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猪源病毒细胞毒性T淋巴细胞表位研究进展
1
作者 鲜钰涵 冯宏盛 +7 位作者 高永宇 李海洋 杨思宇 桑辰君 曹玉蝶 唐越 李子彬 高凤山 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3086-3099,共14页
主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T ly... 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位是抗原经抗原递呈细胞加工后,与SLA-Ⅰ类分子结合并递呈的线性肽段,具有高度特异性,在机体抗原识别递呈和细胞免疫抵抗病毒感染方面发挥着关键作用。CTL表位能够刺激CTLs发挥细胞杀伤作用,主要表现为杀伤病毒。作者将对口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等几种重要的猪源病毒的CTL表位研究现状进行综述,并利用生物信息学手段分析SLA-Ⅰ与CTL表位结合基序特征,以期为今后相关猪源病毒CTL表位的研究和多表位疫苗的设计提供参考。 展开更多
关键词 细胞毒性t淋巴细胞(ctl)表位 猪口蹄疫病毒 非洲猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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人乳头瘤病毒16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的穿膜肽疫苗设计及体外免疫学研究 被引量：6
2
作者 尹锐 郝飞 +1 位作者 郝进 杨希川 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期807-809,共3页
目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分... 目的:利用穿膜肽人免疫缺陷病毒(HIV)-Tat49-57的穿膜能力,设计穿膜肽人乳头瘤病毒(HPV)16E7限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位(第49～57位氨基酸)的融合肽疫苗,并在体外研究其诱导特异性CTL的应答能力。方法:应用多肽固相合成技术,分别合成含HIVTat49-57和人类白细胞抗原(HLA)-A2.1限制性CTL优势表位HPV16E749-57的18肽,和该CTL表位的9肽,并用一无关肽作对照,在体外用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验分别检测了上述18肽和9肽在HLA-A2阳性健康者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导的表位E749-57的特异性CTL活性。结果:经质谱分析,上述多肽成功合成,纯度均在95%以上。与9肽相比,18肽能在体外诱导出明显增强的特异性CTL活性(P<0.05)。结论:在HPV16E7HLA-A2.1限制性CTL表位(49～57)的N-末端加上HIV-Tat49-57序列,不会影响表位的提呈效率,而且在体外能有效激发针对E749-57特异性的CTL应答,为新型抗肿瘤及细胞内感染的多肽疫苗设计提供了新思路。 展开更多
关键词 穿膜肽 人免疫缺陷病毒-tat49-57 细胞毒性t淋巴细胞表位 人乳头瘤病毒16 肽疫苗
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肿瘤抗原细胞毒性T淋巴细胞表位鉴定和多肽疫苗的研究进展 被引量：7
3
作者 吴亚红 高艳锋 祁元明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第5期657-660,共4页
恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要疾病之一,尽管手术治疗联合化疗/放疗能够延长患者的生存期,但是这些治疗手段也会损伤正常细胞,产生很多不良反应,再加上很多恶性肿瘤具有侵袭转移和复发等特征,因此,急需发展新的方法来治疗肿瘤患... 恶性肿瘤是当前威胁人类生命健康的主要疾病之一,尽管手术治疗联合化疗/放疗能够延长患者的生存期,但是这些治疗手段也会损伤正常细胞,产生很多不良反应,再加上很多恶性肿瘤具有侵袭转移和复发等特征,因此,急需发展新的方法来治疗肿瘤患者[1]。 展开更多
关键词 肿瘤抗原 细胞毒性t淋巴细胞 表位 多肽疫苗
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妊娠期特异性beta1糖蛋白9 HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞表位的鉴定 被引量：2
4
作者 李璐 高艳锋 祁元明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第2期176-179,共4页
目的:鉴定来自食管癌细胞中特异性高表达的妊娠期特异性beta1糖蛋白9(PSG9)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR方法检测PSG9mRNA在食管癌细胞EC9706、EC-1及EC-109中的表达情况。然后通过Bimas和Syfpeithi... 目的:鉴定来自食管癌细胞中特异性高表达的妊娠期特异性beta1糖蛋白9(PSG9)的HLA-A3限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法:首先运用RT-PCR方法检测PSG9mRNA在食管癌细胞EC9706、EC-1及EC-109中的表达情况。然后通过Bimas和Syfpeithi预测,再结合NetCTL1.2选取4条来源于PSG9的HLA-A3限制性的表位。候选表位P336的2位的氨基酸由异亮氨酸替换为亮氨酸,9位的氨基酸由酪氨酸替换为赖氨酸。候选表位P378的9位氨基酸由精氨酸替换为赖氨酸。候选表位通过标准的Fmoc化学法合成,通过结合力实验检测表位与T2A3细胞表面HLA-A3分子的结合力水平,通过细胞毒实验检测对EC-1细胞毒活性。结果:PSG9在肿瘤细胞EC9706、EC-1以及EC-109中都有表达。候选表位P107、P201和P336-2L9K与HLA-A3分子有弱结合力,P336、P378和P378-9K与HLA-A3分子有中等结合力。细胞毒实验结果显示P336-2L9K、P378和P378-9K对EC-1细胞均有一定的杀伤作用。结论:多肽P336-2L9K、P378和P378-9K能诱导体外抗肿瘤免疫反应,有可能成为PSG9阳性肿瘤细胞的共同CTL表位。 展开更多
关键词 妊娠期特异性betal糖蛋白9 细胞毒性t淋巴细胞 HLA-A3 表位
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原发性肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位预测
5
作者 雷俊华 曾江正 +4 位作者 郝新宝 苏群豪 洪涛 何志惠 黄芬 《解放军医药杂志》 CAS 2013年第8期26-28,共3页
目的预测原发性肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法通过国家生物技术信息中心(NCBI)数据库获取GPC-3蛋白的氨基酸序列,利用超基序、量化基序法和NetCTL数据库预测分析GPC-3的HLA-A2限制性CTL表位。结... 目的预测原发性肝癌高表达抗原GPC-3的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法通过国家生物技术信息中心(NCBI)数据库获取GPC-3蛋白的氨基酸序列,利用超基序、量化基序法和NetCTL数据库预测分析GPC-3的HLA-A2限制性CTL表位。结果初步筛选出GPC-3肿瘤抗原的HLA-A2限制性CTL优势表位,分别为GPC-3 102～110,155～163,169～177,229～237,281～289,319～327,326～334,367～375,522～530,564～572。结论预测出GPC-3的HLA-A2限制性CTL表位为GPC-3阳性原发性肝癌免疫靶向治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 原发性肝癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3 表位 细胞毒性t淋巴细胞
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中国人丙型肝炎病毒复合细胞毒性T淋巴细胞多表位基因真核载体的构建及在COS-7细胞中的表达
6
作者 郝晓娟 李端 +3 位作者 陈丽萍 赵甫涛 赵英仁 贾战生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期444-446,466,共4页
目的构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复合细胞毒性T淋巴细胞(CTL)多表位基因的真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达。方法根据生物信息学方法筛选中国人的HCV多个CTL优势表位,合成复合多表位抗原基因(mcf);将其克隆入真核表达载体pEGF... 目的构建中国人丙型肝炎病毒(HCV)复合细胞毒性T淋巴细胞(CTL)多表位基因的真核表达载体,并观察其在真核细胞中的表达。方法根据生物信息学方法筛选中国人的HCV多个CTL优势表位,合成复合多表位抗原基因(mcf);将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1,转染COS-7细胞,在荧光显微镜下观察mcf-EGFP融合蛋白在细胞中的分布和定位,RT-PCR及Western blot检测其mRNA及蛋白表达。结果成功构建了真核表达载体pEGFP-mcf。将构建的真核表达载体pEGFP-mcf转染COS-7细胞后,绿色荧光分布于COS-7细胞胞质中;而转染空载体pEGFP-N1后,绿色荧光弥散分布于COS-7细胞胞核及胞质中。RT-PCR检测到转染细胞中mcfmRNA表达;West-ern blot结果证明合成mcf可在COS-7细胞中表达。结论该真核表达载体的成功表达及鉴定,为下一步中国人的HCV复合CTL多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 细胞毒性t淋巴细胞 表位
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恶性疟细胞毒性T淋巴细胞单表位疫苗抗原递呈细胞模型的建立
7
作者 乔苗 史丽丽 王恒 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期390-394,共5页
目的 构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL... 目的 构建恶性疟细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）单表位疫苗及建立抗原递呈细胞模型。方法一采用中国人群常见的HLAⅠ类分子A11限制的恶性疟CTL抗原表位（VTCGNGIQVR），合成其DNA序列并克隆于真核表达载体，构建CTL单表位DNA疫苗。将上述克隆在HLA-A11表型细胞株中进行表达，流式细胞仪检测细胞表面HLAⅠ类分子表达水平。结果 上述CTL单表位DNA疫苗编码的短肽在细胞内的表达明显促进HLA-A11分子在细胞表面的表达，用流式细胞仪测定平均荧光强度可量化表达水平(P ＜ 0．05)。结论 成功构建CTL单表位短肽表达载体，模拟体内环境建立了抗原递呈细胞模型，提示CTL表位在该细胞模型内被内源性加工和递呈，以该表位为基础的疫苗可以为HLA-A11遗传背景的人群提供免疫防护。 展开更多
关键词 恶性疟 ctl表位疫苗 细胞毒性t淋巴细胞 人类白细胞抗原Ⅰ类分子
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GPC3特异性HLA-A11限制的T淋巴细胞表位肽免疫活性检测 被引量：1
8
作者 孙斌 李雯 +8 位作者 计云霞 郭向华 杨晓珍 郝美君 李伟华 白飞云 王延军 郑加生 陈德喜 《北京医学》 CAS 2014年第9期752-755,共4页
目的设计合成人类白细胞抗原(HLA)-A11限制性T细胞识别的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)多肽,并检测其免疫原性和反应性。方法利用BIMAS和SYFPEITHI评分系统评价GPC3多肽与HLA-A11分子的结合能力,预测出相应的抗原谱,合成HLA-A1101限制性GPC... 目的设计合成人类白细胞抗原(HLA)-A11限制性T细胞识别的磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)多肽,并检测其免疫原性和反应性。方法利用BIMAS和SYFPEITHI评分系统评价GPC3多肽与HLA-A11分子的结合能力,预测出相应的抗原谱,合成HLA-A1101限制性GPC3多肽库;流式细胞仪检测HCC患者HLA-A11分子的表达;多肽刺激外周血淋巴细胞,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测T细胞对GPC3多肽的反应性。结果流式细胞仪检测32例HCC患者,7例HLA-A11分子表达阳性(21.9%);ELISPOT检测发现17例(53.1%)HCC患者的T细胞应答阳性,7例(21.9%)HLA-A11表型检测阳性的HCC患者,T细胞应答结果成强阳性。HLA-A11限制性GPC3多肽应答率符合人群中相应基因位点的自然表达率。结论 GPC3多肽设计合理,具有良好的免疫原性和反应性。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 人类白细胞抗原 t淋巴细胞 表位肽
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融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8^+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 被引量：4
9
作者 王芳 焦新安 +5 位作者 潘志明 张晓明 黄金林 Richard Lo-Man Claude Leclerc 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期14-17,共4页
依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经... 依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8+T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8+T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVACD8+T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL＿O,将此重组质粒pYAGFPL＿O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGF PL＿O)。用SDS＿PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD。同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL＿O)发出黄绿色荧光。这些结果表明LCMV和OVAT细胞表位已成功表达。重组菌X4550(pYAGFPL＿O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 卵清白蛋白 t细胞表位 减毒鼠伤寒沙门氏菌
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猪圆环病毒2型ORF1和ORF3T淋巴细胞抗原表位的克隆与原核表达
10
作者 高娟 王艳玲 +2 位作者 蒋再学 竺薇 罗满林 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-97,共5页
根据Stevenson筛选出来的3个具有活性的T淋巴细胞抗原表位(T lymphocyte epitope,TCE)合成tce基因(180 bp),成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD-TCE.将tce酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质... 根据Stevenson筛选出来的3个具有活性的T淋巴细胞抗原表位(T lymphocyte epitope,TCE)合成tce基因(180 bp),成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD-TCE.将tce酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,获得重组质粒,命名为pET-TCE.用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE检测,结果显示合成基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为25 000,Western-blot分析结果表明,获得的融合蛋白可与猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性. 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 t淋巴细胞抗原表位 克隆 原核表达
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HPV18 E7抗原T细胞表位的鉴定及CD4^+T淋巴细胞的免疫反应
11
作者 余剑琴 徐云升 +2 位作者 欧荣英 张乾 郑飞云 《浙江医学》 CAS 2015年第10期823-826,共4页
目的初步鉴定人乳头瘤病毒(HPV)18型E7抗原的辅助T淋巴细胞(Th)表位及CD4^+T淋巴细胞的免疫反应。方法以免疫磁珠进一步分离HLA-DRB1~*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)中的CD4~T淋巴细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用之前实验中已获得... 目的初步鉴定人乳头瘤病毒(HPV)18型E7抗原的辅助T淋巴细胞(Th)表位及CD4^+T淋巴细胞的免疫反应。方法以免疫磁珠进一步分离HLA-DRB1~*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC)中的CD4~T淋巴细胞,流式细胞仪鉴定细胞纯度,用之前实验中已获得的3个HPV18 E7抗原HLA-DRB1~*0301限制性Th表位刺激外周血CD4~T淋巴细胞,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测CD4~T淋巴细胞增殖活性。ELISA方法分析表位刺激CD4~T淋巴细胞分泌的细胞因子。结果多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激CD4^+T淋巴细胞后能够有效诱导CD4~T淋巴细胞增殖,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<O.01),多肽P1(HPV18 E780-94)刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IFN-γ,P1组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18 E7抗原HLA-DRB1~*0301限制性Th表位。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 E7抗原 CD4^+t淋巴细胞 tH表位
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转基因表达HBV抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞受体 被引量：2
12
作者 吴静 王琳 +4 位作者 刘妍 叶海燕 丁宁 刘永明 徐东平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期453-457,共5页
目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LA... 目的通过逆转录病毒介导HBV抗原特异性细胞毒性T细胞(CTL)的T细胞受体(TCR)转基因表达,初步观察其结合活性。方法从HLA-A2阳性急性乙肝患者外周血中诱导、分选、克隆和扩增HBV抗原特异性CTL;提取细胞RNA,用RT-PCR、5'-RACE和OVER-LAP PCR等方法获取TCR的α和β链编码基因;构建TCR重组逆转录病毒,介导特异性TCR分别在人Jurkat T细胞和HLA-A2阳性健康人CD8 T淋巴细胞上表达。结果从1例HLA-A2阳性急性乙肝患者样本中分别获得了2组TCR Vα、Vβ配对,分别命名为α21β13、α15β13,包装的重组逆转录病毒滴度为(1.5～5.0)×105IU/mL,用针对目标TCR的特异性Vβ链抗体(抗Vβ13 TCR-PE)和HLA-A2限制性表位特异性五聚体(pentamer)进行免疫荧光染色,重组TCR在T细胞表面获得表达:其中在Jurkat细胞上转入的Vβ13链表达细胞占1.06%～2.25%,在HLA-A2阳性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞分别占到1.03%～2.06%和1.05%～1.12%,在HLA-A2阴性健康人T细胞上Vβ13阳性细胞和pentamer阳性细胞均低于0.05%。结论通过逆转录病毒介导可以使HBV特异性CTL TCR获得转基因表达,具有结合HLA-A2限制性表位的活性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 细胞毒性t淋巴细胞 t细胞受体 表位特异性 表达
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GPC3抗原表位肽致敏树突状细胞对T淋巴细胞活化的影响
13
作者 高敦芹 骆莹 +2 位作者 王鹏 景丽 高英堂 《山东医药》 CAS 2019年第13期6-10,共5页
目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)抗原表位肽致敏的树突状细胞(DC)对T淋巴细胞活化的影响。方法选用基因型人类白细胞抗原A2阳性的剖宫产妇的胎盘端脐带血50 m L,分离培养DC及T细胞,用人工合成的GPC3抗原表位肽(GPC3_(144-152)、GPC3_... 目的探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)抗原表位肽致敏的树突状细胞(DC)对T淋巴细胞活化的影响。方法选用基因型人类白细胞抗原A2阳性的剖宫产妇的胎盘端脐带血50 m L,分离培养DC及T细胞,用人工合成的GPC3抗原表位肽(GPC3_(144-152)、GPC3_(298-306))、冻融Hep G2细胞抗原致敏DC (DC-GPC3_(144-152)组、DCGPC3_(298-306)组、DC-HepG2组、DC组),经致敏DC处理的T细胞随机分为DC-GPC3_(144-152)-T组、DC-GPC3_(298-306)-T组、DC-HepG2-T组、DC-T组,以未经活化的T细胞作对照(T细胞组)。用流式细胞术检测DC表型、T细胞分类及表面趋化因子的表达。结果 GPC3_(144-152)、GPC3_(298-306)抗原表位肽和冻融Hep G2细胞抗原三种致敏方式均能诱导DC呈典型成熟DC的形态,表面均高表达CD83、CD80和CD86抗原,且不同致敏方式之间CD8^+T、CD4^+T淋巴细胞比例差异无统计学意义(P均> 0. 05);与T细胞组比较,GPC3_(144-152)-T组和DC-GPC3_(298-306)-T组CD4+T细胞中Th1细胞比例高(P均<0. 05);与DC-T组比较,DC-GPC3_(144-152)-T组、DC-GPC3_(298-306)-T组、DC-HepG2-T组CCR6表达高(P均<0. 05)。结论 GPC3_(144-152)和GPC3_(298-306)表位抗原肽均能够有效致敏DC,并促进与DC共培养的T淋巴细胞活化。 展开更多
关键词 肝细胞癌 树突状细胞 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3抗原表位肽 t淋巴细胞 趋化因子
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丙型肝炎病毒多CTL表位树突状细胞疫苗的构建及体外刺激T细胞应答 被引量：3
14
作者 周云 李端 +5 位作者 陈琳 赵甫涛 马力 汪鸿 潘蕾 贾战生 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第1期40-44,共5页
目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料。方法构建和制备出含绿色荧光蛋白(GFP)标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接... 目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料。方法构建和制备出含绿色荧光蛋白(GFP)标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接在荧光显微镜下或用流式细胞仪检测其感染率;RT-PCR和Western Blot方法检测HCV多CTL表位的表达。流式细胞术分析感染前后DC的CD80、CD83、CD86和人类白细胞抗原(HLA)-DR的表达,CCK-8法观察感染重组腺病毒的DC促进T细胞的增殖效应。ELISA检测重组腺病毒刺激后的DC培养上清液内白细胞介素(IL)-12及DC和T细胞混合培养上清液内干扰素(IFN)-γ的含量。用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL的杀伤活性。结果成功构建含GFP标签的HCV多CTL表位的重组腺病毒,并在DC中表达。重组腺病毒能促进DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达分别为(71.19±3.29)%、(81.21±5.07)%、(91.23±4.24)%、(97.95±5.31)%。感染DC后促进同源T细胞增殖,DC:T为1:10时增殖指数为6.806±0.247。分泌的IL-12和IFN-γ也明显增多,分别达到(193.83±6.25)pg/ml和(111.14±2.09)pg/ml。感染DC刺激的CTL能特异性杀伤转染FL-J6/JFH的Huh-7.5细胞,当效靶比为100:1时,AD1-DC-L的杀伤率为35.99%。结论重组多CTL表位腺病毒在体外能有效感染DC,促进了T细胞反应,为下一步抗HCV的DC疫苗研制打下基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒属 表位 树突细胞 病毒性肝炎疫苗 t淋巴细胞 细胞毒性
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gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用 被引量：4
15
作者 马丽萍 潘秀英 +2 位作者 李娜 刘玉京 陈晓欣 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期525-528,共4页
目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;... 目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。 展开更多
关键词 热休克蛋白GP96 杀伤作用 ctl 细胞毒性t淋巴细胞 DC 食管腺癌 介导 提取纯化 多肽 复合物
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肿瘤抗原MAGE-12新的HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测 被引量：3
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作者 张秀敏 隋延仿 +2 位作者 罗二平 黄亚渝 曲萍 《现代肿瘤医学》 CAS 2005年第2期149-151,共3页
目的　预测黑色素瘤抗原MAGE-12的HLA-A2限制性CTL表位。方法　采用SYFPEITHI超基序远程预测系统与量化基序多项式法、延展基序联合应用,筛选MAGE-12抗原HLA-A0201限制性CTL表位。结果　共预测出5个MAGE-12抗原HLA-A2限制性CTL表位。结... 目的　预测黑色素瘤抗原MAGE-12的HLA-A2限制性CTL表位。方法　采用SYFPEITHI超基序远程预测系统与量化基序多项式法、延展基序联合应用,筛选MAGE-12抗原HLA-A0201限制性CTL表位。结果　共预测出5个MAGE-12抗原HLA-A2限制性CTL表位。结论　超基序法与量化基序,延展基序联合应用可以提高预测效率,为实验方法探索MAGE-12的表位提供有用线索。 展开更多
关键词 肿瘤抗原 MAGE-12 细胞毒性t淋巴细胞表位 预测
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HBV细胞毒性T细胞抗原表位单链三聚体在真核细胞中的表达及其腺病毒载体的构建 被引量：3
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作者 周伯平 张红梅 +7 位作者 陈心春 黄瑛 Lybarger Lonnie 李美忠 聂广 乐晓华 王火生 袁静 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2007年第1期19-22,F0003,共5页
目的:构建乙型肝炎病毒表面抗原细胞毒性T细胞抗原表位单链三聚体(HBsAg-SCT)真核表达载体,在真核细胞293T中表达,并构建含HBsAg-SCT的腺病毒载体。方法:合成H-2Ld限制的HBsAg细胞毒性T细胞表位寡核苷酸,与H-2Ld分子融合,构建含HBsAg-SC... 目的:构建乙型肝炎病毒表面抗原细胞毒性T细胞抗原表位单链三聚体(HBsAg-SCT)真核表达载体,在真核细胞293T中表达,并构建含HBsAg-SCT的腺病毒载体。方法:合成H-2Ld限制的HBsAg细胞毒性T细胞表位寡核苷酸,与H-2Ld分子融合,构建含HBsAg-SCT的真核表达载体,并转染293T细胞,采用流式细胞技术观察HB-sAg-SCT在细胞表面的表达。将HBsAg-SCT亚克隆到腺病毒载体,转染293A细胞,包装产生携带HBsAg-SCT的重组腺病毒。结果:成功构建了HBsAg-SCT真核表达载体,并在真核细胞中表达。利用重组腺病毒载体制备出高滴度的重组腺病毒。结论:含HBsAg-SCT的真核表达载体能够在真核细胞表面有效表达,获得含HBsAg-SCT的重组腺病毒,为研究HBsAg-SCT免疫治疗HBV感染打下基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒表面抗原 细胞毒性t细胞表位 单链三聚体 重组腺病毒
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树突状细胞吞噬PLA-AFP_(218-226)微球后诱导细胞毒性T淋巴细胞反应 被引量：1
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作者 张兵 陈玮 +1 位作者 董薇 蔡美英 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期378-380,448,共4页
目的研究树突状细胞(DC)吞噬包被有甲胎蛋白HLA-A2限制性表位肽(AFP218-226,LLNQHACAV)的聚乳酸微球(PLA-AFP218-226)后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株的毒性作用。方法用GM-CSF和I... 目的研究树突状细胞(DC)吞噬包被有甲胎蛋白HLA-A2限制性表位肽(AFP218-226,LLNQHACAV)的聚乳酸微球(PLA-AFP218-226)后诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对肝癌细胞株HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株的毒性作用。方法用GM-CSF和IL-4诱导HLA-A2+的健康志愿者外周血单核细胞,LPS诱导成熟,使其分化为高纯度DC,在诱导过程中加入PLA-AFP218-226微球,用吞噬了PLA-AFP218-226微球的DC诱导自身T淋巴细胞,使其成为肝细胞癌(HCC)特异性CTL。用流氏细胞仪检测DC膜分子标志,T2细胞与AFP218-226结合实验检测HLA-A2分子与AFP218-226之间的亲合力,MTT法检测特异性CTL杀伤HepG2和T2细胞株的能力。结果AFP218-226与HLA-A2分子具有较高的亲合力,吞噬微球后的成熟DC高表达CD83、CD86、CD40等膜分子,其诱导的特异性CTL对HepG2和负载有AFP218-226的T2细胞株具有强的细胞毒作用。结论PLA-AFP218-226被DC细胞吞噬后,能够诱导HCC特异性CTL的产生,可能成为一种新型的抗肿瘤表位肽疫苗,在肝癌的防治中得到应用。 展开更多
关键词 树突状细胞 PLA ctl 甲胎蛋白 HLA—A2限制性表位肽 t淋巴细胞 细胞毒性
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人乳头瘤病毒16型E7抗原细胞毒性T细胞预测表位的分子模拟研究 被引量：1
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作者 徐云升 郝飞 +2 位作者 耿淼 叶庆佾 钟白玉 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期545-547,共3页
对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性。通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构。结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2... 对人乳头瘤病毒(HPV)16型E7抗原的预测表位从理论上分析其与HLA-A2分子结合的情况,推测成为HLA-A2限制性表位的可能性。通过计算机分子模拟,确立各表位及其与HLA-A2分子结合形成复合物的模拟结构。结果发现,各表位的三维结构符合HLA-A2限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位的结构要求,能较好地与HLA-A2分子结合。根据分子模拟提供的理论支持,各预测表位均符合要求,提示可在后续实验中进行表位合成、筛选、鉴定和多肽疫苗的研制。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 E7抗原 细胞毒性t细胞表位 分子模拟
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KDEL修饰的HSV-2CD8^+T细胞表位促进CTL效应的研究 被引量：2
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作者 罗萍 毛旭虎 赵莉莉 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期252-255,共4页
目的:研究赖氨酸天冬氨酸谷氨酸亮氨酸(Lys-Asp-GluLeu,KDEL)修饰的2型单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype2,HSV2)CD8+T细胞表位促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicityTlymphocyte,CTL)效应。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组5只,... 目的:研究赖氨酸天冬氨酸谷氨酸亮氨酸(Lys-Asp-GluLeu,KDEL)修饰的2型单纯疱疹病毒(herpessimplexvirustype2,HSV2)CD8+T细胞表位促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicityTlymphocyte,CTL)效应。方法:将雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,每组5只,用各抗原肽免疫C57BL/6小鼠,采用3HTdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应、标准4h51Cr释放试验检测CD8+T细胞特异性CTL效应,观察HSV2CD8+T细胞表位(SSIEFARL,S1)、KDEL修饰的HSV-2CD8+T细胞表位(SSIEFARL-KDEL,S1-KDEL)、4拷贝串联的CTL表位[(SSIEFARL)4,S4]及KDEL修饰的串联CTL表位[(SSIEFARL)4KDEL,S4-KDEL]的特异性细胞免疫应答。结果:3HTdR掺入试验中,S4组和S4KDEL组cpm值显著高于对照组和S1组、S1KDEL组(P<0.05);S4KDEL组的cpm值显著高于S4组(P<0.05);S1组和S1KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);S1组与S1KDEL组比较,cmp值亦无显著性差异(P>0.05)。以S1致敏的EL4细胞为靶细胞的杀伤实验中,S4和S4KDEL组诱导的CTL活性明显高于对照组、S1组及S1KDEL组(P<0.05);S4KDEL组诱导的CTL活性明显高于S4组(P<0.05),S1组和S1KDEL组与对照组比较,差异无显著性(P>0.05);S1组与S1KDEL组比较,差异亦无显著性(P>0.05);以EL4细胞为靶细胞的实验中,实验组的杀伤率均在10%以下,与对照组? 展开更多
关键词 2型单纯疱疹病毒 细胞毒t淋巴细胞表位 赖氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-亮氨酸基序 细胞毒t淋巴细胞效应
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