KIR2DL4-IgFc融合蛋白基因真核细胞表达载体的克隆及鉴定分析 被引量：3

1

作者 颜卫华 范丽安 等 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期170-172,共3页

目的 构建人KIR2DL4-IgFc段融合蛋白基因真核细胞表达载体。方法 用RT-PCR从孕妇蜕膜组织单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增KIR2DL4胞外段cDNA,经Nhe　I和Bam　HI双酶切后,定向插入真核细胞表达载体CD51negl中,然后经酶切和测序鉴定。结果... 目的 构建人KIR2DL4-IgFc段融合蛋白基因真核细胞表达载体。方法 用RT-PCR从孕妇蜕膜组织单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增KIR2DL4胞外段cDNA,经Nhe　I和Bam　HI双酶切后,定向插入真核细胞表达载体CD51negl中,然后经酶切和测序鉴定。结果 限制性内切酶酶切和序列分析表明已成功构建CD51negl-KIR2DL4载体。结论 本研究成功构建KIR2DL4-IgFc融合蛋白真核细胞表达载体,为研究KIR2DL4与其配体之间的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 KIR 融合蛋白 基因克隆 序列分析 KIR2DL4-IgFc 真核细胞表达载体

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HMGB1基因真核细胞表达载体的构建及其在人脐静脉血管内皮细胞中的表达 被引量：1

2

作者 张晓娟 李旭 +1 位作者 栾正刚 马晓春 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期143-145,共3页

目的构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达。方法提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体。转染HUVEC,Western blot检测... 目的构建HMGB1基因真核细胞表达载体并检测其在真核细胞中的表达。方法提取人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)总RNA,反转录为cDNA。PCR扩增HMGB1全长编码基因,构建成pcDNA-3.1-myc-his-B-HMGB1真核细胞表达载体。转染HUVEC,Western blot检测转染后HMGB1基因的表达改变。结果构建HMGB1全长基因真核细胞表达载体成功,酶切鉴定及测序鉴定表明载体构建正确,转染HUVEC后可检测到外源性蛋白的表达,对照组无外源性蛋白表达。结论成功构建了HMGB1全长基因真核细胞表达载体并可转染至HUVEC中。 展开更多

关键词 高迁移率族蛋白1基因 人脐静脉血管内皮细胞 真核细胞表达载体 转染

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大鼠神经肽Y前体cDNA克隆、测序及哺乳动物细胞表达载体的构建 被引量：2

3

作者 张亮林 杨贵贞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期69-71,共3页

利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从大鼠脑组织中钓得神经肽Ｙ前体ｃＤＮＡ编码区序列，将该ｃＤＮＡ定向亚克隆入哺乳动物细胞表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ中，构建了重组质粒ｐＲｃ／ＣＭＶ－ＮＰＹ。经双脱氧核苷酸终止法对插入... 利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从大鼠脑组织中钓得神经肽Ｙ前体ｃＤＮＡ编码区序列，将该ｃＤＮＡ定向亚克隆入哺乳动物细胞表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ中，构建了重组质粒ｐＲｃ／ＣＭＶ－ＮＰＹ。经双脱氧核苷酸终止法对插入片段作序列分析，证明ＮＰＹｃＤＮＡ序列的准确性及插入方向正确。 展开更多

关键词 神经肽Y 聚合酶链反应 哺乳动物 细胞表达载体

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WWOX基因真核细胞表达载体的构建与鉴定 被引量：1

4

作者 闫洪超 陆晓媛 +1 位作者 韩秋峪 林新生 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期287-288,共2页

目的构建人WWOX基因真核细胞表达载体。方法采用RT-PCR方法,从人新鲜卵巢组织的总RNA中扩增出1245bp的人WWOXcDNA片段,然后用HindⅢ和EcoRI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组... 目的构建人WWOX基因真核细胞表达载体。方法采用RT-PCR方法,从人新鲜卵巢组织的总RNA中扩增出1245bp的人WWOXcDNA片段,然后用HindⅢ和EcoRI双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒。结果WWOX基因的序列测定结果与文献报道完全一致,其真核细胞表达载体被成功构建。结论成功克隆出WWOX基因,并成功构建其真核细胞表达载体。 展开更多

关键词 WWOX基因 真核细胞表达载体

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传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究 被引量：3

5

作者 陈创夫 乔军 +2 位作者 王金富 田晶华 张高轩 《动物科学与动物医学》 2001年第6期29-32,共4页

应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的... 应用 DNA重组技术将含有 IBDV保护性抗原 VP2 质粒 ,以 Eco RI、xho I酶切 ,将酶切得到的 VP2 基因移入到载体 pc DNA3 CMV启动子下游 ,得到含有 IBDV VP2 基因的真核表达载体 pc D-VP2 基因疫苗。pc DVP2 体外转染细胞能正确表达目的蛋白。免疫雏鸡后 2 0 d,在体内可检测到特异性抗体。 展开更多

关键词 VP2基因 基因疫苗 免疫 真核细胞表达载体 鸡病 传染性法氏囊病病毒

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人BLyS基因真核细胞表达载体的构建和鉴定

6

作者 张志方 张春艳 +1 位作者 林学颜 潘敬运 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第B06期10-12,共3页

目的　构建人BLyS基因真核细胞表达载体。方法　采用RT PCR方法 ,从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中扩增得到 876bp的人BLyScDNA片段 ,再用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中 ,用限制性内切酶酶切分析和DNA序... 目的　构建人BLyS基因真核细胞表达载体。方法　采用RT PCR方法 ,从激活的人外周血淋巴细胞的总cDNA中扩增得到 876bp的人BLyScDNA片段 ,再用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中 ,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒。结果　人BLyScDNA已经正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中。 展开更多

关键词 人BLyS基因 真核细胞表达载体 构建 鉴定 RT-PCR 基因克隆 序列分析

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人CD134L基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析 被引量：1

7

作者 汤永平 张春艳 邵焰 《热带医学杂志》 CAS 2002年第2期121-123,120,共4页

目的　构建人CD1 34L真核细胞表达载体并对其进行序列分析。方法　采用PCR方法扩增人CD1 34L基因cDNA ,先后经BamHI和XhoI酶切并纯化 ,再定向克隆到高效真核表达载体pcDNA3中 ,构建成pcDNA3 CD1 34L ,通过PCR扩增、双酶切后琼脂糖电泳... 目的　构建人CD1 34L真核细胞表达载体并对其进行序列分析。方法　采用PCR方法扩增人CD1 34L基因cDNA ,先后经BamHI和XhoI酶切并纯化 ,再定向克隆到高效真核表达载体pcDNA3中 ,构建成pcDNA3 CD1 34L ,通过PCR扩增、双酶切后琼脂糖电泳分析及序列测定进行鉴定。结果　pcDNA3 CD1 34L经BamHI和XhoI双酶切后出现两条目的条带、经PCR扩增出现单一目的条带、序列测定结果与Genebank的序列完全一致。结论　成功地克隆了人CD1 34L基因cDNA ,构建了真核表达载体 ,本研究为探讨CD1 34L与淋巴细胞活化的关系。 展开更多

关键词 CD134L基因 真核细胞 基因克隆 序列分析 聚合酶链反应 真核细胞表达载体 淋巴细胞活化 免疫性疾病 信号传导

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短发夹高迁移率族蛋白B1真核细胞表达载体通过HOXA9下调人脐静脉血管内皮细胞表达E-选择素 被引量：3

8

作者 张晓娟 焦丽丽 +1 位作者 栾正刚 马晓春 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期662-666,共5页

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）激活表达E-选择素的分子机制。方法将同源盒转录因子（HOXA9）小干扰RNA（siRNA）短序列转染至对数生长期的HUVEC，采用实时荧光定量聚合酶链反应（实时qPC... 目的：探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）激活表达E-选择素的分子机制。方法将同源盒转录因子（HOXA9）小干扰RNA（siRNA）短序列转染至对数生长期的HUVEC，采用实时荧光定量聚合酶链反应（实时qPCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测其对HOXA9 mRNA和蛋白表达的影响；另设空白对照组和无意序列nonsilence阴性对照组。取已经稳定转染pRNA-u6.1/Neo-HMGB1 shRNA质粒的HUVEC（低表达HMGB1的HUVEC），采用实时qPCR法检测HOXA9和E选择素的mRNA表达；另设nonsilence转染组作为阴性对照。将HOXA9 siRNA转染至低表达HMGB1的HUVEC中作为共同转染组，采用实时qPCR法检测E-选择素的mRNA表达；以HMGB1 shRNA组和HOXA9 nonsilence组作为对照。结果①空白对照组HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）和蛋白（积分A值）表达分别为1.094±0.115和1.031±0.060。与无意序列nonsilence转染组比较， HOXA9 siRNA转染组可显著降低HUVEC细胞中HOXA9的mRNA和蛋白表达〔HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）：0.257±0.030比1.035±0.091，t＝14.010，P＝0.002；HOXA9蛋白（积分A值）：0.278±0.042比0.975±0.014，t＝27.310，P＝0.002〕。②与nonsilence转染组比较， HMGB1 shRNA转染上调了HUVEC中HOXA9 mRNA（2-ΔΔCT）表达（2.519±0.278比0.856±0.063，t＝10.100， P＝0.001），同时下调了E-选择素mRNA（2-ΔΔCT）表达（0.311±0.046比1.080±0.201，t＝7.415，P＝0.000）。③与HOXA9 nonsilence组及HMGB1 shRNA组比较，HMGB1 shRNA和HOXA9 siRNA共同转染后HUVEC细胞中E-选择素 mRNA（2-ΔΔCT）表达明显升高（3.445±0.428比1.085±0.212、1.004±0.104，t1＝8.507， t2＝9.603，均P＜0.001）。结论 HMGB1在HUVEC细胞核内可能通过HOXA9调节E-选择素的表达。 展开更多

关键词 脓毒症 血管内皮细胞 高迁移率族蛋白 同源盒蛋白基因 E-选择素 转染 真核细胞表达载体

原文传递

霍乱毒素B亚单位植物细胞表达载体的构建及其在人参细胞中的表达

9

作者 任琦 宋之明 +6 位作者 刘丹 孙洋 于海鹏 李娟 富锐丽 刘英 盛军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第7期663-666,共4页

目的构建霍乱毒素B亚单位(CTB)植物细胞表达载体,并在人参细胞中进行表达。方法根据人参偏爱密码子,采用引物延伸PCR法合成CTB基因,连入pBI121质粒,构建植物细胞表达载体,转化人参细胞后,采用PCR、RT-PCR和Western blot进行鉴定。结果... 目的构建霍乱毒素B亚单位(CTB)植物细胞表达载体,并在人参细胞中进行表达。方法根据人参偏爱密码子,采用引物延伸PCR法合成CTB基因,连入pBI121质粒,构建植物细胞表达载体,转化人参细胞后,采用PCR、RT-PCR和Western blot进行鉴定。结果测序结果表明,PCR法合成的目的基因序列与设计完全一致,构建的植物细胞表达载体经双酶切鉴定显示,所含基因片段大小与预期相符。提取转基因人参细胞基因组DNA和mRNA,分别进行PCR和RT-PCR鉴定,均可见约400 bp的特异性片段。Western blot分析可见相对分子质量约12 000的特异性条带。结论已成功构建了含霍乱毒素B亚单位的植物细胞表达载体,并在人参细胞中获得表达。 展开更多

关键词 霍乱毒素B亚单位(CTB) 植物细胞表达载体 人参细胞 转基因

原文传递

hsa-miR-203真核表达载体的构建及对K562细胞增殖与凋亡的影响 被引量：6

10

作者 何金花 黎毓光 +4 位作者 谢杏仪 陈顺仪 王莉 邹茂贤 黄国贤 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期595-598,共4页

目的构建hsa-miR-203(人微小非编码RNA-203)的真核表达载体,观察其对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562)增殖和凋亡的作用。方法构建hsa-miR-203靶向基因的真核表达载体PmiR-203,用脂质体转染法将PmiR-203转染K562细胞;可溶性噻唑盐-8(WST... 目的构建hsa-miR-203(人微小非编码RNA-203)的真核表达载体,观察其对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562)增殖和凋亡的作用。方法构建hsa-miR-203靶向基因的真核表达载体PmiR-203,用脂质体转染法将PmiR-203转染K562细胞;可溶性噻唑盐-8(WST-8)法检测转染后的K562细胞增殖的情况,流式细胞术检测转染后K562细胞的早期凋亡率,实时荧光定量RT-PCR检测bcr/abl mRNA的表达水平,比色法测定caspase-3、caspase-9的活性。结果本法成功构建了重组真核表达载体PmiR-203,流式细胞术结果表明,K562细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达率52.6%。PmiR-203转染K562细胞48 h后,能明显抑制K562细胞的增殖,并促进细胞的早期凋亡。实时荧光定量RT-PCR结果表明,不同浓度的PmiR-203能显著下调bcr/ablmRNA的表达水平,转染后K562细胞的caspase-3、caspase-9的活性明显增强。结论成功构建了hsa-miR-203的真核表达载体PmiR-203,后者主要通过下调bcr/abl融合基因的表达抑制K562细胞的增殖,并通过活化caspase-3、caspase-9促进K562细胞的早期凋亡。 展开更多

关键词 微小RNA 人微小非编码RNA-203 真核细胞表达载体 K562细胞

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人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

11

作者 刘杰 陈怡香 +3 位作者 岳虎 邱尧一 何衎 喻昕 《湖北理工学院学报》 2016年第6期56-60,共5页

构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行... 构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行鉴定。将p EGFPRAD9A转染至肾癌细胞786-0中,荧光显微镜观察GFP-RAD9A融合蛋白的表达及亚细胞定位,Western blot免疫印记法检测转染p EGFP-RAD9A后的肾癌细胞786-0中的融合蛋白。通过定向克隆的方法获得了含有RAD9A基因编码区的真核表达载体p EGFP-RAD9A。与对照组相比,转染p EGFP-RAD9A的肾癌786-0细胞中高效表达了EGFP-RAD9A融合蛋白,后者定位在786-0的细胞核。构建的RAD9A基因重组真核表达载体能够在肾癌细胞786-0中高效表达,为研究RAD9A在肾癌发生发展中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 周期检测点蛋白RAD9A 定向克隆 真核细胞表达载体 肾癌

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HBV全基因C区突变株在永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达 被引量：2

12

作者 张明霞 周福元 +3 位作者 刁志宏 何海棠 侯金林 骆抗先 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期725-729,共5页

目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感... 目的构建携带V60、G87和L97突变位点的HBV全基因组真核表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCLs)。方法用定点突变技术将HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60、G87、L97进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coli.XL1-Blue感受态细胞扩增筛选,用限制性内切酶SacⅠ和KpnⅠ分别将野生型和突变型p3.8Ⅱ质粒进行双酶切,插入EBV-plpp真核细胞表达载体,转染LCLs,潮霉素稳定筛选后,鉴定目的基因在转染细胞能够稳定表达。结果与结论DNA序列分析表明,野型HBVDNA核心区第60、87、97位氨基酸发生了预期的突变,WesternBlotting和微粒子免疫荧光法证明转染的LCLs能稳定表达HBV抗原,证实成功构建了预期细胞模型。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 变异 真核细胞表达载体 永生化B淋巴母细胞

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小反刍兽疫病毒F基因真核载体的构建与表达 被引量：1

13

作者 朱学亮 张强 +4 位作者 杨帆 窦永喜 骆学农 岳城 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期405-409,共5页

根据GenBank中小反刍兽疫病毒(Nigeria75/1株)F基因序列设计了引物,应用RT-PCR方法获得了目的基因,纯化回收后将其连接到克隆载体pMD18-T上。将鉴定与序列测定后的目的基因再克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,经过鉴定,成功构建了含有小反... 根据GenBank中小反刍兽疫病毒(Nigeria75/1株)F基因序列设计了引物,应用RT-PCR方法获得了目的基因,纯化回收后将其连接到克隆载体pMD18-T上。将鉴定与序列测定后的目的基因再克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,经过鉴定,成功构建了含有小反刍兽疫病毒F基因的真核细胞表达载体pEGFP-N1-F。利用脂质体介导阳性pEGFP-N1-F质粒转染了BHK-21细胞。Western-blotting证实,表达的pEGFP-N1-F融合蛋白(90ku)具有免疫活性。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 F基因 真核细胞表达载体 转染 免疫活性

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RNA干扰EGFR基因家族真核表达载体的构建 被引量：1

14

作者 黄环 吴永忠 +3 位作者 李少林 郭启帅 林远洪 彭志平 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第4期399-402,共4页

目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor recepter,EGFR)家族的小分子发夹状RN(A Small hairpinRNA,shRNA)干扰质粒表达载体,为本课题下一步研究提供有力工具。方法:选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家... 目的:构建针对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor recepter,EGFR)家族的小分子发夹状RN(A Small hairpinRNA,shRNA)干扰质粒表达载体,为本课题下一步研究提供有力工具。方法:选择放疗不敏感的卵巢癌细胞SKOV3中高表达的EGFR家族同源性基因为靶基因,根据shRNA的设计原则,设计实验组及对照组shRNA。体外合成2段编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火,克隆到相应载体pGensil-1的polⅢ启动子下游。结果:经酶切和DNA测序鉴定成功构建了EGFR家族同源性基因的RNA干扰表达载体,分别命名为pGensil-1-E及pGensil-1-C。为下一步体外、体内实验奠定了基础。 展开更多

关键词 EGFR家族 RNA干扰 真核细胞表达载体

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淡色库蚊抗药性相关胰蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定 被引量：1

15

作者 公茂庆 顾燕 +4 位作者 胡小邦 孙艳 马磊 李秀兰 朱昌亮 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第6期454-457,共4页

目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载... 目的为进一步研究胰蛋白酶基因与抗药性的关系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗性品系cDNA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的胰蛋白酶(trypsin)基因编码区。T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到昆虫细胞表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/try。经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊虫细胞C6/36,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞。用RTPCR、Westernblotting鉴定胰蛋白酶基因的转录表达。结果酶切和PCR鉴定表明,成功构建昆虫细胞表达载体pIE13/try;证实胰蛋白酶基因已转入C6/36细胞,并建立稳定转染细胞系,成功地表达目的基因。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究胰蛋白酶与抗药性的关系提供了良好的实验基础。 展开更多

关键词 胰蛋白酶基因 昆虫细胞表达载体 抗药性 基因转染 C6/36细胞

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增强p53、p21及抑制c-myc表达对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用 被引量：1

16

作者 张海江 王楠 +2 位作者 朱晓宇 桑建利 何大澄 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2005年第1期16-22,共7页

为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c-myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c-myc3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三... 为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c-myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c-myc3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三种载体不同剂量组合。按照组合用质粒转染细胞,然后对转染细胞的增殖抑制率进行检测,并采用金正均Q值法、单因素方差分析中的LSD法、聚类分析法等统计学方法对结果进行统计分析。结果显示,不同量的p53、p21反义c-myc对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制的程度各基因间存在差异。在各基因组合中,p21与反义c-myc,p53与反义c-myc联用具有协同作用,对MCF-7细胞的增殖产生更强的抑制,而p53与p21之间未显示出协同作用。对三基因协同结果进行聚类分析后,发现第一类组合协同作用最明显,第九类组合的抑制率最高。由此推测,作为抑癌基因的p53或CDK抑制基因p21高表达,同时原癌基因c-myc表达受到抑制,可相互协同显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制作用。 展开更多

关键词 c—myc MCF-7细胞 增殖 反义 抑制作用 真核细胞表达载体 基因 转染细胞 表达水平 质粒

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定点诱变HBcAg质粒在人永生化B淋巴母细胞系中的稳定表达 被引量：1

17

作者 张明霞 刁志宏 +1 位作者 侯金林 骆抗先 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第24期2229-2232,共4页

目的:构建携带V60,G87,L97突变位点的HBV全基因组真核细胞表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCL),建立相同HLA背景下的慢性HBV感染CTL应答的刺激细胞和靶细胞.方法:用定点突变技术在HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60,G87... 目的:构建携带V60,G87,L97突变位点的HBV全基因组真核细胞表达载体,转染慢性HBV感染者永生化B淋巴母细胞系(LCL),建立相同HLA背景下的慢性HBV感染CTL应答的刺激细胞和靶细胞.方法:用定点突变技术在HBVp3.8Ⅱ质粒C基因区3个氨基酸V60,G87,L97位置进行突变(p3.8Ⅱ-V60,G87,L97),转化E.coliXL1-Blue感受态细胞扩增筛选,用限制性内切酶SacⅠ和KpnⅠ分别将野生型和突变型p3.8Ⅱ质粒进行双酶切,插入EBO-plpp真核细胞表达载体,转染LCL,潮霉素稳定筛选后,鉴定目的基因在转染细胞是能够稳定表达.结果:DNA序列分析表明,野型HBVDNA核心区第60,87,97位氨基酸发生了预期的突变,WesternBlot和微粒子免疫荧光法证明,转染的LCL能稳定表达HBV抗原.结论:定点诱变HBcAg质粒在人永生化B淋巴母细胞系中可稳定表达. 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎 核心抗原 乙型 突变 真核细胞表达载体 B淋巴母细胞系

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新城疫病毒F和HN基因真核表达载体的构建 被引量：2

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作者 闻晓波 宋佰芬 +1 位作者 姜海芳 崔玉东 《黑龙江八一农垦大学学报》 2007年第4期54-57,共4页

根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPF-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了F、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表... 根据GenBank中新城疫病毒(NDV)F、HN基因序列和真核细胞表达载体pEGPF-N1的克隆位点,分别设计一对引物,通过PCR方法获得了F、HN基因,经回收纯化,将产物连接到克隆载体pMD18-T上。酶切鉴定和序列分析后,再将目的基因亚克隆到真核细胞表达载体pEGPF-N1上,经鉴定,成功构建含有NDVF和HN基因的真核细胞表达载体pEGPF-N1-F和pEGPF-N1-HN,为下一步研究NDVF和HN蛋白在细胞凋亡中的生物学功能奠定基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 F基因 HN基因 真核细胞表达载体

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蚊抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系的建立与表达鉴定 被引量：1

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作者 顾燕 公茂庆 +4 位作者 胡小邦 孙艳 马磊 李秀兰 朱昌亮 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第2期81-84,共4页

目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cD NA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/... 目的建立抗药性相关糜蛋白酶基因稳定转染细胞系。方法采用PCR方法,以淡色库蚊抗药性品系cD NA文库为模板,扩增出抗药性品系高表达的糜蛋白酶基因编码区;经T/A克隆测序鉴定后,亚克隆到真核表达载体pIE13,构建重组昆虫细胞表达载体pIE13/chy,经酶切和PCR鉴定后,与带有筛选标记的pIE1neo质粒共转染蚊细胞C6/36,通过G418选择培养,建立转染细胞系;用RT PCR、Westernblotting鉴定糜蛋白酶基因的转录表达。结果成功构建了真核表达载体pIE13/chy,证明糜蛋白酶基因已转入C6/36细胞,建立了稳定转染细胞系,表达产物分子质量单位约30ku,与理论值相符。结论稳定转染细胞系的建立和基因表达为进一步研究糜蛋白酶基因与抗药性的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 糜蛋白酶基因 昆虫细胞表达载体 抗药性 基因转染 C6/36细胞

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不同哺乳动物细胞表达尿激酶原的研究 被引量：3

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作者 钱锋 肖成祖 +3 位作者 高丽华 张正光 郭智霞 俞炜源 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期349-352,共4页

以重组尿激酶原 (pro UK)为研究对象 ,构建了细胞表达载体 ,对不同细胞表达载体进行了较为系统的比较性研究。确定了所构建pro UK三种载体的表达特性 ,成功建立了pro UK哺乳动物细胞表达系统。重组Namal wa、Vero和Sp2 / 0细胞表达pro U... 以重组尿激酶原 (pro UK)为研究对象 ,构建了细胞表达载体 ,对不同细胞表达载体进行了较为系统的比较性研究。确定了所构建pro UK三种载体的表达特性 ,成功建立了pro UK哺乳动物细胞表达系统。重组Namal wa、Vero和Sp2 / 0细胞表达pro UK的水平分别是 2 0 0、12 5和 5 0IU/ (10 6cell.2 4h)。亲和层析纯化 pro UK纯度在 90 %以上。免疫吸附溶酰胺测定表明CHO细胞表达 pro UK单链比例最低 ,而Vero和Namalwa细胞表达 pro UK单链比例最高。该研究对生产 pro UK时 。 展开更多

关键词 尿激酶原 VERO细胞 哺乳动物 细胞表达载体

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