨髓间充质干细胞 被引量：4

9

作者 袁军 单立冬 +1 位作者 杨天明 惠国桢 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2005年第4期218-221,共4页

目的:探讨差速贴壁法从早期人胚股骨分离、纯化骨髓间充质干细胞(MSCs)的可行性,并观察培养细胞是否向神经元样细胞诱导分化。方法:取2～3月龄新鲜健康流产人胚股骨,切碎,接种玻璃培养瓶内培养8～12h,待较多的成纤维细胞贴壁,立刻将未... 目的:探讨差速贴壁法从早期人胚股骨分离、纯化骨髓间充质干细胞(MSCs)的可行性,并观察培养细胞是否向神经元样细胞诱导分化。方法:取2～3月龄新鲜健康流产人胚股骨,切碎,接种玻璃培养瓶内培养8～12h,待较多的成纤维细胞贴壁,立刻将未贴壁细胞转种至塑料培养瓶培养,并多次传代;用甲氧酚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)诱导培养的细胞,免疫细胞化学方法检测诱导后细胞神经元烯醇化酶(NSE)、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况。结果:原代培养3d可见塑料培养瓶内有长梭形细胞生长,至第10天前后形成集落样克隆,传至第4代后呈单层漩涡状排列的长梭形的成纤维样细胞,已无明显细胞克隆形成,经多次传代,细胞保持良好的增殖能力和稳定的性状;免疫细胞化学方法显示未诱导细胞NSE、Nestin、GFAP阴性,诱导后细胞NSE、Nestin呈阳性,GFAP阴性,间接证实培养所得细胞是MSCs。结论:差速贴壁培养法从早期人胚股骨中分离纯化MSCs,去除可能的成纤维细胞污染,是简便有效的,可供有关研究参考选择。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞/细胞学 间充质干细胞/细胞学 间充质干细胞/胚胎学 细胞培养/方法 细胞分化 人类

在线阅读 下载PDF 职称材料

无血清悬浮法培养MCF-7细胞系并筛选该细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究 被引量：14

10

作者 许立生 王水 +1 位作者 许健 杜青 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第10期736-740,共5页

目的:研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法:应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其... 目的:研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法:应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其接种于含血清培养基,观察分化。应用单克隆形成实验、表面标志检测、HOECHST33342染色检测来确定培养出的细胞中肿瘤干细胞的比例及其培养后肿瘤干细胞含量的变化。结果:乳腺癌MCF-7细胞系中有约2.12%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的MCF-7无明显差别。流式细胞仪表面标志检测,细胞球中约含83.13%表达CD24-CD44+的细胞,HOECHST33342染色提示细胞球中约含10.06%的侧亚群(sidepopulation)细胞。结论:MCF-7细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有比例较低的具有增殖和分化能力的乳腺癌干细胞相关亚群。表面标志以及HOECHST33342检测差异提示细胞球中仅约1/8细胞具有干细胞的功能。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/病理学 肿瘤干细胞/病理学 细胞系 肿瘤 细胞培养技术/方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

转化生长因子-β1介导的角膜基质细胞外基质纤维化体外三维培养模型的构建 被引量：4

11

作者 靳荷 罗世男 +3 位作者 范梓晰 李杰 周卫为 李霞 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期406-411,共6页

背景 角膜损伤修复过程中细胞外基质（ECM）纤维化是角膜瘢痕形成的基础,转化生长因子-β1（TGF-β1）可引起角膜基质过度产生ECM.我们在前期的研究工作中构建了角膜基质三维培养模型,而将TGF-β1添加于该三维培养体系中是否可达到构建... 背景 角膜损伤修复过程中细胞外基质（ECM）纤维化是角膜瘢痕形成的基础,转化生长因子-β1（TGF-β1）可引起角膜基质过度产生ECM.我们在前期的研究工作中构建了角膜基质三维培养模型,而将TGF-β1添加于该三维培养体系中是否可达到构建角膜基质ECM纤维化的体外三维培养模型有待研究.目的 评估TGF-β1对该三维培养模型中ECM纤维化相关基因表达的影响,确定该三维培养体系是否可以作为角膜基质ECM纤维化的体外三维培养候选模型.方法分离新鲜成年牛角膜,并在基础培养液（DMEM/F12＋体积分数10％胎牛血清）中进行角膜基质细胞的培养,将5＆#215;105个牛角膜基质细胞收集于15 ml离心管中构建体外三维培养模型（Pellet）,根据培养液中添加的TGF-β1质量浓度的不同分为基础培养液组（无TGF-β1）、基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组和基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组,于培养2周时用钙黄绿素-AM/碘化丙啶法（Calcein-AM/PI）法进行细胞活性测定;分别于培养后48 h、1周和2周应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）和Western blot法检测各组Pellet中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）、ColⅢmRNA及其蛋白的表达. 结果 Pellet模型培养后48 h,角膜基质细胞开始抱团,培养后2周经Calcein AM/PI染色证实绝大多数细胞存活.培养后48 h、1周和2周,基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组和基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组角膜基质细胞中α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢmRNA的相对表达量均明显高于基础培养液组,3个组间的总体差异均有统计学意义（F分组=696.745,P＜0.001;F分组=35.166,P＜0.001;F分组=33.677,P＜0.001）,且随着培养时间的延长,α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢmRNA的相对表达量逐渐升高,差异均有统计学意义（F时间=5.863,P＜0.05;F时间=298.614,P＜0.001;F时间=607.472,P＜0.001）;ColⅢmRNA合成速率均大于Col Ⅰ mRNA的合成速率;Western blot检测发现,培养后48 h和1周α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的表达量为微量,培养后2周基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组Pellet模型中α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的相对灰度表达量分别为0.395±0.208、1.060±0.175和0.629±0.382,基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组o-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的灰度表达量分别为0.758±0.228、1.201±0.187和0.753 ±0.468,组间总体比较差异均有统计学意义（α-SMA：F=10.691,P＜0.05;Col Ⅰ：F=14.094,P＜0.05;ColⅢ：F=10.995,P＜0.05）. 结论 培养液中添加TGF-β1和血清促进角膜ECM的纤维化,表现为Pellet三维培养模型中牛角膜基质细胞高表达纤维化特异性标志物.该培养体系可作为角膜基质ECM纤维化研究的体外三维培养模型. 展开更多

关键词 角膜基质细胞 创伤修复 细胞培养技术/方法 转化生长因子-Β1 细胞外基质 纤维化 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原

在线阅读 下载PDF 职称材料

骨髓间充质干细胞分离方法的实验研究 被引量：1

12

作者 赵东海 杨淑艳 +1 位作者 齐玲 杨宁江 《吉林医药学院学报》 2010年第4期187-189,共3页

目的以不同方法分离骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨原代培养MSCs的分离方法间的优劣。方法用Percoll、Ficoll分离液分离法及直接种植法分离骨髓中的单个核细胞,在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养,观察原代培养MSCs形态学间的差异。... 目的以不同方法分离骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨原代培养MSCs的分离方法间的优劣。方法用Percoll、Ficoll分离液分离法及直接种植法分离骨髓中的单个核细胞,在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养,观察原代培养MSCs形态学间的差异。结果采用Percoll分离液分离MSCs,可以获得形态均一性较好的同源细胞群。Ficoll分离液分离法和直接种植法获得的细胞均一性较差,含有较多杂细胞。结论采用Percoll分离液分离骨髓成分,可以获得同源性良好的MSCs。 展开更多

关键词 骨髓 干细胞 细胞培养/方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

转瓶变速培养对微胶囊肝细胞聚集体形成及活性的影响

13

作者 陈滟珊 喻成波 +1 位作者 曹红翠 李兰娟 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期403-409,共7页

目的：观察匀速与变速旋转培养对微胶囊HepLL永生化人肝细胞、HepG2肝细胞聚集体形成和活性的影响。方法：一步法海藻酸钠—壳聚糖（ AC）微胶囊包裹HepG2及HepLL细胞，随机分为两大组，每组按转速分3小组。动态观察并测量各组聚集体大... 目的：观察匀速与变速旋转培养对微胶囊HepLL永生化人肝细胞、HepG2肝细胞聚集体形成和活性的影响。方法：一步法海藻酸钠—壳聚糖（ AC）微胶囊包裹HepG2及HepLL细胞，随机分为两大组，每组按转速分3小组。动态观察并测量各组聚集体大小、数目变化，ELISA动态检测各组白蛋白合成量，比色法检测氨的清除量，高效液相色谱法检测安定转化功能。结果：与匀速旋转培养组相比，变速旋转培养组微胶囊细胞第6、8、10、12、14、16天聚集体平均个数、平均最大径、白蛋白合成量、氨清除量以及安定转化量均明显提高（均P＜0．01），微胶囊HepLL各组在各个时间点的白蛋白合成量、氨清除量及安定转化功能均优于HepG2（均P＜0．01）。结论：微胶囊转瓶变速培养显著加快微胶囊HepLL、HepG2细胞聚集体形成并提高细胞活性，未来HepLL有可能代替HepG2用于人工肝治疗。 展开更多

关键词 壳聚糖 胶囊 肝细胞/细胞学 培养基 细胞 培养的/细胞学 细胞培养技术/方法 旋转

在线阅读 下载PDF 职称材料

人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性

14

作者 胡守龙 李莉 +1 位作者 崔冬梅 曾骏文 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期108-113,共6页

背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维... 背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维培养系统，微观模拟在体巩膜，建立巩膜重塑模型。 方法采集新鲜供体巩膜组织，采用组织块培养法分离和培养HSFs，采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白和角蛋白的表达以鉴定细胞；获取8周龄SPF级雄性SD大鼠鼠尾腱制备鼠尾胶原，400 μl胶原加入50 μl NaOH（0.1 mol/L）溶液中混匀，加入80 μl 10倍培养液，混匀，溶液pH值约为7。加入1 100 μl终浓度1×106/ml细胞悬液混合形成凝胶培养系统，于倒置相差显微镜下观察HSFs的增生情况和细胞形态，采用IPP-5软件对三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性；采用生物力学试验机对三维胶原系统的生物力学特性进行测定。 结果培养的HSFs波形蛋白呈阳性表达，角蛋白表达阴性。未接种培养细胞的无成纤维细胞SD鼠鼠尾胶原凝胶透明，实验期间性状无明显变化，而含HSFs的三维胶原凝胶随着细胞培养时间的延长细胞数量增加，倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列，培养后7～14 d凝胶块呈乳白色，凝胶面积保持在正常的10%左右，三维培养系统中的HSFs接种后24 h细胞产生多向性突起，呈双极形或纺锤形。HSFs胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性（0～100 s）部分与线性（100～600 s）部分，前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化，后者是胶原凝胶在定力的作用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论鼠胶原凝胶对培养的HSFs有良好的生物相容性，HSFs胶原凝胶可形成三维复合物，可呈现机械性生物学特性，是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型，可用于巩膜重塑的模拟研究。 展开更多

关键词 成纤维细胞/细胞学 巩膜 人 胶原 SD大鼠 生物力学 细胞培养技术/方法 种植 人巩膜成纤维细胞的胶原蛋白基质

在线阅读 下载PDF 职称材料

无动物源性成分培养体系快速诱导人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞的分化 被引量：1

15

作者 刘秋慧 王菁 +4 位作者 田蓉 王肖 曹迪 卢晶 罗燕 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期484-488,共5页

背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建... 背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建立xeno-free培养体系,优化快速诱导hESCs向RPE细胞分化的方法. 方法 将hESCs克隆团接种至Vitronectin XFTM,在培养液中加入50 ng/ml noggin、10 ng/ml DKK-1以及10 ng/ml胰岛素样生长因子-1（IGF-1）培养2d,第2～4天将培养液中noggin质量浓度减至10 ng/ml,并加入5 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,第4～6天移除培养液中的noggin和bFGF,第8～14天培养液中加入1 μmol/L CHIR99021.倒置显微镜下观察ESCs在分化为RPE细胞过程中的形态变化,免疫荧光染色检测细胞内特异性抗原的表达以对分化细胞进行鉴定,实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测细胞分化过程中RPE细胞特异性蛋白mRNA的相对表达变化量.结果 分化培养第14天,部分细胞呈多角形并呈现铺路石样排列,且细胞内可见色素颗粒;培养第35天,诱导分化的细胞内表达RPE细胞特异性抗原Mitf及RPE65;培养至第60天,细胞内富含黑色素颗粒且呈规则六边形.与诱导分化前比较,诱导分化第7天和第14天hES-RPE细胞中Mitf mRNA的表达量分别增加了（3.43±2.77）倍和（8.91±2.83）倍,而RPE65 mRNA的表达量分别增加了（14.60±3.94）倍和（87.16±9.32）倍,分化第7天和第14天细胞中的Mitf mRNA和RPE65mRNA的相对表达量均明显高于分化前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 hESCs可在含尼克酰胺、DKK-1、noggin、IGF-1和CHIR99021的xeno-free优化培养体系中快速分化为RPE细胞. 展开更多

关键词 胚胎干细胞/药物作用 细胞培养技术/方法 细胞分化 视网膜色素上皮 培养液/药物作用 细胞株 人 无动物源性

在线阅读 下载PDF 职称材料

脂肪细胞因子Leptin对体外培养的RF/6A细胞自噬、VEGF表达及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响 被引量：2

16

作者 刘哲 王旖 +5 位作者 李蓉 巨伟 杜斌 马利 张一凡 杜军辉 《医学临床研究》 CAS 2022年第1期1-4,共4页

【目的】探讨脂肪细胞因子Leptin对体外培养的RF/6A细胞自噬、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。【方法】以RF/6A细胞为研究对象,加入不同浓度Leptin培养24h后,WesternBlo... 【目的】探讨脂肪细胞因子Leptin对体外培养的RF/6A细胞自噬、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。【方法】以RF/6A细胞为研究对象,加入不同浓度Leptin培养24h后,WesternBlotting检测蛋白微管相关蛋白1轻链3(lightchain3,LC3)、Beclin-1、p62及VEGF表达水平。Leptin联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、氯喹(CQ)作用RF/6A细胞后,用CCK8法检测细胞增殖、Transwell法检测细胞迁移、基质胶(Matrigel)法检测细胞管腔形成。【结果】与Control组比较,不同浓度Leptin均能上调LC3、Beclin-1、VEGF表达,抑制p62表达(P<0.05);与100ng/mLLeptin组比较,加入3-MA、CQ后均能抑制RF/6A细胞增殖,减少迁移细胞数和细胞管腔形成数(P<0.05)。【结论】Leptin能够激活RF/6A细胞自噬,促进VEGF表达、RF/RA细胞增殖、迁移和细胞管腔形成。 展开更多

关键词 脂肪因子类 细胞培养技术/方法 自噬 血管内皮生长因子A CELLPROLIFERATION

在线阅读 下载PDF 职称材料

四种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响 被引量：6

17

作者 曾润铭 刘梦璋 林菁 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第18期67-69,共3页

目的:探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响,为类风湿性关节炎患者临床用药,改善其功能提供依据。方法:实验于2003-05/2004-02在的第一军医大学细胞生物实验室完成。类... 目的:探讨吲哚美辛、雷公藤多甙、甲氨蝶呤、地塞米松4种常用抗类风湿性药物对成纤维样滑膜细胞体外增殖的影响,为类风湿性关节炎患者临床用药,改善其功能提供依据。方法:实验于2003-05/2004-02在的第一军医大学细胞生物实验室完成。类风湿性关节炎及正常滑膜组织,分别来源于第一军医大学南方医院脊柱骨病科和汕头市第二人民医院外二科因类风湿性关节炎而行全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的患者和无关节炎病史的创伤性截肢患者,用原酶消化法获得成纤维样滑膜细胞。用第2～4代细胞在接种12h后分别加入上述药物处理24h,在第5和第10天分别用四甲基偶氮唑盐法测定细胞增殖情况并统计分析。结果:雷公藤、甲氨蝶呤第5天对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制率分别为(46.14±4.20)%和(31.52±2.86)%,第10天分别(47.00±1.89)%和(46.73±3.83)%。消炎痛及地塞米松对成纤维样滑膜细胞增殖无明显抑制作用。这种抑制作用对于类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖尤为明显。雷公藤多甙比甲氨蝶呤对成纤维样滑膜细胞体外增殖抑制作用有更明显的时间依赖性。结论:雷公藤、甲氨蝶呤对于类风湿性关节炎的成纤维样滑膜细胞增殖有明显抑制作用,适当延长甲氨蝶呤用药间隔时间对于抑制滑膜组织过度增生及血管翳的形成效果可能相似。 展开更多

关键词 关节炎 类风湿 成纤维细胞 滑膜/细胞学 细胞分离/方法 细胞培养/方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

人胎视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏 被引量：1

18

作者 吴宏 张绍昆 +2 位作者 张艳萍 王桂云 张晓光 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期157-158,F003,共3页

目的 :冻存和复苏人胎视网膜色素上皮细胞 ,为视网膜色素上皮移植治疗视网膜色素变性提供组织来源。方法 :取第 3代胰酶消化法获取的人胎儿视网膜色素上皮细胞进行冻存 ,复苏后经台盼蓝染色测定细胞存活率 ,角蛋白抗体免疫细胞化学染色... 目的 :冻存和复苏人胎视网膜色素上皮细胞 ,为视网膜色素上皮移植治疗视网膜色素变性提供组织来源。方法 :取第 3代胰酶消化法获取的人胎儿视网膜色素上皮细胞进行冻存 ,复苏后经台盼蓝染色测定细胞存活率 ,角蛋白抗体免疫细胞化学染色鉴定细胞。结果 :复苏后的视网膜色素上皮细胞在体外生长良好 ,抗角蛋白反应阳性 ,细胞具有较高的存活率 [(84 .9%± 3.2 ) % ]。结论 :冻存和培养 RPE细胞为细胞移植提供了一个良好的来源。 展开更多

关键词 色素上皮 眼 视网膜炎 色素性/外科学 细胞培养/方法 组织移植

在线阅读 下载PDF 职称材料

新生小牛视网膜水平细胞生长发育特性的体外实验 被引量：1

19

作者 金燕 吴雅臻 +2 位作者 李根林 张晓光 王津津 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期550-552,F003,共4页

目的:研究新生小牛视网膜水平细胞在体外培养中的生长发育规律。方法:分离培养新生小牛视网膜神经细胞,将培养10、20、30和40d的细胞进行免疫细胞化学染色,采用CalbindinD28K抗体标记视网膜水平细胞,用图像分析系统定量测量阳性细胞的... 目的:研究新生小牛视网膜水平细胞在体外培养中的生长发育规律。方法:分离培养新生小牛视网膜神经细胞,将培养10、20、30和40d的细胞进行免疫细胞化学染色,采用CalbindinD28K抗体标记视网膜水平细胞,用图像分析系统定量测量阳性细胞的免疫反应强度。结果:培养10d的水平细胞还不具备典型的形态特征,培养20d时阳性细胞的形态特征与成熟的水平细胞一致。培养30d和40d的水平细胞的形态特点和培养20d时相似。定量分析显示体外培养20d时阳性细胞免疫反应强度较10d时有增加趋势。体外培养30d和40d时,阳性的水平细胞免疫反应强度较培养10d和20d时均明显减弱。结论:体外培养20d的视网膜水平细胞具备成熟的形态特征,免疫反应强度较强,是发育良好的神经元。 展开更多

关键词 视网膜水平细胞 细胞培养/方法 视网膜/细胞学

在线阅读 下载PDF 职称材料

髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力及凋亡的影响 被引量：4

20

作者 王华松 陈庄洪 罗永湘 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第29期94-97,i0004,共5页

目的:观察骨髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力的影响,以及能否产生诱导骨髓基质细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-07/2003-06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。将骨髓基质细胞以109L-1的浓度接种于培养板和培养... 目的:观察骨髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力的影响,以及能否产生诱导骨髓基质细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-07/2003-06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。将骨髓基质细胞以109L-1的浓度接种于培养板和培养瓶中,加入含体积分数为0.1的胎牛血清,100U/mL青霉素,100mg/L链霉素的DMEM培养基。上述细胞随机分为空白对照组、106,107,108,109L-1脂肪细胞组,分别加入0,106,107,108,109L-1不同浓度的脂肪细胞,37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,建立脂肪细胞和骨髓基质细胞共培养体系。培养时间为12d,每4d取各组细胞样本检测细胞内碱性磷酸酶活性,利用原位杂交方法检测I型胶原mRNA表达,3H-脯氨酸掺入实验检测骨髓基质细胞胶原合成能力,并以TUNEL法及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①共培养体系建立后细胞形态学观察:细胞共培养体系建立48h后,细胞开始贴壁。72h后贴壁的骨髓基质细胞主要为短梭形,部分为多边形,并伸出突起,体积增大,具有典型的成纤维细胞特点。贴壁的脂肪细胞呈多角形或圆形,细胞透明度较好。②脂肪细胞对骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性的影响:与空白对照组比较,培养第4,8,12天随着共培养体系中脂肪细胞的浓度不断上升,骨髓基质细胞内碱性磷酸酶活性均有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01)。③脂肪细胞对骨髓基质细胞内I型胶原mRNA表达的影响:空白对照组染色最深,即表达最强,随着培养体系中脂肪细胞浓度增加,染色由深逐渐变浅,即I型胶原mRNA表达逐渐减弱。④3H-脯氨酸掺入实验结果:空白对照组第4天每分钟脉冲数值最高,随时间延长有所下降。随脂肪细胞浓度的上升,各组每分钟脉冲数值均有不同程度降低,并具有浓度及时间依赖的特征。⑤细胞凋亡TUNEL检测结果:在含有脂肪细胞的共培养体系中,被标记呈棕色的凋亡细胞,细胞核染色质浓聚成致密的斑点状,核固缩甚至碎裂。同一时间点106,107,108,109L-1脂肪细胞组凋亡细胞明显多于空白对照组(P<0.01),空白对照组中几乎没有凋亡细胞。⑥细胞凋亡流式细胞仪检测结果:各组悬浮细胞经流式细胞仪检测后,空白对照组细胞均集中于左下象限,共培养体系中均可在右下象限发现有凋亡细胞存在。结论:髓内脂肪细胞干扰了骨髓基质细胞的成骨能力,并能够诱导骨髓基质细胞的凋亡,可能与原发性骨质疏松症的发病有关。 展开更多

关键词 细胞培养技术/方法 脂细胞 骨髓细胞 骨生成 细胞凋亡 原位缺口末端标记 流式细胞术

在线阅读 下载PDF 职称材料