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烟草花叶病毒胶体金检测试纸条的制备与性能评价
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作者 王春琼 刘凯 +5 位作者 谢永辉 张轲 刘春明 张晓伟 孙浩巍 陈丹 《轻工学报》 北大核心 2025年第1期90-97,共8页
针对传统烟草花叶病毒(TMV)检测方法耗时较长、应用受限的问题,基于双抗夹心法研发快速定性检测TMV的胶体金检测试纸条,并对其制备条件进行优化,考查其检测限、准确性和特异性。结果表明:该试纸条的适宜制备条件为缓冲液添加量4μL、抗... 针对传统烟草花叶病毒(TMV)检测方法耗时较长、应用受限的问题,基于双抗夹心法研发快速定性检测TMV的胶体金检测试纸条,并对其制备条件进行优化,考查其检测限、准确性和特异性。结果表明:该试纸条的适宜制备条件为缓冲液添加量4μL、抗体质量浓度10μg/mL、NC膜选择CN140型、样本提取液0.02 mol/L PBS;该试纸条对TMV-CP蛋白的检测限为0.1μg/mL,与烟草丛顶病毒、番茄斑萎病毒、马铃薯Y病毒无交叉反应,特异性良好;将其进行实际样品检测,与PCR的总符合率为95.0%,阳性符合率为93.3%,准确性良好。此试纸条在10 min内即可显示检测结果,且操作简单,可用于烟田TMV的快速检测。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 单克隆抗体 胶体金免疫层析技术 试纸条
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斯里兰卡木薯花叶病毒在亚洲的暴发、传播与防控
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作者 王琪琦 潘冉冉 +1 位作者 王亚杰 王晓伟 《生物安全学报(中英文)》 北大核心 2025年第1期20-26,共7页
木薯是重要的经济与粮食作物,由于其出色的耐旱、耐贫瘠、易种植等特性,在全球热带和亚热带地区广泛种植。木薯在生长过程中会受到多种病虫害的威胁,其中分布最广、危害最严重的是木薯花叶病毒(Cassava mosaic virus,CMV)。CMV主要通过... 木薯是重要的经济与粮食作物,由于其出色的耐旱、耐贫瘠、易种植等特性,在全球热带和亚热带地区广泛种植。木薯在生长过程中会受到多种病虫害的威胁,其中分布最广、危害最严重的是木薯花叶病毒(Cassava mosaic virus,CMV)。CMV主要通过带毒茎秆和媒介昆虫烟粉虱传播,可以造成木薯叶片出现斑驳花叶、卷曲甚至枯萎,植株整体长势衰弱,导致木薯产量下降,严重威胁木薯生产。我国和东南亚木薯产区此前并没有CMV发生和危害的报道。可近年来,斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lanka cassava mosaic virus,SLCMV)在东南亚地区广泛传播,已经成为该地区木薯生产的主要病害,对我国的木薯生产也构成了重大威胁。本文围绕SLCMV在亚洲的发生、传播机制和防治策略展开了讨论,以期为防控SLCMV在我国的危害提供参考。 展开更多
关键词 木薯 斯里兰卡木薯花叶病毒 烟粉虱 抗性育种 综合防治
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进境大豆中苜蓿花叶病毒的检测鉴定
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作者 刘鹏 张莹 +5 位作者 王伟 王仲敏 康芬芬 魏亚东 廖芳 胡佳续 《植物检疫》 2025年第1期31-34,共4页
随机选取无明显症状的进境大豆样品,提取植物总RNA,根据NCBI已发布的苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)全基因组序列,设计特异性引物和探针,应用RT-PCR、实时荧光RT-PCR、序列分析等方法对该批次大豆进行检测。结果表明,RT-PCR能... 随机选取无明显症状的进境大豆样品,提取植物总RNA,根据NCBI已发布的苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)全基因组序列,设计特异性引物和探针,应用RT-PCR、实时荧光RT-PCR、序列分析等方法对该批次大豆进行检测。结果表明,RT-PCR能够扩增出特异条带,实时荧光PCR反应出现明显扩增曲线,PCR产物序列与AMV阿根廷株系(GenBank登录号:MW835977.1)相似度达到99.71%。根据上述检测结果,得出该批大豆样品中含有苜蓿花叶病毒。这是我国口岸首次在埃塞俄比亚进境大豆中截获苜蓿花叶病毒。 展开更多
关键词 苜蓿花叶病毒 大豆 RT-PCR 实时荧光RT-PCR 序列分析
原文传递
南京萝卜黄瓜花叶病毒和芜菁花叶病毒的检测及序列分析
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作者 邓智亭 王满 +3 位作者 席敏敏 季英华 徐秋芳 王长春 《浙江师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第4期437-445,共9页
为明确呈现褪绿和花叶症状的南京萝卜的具体病原,应用反转录PCR法对采集的萝卜病样进行了14种病毒的检测及序列分析.结果表明:南京萝卜病样感染了黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV),进... 为明确呈现褪绿和花叶症状的南京萝卜的具体病原,应用反转录PCR法对采集的萝卜病样进行了14种病毒的检测及序列分析.结果表明:南京萝卜病样感染了黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)和芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV),进一步对该萝卜样品中扩增到的CMV外壳蛋白基因(coat protein,CP)序列分析发现,CMV CP基因序列与已公开的苦瓜、烟草和茄子等分离物的CP序列高度同源,序列相似性高达98%,系统进化树表明CMV CP序列属于ⅠB亚组;该萝卜病样的TuMV CP序列与来自韩国、朝鲜及日本等国家的TuMV分离物CP序列同源性最高,相似性达99.65%;系统进化树表明,TuMV CP序列属于TuMV的Basal-BR亚组.研究结果鉴定了南京地区萝卜病样感染的病毒种类,通过CP基因序列分析明确了感染南京萝卜的CMV与TuMV与其他分离物之间的亲缘关系,为制定相应的防控措施提供了理论基础. 展开更多
关键词 萝卜 黄瓜花叶病毒 芜菁花叶病毒 病毒检测 序列分析
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大麦黄条点花叶病毒致病性及流行风险
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作者 张爱红 杨菲 +3 位作者 赵元业 赵怡涵 邸垫平 苗洪芹 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第23期4686-4697,共12页
【目的】大麦黄条点花叶病毒(barley yellow striate mosaic virus,BYSMV)在我国北方麦区分布广泛,研究明确BYSMV对主要作物的致病性以及田间自然寄主,评估病害在禾本科作物种植区的流行风险,为该病害的精准防控提供科学依据。【方法】... 【目的】大麦黄条点花叶病毒(barley yellow striate mosaic virus,BYSMV)在我国北方麦区分布广泛,研究明确BYSMV对主要作物的致病性以及田间自然寄主,评估病害在禾本科作物种植区的流行风险,为该病害的精准防控提供科学依据。【方法】利用携带BYSMV的灰飞虱将病毒人工接种于小麦、玉米、谷子、高粱、燕麦、大麦等151个品种,以未接种材料为对照,观察并分析病毒在不同寄主上的潜育期及症状进展过程;接种30 d后,提取材料总RNA,利用一步法RT-PCR技术检测病毒侵染情况,结合生物学观察及分子生物学检测明确BYSMV对主要作物的致病性;在河北省粮食作物种植区采集580份疑似病毒病症状的植物样品,提取样品总RNA,利用一步法RT-PCR技术检测样品中BYSMV感染率,评估病害的流行风险。【结果】小麦、谷子、大麦、燕麦接种病毒9—10 d后叶片出现褪绿条纹,植株发育迟缓,严重矮化。所有供试品种均能发病,供试小麦品种发病率为60.00%—100%,谷子品种发病率为18.18%—100%,燕麦品种发病率为55.56%—100%,4个大麦品种发病率均为100%。BYSMV侵染甜(糯)玉米、高粱的潜育期为15—17 d,叶片有黄色条纹症状,植株轻微矮化;BYSMV可侵染3个甜(糯)玉米品种并表现症状,甜(糯)玉米发病率为14.29%—21.43%;BYSMV可侵染8份高粱材料,其中6个品种可表现症状,2份材料被侵染后无明显症状,发病率为4.00%—33.33%。田间调查结果显示,小麦、谷子、甜玉米样品中BYSMV检出率分别为78.03%、100%、9.52%,禾本科杂草中狗尾草、小画眉、牛筋草田间检出率分别为75.68%、65.38%、8.33%。灰飞虱接种证实,BYSMV还可侵染虎尾草、雀麦、稗草、二穗短柄草、野燕麦5种植物,发病率分别为100%、82.61%、20.00%、60.71%、10.00%,其中牛筋草、稗草、野燕麦等杂草寄主被BYSMV侵染后无明显症状。【结论】BYSMV对小麦、谷子、大麦、燕麦等禾本科作物致病性较强,目前主栽品种均不抗病,需要重点监测BYSMV的流行动态,防止造成重大灾害;BYSMV对甜(糯)玉米、高粱致病性较弱,而且不同品种抗性存在差异,在病害流行时可以选种抗病品种进行防治;虎尾草、狗尾草、小画眉、牛筋草等杂草易感染BYSMV,是病害流行的重要初侵染源。 展开更多
关键词 大麦黄条点花叶病毒 灰飞虱 寄主 致病性 风险评估
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青蒿中番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒的分子鉴定及相关序列分析
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作者 钟静 李婷婷 +5 位作者 韩天华 李学卫 尹跃艳 陈越 马文广 丁铭 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期244-255,共12页
番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒,对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年,在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩... 番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, TSWV)和烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus, TMV)是2种重要的植物病原病毒,对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年,在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩以及无症状的青蒿Artemisia caruifolia样品共计14份,利用免疫金标速测卡和RT-PCR对其病原病毒进行检测。利用免疫金标速测卡检测结果显示,在所检样品中有9份样品检测出TSWV,检出率为64.28%,有3份样品检测出TMV,检出率为21.43%,2种病毒复合侵染的检出率同样为21.43%;利用RT-PCR对复合侵染的3份样品进行分子检测,结果显示,在3份复合侵染青蒿样品中获得3条TSWV N基因序列、3条TMV cp基因序列和2条TMV RdRp部分序列。TSWV青蒿分离物与分离自云南的TSWV-2分离物相似性最高,为99.6%;TMV青蒿分离物与分离自辽宁的TMV-Shenyang分离物和分离自云南的TMV-Yongren-1相似性最高,均大于99.4%。这是首次发现TSWV和TMV 2种不同属病毒复合侵染青蒿。 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 烟草花叶病毒 青蒿 复合侵染
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我国斯里兰卡木薯花叶病毒的分子特征及致病性分析
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作者 王国芬 李超萍 +5 位作者 时涛 吴会杰 蔡吉苗 李博勋 陆翠梅 黄贵修 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期187-196,共10页
为进一步探究我国斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)的分子特征及致病性。以感染SLCMV的木薯叶片基因组DNA为模板,PCR扩增获得DNA-A和DNA-B基因组全长,通过生物信息软件分析比较其核酸及氨基酸序列特征;构... 为进一步探究我国斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)的分子特征及致病性。以感染SLCMV的木薯叶片基因组DNA为模板,PCR扩增获得DNA-A和DNA-B基因组全长,通过生物信息软件分析比较其核酸及氨基酸序列特征;构建了强、弱致病力分离物(SLCMV-Colombo和SLCMV-DG1922)的侵染性克隆,分别将2种致病力分离物的DNA-A和DNA-B组分进行重组,接种烟草(Nicotianatabacum),比较2种分离物的致病性差异。结果显示:我国SLCMV为“旧世界”双组份菜豆花叶病毒,编码包括AV2基因在内的8个开放阅读框(ORFs);具有双生病毒典型的共同序列(CR)、重复序列、TATABox和TAATATT↓AC茎环结构,Rep蛋白羧基末端有7个氨基酸缺失;我国SLCMV的基因组、编码和非编码区与柬埔寨、泰国和越南分离物的相似性在97.0%~100.0%之间,与印度和斯里兰卡早期的分离物相似性为86.5%~98.6%,DNA-B组份与印度木薯花叶病毒株系(ICMV)编码区序列相似性为95.0%~97.6%,与其他9个非洲木薯花叶病毒株系序列之间的序列相似性均低于80.0%。侵染性克隆接种结果证实,强致病力分离物SLCMV-Col的DNA-A(Col-A)组份在烟草叶片表现典型花叶症状中起主要作用,而我国分离物的DNA-B(DG1922-B)能协同Col-A对烟草产生强致病性。本研究分析了我国SLCMV的全基因组结构,建立的侵染性克隆及其技术为进一步解析SLCMV致病性机理提供重要的研究基础。 展开更多
关键词 斯里兰卡木薯花叶病毒 分子特征 侵染性克隆 致病性
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苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备
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作者 邢飞 王红清 李世访 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期63-69,共7页
苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规... 苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物,以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列,插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化,回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔,制备出多克隆抗血清,稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明,本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性,检测效率高,能够用于田间大量样品ApNMV的诊断. 展开更多
关键词 苹果坏死花叶病毒 外壳蛋白基因 原核表达 抗血清 酶联免疫吸附分析方法
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信前胡烟草花叶病毒lncRNA测序鉴定、原核蛋白表达及其序列分析
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作者 尹明华 郭依瑶 +3 位作者 李启诺 罗泽全 林文龙 熊姿雯 《中国农学通报》 2024年第21期106-113,共8页
本研究对信前胡烟草花叶病毒进行鉴定、原核蛋白表达和序列分析,为信前胡脱毒苗的培育和鉴定提供理论依据。通过lncRNA测序和RT-PCR鉴定信前胡烟草花叶病毒蛋白基因,利用大肠杆菌重组技术表达信前胡烟草花叶病毒蛋白,并采用生物信息学... 本研究对信前胡烟草花叶病毒进行鉴定、原核蛋白表达和序列分析,为信前胡脱毒苗的培育和鉴定提供理论依据。通过lncRNA测序和RT-PCR鉴定信前胡烟草花叶病毒蛋白基因,利用大肠杆菌重组技术表达信前胡烟草花叶病毒蛋白,并采用生物信息学方法进行序列分析。信前胡烟草花叶病毒蛋白基因包括复制酶(ORF1)、运动蛋白(ORF2)和外壳蛋白(ORF3);信前胡烟草花叶病毒复制酶、运动蛋白和外壳蛋白均可通过RT-PCR检测到,并可实现大肠杆菌重组表达,表明信前胡烟草花叶病毒的lncRNA测序结果准确;信前胡烟草花叶病毒复制酶、运动蛋白和外壳蛋白基因cDNA总长度分别为3351 bp、807 bp和480 bp;信前胡烟草花叶病毒复制酶、运动蛋白和外壳蛋白与烟草花叶病毒的亲缘关系较近,同源性分别为99.64%、98.88%、98.74%。信前胡烟草花叶病毒(Peucedanum praeruptorm tobacco mosaic virus,PpTMV)在江西省上饶市信前胡主产区信州、广信、玉山、广丰、婺源、德兴、弋阳的7个区或县均有发生。这是首次报道在信前胡上检测到PpTMV。 展开更多
关键词 信前胡 烟草花叶病毒 lncRNA测序鉴定 RT-PCR 原核蛋白表达 序列分析
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木薯花叶病毒AC4蛋白与AtPARN互作研究 被引量:3
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作者 刘琳玉 赵平娟 +3 位作者 符艳 刘志昕 任艳利 张秀春 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期197-204,共8页
木薯(Manihot esculenta Crantz)作为重要的热带作物,是全球六大粮食作物之一,并为全球近七亿人口提供主粮,然而病毒侵染引起的病害在全球范围内严重威胁木薯产业的发展。木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)是最有威胁的病害之... 木薯(Manihot esculenta Crantz)作为重要的热带作物,是全球六大粮食作物之一,并为全球近七亿人口提供主粮,然而病毒侵染引起的病害在全球范围内严重威胁木薯产业的发展。木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)是最有威胁的病害之一,造成严重的经济损失。斯里兰卡木薯花叶病毒(SriLankancassavamosaicvirus,SLCMV)是引发木薯花叶病的病原物之一,SLCMV是典型的双组分双生病毒,其基因组由DNA-A和DNA-B两个环状组分组成。无义介导的mRNA降解(nonsense-mediatedmRNAdecay,NMD)是真核细胞mRNA降解的主要途径之一,也是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制。越来越多的研究显示,NMD不仅是真核生物重要的mRNA数量、质量调控机制,还与转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing,PTGS)同样能降解病毒RNA,是真核生物普遍存在的抗病毒防御机制。NMD的mRNA衰减过程包括PTC的识别、脱腺苷酸、脱帽和最后的核酸外切酶降解4个过程,UPF1、PARN、DCP2和XRN4分别是上述4个过程中的关键蛋白。病毒是专性寄生生物,必须逃避或耐受寄主细胞的降解,才能成功感染。聚腺苷酸特异性核糖核酸酶[poly(A)-specific ribonuclease,PARN]是NMD信号通路的一个关键因子。目前,关于SLCMV抵御寄主NMD的分子机制尚不明确。本研究采用酵母双杂交(yeast two-hybrid system)和荧光双分子互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)试验证明斯里兰卡木薯花叶病毒(SLCMV)编码的沉默抑制子AC4与拟南芥PARN相互作用。据此推测SLCMV AC4蛋白可能通过与AtPARN相互作用而抑制寄主NMD的病毒防御功能帮助病毒逃避或耐受寄主细胞的降解。研究结果为阐明木薯花叶病毒调控寄主NMD抗病毒防御功能的分子机理奠定基础。 展开更多
关键词 斯里兰卡木薯花叶病毒(SLCMV) AC4蛋白 聚腺苷酸特异性核糖核酸酶(PARN) 酵母双杂交(Y2H) 荧光双分子互补(BiFC)
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山东省小麦土传花叶病毒病的分布与病原鉴定 被引量:4
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作者 吴斌 姜珊珊 +4 位作者 张眉 王升吉 赵玖华 徐德坤 辛相启 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期246-252,共7页
小麦土传花叶病毒病是侵染小麦的一种重要病害,该病害病原有多个病毒种类,主要为小麦黄花叶病毒(WYMV)和中国小麦花叶病毒(CWMV),由禾谷多黏菌以持久性方式传播为害。为明确该病害在山东的最新分布状况,于2013-2016年采用田间调查,结合d... 小麦土传花叶病毒病是侵染小麦的一种重要病害,该病害病原有多个病毒种类,主要为小麦黄花叶病毒(WYMV)和中国小麦花叶病毒(CWMV),由禾谷多黏菌以持久性方式传播为害。为明确该病害在山东的最新分布状况,于2013-2016年采用田间调查,结合dot-ELISA和RT-PCR检测等方法对小麦土传花叶病毒病进行了研究。结果表明,小麦土传花叶病毒病主要分布在鲁南地区,而鲁中、鲁东、鲁北等为零星发生区。WYMV主要分布在临沂、济宁、泰安和枣庄等地;CWMV主要分布在烟台、威海、青岛、临沂和德州等地;烟台、威海、青岛、临沂为两种病毒的混发区。对CWMV主要分布区域(文登、荣成、胶州、莒南、平原、沂水、福山)的CWMV的CP基因进行系统进化聚类分析发现,CWMV的CP基因同源性为94.7%~98.3%,在进化树中聚类为两组,其中,平原、文登、福山和莒南分离物与日本分离物(登录号:AB299272.1)亲缘关系较近,沂水、荣成和胶州分离物与江苏大丰分离物(登录号:EF121374.1)亲缘关系较近。 展开更多
关键词 小麦土传花叶病毒 小麦黄花叶病毒 中国小麦花叶病毒 痛原鉴定
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用甘蔗花叶病毒生物防治烟草蚀纹病毒病 被引量:4
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作者 王秀敏 成巨龙 +1 位作者 吴云锋 魏宁生 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期171-173,共3页
关键词 甘蔗花叶病毒 烟草种植 蚀纹病毒 生物防治 20世纪80年代 MOSAIC virus 种植面积 黄瓜花叶病毒 烟草花叶病毒
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3种麦类土传花叶病毒的多抗制备及检测应用 被引量:4
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作者 任春梅 程兆榜 +5 位作者 朱慧 邰丽娟 陆凤霞 鲍传华 范永坚 周益军 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第11期143-146,共4页
采用PEG二次沉淀和蔗糖硫酸铯密度梯度离心,得到提纯的3种麦类土传花叶病毒(小麦黄花叶病毒、大麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒)。透射电镜观察分别可见线状、直杆状病毒粒子,测定浓度分别达5.44、8.08、4.09 mg/m L。提纯病毒免疫新... 采用PEG二次沉淀和蔗糖硫酸铯密度梯度离心,得到提纯的3种麦类土传花叶病毒(小麦黄花叶病毒、大麦黄花叶病毒、中国小麦花叶病毒)。透射电镜观察分别可见线状、直杆状病毒粒子,测定浓度分别达5.44、8.08、4.09 mg/m L。提纯病毒免疫新西兰大白兔制备抗血清,得到的3株抗血清经酶联免疫吸附法测定效价分别达1∶12 800、1∶25 600、1∶6 400。应用样品和多抗稀释的方阵试验,建立3种多抗的双抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA),并对采自江苏省、安徽省、河南省、山东省的麦子病样进行检测,结果显示,阳性检出率较高,说明这3种病毒仍是我国麦子流行的主要病毒。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 大麦黄花叶病毒 中国小麦花叶病毒 抗血清制备 血清学检测
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河北保定地区黄瓜花叶病毒与马铃薯Y病毒复合侵染叶用莴苣分子鉴定
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作者 陈利达 李畅 +4 位作者 李敬蕊 吕桂云 吴晓蕾 宫彬彬 高洪波 《中国蔬菜》 北大核心 2024年第5期69-74,共6页
利用RT-PCR方法对采集自河北保定地区的疑似叶用莴苣病毒病样品进行分子生物学鉴定,并构建系统发育进化树。结果表明,特异性引物CMV和PVY分别扩增得到大小为260、420 bp的单一条带;通过核苷酸序列Blast比对及系统进化树分析,河北保定地... 利用RT-PCR方法对采集自河北保定地区的疑似叶用莴苣病毒病样品进行分子生物学鉴定,并构建系统发育进化树。结果表明,特异性引物CMV和PVY分别扩增得到大小为260、420 bp的单一条带;通过核苷酸序列Blast比对及系统进化树分析,河北保定地区叶用莴苣病毒分离物分别与印度番茄CMV分离物(MN514839.1)、印度马铃薯PVY分离物(JX945850.1)聚在同一分支上,同源性分别为95%、92%。本研究首次检测到河北保定地区叶用莴苣病毒病是由CMV与PVY复合侵染所致。 展开更多
关键词 叶用莴苣 黄瓜花叶病毒 马铃薯Y病毒 复合侵染
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RNA干扰防控烟草黄瓜花叶病毒的效果
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作者 张倩 郭玉鸽 +7 位作者 曹可心 杨惠娟 张富生 阴广宇 陈雷 李俊营 武兆云 杨铁钊 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第13期139-144,共6页
烟草黄瓜花叶病毒病是危害烟草的重要病害之一,严重影响烟株田间生长发育。为防控烟草黄瓜花叶病毒病,根据已经构建的靶向沉默黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)相关基因的VIGS载体,使用单个载体和混合载体沉默与CMV有关的CMV-1a... 烟草黄瓜花叶病毒病是危害烟草的重要病害之一,严重影响烟株田间生长发育。为防控烟草黄瓜花叶病毒病,根据已经构建的靶向沉默黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)相关基因的VIGS载体,使用单个载体和混合载体沉默与CMV有关的CMV-1a、CMV-2a、CMV-MP和CMV-CP这4个病毒编码蛋白基因,测定基因沉默后CMV-1a、CMV-2a、CMV-MP、CMV-CP相对表达量及CMV浓度,并评价VIGS对烟草黄瓜花叶病毒病的防治效果。结果表明:单独接种和混合接种4种载体烟株均能有效沉默相应靶基因的表达,单独接种时,对CMV-1a、CMV-2a、CMV-MP、CMV-CP的沉默效率分别为10.78%、60.36%、32.92%、58.95%,pTRV2-CMV-2a载体单独接种对CMV-2a基因的沉默效率最高;混合接种对CMV-1a、CMV-2a、CMV-MP、CMV-CP基因的沉默效率分别为18.78%、44.18%、28.33%、35.64%,混合接种也是对CMV-2a基因的沉默效率最高。接种VIGS-TRV载体的烟株在接种病毒后21 d内,单独接种和混合接种载体均有效下调CMV浓度,且混合接种的效果大于单一载体,有效地抑制烟株内CMV的传播,减轻烟草黄瓜花叶病毒病的发病率和病情指数,接种混合载体的效果最佳,为有效防控烟草黄瓜花叶病毒提供了新的方法。 展开更多
关键词 烟草 VIGS 黄瓜花叶病毒 相对基因表达量
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椴叶鼠尾草抗烟草花叶病毒活性成分研究
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作者 王子夫 闫俊伊 +3 位作者 刘洋 吴江梅 闫晓慧 胡世俊 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期68-72,共5页
为寻找新型植物病毒抑制剂,以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,研究发现入侵植物椴叶鼠尾草提取物具有抗TMV活性。通过半叶枯斑法不同施药方式筛选发现,在质量浓度为1 mg/mL时,石油醚萃取物的保护作用和钝化作用最强,抑制率为40.95%和52.8... 为寻找新型植物病毒抑制剂,以烟草花叶病毒(TMV)为供试病毒,研究发现入侵植物椴叶鼠尾草提取物具有抗TMV活性。通过半叶枯斑法不同施药方式筛选发现,在质量浓度为1 mg/mL时,石油醚萃取物的保护作用和钝化作用最强,抑制率为40.95%和52.85%;乙酸乙酯萃取物的治疗作用最强,抑制率为52.85%,与阳性对照药剂宁南霉素无显著差异。石油醚萃取物各馏分中,Fr7的保护作用和治疗作用最好,抑制率为40.51%和45.52%,Fr6的钝化作用最好,抑制率为74.63%。乙酸乙酯萃取物各馏分中,Fr1′的保护作用最强,抑制率为61.77%,Fr3′的治疗作用最强,抑制率为55.02%,Fr4′的钝化作用最强,抑制率为60.22%。运用现代色谱波谱技术分离鉴定了5个化合物分别为tilifodiolide、eupatoric acid、熊果酸、齐墩果酸和2-甲基-5,7-二羟基色原酮。 展开更多
关键词 椴叶鼠尾草 化学成分 分离纯化 烟草花叶病毒(TMV) 抗TMV活性
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两种丛枝菌根真菌和黄瓜花叶病毒复合作用对烟草生长和光合特性的影响
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作者 裴佳 梁瑾 +3 位作者 金夏焕 夏丽娜 贺晓斌 王艳红 《生态科学》 CSCD 北大核心 2024年第1期55-62,共8页
为研究丛枝菌根真菌(AM真菌)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的复合作用对烟草生长的影响,在大棚控制试验中,通过设置4个AM真菌处理水平(接种灭菌混合AM真菌、Funneliformis mosseae、Diversispora versiformis和两者混合菌... 为研究丛枝菌根真菌(AM真菌)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的复合作用对烟草生长的影响,在大棚控制试验中,通过设置4个AM真菌处理水平(接种灭菌混合AM真菌、Funneliformis mosseae、Diversispora versiformis和两者混合菌种)和2个CMV处理水平(不接种和接种),从生理生态学角度来研究其调控作用。结果表明:接种CMV显著降低了未接种AM真菌烟草植株的总干重、净光合速率(Pn)和瞬时水分利用效率(WUE);接种AM真菌显著提高烟草植株的菌根侵染率、菌丝酶活性、总干重、Pn和WUE。无论接种CMV与否,AM真菌的菌根效应均为正值且存在菌种间的差异,以D.versiformis的菌根效应最为显著。可见,接种AM真菌对烟草抗CMV能力具有一定的促进作用,增加烟草植株的光合能力可能是AM真菌增强烟草植株抗CMV能力的主要作用机理。 展开更多
关键词 AM真菌 黄瓜花叶病毒 烟草 光合能力 生物量积累
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基于RPA-CRISPR/Cas12a的番茄花叶病毒可视化检测方法的建立
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作者 董铮 赵振兴 +3 位作者 范奇璇 王思元 周涛 张永江 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期235-241,共7页
番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)属于植物杆状病毒科Virgaviridae烟草花叶病毒属Tobamovirus成员,主要危害番茄和辣椒,多数茄科植物易感染,严重影响果实的品质和产量。本研究根据ToMV编码的外壳蛋白的基因保守序列,设计重组酶... 番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)属于植物杆状病毒科Virgaviridae烟草花叶病毒属Tobamovirus成员,主要危害番茄和辣椒,多数茄科植物易感染,严重影响果实的品质和产量。本研究根据ToMV编码的外壳蛋白的基因保守序列,设计重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)特异性引物和簇状规则间隔短链重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)及相关蛋白12a(CRISPR-associated 12a,Cas12a)的crRNA并挑选报告基因。通过优化反应体系建立了ToMV的快速可视化检测方法,当荧光报告基因FQ终浓度为400 nmol/L、Cas12a/crRNA比例为1∶5、终浓度为200 nmol·L^(-1)/1000 nmol·L^(-1)时检测信号最强,只需RPA和CRISPR/Cas12a分别反应15 min,即可在便携式蓝光照射设备下直接观察到阳性信号。该方法可特异性检测ToMV,对携带ToMV样品的RNA检测灵敏度可以达到172 ag/μL,是普通RT-PCR检测灵敏度的10000倍,可用于ToMV快速灵敏的可视化检测。 展开更多
关键词 番茄花叶病毒 RPA CRISPR/Cas12a 可视化检测
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中国小麦花叶病毒(CWMV)外壳蛋白(CP)特异性抗体的制备与应用
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作者 沈峥嵘 戴远兴 +2 位作者 郭留明 汪芷瑶 张恒木 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2042-2050,共9页
中国小麦花叶病毒(CWMV)是浙江省农业科学院发现并鉴定的一种土传病毒,其RNA2编码的外壳蛋白(CP)在病毒侵染过程中发挥重要功能。为了检测该蛋白表达并分析其生物学功能,该研究采用RT-PCR方法从感染CWMV小麦病叶中扩增获得CP基因,并通过... 中国小麦花叶病毒(CWMV)是浙江省农业科学院发现并鉴定的一种土传病毒,其RNA2编码的外壳蛋白(CP)在病毒侵染过程中发挥重要功能。为了检测该蛋白表达并分析其生物学功能,该研究采用RT-PCR方法从感染CWMV小麦病叶中扩增获得CP基因,并通过In-Fusion技术构建了CWMV CP重组表达载体,将其导入BL21(DE3)菌株诱导表达;原核表达的重组CP蛋白经镍柱亲和层析纯化后注射免疫家兔,收集抗血清经亲和层析纯化获得CP多克隆抗体。Dot-ELISA、ID-ELISA、Western blot显示,该抗体不仅对CWMV具有高度的特异性,而且其效价高达1∶2.048×10^(7)、灵敏度达6.25×10^(-2)ng。应用该抗体采用Dot-ELISA、Western blot方法检测田间小麦样品显示其可用于CWMV的准确诊断,这为CWMV病毒病检测、CP定量分析及其功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 中国小麦花叶病毒 外壳蛋白 重组蛋白 多克隆抗体
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斯里兰卡木薯花叶病毒AC2与拟南芥SGS3蛋白互作研究
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作者 刘雪婷 谢秋贤 +3 位作者 刘琳玉 符艳 张秀春 任艳利 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第7期1323-1331,共9页
木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)对我国和世界木薯生产造成严重威胁和危害,目前尚无有效防治方法且缺乏抗性材料,造成严重经济损失,被认为是最有威胁性的病毒病之一,斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,... 木薯花叶病毒病(cassava mosaic disease,CMD)对我国和世界木薯生产造成严重威胁和危害,目前尚无有效防治方法且缺乏抗性材料,造成严重经济损失,被认为是最有威胁性的病毒病之一,斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)是引起木薯花叶病的主要病原之一。RNA沉默是植物和动物先天性的一种抗病毒免疫反应机制,寄主转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing,PTGS)是真核生物中一种保守的基因表达调控机制,也是重要的抗病毒免疫机制之一。寄主基因沉默抑制子(suppressor of gene silencing 3,SGS3)是PTGS通路的关键蛋白,在寄主抵御病毒侵染中发挥着关键作用。为抵御宿主这种免疫反应,病毒通常编码病毒沉默抑制子(viral suppressors of RNA silencing,VSRs)来抵御寄主PTGS的病毒防御机制,与寄主蛋白互作是沉默抑制子发挥作用的主要作用机制之一。为探究SLCMV AC2是否通过与AtSGS3互作而抑制寄主PTGS的免疫功能,本研究采用酵母双杂交技术(yeast two hybrid system,Y2H)和双分子荧光互补技术(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)分析SLCMV AC2与AtSGS3之间的相互作用。结果表明:SLCMV AC2与AtSGS3蛋白在酵母细胞和植物体内均存在相互作用的关系。亚细胞共定位研究进一步证明SLCMV AC2在与AtSGS3互作后,可与AtSGS3形成siRNA-body的RDR6发生共定位。这些结果表明SLCMV AC2可能通过与siRNA-body互作而影响寄主自身免疫机制,提高病毒致病性,SLCMV AC2与AtSGS3的互作可能是SLCMV侵染木薯导致花叶症状发生的分子基础。该研究结果为后续深入解析SLCMV致病机理提供新的理论依据。 展开更多
关键词 斯里兰卡木薯花叶病毒 SLCMV AC2 AtSGS3 蛋白互作
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