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热休克蛋白70抑制剂联合阿苯达唑干预对多房棘球蚴感染小鼠病灶活性和淋巴细胞亚群的影响
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作者 阿迪莱·多力坤 李寅时 +9 位作者 邓冰清 阿比旦·艾尼瓦尔 孙胜 肖雯颖 葛聪蕙 唐娜 李静 高春花 王慧 张传山 《新疆医科大学学报》 2025年第3期277-285,共9页
目的探讨热休克蛋白70抑制剂(Apoptozole,Az)联合阿苯达唑(Albendazole,ABZ)干预对多房棘球蚴感染小鼠模型病灶活性和淋巴细胞亚群的影响。方法无菌分离多房棘球绦虫原头节,以每只小鼠腹腔注射10000枚的剂量接种雌性Balb/c小鼠27只。在... 目的探讨热休克蛋白70抑制剂(Apoptozole,Az)联合阿苯达唑(Albendazole,ABZ)干预对多房棘球蚴感染小鼠模型病灶活性和淋巴细胞亚群的影响。方法无菌分离多房棘球绦虫原头节,以每只小鼠腹腔注射10000枚的剂量接种雌性Balb/c小鼠27只。在感染4周后,将27只小鼠随机分为对照组(腹腔注射1.4%DMSO)、Az组(腹腔注射4mg/kg Apoptozole)和Az+ABZ组(腹腔注射4 mg/kg Apoptozole+4 mg/kg ABZ),每组9只,每两天注射1次,连续注射6周。收集各组小鼠病灶组织样本进行石蜡包埋和HE染色,观察组织的病理学变化。采用免疫组化方法检测病灶组织中Em 18和Em 14-3-3蛋白的表达水平,评价病灶活性。分离小鼠肝脏、脾脏和腹腔淋巴细胞,采用流式细胞术检测和分析各组小鼠肝脏、脾脏和腹腔中淋巴细胞亚群的比例变化。结果HE染色结果显示:与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠病灶组织中炎性细胞浸润比较明显。免疫组化结果显示:与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠病灶组织中Em 14-3-3和Em 18蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示:与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠肝脏NK细胞和B细胞表达比例升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,Az+ABZ组小鼠肝脏T细胞表达比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,Az组小鼠肝脏B细胞表达比例升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠脾脏NK细胞表达比列有升高的趋势,T细胞表达比例有下降的趋势(P>0.05)。与对照组比较,Az组小鼠脾脏B细胞表达比例升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠腹腔NK细胞和B细胞表达比例有升高的趋势,T细胞和CD8^(+)T细胞表达比例有下降的趋势(P>0.05)。与Az组比较,肝脏,脾脏,腹腔淋巴细胞中的NK细胞都有上调的趋势。结论热休克蛋白70抑制剂Apoptozole联合阿苯达唑干预多房棘球蚴感染小鼠模型,能够抑制病灶活性,促进NK细胞向肝脏中的募集,介导对多房棘球蚴病灶的抑制。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 休克蛋白70 淋巴细胞 病灶活性
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结核杆菌热休克蛋白70在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定 被引量:4
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作者 彭明利 凌宁 +2 位作者 许红梅 卿玉玲 任红 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期286-290,共5页
为获得结核杆菌热休克蛋白 70在毕赤酵母中的分泌表达。构建了酵母表达质粒pPIC9K hsp70 ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiapastorisGS115 ,经PCR方法筛选出阳性菌落 ,在 0 .5 %甲醇诱导下分泌表达。所得产物经离心收集上清、超滤浓... 为获得结核杆菌热休克蛋白 70在毕赤酵母中的分泌表达。构建了酵母表达质粒pPIC9K hsp70 ,并将其线性化后用电穿孔法导入PichiapastorisGS115 ,经PCR方法筛选出阳性菌落 ,在 0 .5 %甲醇诱导下分泌表达。所得产物经离心收集上清、超滤浓缩脱盐、亲和层析后 ,分别用SDS PAGE、Westernblot和动物免疫实验对上清中的重组Hsp70进行鉴定 ,并考察产物对DC的作用。经SDS PAGE、Westernblot分析表明表达的Hsp70表观分子量为 70kD并能特异性地与抗 Mt.Hsp70单抗结合 ,动物实验表明重组的Hsp70能在体诱导免疫应答。重组Hsp70能够诱导DC成熟并释放Th1型细胞因子。摇瓶发酵表达量达 12 0mg L ,占培养上清 30 %以上。 展开更多
关键词 结核杆菌休克蛋白70 分泌表达 树突状细胞 毕赤酵母
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结核杆菌热休克蛋白70与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建 被引量:3
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作者 曾曙光 张积仁 +4 位作者 章锦才 吴世卿 刘启才 艾伟健 薛国初 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期433-436,445,共5页
目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物... 目的利用pIRES-EGFP载体构建含有人巨细胞病毒(cytomegaloviru,CMV)启动子调控表达的结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子真核表达载体pCMV-hsp70-IRES-EGFP。方法根据mtHSP70基因全长cDNA的特异引物PCR扩增获得mtHSP70基因序列。将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒PMD-18T-mtHSP70,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶Xho I和EcoR I酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒。将mtHSP70基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含mtHSP70和EGFP基因的重组质粒。Lipofectamine介导下转染B16细胞,并分别在荧光显微镜下观察EGFP的表达和以Westernblot检测mtHSP70蛋白表达情况。结果酶切见特异酶切图谱,该载体在瞬时表达时获得mtHSP70/EGFP的良好表达。结论含mtHSP70和EGFP基因双顺反子真核表达载体pCMV-mtHSP70-IRES-EGFP构建成功,为研究基于以GFP为报告基因的mtHSP70的肿瘤DNA疫苗对肿瘤的治疗作用及机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 休克蛋白70 增强型绿色荧光蛋白 真核表达 免疫治疗 肿瘤
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结核杆菌热休克蛋白70刺激表位在融合基因疫苗中的佐剂作用 被引量:2
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作者 段秀梅 邹亚斌 +4 位作者 马洪喜 李树蕾 王银萍 王超 李玉琴 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期506-511,共6页
目的:探讨结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661(HCA661)融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法:18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组... 目的:探讨结核杆菌热休克蛋白70(mtHSP70)的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661(HCA661)融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法:18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组,每组6只,分别肌肉注射100μg空质粒pCI-neo、重组质粒pCI-HCA661-mtHSP70C和pCI-HCA661-mtHSP70E,流式细胞术分析小鼠脾T细胞亚群变化;ELISA法检测体外培养脾细胞上清中干扰素γ(IFNγ)的含量及免疫小鼠血清中HCA661特异性抗体的滴度;体外特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤试验观察融合基因疫苗对肿瘤细胞的抑制作用。结果:pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+比值与pCI-neo组比较差异有统计学意义(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值均高于pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组,差异有统计学意义(P<0.05);在抗原肽刺激下,pCI-HCA661-HSP70E免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFNγ含量较pCI-mtHCA661-HSP70C免疫组明显提高(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组IFNγ含量均高于pCI-neo组(P<0.05)。pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组诱导的HCA661特异性抗体水平较pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组显著增高(P<0.05);pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组可以产生更强的CTL抗肿瘤效应。结论:mtHSP70刺激表位可以诱导机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答,发挥更强的佐剂作用。 展开更多
关键词 融合基因疫苗 肝细胞癌相关抗原661 结核分枝杆菌休克蛋白70 基因佐剂
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人乳头瘤病毒6型E7与结核杆菌热休克蛋白70融合基因的构建及原核表达 被引量:1
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作者 党育平 王刚 +3 位作者 范雪莉 沈柱 樊建勇 刘玉峰 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期208-210,共3页
目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插... 目的:构建结核杆菌热休克蛋白(HSP)70与人乳头瘤病毒(HPV)6型E7抗原的融合基因,在大肠杆菌中进行表达和纯化。方法:利用PCR方法扩增结核杆菌HSP70基因,插入原核表达载体pGEX-4T-1;经测序后,再通过PCR方法扩增HPV6型E7基因片段,测序后插入HSP70基因的5'端,构建HPV6E7与结核杆菌HSP70的N端融合基因原核表达质粒pGEX-E7-HSP70;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,进行诱导表达和分离纯化。结果:成功地构建了pGEX-E7-HSP70原核表达质粒;在含有该质粒的大肠杆菌DH5α中,经异丙醇-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达相对分子质量约为108000的蛋白;经谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达系统纯化,得到E7与结核杆菌HSP70的可溶性融合蛋白。结论:成功获得HPV6型E7与结核杆菌HSP70的融合蛋白,为研究该融合蛋白疫苗在尖锐湿疣治疗中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒6型 E7蛋白 结核杆菌 休克蛋白70 融合基因 原核表达
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小鼠甲胎蛋白与结核杆菌热休克蛋白70基因融合载体的构建及体外表达 被引量:1
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作者 兰英华 梁增伟 +2 位作者 李用国 陈敏 任红 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期74-77,共4页
目的 构建小鼠甲胎蛋白 (α Fetoprotein ,AFP)与结核杆菌热休克蛋白 70 (Mycobacteriumtuberculosisheatshockprotein 70 ,Mt.HSP70 )基因融合载体 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 以pcDNA3.1为基本单位构建AFP及与HSP70的... 目的 构建小鼠甲胎蛋白 (α Fetoprotein ,AFP)与结核杆菌热休克蛋白 70 (Mycobacteriumtuberculosisheatshockprotein 70 ,Mt.HSP70 )基因融合载体 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 以pcDNA3.1为基本单位构建AFP及与HSP70的融合表达载体 ,融合基因以G S G G S连接子连接 ;用脂质体将系列载体导入COS 7细胞 ,4 8h后以免疫化学方法检测其表达。结果 构建的AFP和HSP70的单独及融合表达载体导入COS 7细胞 4 8h后经RT PCR检测可扩增出相应片段 ,细胞免疫化学染色为阳性。结论 AFP和HSP70的单独及融合表达载体构建成功 ,并能在真核细胞中表达。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 休克蛋白70 肝细胞 融合
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血清脑源性神经营养因子、丙二醛、内皮素-1、热休克蛋白-70水平与阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者认知功能障碍的相关性
7
作者 宋花花 朱荣华 施莉 《实用临床医药杂志》 2025年第3期70-74,共5页
目的分析血清脑源性神经营养因子(BDNF)、丙二醛(MDA)、内皮素-1(ET-1)、热休克蛋白-70(HSP-70)水平与睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者认知功能障碍的关系。方法选取132例OSAHS患者为研究对象,另选取同期健康体检者90例为对照组。... 目的分析血清脑源性神经营养因子(BDNF)、丙二醛(MDA)、内皮素-1(ET-1)、热休克蛋白-70(HSP-70)水平与睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者认知功能障碍的关系。方法选取132例OSAHS患者为研究对象,另选取同期健康体检者90例为对照组。根据病情严重程度将OSAHS患者分为轻度组43例、中度组50例和重度组39例。比较各组血清BDNF、MDA、ET-1、HSP-70水平。采用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)和简易精神状态检查量表(MMSE)评估各组认知功能。分析OSAHS患者认知功能障碍与血清BDNF、MDA、ET-1、HSP-70水平及疾病严重程度的相关性。根据MoCA评分和MMSE评分将OSAHS患者分为认知功能障碍组和非认知功能障碍组。采用多因素Logistic回归分析法筛选OSAHS患者发生认知功能障碍的危险因素。结果重度组血清BDNF水平以及MMSE评分、MoCA评分低于轻度组、中度组,血清MDA、ET-1、HSP-70水平高于轻度组、中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。认知功能障碍组的低学历占比、疾病程度为重度占比、体质量指数以及血清MDA、ET-1、HSP-70水平高于非认知功能障碍组,血清BDNF水平低于非认知功能障碍组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清BDNF水平与认知功能障碍呈负相关,血清MDA、ET-1、HSP-70水平及疾病严重程度与认知功能障碍呈正相关(P<0.05)。低学历、高BMI以及高MDA、ET-1、HSP-70水平和低BDNF水平为OSAHS患者发生认知功能障碍的危险因素(P<0.05)。结论OSAHS患者血清MDA、ET-1、HSP-70水平升高,血清BDNF水平降低。血清MDA、ET-1、HSP-70、BDNF水平与OSAHS患者认知功能障碍的发生密切相关。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 丙二醛 内皮素-1 休克蛋白-70 认知功能障碍 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征
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结核杆菌热休克蛋白70剂量相关的免疫调节作用
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作者 高志玲 孙丽媛 戴琎 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期697-699,705,共4页
目的:验证HSP70的免疫调节作用是否和剂量相关。方法:不同剂量的结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)体外刺激未成熟的树突状细胞(DC),检测其对DC表面分子CD86以及IL-10表达量的影响。结果:0~50μg/ml浓度范围内的HSP70在体外可以促进DC表达C... 目的:验证HSP70的免疫调节作用是否和剂量相关。方法:不同剂量的结核杆菌热休克蛋白70(HSP70)体外刺激未成熟的树突状细胞(DC),检测其对DC表面分子CD86以及IL-10表达量的影响。结果:0~50μg/ml浓度范围内的HSP70在体外可以促进DC表达CD86并呈现剂量依赖性,但是当浓度在50~200μg/ml范围时,HSP70抑制DC表达CD86。此外HSP70在体外也可以促进DC产生IL-10,并呈一定剂量相关性。大剂量的HSP70可以抑制NOD小鼠糖尿病的发生率并显著促进Treg的产生。结论:小剂量的HSP70在体外可以促进DC的成熟,大剂量的HSP70反而可以抑制DC的成熟并抑制NOD小鼠糖尿病的发生,这种抑制作用可能是通过产生IL-10和Treg引起的。 展开更多
关键词 休克蛋白70 剂量 免疫调节 树突状细胞
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HBsAg与结核杆菌热休克蛋白70融合乙肝DNA疫苗诱导小鼠产生抗HBsAg特异性免疫应答
9
作者 梁增伟 任红 《胃肠病学》 2001年第C00期180-180,共1页
关键词 乙型肝炎病毒 结核杆菌休克蛋白70 乙肝DNA疫苗 抗HBsAg特异性免疫应答 动物实验
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结核杆菌热休克蛋白70作为表位肽载体体外诱导HBV特异性免疫应答 被引量:2
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作者 罗莉 何松 +1 位作者 罗娜 彭明利 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1025-1028,共4页
目的在体外研究结核杆菌热休克蛋白70(TB.HSP70)作为乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)细胞毒性T淋巴细胞表位肽载体,诱导HBV特异性免疫应答。方法应用毕赤酵母分泌表达HSP70(P1)、HSP70-HBcAg(18-27)(P2)、HSP70-PreS2B(18-24)-PreS2Th... 目的在体外研究结核杆菌热休克蛋白70(TB.HSP70)作为乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)细胞毒性T淋巴细胞表位肽载体,诱导HBV特异性免疫应答。方法应用毕赤酵母分泌表达HSP70(P1)、HSP70-HBcAg(18-27)(P2)、HSP70-PreS2B(18-24)-PreS2Th(37-53)-HBcAg(18-27)(P3),用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹法鉴定各重组蛋白的表达。体外考察重组蛋白(P1、P2、P3)对慢性乙型肝炎外周血来源的树突状细胞和淋巴细胞的作用,流式细胞术评估树突状细胞的成熟,酶联免疫吸附测定法检测细胞因子白细胞介素(IL)-12p70、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)分泌情况,TdR-3H掺入法检测淋巴细胞的增殖情况,应用经典51 Cr法检测重组蛋白诱导HBV特异性细胞毒活性。结果重组蛋白P1、P2、P3构建成功,P1、P2、P3能诱导树突状细胞成熟,上调CD1a、CD40、CD86表达,释放Th1型细胞因子IL-12p70、IL-1β和TNF-α,P3最能有效激活自体淋巴细胞成为细胞毒活性细胞,促进淋巴细胞增殖和IFN-γ的释放,而单独的HSP70无杀伤活性。结论 TB.HSP70可作为HBV HBcAg细胞毒性T淋巴细胞表位肽载体,提高T淋巴细胞表位肽的免疫原性,且含有B、Th表位的P3能更好地激活HBV特异性免疫应答。 展开更多
关键词 hsp70休克蛋白 T淋巴细胞 乙型肝炎病毒 树突细胞
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乙脑病毒E蛋白中和表位与结核杆菌hsp70在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
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作者 葛菲菲 刘佩红 +3 位作者 王建 沈莉萍 徐锋 孙泉云 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期208-212,共5页
根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建... 根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373-399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建融合表达载体pet-32a-epitope-hsp70。诱导表达后,将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果表明该融合蛋白以包含体形式存在。将包含体在8 mol/L的尿素中过夜溶解,然后将上清过柱,获得良好的纯化结果。融合蛋白的分子量为94 kD。Western blot显示该蛋白兼具对JEV和结核杆菌热休克蛋白70(M.Thsp70)的特异抗原性。 展开更多
关键词 乙脑病毒E蛋白中和表位 大肠杆菌 结核杆菌hsp70 融合 包含体
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短指软珊瑚(Sinularia acuta)热休克蛋白HSP70家族特征及进化分析
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作者 李子若 罗晏杰 +2 位作者 曹政 Chin yaoxian 王沛政 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期123-136,共14页
热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)在生物细胞或组织免受热或氧化应激等方面起着关键作用,是已知高度保守的蛋白质之一。由于全球环境持续升温,珊瑚大面积白化、死亡,珊瑚如何应对持续升温的抗逆机制是科学研究热点。本研究... 热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)在生物细胞或组织免受热或氧化应激等方面起着关键作用,是已知高度保守的蛋白质之一。由于全球环境持续升温,珊瑚大面积白化、死亡,珊瑚如何应对持续升温的抗逆机制是科学研究热点。本研究从高温胁迫短指软珊瑚测序蛋白序列数据库分析鉴定出了28个HSP70蛋白家族成员,均为酸性亲水蛋白,大部分蛋白质结构较为稳定。亚细胞定位表明HSP70蛋白主要分布在珊瑚细胞核、细胞质中,在线粒体、内质网上也有少量分布。信号肽预测表明, 28个HSP70蛋白成员中26个没有信号肽,大部分不属于分泌蛋白,不存在跨膜结构。系统进化树结果表明短指软珊瑚HSP70蛋白家族成员聚成5大类。短指软珊瑚HSP70蛋白家族结构和保守基序分析中预测到了10条保守基序motif分为5个亚族。短指软珊瑚HSP70蛋白家族二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,α-螺旋的含量占比大。28个HSP70家族蛋白中有25个预测到了N-糖基化位点,且位点个数在1~9范围内。28个HSP70家族蛋白均预测到磷酸化位点和O-糖基化位点,总个数分别在41~96和1~23范围内。本研究HSP70家族蛋白结果为今后珊瑚在应对全球升温胁迫中的适应机制等方面研究奠定了基础。 展开更多
关键词 短指软珊瑚 休克蛋白 hsp70家族 进化
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乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌hsp70在毕赤酵母中的融合表达 被引量:1
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作者 葛菲菲 邱亚峰 +2 位作者 杨耀武 高小飞 陈溥言 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第12期1081-1085,共5页
目的构建乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosisheat shock protein70,Mt.hsp70)基因融合表达载体,并研究其在巴斯德毕赤酵母中的表达情况,为改善发展新的乙脑疫苗打基础。方法以酵母表达载体pPICZ... 目的构建乙脑E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosisheat shock protein70,Mt.hsp70)基因融合表达载体,并研究其在巴斯德毕赤酵母中的表达情况,为改善发展新的乙脑疫苗打基础。方法以酵母表达载体pPICZα-A为基本单位构建E蛋白基因主要抗原片段与hsp70的融合表达载体,融合基因以酶切位点BamHⅠ连接,用电穿孔法转化酵母X-33,用Zeocin平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果E蛋白基因与hsp70的融合表达载体构建成功,SDS-PAGE显示,其相对分子质量为114kD,与实际大小相符,经凝胶薄层扫描分析,表达量为33mg/L,经Western印迹验证,有良好的抗原性。结论E-hsp70融合蛋白在酵母中的表达为下一步研究hsp70是否能作为E蛋白免疫时的理想佐剂作准备。 展开更多
关键词 乙型脑炎E蛋白主要抗原片段 结核杆菌休克蛋白70 融合 巴斯德毕赤酵母 抗原性
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乙脑E蛋白与结核杆菌HSP70的融合蛋白对BALB/c小鼠特异性免疫的影响 被引量:1
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作者 葛菲菲 邱亚峰 +1 位作者 杨耀武 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期441-445,共5页
研究酵母表达的乙脑病毒(JapaneseEncephalitisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70 (hsp70 )形成的融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹膜内注射蛋白的方法免疫小鼠,以直接免疫E蛋白主要抗原片段和以E蛋白主要... 研究酵母表达的乙脑病毒(JapaneseEncephalitisvirus)E蛋白主要抗原片段与结核杆菌热休克蛋白70 (hsp70 )形成的融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。采用腹膜内注射蛋白的方法免疫小鼠,以直接免疫E蛋白主要抗原片段和以E蛋白主要抗原片段和单独表达的hsp70两者均以5 0pmol的量进行混合后的蛋白免疫的小鼠作为对照,用半定量RT PCR检测细胞免疫因子IL 2mRNA的水平,IL 2是细胞介导的免疫反应和巨噬细胞激活中的关键分子,MTT法检测淋巴细胞的增殖情况以及通过ELISA检测抗体水平,从这3个方面来评价融合与未融合蛋白以及等量混合后的免疫效果。结果E蛋白主要抗原片段与结核杆菌hsp70重组后,mIL 2 ,淋巴细胞的增殖以及抗体水平均较重组前明显升高,因此,以乙脑E 展开更多
关键词 乙脑病毒E蛋白主要抗原片段 结核杆菌休克蛋白70 mIL-2 淋巴细胞的增殖 抗体水平
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单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70 DNA疫苗的免疫效应研究
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作者 樊建勇 田晨 +5 位作者 王兴旺 张功恺 高睿 籍丽玥 陈韦君 杨慧兰 《实用皮肤病学杂志》 2021年第1期8-11,共4页
目的研究单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70-HSV2gD)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠出现的特异性免疫反应.方法用制备的Hsp70-HSV2gD DNA疫苗免疫小鼠3次,最后1次免疫后第4周测定小鼠血中特异性gD IgG抗体;分离小鼠脾淋巴细胞,... 目的研究单纯疱疹病毒2型gD蛋白-结核杆菌热休克蛋白70(Hsp70-HSV2gD)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠出现的特异性免疫反应.方法用制备的Hsp70-HSV2gD DNA疫苗免疫小鼠3次,最后1次免疫后第4周测定小鼠血中特异性gD IgG抗体;分离小鼠脾淋巴细胞,用HSV2gD蛋白刺激后用MTT法测定小鼠脾淋巴细胞增殖水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脾淋巴细胞培养液中干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4浓度,用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞CD4+、CD8+T细胞亚群.结果gD、gD+Hsp70和Hsp70-HSV2gD 3组均可刺激小鼠产生靶向HSV2gD蛋白抗体,诱导CD4+T细胞与CD8+T细胞增殖,刺激脾淋巴细胞增殖并分泌IFN-γ、IL-4.Hsp70-HSV2gD组在抗体水平、诱导CD4+T细胞与CD8+T细胞增殖、刺激脾淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ、IL-4均明显高于gD+Hsp70组、gD组,差异有统计学意义(P<0.05).结论Hsp70-HSV2gD DNA疫苗可以刺激小鼠产生比gD、gD+Hsp70组更强的特异性免疫反应,Hsp70-HSV2gD DNA疫苗中的Hsp70对HSV2gD抗原诱导的特异性免疫应答可能有促进作用. 展开更多
关键词 病毒 单纯疱疹 休克蛋白70 DNA疫苗
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消化性溃疡合并幽门螺杆菌感染患儿血清G-17、HSP-70水平变化及意义
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作者 明虹均 宋紫霞 《国际检验医学杂志》 2025年第4期509-512,共4页
目的探讨消化性溃疡(PU)合并幽门螺杆菌(Hp)感染患儿血清胃泌素-17(G-17)、热休克蛋白-70(HSP-70)水平变化及意义。方法选取2022年2月至2024年2月在该院接受治疗的173例PU患儿作为研究对象,其中92例PU患儿合并Hp感染(合并组),81例PU患... 目的探讨消化性溃疡(PU)合并幽门螺杆菌(Hp)感染患儿血清胃泌素-17(G-17)、热休克蛋白-70(HSP-70)水平变化及意义。方法选取2022年2月至2024年2月在该院接受治疗的173例PU患儿作为研究对象,其中92例PU患儿合并Hp感染(合并组),81例PU患儿未合并Hp感染(非合并组)。另选取同期该院体检健康儿童173例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测G-17、HSP-70水平,采用Pearson相关性分析PU合并Hp患儿血清G-17与HSP-70的相关性;多因素Logistic回归分析PU合并Hp的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清G-17、HSP-70对PU合并Hp的诊断价值。结果与对照组比较,非合并组、合并组血清G-17、HSP-70水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ⅱ型Hp感染患儿比较,Ⅰ型Hp感染患儿血清HSP-70水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,合并组血清G-17与HSP-70水平呈正相关(r=0.662,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,G-17、HSP-70是影响PU合并Hp的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清G-17诊断PU合并Hp感染的曲线下面积(AUC)为0.848,血清HSP-70诊断PU合并Hp感染的AUC为0.850,二者联合诊断PU合并Hp感染的AUC为0.915,二者联合优于各自单独诊断(Z联合vs.G-17=2.456、Z联合vs.HSP-70=2.535,P<0.05)。结论PU合并Hp感染患儿血清G-17、HSP-70水平显著升高,二者联合对于PU合并Hp感染具有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 消化性溃疡 幽门螺杆菌 胃泌素-17 休克蛋白-70
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结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的高效自发再折叠和再组装 被引量:5
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作者 毛启龙 冯修光 昌增益 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期87-90,共4页
来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3以九聚体的形式存在 .用三种不同的强变性条件 (10 0℃加热15min ,12mol/L脲或 8mol/L盐酸胍处理 4h)将Hsp16 3变性 ,然后通过冷却或透析使之复性 ,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色... 来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16 3以九聚体的形式存在 .用三种不同的强变性条件 (10 0℃加热15min ,12mol/L脲或 8mol/L盐酸胍处理 4h)将Hsp16 3变性 ,然后通过冷却或透析使之复性 ,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色性光谱比较了变性 复性前后Hsp16 3的各个层次高级结构 .结果显示 ,变性的Hsp16 3几乎可以完全恢复至天然构象 ,这表明小分子热休克蛋白Hsp16 3具有很强的自发折叠和组装能力 . 展开更多
关键词 休克蛋白 变性 复性 再折叠 再组装 结核杆菌 hsp16.3 小分子
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脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析 被引量:28
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作者 韩俊英 李健 +3 位作者 李吉涛 常志强 陈萍 李华 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1130-1138,共9页
克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。... 克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。 展开更多
关键词 脊尾白虾 休克蛋白70 基因克隆 表达分析
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合浦珠母贝热休克蛋白hsp70基因的克隆与表达分析 被引量:20
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作者 黄桂菊 曲妮妮 +1 位作者 喻达辉 李莉好 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期726-732,共7页
采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为7... 采用同源克隆和RT-PCR技术对合浦珠母贝(Pinctada fucata)热休克蛋白hsp70基因进行了克隆和表达分析。获得cDNA全长序列2 365 bp,其中3’非编码区域(UTR)为318 bp,5’UTR为88 bp,开放阅读框(ORF)为1 959 bp,编码652个氨基酸,分子量约为71.39 kD,理论等电点为5.22,并含有3个HSP70家族的签名序列IDLGTTYS、DLGGGTFD和EEVD。同源性分析表明,合浦珠母贝HSP70的氨基酸序列与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)等双壳贝类的相似性高达86%以上,基于氨基酸序列的聚类分析表明,合浦珠母贝与牡蛎属种类亲缘关系最近。高温、高盐刺激后,半定量RT-PCR检测发现hsp70基因的表达明显增加,高温刺激的表达量高于高盐刺激,高温刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、消化腺、外套膜、肌肉、性腺,高盐刺激组不同组织的表达量由大到小依次为鳃、外套膜、肌肉、消化腺、性腺,表明HSP70参与了机体对刺激的应答过程。该基因的克隆为进一步深入研究合浦珠母贝的抗逆机理及其遗传改良奠定了重要基础。 展开更多
关键词 合浦珠母贝 休克蛋白hsp70 同源克隆 体内表达
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温度刺激下栉孔扇贝不同组织热休克蛋白HSP70的表达研究 被引量:17
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作者 曲凌云 相建海 +2 位作者 孙修勤 洪旭光 张进兴 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期96-100,共5页
采用免疫印迹(Western blot)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)方法,研究了热激栉孔扇贝不同组织内热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的表达变化.免疫印迹结果显示,HSP70的诱导表达有组织特异性,即热休克可以使扇贝鳃组织中HSP7... 采用免疫印迹(Western blot)和流式细胞术(flow cytometry,FCM)方法,研究了热激栉孔扇贝不同组织内热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)的表达变化.免疫印迹结果显示,HSP70的诱导表达有组织特异性,即热休克可以使扇贝鳃组织中HSP70的表达明显升高,但在肌柱、外套膜和性腺组织中,未检测到HSP70 的表达.流式细胞术结果表明:在不同的季节,相同的热刺激对扇贝血淋巴中HSP70的诱导表达存在差异.高温刺激后,栉孔扇贝血淋巴细胞中HSP70的表达量逐渐升高,在诱导7h时达到最高. 展开更多
关键词 栉孔扇贝 休克蛋白 hsp70 免疫印迹 流式细胞术 组织特异性 血淋巴细胞 温度刺激
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