体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法:差速贴壁+阿糖胞苷+胰酶法 被引量：2

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作者 殷义霞 李世普 +2 位作者 闫玉华 袁琳 王欣宇 《中国组织工程研究与临床康复》 CSCD 北大核心 2007年第7期1284-1286,共3页

目的:通过细胞形态学观察及生物学特性鉴定,建立一种经济实用的体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法。方法:实验于2006-06在武汉理工大学完成。①阿糖胞苷(Sigma,批号w10562);胎牛血清(杭州四季青产品);胰蛋白酶(Amresco);多聚赖... 目的:通过细胞形态学观察及生物学特性鉴定,建立一种经济实用的体外原代培养纯化新生鼠嗅鞘细胞的实验方法。方法:实验于2006-06在武汉理工大学完成。①阿糖胞苷(Sigma,批号w10562);胎牛血清(杭州四季青产品);胰蛋白酶(Amresco);多聚赖氨酸(Sigma);胶质纤维酸性蛋白,神经生长因子受体蛋白抗体(博士德)。②选取出生3d内的Wistar大鼠5只,乙醇浸泡后断头处死,取嗅球的最外两层,通过1.25g/L胰蛋白酶消化分离嗅鞘细胞,体外原代培养。③采用Nash差速贴壁+阿糖胞苷+胰酶法纯化嗅鞘细胞。培养18h后将未贴壁的细胞悬液转种于另一未涂层的器皿中,再培养36h,重复上述步骤移入0.1g/L多聚赖氨酸包被的塑料培养瓶中进行培养,纯化后的细胞在24h内陆续贴壁,常规培养2d,加入终浓度为2mg/L的阿糖胞苷,作用48h后,换上新的培养基,继续培养1d,弃去培养基,用无钙镁的Hanks液清洗2次,然后用1.25g/L的胰酶消化10min,待细胞突起回缩、胞体变圆时,立刻加入纯血清终止,其血清终浓度为20%,制备单细胞悬液。④倒置显微镜下观察其形态变化,苏木精-伊红染色,同时行神经生长因子受体蛋白和胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定嗅鞘细胞,并计算嗅鞘细胞阳性百分率。结果:①活细胞形态观察:分离培养的嗅鞘细胞具有双极或多极突起,且突起细长,相互交织。②嗅鞘细胞的苏木精-伊红染色鉴定:细胞呈三角形或梭形,有长的突起,胞浆被染成粉红色,胞核呈蓝紫色,胞核内深染的为核仁,有1～3个核仁。③嗅鞘细胞的胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色鉴定:细胞呈现棕黄色,胞核淡染,阳性细胞成网状连接,胞体多为三角形,有细长突起,阳性率91.5%。④嗅鞘细胞的P75免疫组化染色鉴定:阳性细胞呈绿色,多数细胞染色阳性,阳性率89%。结论:实验所采用的Nash差速贴壁+阿糖胞苷+胰酶法分离纯化培养嗅鞘细胞切实可行,为神经诱导修复材料的研究提供种子细胞。 展开更多

关键词 细胞培养技术/方法 嗅球/细胞学 免疫组织化学

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无血清悬浮法培养MCF-7细胞系并筛选该细胞系中肿瘤干细胞相关亚群的初步研究 被引量：14

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作者 许立生 王水 +1 位作者 许健 杜青 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2007年第10期736-740,共5页

目的:研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法:应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其... 目的:研究无血清培养基悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系,筛选并鉴定MCF-7乳腺癌细胞系中的肿瘤干细胞相关亚群。方法:应用乳腺癌培养基在无血清的条件下悬浮培养MCF-7乳腺癌细胞系。通过无血清培养筛选乳腺癌细胞系肿瘤干细胞相关亚群,将其接种于含血清培养基,观察分化。应用单克隆形成实验、表面标志检测、HOECHST33342染色检测来确定培养出的细胞中肿瘤干细胞的比例及其培养后肿瘤干细胞含量的变化。结果:乳腺癌MCF-7细胞系中有约2.12%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球。细胞球可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的MCF-7无明显差别。流式细胞仪表面标志检测,细胞球中约含83.13%表达CD24-CD44+的细胞,HOECHST33342染色提示细胞球中约含10.06%的侧亚群(sidepopulation)细胞。结论:MCF-7细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。该细胞系中含有比例较低的具有增殖和分化能力的乳腺癌干细胞相关亚群。表面标志以及HOECHST33342检测差异提示细胞球中仅约1/8细胞具有干细胞的功能。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤/病理学 肿瘤干细胞/病理学 细胞系 肿瘤 细胞培养技术/方法

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转化生长因子-β1介导的角膜基质细胞外基质纤维化体外三维培养模型的构建 被引量：4

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作者 靳荷 罗世男 +3 位作者 范梓晰 李杰 周卫为 李霞 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期406-411,共6页

背景 角膜损伤修复过程中细胞外基质（ECM）纤维化是角膜瘢痕形成的基础,转化生长因子-β1（TGF-β1）可引起角膜基质过度产生ECM.我们在前期的研究工作中构建了角膜基质三维培养模型,而将TGF-β1添加于该三维培养体系中是否可达到构建... 背景 角膜损伤修复过程中细胞外基质（ECM）纤维化是角膜瘢痕形成的基础,转化生长因子-β1（TGF-β1）可引起角膜基质过度产生ECM.我们在前期的研究工作中构建了角膜基质三维培养模型,而将TGF-β1添加于该三维培养体系中是否可达到构建角膜基质ECM纤维化的体外三维培养模型有待研究.目的 评估TGF-β1对该三维培养模型中ECM纤维化相关基因表达的影响,确定该三维培养体系是否可以作为角膜基质ECM纤维化的体外三维培养候选模型.方法分离新鲜成年牛角膜,并在基础培养液（DMEM/F12＋体积分数10％胎牛血清）中进行角膜基质细胞的培养,将5＆#215;105个牛角膜基质细胞收集于15 ml离心管中构建体外三维培养模型（Pellet）,根据培养液中添加的TGF-β1质量浓度的不同分为基础培养液组（无TGF-β1）、基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组和基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组,于培养2周时用钙黄绿素-AM/碘化丙啶法（Calcein-AM/PI）法进行细胞活性测定;分别于培养后48 h、1周和2周应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）和Western blot法检测各组Pellet中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（Col Ⅰ）、ColⅢmRNA及其蛋白的表达. 结果 Pellet模型培养后48 h,角膜基质细胞开始抱团,培养后2周经Calcein AM/PI染色证实绝大多数细胞存活.培养后48 h、1周和2周,基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组和基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组角膜基质细胞中α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢmRNA的相对表达量均明显高于基础培养液组,3个组间的总体差异均有统计学意义（F分组=696.745,P＜0.001;F分组=35.166,P＜0.001;F分组=33.677,P＜0.001）,且随着培养时间的延长,α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢmRNA的相对表达量逐渐升高,差异均有统计学意义（F时间=5.863,P＜0.05;F时间=298.614,P＜0.001;F时间=607.472,P＜0.001）;ColⅢmRNA合成速率均大于Col Ⅰ mRNA的合成速率;Western blot检测发现,培养后48 h和1周α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的表达量为微量,培养后2周基础培养液＋0.5 ng/ml TGF-β1组Pellet模型中α-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的相对灰度表达量分别为0.395±0.208、1.060±0.175和0.629±0.382,基础培养液＋1.0 ng/ml TGF-β1组o-SMA、Col Ⅰ和ColⅢ蛋白的灰度表达量分别为0.758±0.228、1.201±0.187和0.753 ±0.468,组间总体比较差异均有统计学意义（α-SMA：F=10.691,P＜0.05;Col Ⅰ：F=14.094,P＜0.05;ColⅢ：F=10.995,P＜0.05）. 结论 培养液中添加TGF-β1和血清促进角膜ECM的纤维化,表现为Pellet三维培养模型中牛角膜基质细胞高表达纤维化特异性标志物.该培养体系可作为角膜基质ECM纤维化研究的体外三维培养模型. 展开更多

关键词 角膜基质细胞 创伤修复 细胞培养技术/方法 转化生长因子-Β1 细胞外基质 纤维化 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原

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转瓶变速培养对微胶囊肝细胞聚集体形成及活性的影响

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作者 陈滟珊 喻成波 +1 位作者 曹红翠 李兰娟 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期403-409,共7页

目的：观察匀速与变速旋转培养对微胶囊HepLL永生化人肝细胞、HepG2肝细胞聚集体形成和活性的影响。方法：一步法海藻酸钠—壳聚糖（ AC）微胶囊包裹HepG2及HepLL细胞，随机分为两大组，每组按转速分3小组。动态观察并测量各组聚集体大... 目的：观察匀速与变速旋转培养对微胶囊HepLL永生化人肝细胞、HepG2肝细胞聚集体形成和活性的影响。方法：一步法海藻酸钠—壳聚糖（ AC）微胶囊包裹HepG2及HepLL细胞，随机分为两大组，每组按转速分3小组。动态观察并测量各组聚集体大小、数目变化，ELISA动态检测各组白蛋白合成量，比色法检测氨的清除量，高效液相色谱法检测安定转化功能。结果：与匀速旋转培养组相比，变速旋转培养组微胶囊细胞第6、8、10、12、14、16天聚集体平均个数、平均最大径、白蛋白合成量、氨清除量以及安定转化量均明显提高（均P＜0．01），微胶囊HepLL各组在各个时间点的白蛋白合成量、氨清除量及安定转化功能均优于HepG2（均P＜0．01）。结论：微胶囊转瓶变速培养显著加快微胶囊HepLL、HepG2细胞聚集体形成并提高细胞活性，未来HepLL有可能代替HepG2用于人工肝治疗。 展开更多

关键词 壳聚糖 胶囊 肝细胞/细胞学 培养基 细胞 培养的/细胞学 细胞培养技术/方法 旋转

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人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性

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作者 胡守龙 李莉 +1 位作者 崔冬梅 曾骏文 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期108-113,共6页

背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维... 背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维培养系统，微观模拟在体巩膜，建立巩膜重塑模型。 方法采集新鲜供体巩膜组织，采用组织块培养法分离和培养HSFs，采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白和角蛋白的表达以鉴定细胞；获取8周龄SPF级雄性SD大鼠鼠尾腱制备鼠尾胶原，400 μl胶原加入50 μl NaOH（0.1 mol/L）溶液中混匀，加入80 μl 10倍培养液，混匀，溶液pH值约为7。加入1 100 μl终浓度1×106/ml细胞悬液混合形成凝胶培养系统，于倒置相差显微镜下观察HSFs的增生情况和细胞形态，采用IPP-5软件对三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性；采用生物力学试验机对三维胶原系统的生物力学特性进行测定。 结果培养的HSFs波形蛋白呈阳性表达，角蛋白表达阴性。未接种培养细胞的无成纤维细胞SD鼠鼠尾胶原凝胶透明，实验期间性状无明显变化，而含HSFs的三维胶原凝胶随着细胞培养时间的延长细胞数量增加，倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列，培养后7～14 d凝胶块呈乳白色，凝胶面积保持在正常的10%左右，三维培养系统中的HSFs接种后24 h细胞产生多向性突起，呈双极形或纺锤形。HSFs胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性（0～100 s）部分与线性（100～600 s）部分，前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化，后者是胶原凝胶在定力的作用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论鼠胶原凝胶对培养的HSFs有良好的生物相容性，HSFs胶原凝胶可形成三维复合物，可呈现机械性生物学特性，是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型，可用于巩膜重塑的模拟研究。 展开更多

关键词 成纤维细胞/细胞学 巩膜 人 胶原 SD大鼠 生物力学 细胞培养技术/方法 种植 人巩膜成纤维细胞的胶原蛋白基质

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无动物源性成分培养体系快速诱导人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞的分化 被引量：1

6

作者 刘秋慧 王菁 +4 位作者 田蓉 王肖 曹迪 卢晶 罗燕 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期484-488,共5页

背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建... 背景 随着视网膜色素上皮（RPE）细胞视网膜下腔移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）研究的开展,需要优化无动物源性成分（xeno-free）培养体系快速定向诱导人胚胎干细胞（hESCs）向RPE细胞分化以满足日渐增长的科研及临床需要. 目的 建立xeno-free培养体系,优化快速诱导hESCs向RPE细胞分化的方法. 方法 将hESCs克隆团接种至Vitronectin XFTM,在培养液中加入50 ng/ml noggin、10 ng/ml DKK-1以及10 ng/ml胰岛素样生长因子-1（IGF-1）培养2d,第2～4天将培养液中noggin质量浓度减至10 ng/ml,并加入5 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,第4～6天移除培养液中的noggin和bFGF,第8～14天培养液中加入1 μmol/L CHIR99021.倒置显微镜下观察ESCs在分化为RPE细胞过程中的形态变化,免疫荧光染色检测细胞内特异性抗原的表达以对分化细胞进行鉴定,实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测细胞分化过程中RPE细胞特异性蛋白mRNA的相对表达变化量.结果 分化培养第14天,部分细胞呈多角形并呈现铺路石样排列,且细胞内可见色素颗粒;培养第35天,诱导分化的细胞内表达RPE细胞特异性抗原Mitf及RPE65;培养至第60天,细胞内富含黑色素颗粒且呈规则六边形.与诱导分化前比较,诱导分化第7天和第14天hES-RPE细胞中Mitf mRNA的表达量分别增加了（3.43±2.77）倍和（8.91±2.83）倍,而RPE65 mRNA的表达量分别增加了（14.60±3.94）倍和（87.16±9.32）倍,分化第7天和第14天细胞中的Mitf mRNA和RPE65mRNA的相对表达量均明显高于分化前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）. 结论 hESCs可在含尼克酰胺、DKK-1、noggin、IGF-1和CHIR99021的xeno-free优化培养体系中快速分化为RPE细胞. 展开更多

关键词 胚胎干细胞/药物作用 细胞培养技术/方法 细胞分化 视网膜色素上皮 培养液/药物作用 细胞株 人 无动物源性

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脂肪细胞因子Leptin对体外培养的RF/6A细胞自噬、VEGF表达及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响 被引量：2

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作者 刘哲 王旖 +5 位作者 李蓉 巨伟 杜斌 马利 张一凡 杜军辉 《医学临床研究》 CAS 2022年第1期1-4,共4页

【目的】探讨脂肪细胞因子Leptin对体外培养的RF/6A细胞自噬、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。【方法】以RF/6A细胞为研究对象,加入不同浓度Leptin培养24h后,WesternBlo... 【目的】探讨脂肪细胞因子Leptin对体外培养的RF/6A细胞自噬、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达及细胞增殖、迁移和管腔形成的影响。【方法】以RF/6A细胞为研究对象,加入不同浓度Leptin培养24h后,WesternBlotting检测蛋白微管相关蛋白1轻链3(lightchain3,LC3)、Beclin-1、p62及VEGF表达水平。Leptin联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、氯喹(CQ)作用RF/6A细胞后,用CCK8法检测细胞增殖、Transwell法检测细胞迁移、基质胶(Matrigel)法检测细胞管腔形成。【结果】与Control组比较,不同浓度Leptin均能上调LC3、Beclin-1、VEGF表达,抑制p62表达(P<0.05);与100ng/mLLeptin组比较,加入3-MA、CQ后均能抑制RF/6A细胞增殖,减少迁移细胞数和细胞管腔形成数(P<0.05)。【结论】Leptin能够激活RF/6A细胞自噬,促进VEGF表达、RF/RA细胞增殖、迁移和细胞管腔形成。 展开更多

关键词 脂肪因子类 细胞培养技术/方法 自噬 血管内皮生长因子A CELLPROLIFERATION

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髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力及凋亡的影响 被引量：4

8

作者 王华松 陈庄洪 罗永湘 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第29期94-97,i0004,共5页

目的:观察骨髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力的影响,以及能否产生诱导骨髓基质细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-07/2003-06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。将骨髓基质细胞以109L-1的浓度接种于培养板和培养... 目的:观察骨髓内脂肪细胞对骨髓基质细胞成骨能力的影响,以及能否产生诱导骨髓基质细胞凋亡的作用。方法:实验于2001-07/2003-06在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。将骨髓基质细胞以109L-1的浓度接种于培养板和培养瓶中,加入含体积分数为0.1的胎牛血清,100U/mL青霉素,100mg/L链霉素的DMEM培养基。上述细胞随机分为空白对照组、106,107,108,109L-1脂肪细胞组,分别加入0,106,107,108,109L-1不同浓度的脂肪细胞,37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,建立脂肪细胞和骨髓基质细胞共培养体系。培养时间为12d,每4d取各组细胞样本检测细胞内碱性磷酸酶活性,利用原位杂交方法检测I型胶原mRNA表达,3H-脯氨酸掺入实验检测骨髓基质细胞胶原合成能力,并以TUNEL法及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①共培养体系建立后细胞形态学观察:细胞共培养体系建立48h后,细胞开始贴壁。72h后贴壁的骨髓基质细胞主要为短梭形,部分为多边形,并伸出突起,体积增大,具有典型的成纤维细胞特点。贴壁的脂肪细胞呈多角形或圆形,细胞透明度较好。②脂肪细胞对骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性的影响:与空白对照组比较,培养第4,8,12天随着共培养体系中脂肪细胞的浓度不断上升,骨髓基质细胞内碱性磷酸酶活性均有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01)。③脂肪细胞对骨髓基质细胞内I型胶原mRNA表达的影响:空白对照组染色最深,即表达最强,随着培养体系中脂肪细胞浓度增加,染色由深逐渐变浅,即I型胶原mRNA表达逐渐减弱。④3H-脯氨酸掺入实验结果:空白对照组第4天每分钟脉冲数值最高,随时间延长有所下降。随脂肪细胞浓度的上升,各组每分钟脉冲数值均有不同程度降低,并具有浓度及时间依赖的特征。⑤细胞凋亡TUNEL检测结果:在含有脂肪细胞的共培养体系中,被标记呈棕色的凋亡细胞,细胞核染色质浓聚成致密的斑点状,核固缩甚至碎裂。同一时间点106,107,108,109L-1脂肪细胞组凋亡细胞明显多于空白对照组(P<0.01),空白对照组中几乎没有凋亡细胞。⑥细胞凋亡流式细胞仪检测结果:各组悬浮细胞经流式细胞仪检测后,空白对照组细胞均集中于左下象限,共培养体系中均可在右下象限发现有凋亡细胞存在。结论:髓内脂肪细胞干扰了骨髓基质细胞的成骨能力,并能够诱导骨髓基质细胞的凋亡,可能与原发性骨质疏松症的发病有关。 展开更多

关键词 细胞培养技术/方法 脂细胞 骨髓细胞 骨生成 细胞凋亡 原位缺口末端标记 流式细胞术

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脂肪干细胞体外快速扩增实验研究 被引量：1

9

作者 梁慧 王庆胜 +1 位作者 方海滨 马卉 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第21期5047-5049,共3页

目的:探索在旋转生物反应器内应用微载体技术快速扩增兔脂肪干细胞的方法。方法:比较应用微载体结合旋转生物反应器(RCSS)进行动态培养与平皿静态培养两种方法中,脂肪干细胞生长曲线、倍增时间和生长周期的情况。结果:实验组RCSS法培养... 目的:探索在旋转生物反应器内应用微载体技术快速扩增兔脂肪干细胞的方法。方法:比较应用微载体结合旋转生物反应器(RCSS)进行动态培养与平皿静态培养两种方法中,脂肪干细胞生长曲线、倍增时间和生长周期的情况。结果:实验组RCSS法培养中脂肪干细胞密度可达最初接种的19倍左右,而对照组平皿静态培养仅为6倍余。实验组倍增时间短于对照组,且细胞周期分析显示G2-M期+S期细胞比例高于对照组。结论:利用微载体细胞培养技术可快速地在体外扩增脂肪干细胞。 展开更多

关键词 细胞培养技术/方法 干细胞/细胞学 脂肪组织/细胞学 细胞 培养的

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脐带血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性研究 被引量：1

10

作者 旷文勇 周新伏 +2 位作者 李睿娟 郑敏翠 张广森 《中国医师杂志》 CAS 2009年第10期1317-1320,共4页

目的观察脐带血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法抽取骨髓穿刺液10ml，采用含10％脐带血清的DMEM／F12培养，流式细胞仪检测细胞表面抗原，成骨诱导体系及脂肪诱导体系诱导BM—MSCs定向分化。结果BM—MSC—Ss高表达CD29... 目的观察脐带血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法抽取骨髓穿刺液10ml，采用含10％脐带血清的DMEM／F12培养，流式细胞仪检测细胞表面抗原，成骨诱导体系及脂肪诱导体系诱导BM—MSCs定向分化。结果BM—MSC—Ss高表达CD29、CD73、CD105，不表达CD34、CIM5、CD31，BM—MSCs体外能诱导为成骨细胞和脂肪细胞。结论脐带血清培养的BM—MSCs的具有较高的纯度和体外分化能力，脐带血清培养BM—MSCs适合临床应用。 展开更多

关键词 胎血 细胞培养技术/方法 造血干细胞 骨髓细胞

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兔视网膜Müller细胞原代培养 被引量：1

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作者 过贵元 胡淑鸾 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期167-169,共3页

目的建立成年兔视网膜Mueler细胞体外原代培养方法。方法运用组织块培养法。分离出成年兔视网膜神经感觉层，剪成1mm×1mm大小组织块，置于含有20％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液／F12培养，采用倒置相差显微镜、透射电子显微... 目的建立成年兔视网膜Mueler细胞体外原代培养方法。方法运用组织块培养法。分离出成年兔视网膜神经感觉层，剪成1mm×1mm大小组织块，置于含有20％胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液／F12培养，采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜观察及荧光免疫组织化学染色的方法进行培养细胞的鉴定。结果培养的细胞块3d后可见部分细胞突起长出，7d后整个组织块周围放射状长出较多细胞。倒置相差显微镜下，培养细胞呈一端细胞体丰富膨大，另一端有一长突起，细胞核椭圆形，常有2个或2个以上核仁；透射电子显微镜下，细胞胞体大，细胞浆丰富，内含丰富的8～10nm的微丝。荧光免疫组织化学法显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白和胞内视黄醛结合蛋白阳性，阳性率达95％以上。结论运用组织块培养法可培养出兔视网膜Mueiler细胞。 展开更多

关键词 细胞培养技术/方法 视网膜/病理生理学 MUELLER细胞

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人类淋巴母细胞建株方法的改进 被引量：1

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作者 赵迪诚 黄芬 吴国佩 《中国医师杂志》 CAS 2007年第5期704-704,共1页

目的探讨有效的淋巴细胞建株技术。方法用EB病毒转染对53例标本进行建株,Ⅰ组：开放培养＋早期分离活细胞;Ⅱ组：开放培养;Ⅲ组：密闭培养。结果成功率分别是：Ⅰ组96.2%、Ⅱ组75.5%、Ⅲ组50.9%。结论开放培养＋早期分离活细胞能提高建... 目的探讨有效的淋巴细胞建株技术。方法用EB病毒转染对53例标本进行建株,Ⅰ组：开放培养＋早期分离活细胞;Ⅱ组：开放培养;Ⅲ组：密闭培养。结果成功率分别是：Ⅰ组96.2%、Ⅱ组75.5%、Ⅲ组50.9%。结论开放培养＋早期分离活细胞能提高建株成功率和缩短建株时间。 展开更多

关键词 B淋巴细胞 细胞培养技术/方法

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体外培养及诱导胚兔视网膜及脑神经干细胞分化的研究

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作者 吴婵 董方田 +1 位作者 陈连凤 许卓再 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期265-269,共5页

目的比较体外不同培养条件对视网膜及脑神经干细胞（NSCs）视紫红质的纯化能力及不同诱导条件对NSCs的诱导分化能力。方法取胚兔视网膜及大脑皮质制备单细胞悬液，分别在5种不同培养基中进行体外培养并纯化。选取无血清条件下传3代的NSC... 目的比较体外不同培养条件对视网膜及脑神经干细胞（NSCs）视紫红质的纯化能力及不同诱导条件对NSCs的诱导分化能力。方法取胚兔视网膜及大脑皮质制备单细胞悬液，分别在5种不同培养基中进行体外培养并纯化。选取无血清条件下传3代的NSCs，分别在2种培养基中诱导8～10d。采用免疫荧光法及流式细胞仪检测所获得细胞的神经干细胞和视网膜神经上皮细胞抗原的表达。结果免疫荧光法显示无血清培养条件下2种组织来源的NSCs均部分表达巢蛋白。流式细胞术显示2种诱导方式均部分细胞表达巢蛋白，较诱导前明显降低，而视紫红质及Thyl．1的表达均较诱导前明显增高。经5％胎牛血清（FBS）诱导的细胞表达视紫红质较联合应用全反式视黄酸（ATRA）时高，差异均有统计学意义（X2=30．59，6．76；P〈0．01），但Thyl．1表达低于后者，差异也有统计学意义（X2=6．19，22．92；P=0．01）。结论无血清培养基添加N2、EGF、bFGF、LIF4种因子可以获得最佳纯化效果。2种诱导培养基都能够诱导NSCs的分化，视网膜NSCs分化为视网膜神经上皮细胞的能力高于大脑皮质NSCs。 展开更多

关键词 干细胞/细胞学 细胞培养技术/方法 细胞分化/免疫学 神经上皮细胞/细胞学

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人重组表皮生长因子和牛磺酸体外诱导人脐血干细胞分化为神经元样细胞

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作者 金玮 邢怡桥 +2 位作者 杨安怀 杨燕宁 艾明 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期261-264,共4页

目的探讨人重组表皮生长因子（rhEGF）和牛磺酸体外诱导人脐血间充质干细胞（MSC）分化为神经元样细胞的实验条件和可能机制。方法用含有10^5U／L青霉素、100mg／L链霉素、10％胎牛血清（FBS）、5％自体血浆、4mmol／L一谷氨酰胺、30ng... 目的探讨人重组表皮生长因子（rhEGF）和牛磺酸体外诱导人脐血间充质干细胞（MSC）分化为神经元样细胞的实验条件和可能机制。方法用含有10^5U／L青霉素、100mg／L链霉素、10％胎牛血清（FBS）、5％自体血浆、4mmol／L一谷氨酰胺、30ng／mlrhEGF的Dulbecco改良Eagle培养基与F12以1：1混合（DMEM／F-12）培养液对人脐血MSC进行原代培养，传至第3代后改用含牛磺酸的培养基进行诱导。流式细胞仪检测细胞表面抗原CD90、CD29、CD34、CD44及CD45的表达。免疫细胞化学方法观察神经元特异性烯醇化酶（NSE）、视紫红质、巢蛋白的阳性细胞表达情况。统计学方法采用两组资料的卡方检验分析NSE、视察红质、巢蛋白的表达。结果脐血MSC首次培养5～7d，有间充质样细胞贴壁，3～4周后细胞达80％～90％融合，传代后生长加速；形态学类似骨髓源性MSC。脐血MSC均一稳定地表达MSC的相关抗原CD29、CD44、CD90，不表达CD34、CD45。经牛磺酸体外诱导后的脐血MSC中，3120个细胞中有2515个细胞表达神经元特异性烯醇化酶（NSE），3050个细胞中有903个细胞表达巢蛋白，3175个细胞中有1168个细胞表达视紫红质；未诱导组的2965个脐血MSC中仅有234个细胞表达NSE，其他抗原未见表达。两组间NSE、巢蛋白和视紫红质的表达差异具有统计学意义（X2=3242．9，1073．0，1444．5；P值均〈0．01）。结论人脐血MSC经rhEGF和牛磺酸诱导后能使部分MSC向神经元样细胞或视紫红质阳性细胞分化。 展开更多

关键词 干细胞/细胞学 脐血干细胞 细胞培养技术/方法 细胞分化/免疫学

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体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向视网膜色素上皮细胞分化的可行性研究

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作者 高斐 董方田 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期254-256,共3页

目的探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（rMSCs）向视网膜色素上皮（RPE）细胞分化的可行性。方法采用贴壁筛选法分离、培养Brown—Norway（BN）rMSCs。将反复冻融制成的BN大鼠RPE细胞裂解液加入到rMSCs培养体系中，鉴定被诱导的细胞是... 目的探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（rMSCs）向视网膜色素上皮（RPE）细胞分化的可行性。方法采用贴壁筛选法分离、培养Brown—Norway（BN）rMSCs。将反复冻融制成的BN大鼠RPE细胞裂解液加入到rMSCs培养体系中，鉴定被诱导的细胞是否同时表达RPE细胞的特征性标记物细胞角蛋白（CK）与S一100。结果经RPE细胞裂解液诱导的rMSCs生长速度减慢，细胞呈长梭形，周边有毛刺样突起。免疫印迹法和双重免疫荧光标记显示部分经诱导的细胞同时表达CK与S一100。流式细胞术显示14．1％的细胞能够同时表达CK与S-100。结论rMSCs经RPE细胞裂解液诱导后能够向RPE细胞方向分化。 展开更多

关键词 干细胞/细胞学 骨髓祖代细胞/免疫学 细胞培养技术/方法 细胞分化/免疫学 色素上皮 眼/细胞学 动物 实验

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