cGAS蛋白促进PCV-2茎环结构诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应研究

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作者 苏冰 邓治邦 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第13期59-65,71,共8页

为了探索猪圆环病毒2型(PCV-2)DNA茎环结构是否可以激活环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS),以及是否诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应,试验将含有PCV-2茎环结构的单链DNA(SL-DNA)转染至PK15细胞中,通过Western-blot检测cGAS蛋白是否在PK15... 为了探索猪圆环病毒2型(PCV-2)DNA茎环结构是否可以激活环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cGAS),以及是否诱导cGAS-STING信号通路天然免疫反应,试验将含有PCV-2茎环结构的单链DNA(SL-DNA)转染至PK15细胞中,通过Western-blot检测cGAS蛋白是否在PK15细胞中表达;将SL-DNA转染至过表达及敲除cGAS蛋白的PK15细胞中,通过实时荧光定量PCR检测细胞中cGAS、干扰素刺激基因(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的表达水平。结果表明:SL-DNA转染后,PK15细胞中cGAS蛋白表达量上升;过表达cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著升高(P<0.01);敲除cGAS蛋白的PK15细胞与PK15细胞相比,SL-DNA转染后cGAS、STING、TBK1、IRF3、IFN-β、IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达量均极显著降低(P<0.01)。说明cGAS蛋白可以识别PCV-2的茎环结构,并且促进其诱导的cGAS-STING信号通路天然免疫反应。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 茎环结构 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 cGAS-STING信号通路 天然免疫反应

原文传递

SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究 被引量：1

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作者 王红钢 马欢 +4 位作者 李珠 张彬 景向阳 张媛 吕占军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期337-346,共10页

研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45... 研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45R(2F2R 5′端的45 bp)、30R和22R可以活化基因,且二串连体活化基因作用高于单体。Secloop(2F2R近中部的22 bp)和Poly4(2F2R 3′端的30 bp)不能活化基因。30R与Poly4用9碱基连接形成30R-Poly4,其活化基因作用低于2F2R,两个22R之间连接碱基数对活化GFP基因作用没有明显的影响。22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′)含有不完整的回文序列,可以形成不完整的茎环结构,包括一个3碱基loop、3 bp第一茎、2碱基泡和3 bp第二茎。改变22R茎环结构的碱基突变明显影响其活化GFP基因的作用,过多互补和过少互补的茎环结构均不利于活化基因,提示适当的不完整茎环结构与活化基因有关。 展开更多

关键词 非编码序列 GFP 茎环结构 ALU SV40PolyA

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茎环结构DNA循环放大技术测定水样中的痕量银离子 被引量：4

3

作者 杜平 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期666-671,共6页

利用茎环结构DNA的循环杂交放大作用和碱基C与Ag^+之间的稳定结构,设计了一种高灵敏性的表面增强拉曼生物传感器用于水样中Ag^+的检测。首先制备了携带有大量拉曼信号分子的纳米金生物条码作为拉曼信号探针。然后通过酰胺键将捕获DNA固... 利用茎环结构DNA的循环杂交放大作用和碱基C与Ag^+之间的稳定结构,设计了一种高灵敏性的表面增强拉曼生物传感器用于水样中Ag^+的检测。首先制备了携带有大量拉曼信号分子的纳米金生物条码作为拉曼信号探针。然后通过酰胺键将捕获DNA固载在磁珠表面上,利用C-Ag^+-C形成的稳定结构和链式循环杂交反应放大技术,将含有大量拉曼信号DNA分子的纳米金颗粒通过生物素和链霉亲和素的特异性结合到磁珠上,最后通过SERS技术实现了溶液中Ag^+的检测。最佳实验条件下,当固定磁珠捕获DNA浓度为1.0×10^(-7)M,Tris-HCl缓冲溶液为pH7.4,37℃下杂交反应2.5 h后,Ag^+的浓度与拉曼信号强度呈良好的线性关系,测定线性范围为1.0×10^(-7)~1.0×10^(-12)M,检测限1.0×10^(-12)M(S/N=3)。该传感器用于海产品中Ag^+的测定,测定值与ICP-AES的测定值基本一致。 展开更多

关键词 茎环结构DNA 杂交循环放大表面增强拉曼技术 AG^+

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用序列比对设计的茎环结构探针检测金黄色葡萄球菌 被引量：1

4

作者 杨旭 肖潇 +2 位作者 陈章 李会东 邓乐 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1169-1173,共5页

基于金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列,采用序列比对设计了一种茎环结构的寡聚核苷酸探针。探针的环序列即为金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列的其中一个片段,同其他菌种的16S rRNA基因序列误配2个以上的核苷酸,因此能高度专一、灵敏的检... 基于金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列,采用序列比对设计了一种茎环结构的寡聚核苷酸探针。探针的环序列即为金黄色葡萄球菌16S rRNA基因序列的其中一个片段,同其他菌种的16S rRNA基因序列误配2个以上的核苷酸,因此能高度专一、灵敏的检测金黄色葡萄球菌16S rRNA。根据分子信标技术和酶联免疫分析的原理,评估一个实验方法,即利用能构象转换的、固定化的茎环结构探针酶联检测靶核酸。由于探针的特异性加强,这个检测系统能有效的排除假阳性即不会出现误配一个核苷酸的情况。采用微量浓度测定分析,最低下限可检测出大约4ng的金葡球菌16SrRNA。这种方法的灵敏度比其他常规检测方法高出了至少一个数量级。 展开更多

关键词 序列比对 茎环结构探针 16S核糖体核糖核酸 检测

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带发夹茎环结构反义核酸的体外稳定性研究

5

作者 黄爱琼 姚志强 +2 位作者 周永兴 时德仁 刘志红 《实用肝脏病杂志》 CAS 1997年第4期217-217,共1页

反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynu-cleotide,asON)在体外进行抗病毒基因复制与表达研究国内外已有多篇报道,但其应用于体内主要障碍之一是易被血清中各种核酸酶降解,因此,成药性修饰成为其临床应用前景的关键,核酸酶降解未修饰或硫... 反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynu-cleotide,asON)在体外进行抗病毒基因复制与表达研究国内外已有多篇报道,但其应用于体内主要障碍之一是易被血清中各种核酸酶降解,因此,成药性修饰成为其临床应用前景的关键,核酸酶降解未修饰或硫代磷酸化修饰的asON一般是从3′端逐渐外切(Antisense Re- 展开更多

关键词 反义核酸 茎环结构 体外稳定性 反义寡核苷酸 酶降解 西安市 第四军医大学 传染科 体内稳定性 发夹

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茎环结构DNA电化学传感芯片对PML/RARα mRNA的检测

6

作者 陈婧 《电子测试》 2013年第8X期120-121,共2页

PML/RARα融合基因是急性早幼粒细胞白血病的分子学标志,本文根据期其碱基序列设计了茎环结构DNA探针(HP),并且采用电化学酶联免疫分析技术构建出多通道电化学传感芯片,对人工合成的PML/RARα融合基因片断进行检测。实验结果显示:该传... PML/RARα融合基因是急性早幼粒细胞白血病的分子学标志,本文根据期其碱基序列设计了茎环结构DNA探针(HP),并且采用电化学酶联免疫分析技术构建出多通道电化学传感芯片,对人工合成的PML/RARα融合基因片断进行检测。实验结果显示:该传感芯片对mRNA的检测限为5.0×10-14 M,检测电流值与靶序列的浓度在0.5-300 pM范围保持良好的线性关系。说明该方法能很好识别完全互补序列与单碱基突变序列,可以实现对PML/RARα融合基因定性定量的测定。 展开更多

关键词 茎环结构 PML/RARΑ融合基因 DNA电化学传感芯片

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以茎环结构为模板的DNA银纳米簇合成及其检测方法应用

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作者 陈英 沈福苗 +5 位作者 金萍 纪丽君 丁洪流 钱和 郭亚辉 姚卫蓉 《科技通报》 2020年第9期90-96,共7页

以DNA为模板合成的银纳米簇是一类优异的荧光物质,它可以在DNA模板上通过简单的步骤原位合成。由于其尺寸小,量子产率高,发射波长可调以及较低的毒性,很好的生物相容性而受到广泛的关注和研究。DNA银纳米簇的性质在很大程度上取决于DNA... 以DNA为模板合成的银纳米簇是一类优异的荧光物质,它可以在DNA模板上通过简单的步骤原位合成。由于其尺寸小,量子产率高,发射波长可调以及较低的毒性,很好的生物相容性而受到广泛的关注和研究。DNA银纳米簇的性质在很大程度上取决于DNA模板。茎环结构(发夹结构)DNA是单链DNA的一种特殊的二级结构,其由双链茎部及单链的环部组成,其双链部分使发夹结构具有一定的刚性,能更好的稳定银纳米簇,同时其单链环部可以作为银纳米簇很好的合成支架。本文立足于茎环结构DNA模板化的银纳米簇,总结了该银纳米簇的合成及其检测应用的研究进展,将会为预测并设计具有优异荧光性质的DNA银纳米簇提供理论基础,有望进一步拓展DNA银纳米簇在检测上的应用。 展开更多

关键词 DNA 银纳米簇 茎环(发夹)结构 合成 检测

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与猪圆环病毒2型基因组茎环结构相互作用的宿主细胞蛋白的筛选 被引量：3

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作者 张辉 唐青海 +5 位作者 危艳武 黄立平 张志慧 刘建波 吴洪丽 刘长明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1211-1216,共6页

利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库... 利用酵母单杂交技术对猪圆环病毒2型(PCV2)基因组复制起始处茎环结构序列与PK-15细胞中的互作蛋白进行了筛选和鉴定。首先将合成的PCV2复制起始处的茎环结构序列整合到酵母染色体中构建诱饵酵母菌株;采用SMART技术合成PK-15细胞cDNA文库,将总cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化酵母诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建,以药物筛选阳性克隆;通过酵母菌落PCR得到阳性克隆中的cDNA插入片段,通过序列分析对此予以确认。本试验成功地构建了酵母单杂交文库,筛选出1.01×106个酵母克隆,其中196个为阳性克隆。经PCR产物测序,并通过NCBI Blast法进行序列比对,确定有4种蛋白可与PCV2基因组茎环序列发生作用。本研究从宿主细胞cDNA文库中筛选到4种可与PCV2基因组茎环序列发生作用的蛋白,为下一步阐明这些宿主蛋白对PCV2复制的调节作用奠定了基础。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 茎环结构 宿主细胞 互作蛋白

原文传递

基于具有多茎环特征GA-SVM的人类Pre-miRNA的预测研究

9

作者 熊大鹏 刘蓉杰 +4 位作者 胡凯 谭艳平 张园 唐广宇 曾寅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1174-1178,共5页

MicroRNA(miRNA)是一类长度约为21 nt的非编码RNA,在动植物中发挥着重要而广泛的转录后调控作用.现有的计算预测方法通常不能很好地识别具有多分枝茎环二级结构的pre-miRNA.为进一步提高对pre-miRNA的预测精度,本文在以往研究的基础上,... MicroRNA(miRNA)是一类长度约为21 nt的非编码RNA,在动植物中发挥着重要而广泛的转录后调控作用.现有的计算预测方法通常不能很好地识别具有多分枝茎环二级结构的pre-miRNA.为进一步提高对pre-miRNA的预测精度,本文在以往研究的基础上,新引用了一类多茎环生物学特征,将遗传算法(GA)与支持向量机(SVM)结合以进行特征选择,同时优化SVM分类器模型参数(c,g),并对数据集的不平衡性进行处理,构造出新的分类器.本文采用人类pre-miRNA作为研究数据集,通过5折交叉验证,实验结果显示,新的分类器能够有效地提高预测精度. 展开更多

关键词 PRE-MIRNA 多分枝茎环结构 计算预测 遗传算法(GA) 支持向量机(SVM)

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猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非翻译区中一顺式结构因子对病毒感染必要性的分析 被引量：2

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作者 高飞 陆嘉琦 +1 位作者 袁世山 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第1期1-9,共9页

人们广泛认为动脉炎病毒的基因组5'非翻译区(untranslated region,UTR)在病毒基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用,然而其结构与功能仍然在很大程度上不为人知。现基于2型猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(Porc... 人们广泛认为动脉炎病毒的基因组5'非翻译区(untranslated region,UTR)在病毒基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录和蛋白翻译过程中发挥关键作用,然而其结构与功能仍然在很大程度上不为人知。现基于2型猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染性克隆pAPRRS的基础,构建了一系列5'UTR的5'末端缺失突变体,利用RNA和DNA转染,分析了拯救病毒的遗传学与病毒学特征,发现拯救病毒的5'末端突变位点被一些不知来源的AU-rich外源序列所修复。基于T7启动子与CMV启动子转录起始位点的不同,我们人为引入一段GC-rich的序列以研究病毒的自我修复是否为模板依赖性,结果发现病毒的外源序列修复机制是非模板依赖的。通过二级结构预测分析发现,在PRRSV5'UTR中的第一个茎环结构是病毒感染性必不可少的。 展开更多

关键词 非翻译区 茎环结构 回复突变体 RNA/DNA导策

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小米psbA基因5'末端非编码区的结构特征

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作者 黄瑶 吴乃虎 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期119-123,共5页

以小米(Setaria italica)为材料,克隆了含有叶绿体psbA基因的2.2kb EcoRⅠ片段,测定了该基因5＇末端非编码区的核苷酸序列。序列分析显示psbA基因5＇末端非编码区存在着与原核类似的启动子结构,其“-10”区的序列为TATACT,与原核生物“... 以小米(Setaria italica)为材料,克隆了含有叶绿体psbA基因的2.2kb EcoRⅠ片段,测定了该基因5＇末端非编码区的核苷酸序列。序列分析显示psbA基因5＇末端非编码区存在着与原核类似的启动子结构,其“-10”区的序列为TATACT,与原核生物“-10”共有基序(Consensus motif)仅相差一个核苷酸;其“-35”区的序列为TTGACA,与原核生物“-35”共有基序完全相同。另外,在“-10”区和“-35”区之间还存在着一个类似真核启动子结构的“TATATA”保守序列。这些结果表明小米psbA基因的启动子既具有原核的特征又具有真核的特征。小米psbA基因的mRNA前导序列长87bp,与高粱完全一致,而比水稻多出了“CTATTTT”7个核苷酸,比小麦、大麦和黑麦多出了“TTTT”4个核苷酸。因此推测在禾本科的C_3和C_4植物之间,psbA基因mRNA前导序列区的差异可能具有普遍性。计算机分析结果显示,以上6种植物的psbA基因mRNA前导序列区内均能形成小的茎环结构,而且这段“CTATTTT”额外序列恰好位于茎环结构中,造成了6种植物间茎环大小的差异。这一小的二级结构可能对psbA基因的表达调控有一定的影响。 展开更多

关键词 小米 PSBA基因 启动子 茎环结构

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核糖开关与基因表达调控 被引量：5

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作者 韩祥东 刘薇 +1 位作者 吴存祥 冯永君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1094-1100,共7页

核糖开关(riboswitch)是近几年基因表达调控研究的一个热点.核糖开关位于mRNA的非翻译区(untranslated regions,UTR),能够直接感受胞内外信号并引起自身二级结构的变化,在转录或后转录(翻译和mRNA稳定性)水平实现对下游相关基因的表达调... 核糖开关(riboswitch)是近几年基因表达调控研究的一个热点.核糖开关位于mRNA的非翻译区(untranslated regions,UTR),能够直接感受胞内外信号并引起自身二级结构的变化,在转录或后转录(翻译和mRNA稳定性)水平实现对下游相关基因的表达调控,该过程不依赖于包括蛋白质在内的其它任何因子的作用.根据现已发现的核糖开关所能识别的信号因子类型,可以将其分为4类,即小分子代谢物、金属离子、环境因素及空载tRNA敏感的核糖开关;其中,小分子代谢物敏感的核糖开关是发现和研究最多且最深入的一类.随着研究的深入,将会有更多的核糖开关被发现,这不仅有助于理解生物进化与环境适应性,而且在生物学基础研究,新型药物的开发以及工业生产领域都将发挥重要作用. 展开更多

关键词 核糖开关 基因表达调控 茎环结构 适体 配体

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绞股蓝核糖体失活蛋白家族编码基因的5个cDNA及其下游非编码区 被引量：1

13

作者 林毅 谢荔岩 +3 位作者 陈国强 吴祖建 谢联辉 林奇英 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期163-168,共6页

通过3'RACE克隆策略获得绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(ribosome-inac-tivating protein,RIP)Gynostemmin的5个cDNA序列gynostemminⅠ￣Ⅴ及其下游非编码区(3'untranslatedregion,3'UTR)。它们的编码区长... 通过3'RACE克隆策略获得绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(ribosome-inac-tivating protein,RIP)Gynostemmin的5个cDNA序列gynostemminⅠ￣Ⅴ及其下游非编码区(3'untranslatedregion,3'UTR)。它们的编码区长度除gynostemminⅡ为825bp外,其余均为831bp。其下游非编码区的长度分别为279、174、170、161和171bp。在3'UTR中,gynostemminⅠ比另外4个多了两个小的茎环结构和一富含AU的不稳定子元件,其mRNA的稳定性可能因此受到影响。 展开更多

关键词 非编码区 核糖体失活蛋白 绞股蓝 下游 编码基因 家族 cDNA序列 RACE 茎环结构 mRNA 稳定子 稳定性 长度 克隆

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核糖体失活蛋白的研究进展 被引量：28

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作者 李建国 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第4期566-570,共5页

核糖体失活蛋白是一类作用于rRNA而抑制核糖体功能的毒蛋白,广泛存在于高等植物体内。核糖体失活蛋白分为3类:第1类是单肽链蛋白,分子量大约30kD,一般为碱性糖蛋白,具有RNAN-糖苷酶活性;第2种类型是异源二聚体蛋白,分子量大约为60kD,A... 核糖体失活蛋白是一类作用于rRNA而抑制核糖体功能的毒蛋白,广泛存在于高等植物体内。核糖体失活蛋白分为3类:第1类是单肽链蛋白,分子量大约30kD,一般为碱性糖蛋白,具有RNAN-糖苷酶活性;第2种类型是异源二聚体蛋白,分子量大约为60kD,A链具有RNAN-糖苷酶活性,B链是一个对半乳糖专一的凝集素,B链可以分别或同时与真核细胞表面的糖蛋白或糖脂的半乳糖部分结合,介导A链逆向进入胞质溶胶;第3种类型是先合成无活性的核糖体失活蛋白前体,然后在涉及形成活性位点的氨基酸之间进行酶解加工。核糖体失活蛋白通过对核糖体大亚基RNA的3'端茎环结构中一个高度保守的核苷酸区域的作用,破坏核糖体大亚基RNA的结构,使核糖体失活。核糖体失活蛋白的功能主要通过2个方面产生,即RNA的N-糖苷酶活性和RNA水解酶的活性。核糖体失活蛋白不仅对病毒具有广谱抗性,而且对真菌和昆虫也有抗性。核糖体失活蛋白可以给植物提供对病毒和真菌的广谱抗性,这为我们利用有关的核糖体失活蛋白基因提高植物对病毒和真菌的抗性提供了一条新的途径。 展开更多

关键词 核糖体失活蛋白 研究进展 N-糖苷酶 广谱抗性 异源二聚体 rRNA 植物体内 细胞表面 胞质溶胶 活性位点 茎环结构 蛋白基因 分子量 糖蛋白 半乳糖 大亚基 毒蛋白 体功能 凝集素 氨基酸 核苷酸 水解酶 病毒 真菌 类型 A链

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猪繁殖与呼吸综合征病毒基因表达调控序列的初步解析

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作者 高飞 孙志 +7 位作者 郑海红 袁海峰 刘长龙 陆嘉琦 刘萍 尹扬 袁世山 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第6期65-70,共6页

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界养猪业的一个巨大的威胁。近年来,此病给各国养猪业造成了巨大的经济损失。本文立足于反向遗传操作技术,介绍了调控PRRS病毒粒子的感染性、基因组RNA复... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界养猪业的一个巨大的威胁。近年来,此病给各国养猪业造成了巨大的经济损失。本文立足于反向遗传操作技术,介绍了调控PRRS病毒粒子的感染性、基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录以及翻译等重要过程的顺式调控元件的一级序列和高级结构的最新研究进展。 展开更多

关键词 非翻译区 茎环结构 假结

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基于硒蛋白生物合成机制的硒生物检测器

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作者 邱洋松 孙婧 +5 位作者 孙爱 邬丹妮 张冰倩 马建辉 徐丽珊 孙梅好 《安徽农业科学》 CAS 2013年第11期4729-4734,共6页

硒是许多生物的必需微量元素,与人类健康关系密切。硒在自然界中分布的不平衡导致不同地区的硒含量差异较大,易引起硒缺乏或者中毒。原核生物的硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Sec)及硒蛋白的生物合成途径已较为清楚,此为构建硒酸盐生物... 硒是许多生物的必需微量元素,与人类健康关系密切。硒在自然界中分布的不平衡导致不同地区的硒含量差异较大,易引起硒缺乏或者中毒。原核生物的硒代半胱氨酸(Selenocysteine,Sec)及硒蛋白的生物合成途径已较为清楚,此为构建硒酸盐生物检测器,进而补充目前常用硒含量测定方法提供了可能。该研究利用原核载体构建硒代半胱氨酸插入所需茎环结构(Selenocysteine insertion se-quence,SECIS)及其突变载体,通过氨苄青霉素筛选获得高效、高准确率的SECIS,并以此构建GFP超表达载体pSEGFP。通过pSEGFP和pSelABC共转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达,测定分析发现胞质蛋白的荧光强度与培养基硒酸盐浓度在一定范围内具有较好的线性关系。此结果表明,试验已初步构建了大肠杆菌硒生物检测器,为利用此方法进一步分析测定环境及生物样品中的硒含量奠定了基础。 展开更多

关键词 硒蛋白 硒代半胱氨酸 生物检测器 茎环结构

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植物小RNA的巨大作用 被引量：1

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作者 明凤 《世界科学》 2008年第10期26-27,共2页

microRNA(或miRNA)是一种长度介于20～24个核苷酸的单链RNA,由III型RNase Dicer从含有茎环结构的内源转录本中切割产生。作为一种负调控因子,miRNA作用于它们的靶标mRNA,能够在转录或翻译水平上对基因的表达起到调控作用。从1993年首个m... microRNA(或miRNA)是一种长度介于20～24个核苷酸的单链RNA,由III型RNase Dicer从含有茎环结构的内源转录本中切割产生。作为一种负调控因子,miRNA作用于它们的靶标mRNA,能够在转录或翻译水平上对基因的表达起到调控作用。从1993年首个miRNA在线虫中的发现开始,到2002年第一个植物miRNA的发现,miRNA引发了世界各国科学家的极大兴趣与高度重视,其普遍性和重要性才逐渐被人们所认识。miRNA于2002年成为当年十大科技榜首之位。 展开更多

关键词 小RNA 植物 miRNA MICRORNA RNASE DICER 负调控因子 茎环结构

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22R序列loop和泡突变对GFP报告基因表达的作用

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作者 王红钢 王予东 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2011年第4期255-259,共5页

目的:我们研究室的前期工作在猴空泡病毒40(SV40)早期mRNA PolyA序列(SV40PolyA)中发现1个活化基因的原件22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′),该片段可以解除Alu串连序列(或Line-1重复序列)对GFP报告基因的抑制作用。我们研究22R突变... 目的:我们研究室的前期工作在猴空泡病毒40(SV40)早期mRNA PolyA序列(SV40PolyA)中发现1个活化基因的原件22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′),该片段可以解除Alu串连序列(或Line-1重复序列)对GFP报告基因的抑制作用。我们研究22R突变对GFP报告基因表达的作用。方法:将22R及其突变片段插入pEGFP-C1质粒,构建表达载体,瞬时转染HeLa细胞,荧光显微镜下计数观察GFP荧光阳性细胞数。结果:AAG、AGA、TGT、TTG和TGC(22R,野生型)5个质粒促进基因表达作用比较明显。VECT、VEGT、VETA、VETC、VETG和VETT明显促进GFP基因表达。结论:22Rloop和泡的突变对其活化GFP报告基因作用有重要影响。 展开更多

关键词 SV40PolyA 22R GFP 茎环结构 转染

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MiRdetector:一个预测与搜寻miRNA基因的计算工具 被引量：2

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作者 张冬宁 刘阳 王翼飞 《上海大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期376-382,共7页

MicroRNA（miRNA）是一类内源性的长约21～24nucleotide（nt）的非编码小分子RNA，能够调节其它基因的表达活性，在生物体的发育过程中发挥重要的作用．每种生物体中miRNA的基因总数还未知，生物信息学分析手段为发现新的miRNA基因提供... MicroRNA（miRNA）是一类内源性的长约21～24nucleotide（nt）的非编码小分子RNA，能够调节其它基因的表达活性，在生物体的发育过程中发挥重要的作用．每种生物体中miRNA的基因总数还未知，生物信息学分析手段为发现新的miRNA基因提供了有效的方法．作者开发了一个预测与搜寻miRNA基因的完全自动化系统“MiRdetector”．MiRdetector系统是基于计算机比对和miRNA前体茎环结构判断的．用水稻miRNA基因对系统的预测精度进行了检验。系统正确识别了155个样本中的140个，预测精度达到90．32％，并且搜寻到了95个可能的水稻miRNA基因。由于系统的假阳性率较低，因此能够为进一步证实miRNA基因的实验研究提供高质量的数据集． 展开更多

关键词 miRNA基因 系统 MiRdetector BLASTN 生物基因组 茎环结构

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microRNA在自身免疫性疾病中的研究进展 被引量：5

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作者 郭莹 瞿文 +1 位作者 王一浩 邵宗鸿 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1237-1240,1244,共5页

microRNA（miRNA）是一类能够调节基因表达的短单链内源非编码RNA,人体30%编码蛋白的RNA受miRNA调节,这种带有茎-环结构的miRNA主要通过与互补的mRNA结合引起RNA降解或翻译抑制,对基因的表达起调控作用,进而调节细胞发育、增殖、分化、... microRNA（miRNA）是一类能够调节基因表达的短单链内源非编码RNA,人体30%编码蛋白的RNA受miRNA调节,这种带有茎-环结构的miRNA主要通过与互补的mRNA结合引起RNA降解或翻译抑制,对基因的表达起调控作用,进而调节细胞发育、增殖、分化、凋亡以及肿瘤的发生。 展开更多

关键词 MICRORNA 自身免疫性疾病 细胞分化 茎-环结构 翻译抑制 基因沉默 编码蛋白 免疫调控 信号通路 调节基因

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