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从原始生殖细胞分离克隆鸡胚胎生殖细胞的研究 被引量：14
1
作者 王娟 杨娜娜 杜立新 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期69-73,共5页
从孵化 5 5天的鸡胚生殖腺中分离得到大量原始生殖细胞 (PGCs)集落 ,这些集落的细胞经多次克隆传代具有胚胎生殖细胞 (EG)的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (传至第 9代 ) ,细胞集落有典型鸟巢状结构 ,PAS染色阳性 ,AKP染色阳性 ,在无... 从孵化 5 5天的鸡胚生殖腺中分离得到大量原始生殖细胞 (PGCs)集落 ,这些集落的细胞经多次克隆传代具有胚胎生殖细胞 (EG)的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (传至第 9代 ) ,细胞集落有典型鸟巢状结构 ,PAS染色阳性 ,AKP染色阳性 ,在无饲养层无分化抑制因子LIF时可以自发分化成几种细胞类型 ,包括成纤维细胞、神经细胞、自律细胞等 ,悬浮培养时具有形成类胚体的能力。上述发现表明该细胞具EG细胞的诸多特性 。 展开更多
关键词 集落 胚胎生殖细胞 阳性 原始生殖细胞 成纤维细胞 PAS染色 鸡胚 分离克隆 孵化 传代
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以STO细胞和hELF作为胚胎生殖细胞培养饲养层的比较 被引量：7
2
作者 刘永刚 李芳菲 +2 位作者 陈地龙 王莎莉 王亚平 《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第18期1704-1707,共4页
目的：比较以STO细胞和人胚胎肺成纤维细胞（hELF）作为饲养层对人胚胎生殖嵴细胞（EG）生长的影响以及经丝裂酶素C处理后的两种饲养层的变化．方法：分离、培养3—4mohELF，观察经丝裂酶素C处理STO细胞和hELF后形态学变化，以STO细胞和... 目的：比较以STO细胞和人胚胎肺成纤维细胞（hELF）作为饲养层对人胚胎生殖嵴细胞（EG）生长的影响以及经丝裂酶素C处理后的两种饲养层的变化．方法：分离、培养3—4mohELF，观察经丝裂酶素C处理STO细胞和hELF后形态学变化，以STO细胞和hELF作为饲养层培养人EG细胞，计数EG细胞集落的形成率以及免疫组化检测EG细胞表面标志物抗阶段特异性胚胎抗原-1（SSEA-1）和抗阶段特异性胚胎抗原-4（SSEA-4）．结果：经丝裂霉素c处理后hELF较STO细胞生存时间明显长，形态维持更好；以hELF和STO细胞作为饲养层培养人EG细胞，集落形成率没有明显差异；两种饲养层上形成的集落免疫学特征无明显差异．结论：在培养人EG细胞时，hELF饲养层较STO细胞饲养层更有优势． 展开更多
关键词 STO细胞 胚胎肺成纤维细胞 胚胎生殖细胞 人类
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人胚胎生殖细胞在人胚胎成纤维细胞饲养层上的生长 被引量：4
3
作者 刘永刚 韩兵 +3 位作者 陈地龙 李芳菲 王亚平 王莎莉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期284-287,共4页
目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件。方法分离、培养3～4月胚胎成纤维细胞,取3～15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6～11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因... 目的探讨以人胚胎成纤维细胞为饲养层分离、培养人胚胎生殖细胞的方法和条件。方法分离、培养3～4月胚胎成纤维细胞,取3～15代细胞经丝裂酶素处理后铺板备用;分离6～11周胚胎原始生殖细胞,将其置于人胚胎成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞;用免疫细胞化学方法检测胚胎生殖细胞表面标志SSEA1和SSEA4;钙钴法检测碱性磷酸酶活性;RT PCR检测转录因子Oct4的表达。结果人胚胎成纤维细胞可连续传代25代以上(6月),3～15代细胞可以用作饲养层细胞。分离的胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过8代。集落未分化标志检测显示SSEA1、SSEA4呈阳性,碱性磷酸酶活性呈强阳性,Oct4表达阳性。结论用人胚胎成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 胚胎成纤维细胞 细胞培养 免疫细胞化学 逆转录聚合酶链反应 人胚
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人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 被引量：14
4
作者 王英 何津 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期245-248,共4页
目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物... 目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性（细胞形态、细胞生长特点、细胞周期）。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志（脯氨酰4-羟化酶β亚单位）和上皮细胞特异性标志（细胞角蛋白4）的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白血病抑制因子（LIF）。结果：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论：成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。 展开更多
关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 细胞培养
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人胚胎生殖细胞的传代培养 被引量：5
5
作者 陈永珍 张苏 +1 位作者 朱旻 陈谦 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期330-332,F0003,共4页
目的探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法。方法取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消... 目的探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法。方法取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消化液进行传代培养,记录各代培养的细胞集落数。结果在原代培养第8天时,挑取传代法传2代后获得的细胞集落数减少;消化传代法传4代后获得的细胞集落数明显增多。原代培养第16天时未能传代培养,但却看到人胚胎生殖细胞集落的分化。结论人胚胎生殖细胞传代培养最适宜的传代时间为原代培养第8天,最佳的传代方法为消化传代法。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 传代培养 挑取传代法 消化传代法
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人类胚胎生殖细胞体外分化为心肌细胞的研究 被引量：5
6
作者 华进联 徐小明 窦忠英 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1080-1085,共6页
胚胎生殖（EG）细胞是来源于胚胎原始生殖细胞（PGCs）的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液（DMEM＋20％NBS＋0．1mM 2Me）培养EG细胞，部分在基础培养液添加10μmol／LRA＋0．75％DMSO或10μmol／L 5-氮胞苷（... 胚胎生殖（EG）细胞是来源于胚胎原始生殖细胞（PGCs）的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液（DMEM＋20％NBS＋0．1mM 2Me）培养EG细胞，部分在基础培养液添加10μmol／LRA＋0．75％DMSO或10μmol／L 5-氮胞苷（5-AZA）诱导人类EG细胞向心肌细胞分化，以检测其是否具有向心肌细胞自发分化的能力。9例（8．49％，9／106）胎儿EG细胞在体外分化得到20个节律性心脏跳动样细胞团，其搏动节律为20～120次／min，体外维持节律性搏动最短2d，最长至15d，呈PAS，Myoglobin，α-actin阳性；对K^＋、Ca^＋、肾上腺素等具有与在体心脏相似的反应性；透射电镜观察具有心肌细胞样结构。添加DMSO和RA或5-AZA诱导未得到跳动样心肌细胞，但可提高心肌α-actin免疫组织化学染色阳性率；表明人类胚胎生殖细胞具有向心肌细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 胚胎干细胞 心肌细胞
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SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达 被引量：2
7
作者 李芳 陈永珍 +2 位作者 陈谦 朱旻 张苏 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期21-24,共4页
分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体... 分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体外培养得到的细胞或细胞集落均阳性表达SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT,说明组织块体外培养获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。 展开更多
关键词 人胚胎生殖细胞 SSEA-1 SSEA-3 OCT-4 HTERT 表达
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SSEA-1、Oct-4在人胚胎生殖细胞的表达 被引量：2
8
作者 陈永珍 陈谦 +2 位作者 李芳 朱旻 张苏 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期232-235,共4页
目的体外培养人胚胎生殖细胞（EG细胞）,通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5... 目的体外培养人胚胎生殖细胞（EG细胞）,通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞. 展开更多
关键词 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 阶段特异性胚胎表面抗原-1 OCT-4 流式细胞术 人
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胚胎干细胞与胚胎生殖细胞 被引量：2
9
作者 徐小明 杨炜峰 +1 位作者 窦忠英 华进联 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第6期237-240,共4页
　胚胎干细胞与胚胎生殖细胞同属于胚胎源的多潜能干细胞。胚胎干细胞是从附置前胚胎内细胞团分离而来的,而胚胎生殖细胞来自胎儿原始生殖细胞。二者在现代生命科学的各个领域都有着广阔的应用前景。对胚胎生殖细胞的特性,胚胎干细胞与... 　胚胎干细胞与胚胎生殖细胞同属于胚胎源的多潜能干细胞。胚胎干细胞是从附置前胚胎内细胞团分离而来的,而胚胎生殖细胞来自胎儿原始生殖细胞。二者在现代生命科学的各个领域都有着广阔的应用前景。对胚胎生殖细胞的特性,胚胎干细胞与胚胎生殖细胞的异同以及二者的应用前景作一综述。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 胚胎生殖细胞 多潜能干细胞 特性 应用前景
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人胚骨髓基质细胞饲养层对人胚胎生殖细胞生长的作用 被引量：2
10
作者 姜景岩 孔北华 +4 位作者 刘星霞 侯怀水 马秀峰 沈柏均 时庆 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期131-136,共6页
目的:研究人胚原代骨髓基质细胞(BMSC)饲养层对人胚胎生殖细胞(hEGC)生长的支持作用。方法:以非意愿妊娠流产胎儿股骨为材料制备BMSC饲养层;同时取胎儿组织分离培养人成纤维细胞,以成纤维细胞培养液上清制备条件培养液(CM)。另取13.5d... 目的:研究人胚原代骨髓基质细胞(BMSC)饲养层对人胚胎生殖细胞(hEGC)生长的支持作用。方法:以非意愿妊娠流产胎儿股骨为材料制备BMSC饲养层;同时取胎儿组织分离培养人成纤维细胞,以成纤维细胞培养液上清制备条件培养液(CM)。另取13.5d胎鼠制备原代小鼠胎儿成纤维细胞(PMEF)饲养层。分组培养人原始生殖细胞:A组(PMEF饲养层)、B组(BMSC饲养层)、C组(CM)、D组(BMSC饲养层+CM),观察不同条件下hEGC生长增殖行为。结果:D组与A组均有利于支持人胚胎生殖细胞的体外生长,并保持其不分化的状态和多分化的潜能,两组比较无明显差异。单用B组可支持人胚胎生殖细胞的体外生长,但效率低于上述两组。单用条件培养液不能获得贴壁生殖细胞克隆。结论:BMSC饲养层+CM可支持hEGC的体外培养,且无异源性蛋白的污染,更有利于临床应用。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 原始生殖细胞 骨髓基质细胞 饲养层
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不同培养条件对鸡胚胎生殖细胞Oct4启动子DNA甲基化的影响 被引量：2
11
作者 王娟 焦飞 +2 位作者 于媛 潘效红 马云 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期118-121,共4页
旨在在体外通过胚胎生殖细胞(EGC)和细胞外基质共同构建一个EGC的小生境(niche)模型,通过比较Oct4DNA甲基化的变化,研究niche中特有的表观遗传效应对胚胎生殖细胞自我更新的影响。构建EGC细胞标准培养方案(对照组)和改良培养方案(试验... 旨在在体外通过胚胎生殖细胞(EGC)和细胞外基质共同构建一个EGC的小生境(niche)模型,通过比较Oct4DNA甲基化的变化,研究niche中特有的表观遗传效应对胚胎生殖细胞自我更新的影响。构建EGC细胞标准培养方案(对照组)和改良培养方案(试验组),采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)技术、RT-PCR技术,对比分析两种培养方案中Oct4启动子的甲基化状态,判断基因表达与其CpG岛甲基化的关系,分析DNA甲基化模式与EGC细胞自我更新的关系。结果显示,试验组可扩增出Oct4的非甲基化扩增产物,而对照组为其甲基化扩增产物,试验组Oct4表达水平明显高于对照组。试验组EGC生长状态明显好于对照组。试验表明,在改良培养条件下,Oct4基因启动子DNA甲基化程度较低,且与基因表达水平呈负相关,更有利于维持胚胎生殖细胞的自我更新状态。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 Oct4基因 DNA甲基化 全能性
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原始生殖细胞和胚胎生殖细胞发育多能性 被引量：3
12
作者 许新 丛笑倩 严缘昌 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期259-262,267,共5页
关键词 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 发育 多能性
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昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养 被引量：4
13
作者 李吉霞 王新庄 李权武 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第10期790-793,共4页
以昆明白品系小鼠胎儿生殖嵴为材料,以不同的培养液分离培养胚胎生殖细胞(EGcells),发现小鼠胎儿肝细胞条件培养液的效果好于未添加白血病抑制因子(LIF)的基础培养液,而差于添加了1 000 IU/mL LIF的基础培养液。同时,试验对比了从不同... 以昆明白品系小鼠胎儿生殖嵴为材料,以不同的培养液分离培养胚胎生殖细胞(EGcells),发现小鼠胎儿肝细胞条件培养液的效果好于未添加白血病抑制因子(LIF)的基础培养液,而差于添加了1 000 IU/mL LIF的基础培养液。同时,试验对比了从不同胎龄胎儿分离培养原始生殖细胞(PGCs)的情况,鉴定了EG细胞的生物学特性;EG细胞经体外培养,可以分化为神经样细胞、上皮样细胞和简单类胚体。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 原始生殖细胞 培养 昆明白小鼠
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鸡胚胎生殖细胞在鼠胚成纤维细胞饲养层上的生长 被引量：8
14
作者 王娟 孔祥华 杜立新 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期54-56,共3页
目的:探讨以鼠胚成纤维细胞为饲养层分离、培养鸡胚胎生殖细胞的方法和条件。方法:分离、培养12.5～13.5d鼠胚成纤维细胞。分离孵化5.5d鸡胚原始生殖细胞,原代培养时不使用饲养层,与性腺基质细胞共培养;继代培养时将其置于鼠胚成纤维细... 目的:探讨以鼠胚成纤维细胞为饲养层分离、培养鸡胚胎生殖细胞的方法和条件。方法:分离、培养12.5～13.5d鼠胚成纤维细胞。分离孵化5.5d鸡胚原始生殖细胞,原代培养时不使用饲养层,与性腺基质细胞共培养;继代培养时将其置于鼠胚成纤维细胞饲养层上,在含生长因子、分化抑制因子的培养体系中培养胚胎生殖细胞。结果:鼠胚成纤维细胞可连续传代18代以上(4个月),3～15代细胞可以用作饲养层细胞。分离的鸡胚胎生殖细胞在饲养层上可增殖形成典型胚胎生殖细胞集落,并能连续在体外培养超过9代。集落未分化标志高碘酸希夫反应(PAS)呈强阳性,体外分化实验表明胚胎生殖细胞具有多能性。结论:用鼠胚成纤维细胞作为饲养层能获得可连续增殖的胚胎生殖细胞。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 鼠胚成纤维细胞 细胞培养 鸡
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以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞 被引量：1
15
作者 李芳菲 刘永刚 +2 位作者 王建伟 王莎莉 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期310-314,共5页
目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LI... 目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞。将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定。结果经RT-PCR及Western blotting鉴定证实,转染pcDNA3.1(+)-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因。在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4。结论用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新。 展开更多
关键词 人胚肺成纤维细胞 白血病抑制因子 饲养层 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹法 人胚胎生殖细胞
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禽类胚胎生殖细胞的研究 被引量：1
16
作者 张艳艳 王颖 +4 位作者 陈莉娜 李林凤 靳亚平 关伟军 马月辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期40-43,51,共5页
胚胎干细胞有2种来源:一种来自于早期胚胎囊胚期内细胞团(inner cell mass,ICM)的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞),另一种是来自胚胎生殖腺原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EG细... 胚胎干细胞有2种来源:一种来自于早期胚胎囊胚期内细胞团(inner cell mass,ICM)的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞),另一种是来自胚胎生殖腺原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EG细胞)。PGCs是生殖母细胞的前体细胞,是精子或卵子的祖先细胞。自Matsui等证实了PGCs同样可以作为胚胎干细胞的原材料之后,现已在人、小鼠、猪和鸡等多种动物的PGCs进行了分离培养并获得了EG细胞。现从形态特征和迁移、分离培养及鉴定方面对禽类EG细胞的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 禽 胚胎生殖细胞 形态 分离培养 鉴定
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转录因子Oct-4和端粒酶在人胚胎生殖细胞的表达 被引量：1
17
作者 张苏 陈永珍 +1 位作者 朱旻 陈谦 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期6-8,F0002,共4页
目的体外培养人胚胎生殖细胞（EGC），通过检测培养的细胞中转录因子Oct-4、端粒酶的表达，鉴定EGC。方法取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜，进行组织块体外培养，采用免疫细胞化学检测Oct-4、端粒酶表达。结果组织块体外培养得到... 目的体外培养人胚胎生殖细胞（EGC），通过检测培养的细胞中转录因子Oct-4、端粒酶的表达，鉴定EGC。方法取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜，进行组织块体外培养，采用免疫细胞化学检测Oct-4、端粒酶表达。结果组织块体外培养得到的细胞，经免疫细胞化学法显示的单个细胞或细胞集落，均阳性表达转录因子Oct-4、端粒酶。结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞（PGCs），为未分化的EGC。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 转录因子Oct-4 端粒酶
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小鼠胚胎生殖细胞系的建立及其印记状态
18
作者 胡静 赵巧湜 +3 位作者 古艳丽 白光宇 吴稀 雷蕾 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期397-402,共6页
目的成功建立小鼠胚胎生殖细胞(EGCs)系,并初步分析小鼠胚胎生殖细胞的印记状态。方法建立交配后12.5d(12.5dpc)原始生殖细胞(PGCs)来源的小鼠EGCs,通过碱性磷酸酶(AKP)染色、免疫荧光细胞化学、体内分化及体外分化等方法检测EGCs的多能... 目的成功建立小鼠胚胎生殖细胞(EGCs)系,并初步分析小鼠胚胎生殖细胞的印记状态。方法建立交配后12.5d(12.5dpc)原始生殖细胞(PGCs)来源的小鼠EGCs,通过碱性磷酸酶(AKP)染色、免疫荧光细胞化学、体内分化及体外分化等方法检测EGCs的多能性,并以小鼠胚胎干细胞(ESCs)为对照,应用Real-time PCR检测EGCs中与发育相关的Ins2、Lgf2、H19、Lgf2r等11个父源与母源印记基因的表达情况。结果成功建立小鼠EG细胞系,EGCs克隆AKP染色显示有高水平的AKP活性,免疫荧光细胞化学方法显示克隆表达小鼠ESCs多能性标记物Oct4及细胞表面标记SSEA-1。核型分析检测显示,小鼠EGCs为正常的40条染色体,体内可分化出3个胚层来源的组织,说明小鼠EGCs具有多能性;Real-time PCR结果显示EGCs的印记基因表达量显著高于ESCs。结论12.5dpc PGC来源的EGCs的印记基因处于擦除状态。 展开更多
关键词 胚胎生殖细胞 印记基因 实时定量聚合酶链反应 小鼠
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猪类胚胎生殖细胞体外诱导分化为神经细胞的研究
19
作者 丛义梅 马婧 +5 位作者 孙瑞珍 王健宇 薛冰华 胡魁 尹智 刘忠华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1272-1279,共8页
【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺... 【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;(2)猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现"S"型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;(3)经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神经元及神经胶质细胞标记物的多种神经细胞类型。【结论】从早期性腺中成功分离培养得到了猪类胚胎生殖细胞,通过简单、快速的神经细胞分化的诱导体系证实了猪类胚胎生殖细胞具有体外定向分化为多种神经谱系细胞的能力。 展开更多
关键词 类胚胎生殖细胞 体外诱导 神经细胞 猪
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胚龄及分离方法对小鼠胚胎生殖细胞扩增效率的影响
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作者 王璐 刘永刚 +2 位作者 李芳菲 姜蓉 王亚平 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第16期3083-3088,共6页
目的：应用原始生殖细胞进行全能干细胞的研究具有与胚胎干细胞同样广阔的前景,尤其适合于难以从囊胚内细胞团中分离培养胚胎干细胞的动物。但胚胎生殖细胞体外培养条件一直是制约这方面发展的瓶颈。实验设计了体外有效扩增小鼠原始生... 目的：应用原始生殖细胞进行全能干细胞的研究具有与胚胎干细胞同样广阔的前景,尤其适合于难以从囊胚内细胞团中分离培养胚胎干细胞的动物。但胚胎生殖细胞体外培养条件一直是制约这方面发展的瓶颈。实验设计了体外有效扩增小鼠原始生殖细胞的方法,拟搭建稳定高效的原始生殖细胞培养平台。方法：实验于2006-10/2007-08在重庆医科大学组织胚胎学教研室重庆市生物化学分子药理学重点实验室完成。①实验材料：清洁级昆明孕鼠由重庆医科大学动物实验中心提供,见阴栓计为0.5d胚龄,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取胚龄8．5d胎鼠尾端尿囊及周围组织，取胚龄9．5～10．5d胎鼠后肠及周围组织，取胚龄11．5d，12．5d胎鼠生殖嵴及周围组织，分别经0．25％胰酶一0．02％EDTA消化并接种于0．1％明胶包被的培养皿中。比较不同妊娠时间点取材对原代、F1代胚胎生殖细胞克隆形成的影响。采用SSEA-1免疫组织化学法计数细胞阳性率，计数胚胎生殖细胞克隆联合MTT法比较胚龄11．5d，12．5d两个时间点原始生殖细胞的增殖能力。比较上述两种取材培养方法对胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞扩增的影响。采用碱性磷酸酶染色、免疫组化检测SSEA一1、免疫荧光检测Nanog，体外分化实验鉴定分化能力。结果：①胚龄11．5d，12．5d胎鼠原代和F1代集落形成率较胚龄8．5～10．5d高，扩增效率显著提高（P〈0．01）。②免疫组织化学法检测分离的胚龄11．5d，12．5d原始生殖细胞SSEA-1阳性率差异不显著（P〉0．05）。原代第3天克隆计数显示，胚龄11．5d胎鼠高于12．5胚龄胎鼠（P〈0．01），MTT数据显示11．5胚龄组稍高于12．5胚龄组。③两种方法对胚龄11．5d，12．5d胎鼠胚胎生殖细胞集落形成无显著性差异（P〉O．05），但生长方式有所不同。④克隆胚胎生殖细胞呈典型的胚胎干细胞样集落生长，能稳定传代；碱性磷酸酶、SSEA-1、Nanog表达强阳性：体外能分化为囊状类胚体。结论：胚龄11．5d和12．5d胎鼠，尤其是胚龄11．5d胎鼠扩增原始生殖细胞效率较高，在这两个时间点运用与周围组织共培养法和生殖嵴分离培养法均适宜。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 胚胎生殖细胞 扩增 小鼠
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