银耳芽孢总蛋白提取方法的建立 被引量：4

1

作者 刘洋 朱涵予 +2 位作者 许丹云 张丽姣 马爱民 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第9期35-39,共5页

采用超声波与高压均质破碎细胞,通过显微观察细胞破碎效果、Bradford法测定蛋白含量并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,比较了三羟甲基氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)methyl?aminomethane,Tris)-饱和酚法、三氯乙酸(trichloro... 采用超声波与高压均质破碎细胞,通过显微观察细胞破碎效果、Bradford法测定蛋白含量并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,比较了三羟甲基氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)methyl?aminomethane,Tris)-饱和酚法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)-丙酮沉淀法及Tris-饱和酚结合TCA-丙酮沉淀法提取银耳芽孢总蛋白的效果。结果表明:高压均质的细胞破碎效果优于超声波,3种方法所得到的银耳芽孢总蛋白质量浓度分别为2.33、1.26、1.02 mg/m L,且Tris-饱和酚法经传统考马斯亮蓝染色法染色所得电泳条带亮度及清晰度均优于其他两种方法。因此,Tris-饱和酚法是进行银耳芽孢总蛋白提取的一种有效方法。 展开更多

关键词 银耳 芽孢 蛋白提取方法

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黄芪蛋白提取方法的比较 被引量：7

2

作者 刘杨 包华音 +1 位作者 刘德丽 单成钢 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第20期76-78,共3页

目的:应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术筛选建立黄芪蛋白质指纹图谱及蛋白提取方法。方法:采用8种提取方法(稀释4倍的浓缩胶缓冲液,双蒸水,Tris-HCl法,柠檬酸盐法,PVP buffer,改良饱和酚法,TCA-丙酮法,植物蛋白提取试剂盒)提取... 目的:应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术筛选建立黄芪蛋白质指纹图谱及蛋白提取方法。方法:采用8种提取方法(稀释4倍的浓缩胶缓冲液,双蒸水,Tris-HCl法,柠檬酸盐法,PVP buffer,改良饱和酚法,TCA-丙酮法,植物蛋白提取试剂盒)提取黄芪药材的水溶性蛋白质,根据PAGE谱带的多少和清晰度优选建立黄芪药材蛋白质指纹图谱的蛋白提取条件。结果:植物蛋白质提取液、稀释4倍的浓缩胶缓冲液和Tris-HCl缓冲液提取的蛋白含量较高,但杂质较多,条带拖尾,部分特征峰不能得到有效分离。TCA-丙酮法、改良饱和酚法、柠檬酸盐缓冲液和PVP buffer提取的蛋白含量较低,谱带数目较少,辨识度低。以双蒸水为提取溶剂时可辨识谱带数目最多,清晰度较好,电泳指纹图谱中各峰的分离度较高。结论:双蒸水直接提取法更适用于建立黄芪药材的蛋白质指纹图谱。 展开更多

关键词 黄芪 生物指纹图谱 聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白提取方法

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适于双向电泳分析的苹果叶片蛋白质提取方法 被引量：14

3

作者 曾广娟 李春敏 +2 位作者 张新忠 滕云龙 董文轩 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期484-488,共5页

为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilize... 为了探索适用于双向电泳（2-DE）分析的苹果叶片蛋白质提取方法,比较了三氯乙酸（TCA）/丙酮沉淀法、二硫苏糖醇（DTT）/丙酮法、Tris-HCl提取法和改良的Tris-HCl提取法等4种蛋白质提取方法。以7cm、pH3-10的线性固相pH梯度（immobilized pH gradient,IPG）胶条作为第一向电泳,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）（12.5%的分离胶）作为第二向电泳,对提取物进行2-DE分离,采用银染显色。结果表明,上述4种方法在2-DE图谱上分别得到140,215,181和616个蛋白质点。其中以改良的Tris-HCl提取法得到的蛋白质点数最多,且背景清晰、图谱上没有明显的横纵条纹。为了进一步验证改良的Tris-HCl提取法的有效性,用18cm、pH3-10的线性IPG胶条和12.5%的分离胶对提取的苹果叶片蛋白质进行2-DE分离,考马斯亮蓝R-250染色,共检测到455个蛋白质点,其相对分子质量主要分布在14000-66000范围内,图谱背景清晰,再次证明应用该方法制备的样品适用于双向电泳分析,可用于苹果叶片的蛋白质组学分析。 展开更多

关键词 双向电泳 蛋白质提取方法 苹果叶片 蛋白质组学分析

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不同方法提取蚱蝉若虫蛋白质效果比较 被引量：9

4

作者 金会鑫 谢寿安 +2 位作者 史睿杰 汤耀宗 王翻艳 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期128-130,138,共4页

以蚱蝉(Cryptotympana pustulata)若虫为材料,采用正交试验法,对蚱蝉若虫蛋白质的提取条件进行了研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为盐提蛋白法,Tris-HCl提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数0.5... 以蚱蝉(Cryptotympana pustulata)若虫为材料,采用正交试验法,对蚱蝉若虫蛋白质的提取条件进行了研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率最高,其次为盐提蛋白法,Tris-HCl提蛋白法得率最低。碱提蛋白法的主要工艺指标为:碱液质量分数0.5%、温度60℃、时间60min、固液体积比为1∶5时蛋白质得率有最大值;盐提蛋白法的主要工艺指标为:盐液质量分数1.5%、温度40℃、时间120min、固液体积比为1∶10时蛋白质得率有最大值;Tris-HCl提蛋白法的主要工艺指标为:Tris-HCl液pH值8.1、抽提温度20℃、抽提时间30min、固液体积比1∶10时蛋白质得率有最大值。 展开更多

关键词 蚱蝉若虫 蛋白质提取方法 正交试验

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玉米叶片2种总蛋白质提取方法的比较 被引量：1

5

作者 齐建双 王彦玲 +5 位作者 铁双贵 卢彩霞 岳润清 韩小花 燕树锋 孙若楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期162-164,共3页

为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法，提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质，并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明：TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚... 为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法，提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质，并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明：TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压，而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合；对电泳胶图分析后可知，TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个，低丰度蛋白质得到充分显现，大多数蛋白点分子量为20～80 kDa，pH值为4～7，蛋白点的形状较规则；TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个，表明样品中蛋白质分离种类较少，高丰度蛋白质过度显现，低丰度蛋白质检出率大大降低。 展开更多

关键词 玉米叶片 蛋白质提取方法 双向电泳

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不同方法提取珊瑚总蛋白质的比较 被引量：1

6

作者 程华民 杨婷寒 +3 位作者 项楠 赵洪伟 周海龙 刁晓平 《热带生物学报》 2017年第2期225-231,共7页

以海南省近岸海域的鼻形鹿角珊瑚(Acropora nasuta)和箭排孔珊瑚(Seriatopora hystrix)2种硬珊瑚为研究对象,比较了TRIzol试剂提取法和BP-酚提取法在珊瑚蛋白质提取量、双向蛋白点数量和分布上的差异。结果表明,BP-酚抽提法的蛋白质得... 以海南省近岸海域的鼻形鹿角珊瑚(Acropora nasuta)和箭排孔珊瑚(Seriatopora hystrix)2种硬珊瑚为研究对象,比较了TRIzol试剂提取法和BP-酚提取法在珊瑚蛋白质提取量、双向蛋白点数量和分布上的差异。结果表明,BP-酚抽提法的蛋白质得率相对较高。通过1-DE及2-DE电泳比较分析发现,2种方法获得的蛋白样品存在较大差异。BP-酚抽提法能够获得更多蛋白条带和点数,并且具有较少的拖尾现象。在低相对分子质量蛋白的提取方面,TRIzol试剂提取法具有优势;在高相对分子质量的提取方面,BP-酚抽法具有明显优势。研究结果有望为硬珊瑚的蛋白质组学研究奠定一定的基础。 展开更多

关键词 硬珊瑚 蛋白质组 蛋白提取方法 1DE 2DE

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不同方法提取车前草蛋白质效果比较

7

作者 李蒙 《陕西农业科学》 2019年第2期42-44,共3页

以车前草叶片为材料,采用正交试验方法,对车前草蛋白质的提取条件进行优化研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率高于盐提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。碱提取蛋白质的优化工艺指标为:碱液浓度为1. 5%,浸提温度为60℃,抽提时间为60 min,... 以车前草叶片为材料,采用正交试验方法,对车前草蛋白质的提取条件进行优化研究。结果表明,碱提蛋白法的蛋白质得率高于盐提蛋白法和Tris-HCl提蛋白法。碱提取蛋白质的优化工艺指标为:碱液浓度为1. 5%,浸提温度为60℃,抽提时间为60 min,固液比为1:10。 展开更多

关键词 车前草 蛋白质提取方法 正交试验

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莲种子蛋白质提取方法比较与双向电泳分析 被引量：5

8

作者 曹锐 陈浩 丁毅 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期127-135,共9页

莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)不仅是重要的水生蔬菜作物之一,而且是进行基础研究的好材料。本文采用4种蛋白质提取方法(新型TCA/丙酮法、传统TCA/丙酮法、改良的Tris-HCl法、Tris-饱和酚法)并结合双向电泳技术,对莲子蛋白质提取方法进... 莲(Nelumbo nucifera Gaertn.)不仅是重要的水生蔬菜作物之一,而且是进行基础研究的好材料。本文采用4种蛋白质提取方法(新型TCA/丙酮法、传统TCA/丙酮法、改良的Tris-HCl法、Tris-饱和酚法)并结合双向电泳技术,对莲子蛋白质提取方法进行筛选与优化。双向电泳实验结果显示,所得蛋白质图谱与莲种子蛋白质组成分布特点一致。通过PDQuest软件分析表明,新型TCA/丙酮法适用于莲子叶和胚芽组织的双向电泳蛋白质提取,而传统TCA/丙酮法则适用于莲胚轴组织双向电泳的蛋白质提取。研究结果为进一步利用质谱进行莲子蛋白质组研究奠定了基础。 展开更多

关键词 莲子 蛋白质提取方法 双向电泳 蛋白质图谱

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中肋骨条藻蛋白质双向电泳样品制备方法的比较

9

作者 王秀秀 陈纪新 黄邦钦 《海洋学研究》 北大核心 2012年第4期72-77,共6页

比较了裂解液法和直接三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法对中肋骨条藻Skeletonema costatum蛋白双向电泳的提取效果并优化了提取条件,结果表明:裂解液-TCA-丙酮沉淀法在去除胞内干扰物质方面,较裂解液-超滤管法和裂解液-试剂盒法的效果都好。裂... 比较了裂解液法和直接三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法对中肋骨条藻Skeletonema costatum蛋白双向电泳的提取效果并优化了提取条件,结果表明:裂解液-TCA-丙酮沉淀法在去除胞内干扰物质方面,较裂解液-超滤管法和裂解液-试剂盒法的效果都好。裂解液-TCA-丙酮沉淀法和直接TCA-丙酮沉淀法都能取得背景干净、蛋白点清晰的双向电泳图谱,但后者的双向电泳图谱聚焦更完全,在进一步优化条件后(即蛋白沉淀12h并增加超声波洗涤过程),可作为提取中肋骨条藻蛋白的最适方法。 展开更多

关键词 中肋骨条藻 蛋白质组学 双向电泳 蛋白提取方法

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土壤宏蛋白质组学之土壤蛋白质提取技术的发展 被引量：3

10

作者 熊艺 林欣萌 兰平 《土壤》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期835-843,共9页

随着土壤宏基因组学的日益成熟和发展,作为后基因组时代重要技术平台的土壤宏蛋白质组学越来越受到关注。土壤宏蛋白质组学的研究是解析土壤宏基因功能的重要手段之一,对于碳氮磷的生物地球化学循环以及土壤有机质积累的研究具有重大价... 随着土壤宏基因组学的日益成熟和发展,作为后基因组时代重要技术平台的土壤宏蛋白质组学越来越受到关注。土壤宏蛋白质组学的研究是解析土壤宏基因功能的重要手段之一,对于碳氮磷的生物地球化学循环以及土壤有机质积累的研究具有重大价值,可将蛋白信息与相关的生态系统过程联系起来。但是,土壤蛋白含量少,样品复杂程度高,极大限制了土壤蛋白的分离提取和进一步分析。因此,通过改进和优化土壤蛋白的提取技术,得到高浓度的蛋白是土壤宏蛋白质组学研究的前提条件。本文总结了近几年来土壤蛋白提取方法,并对其适用的土壤性质以及适用的不同种类和功能的蛋白进行了分析。此外,本文也对现有的土壤蛋白提取技术以及土壤蛋白鉴定技术的方法改进进行了探讨。 展开更多

关键词 土壤蛋白质 宏蛋白质组学 蛋白质提取方法

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无残留速溶丝胶蛋白粉的制备及应用

11

《安康学院学报》 2024年第3期F0002-F0002,共1页

由我校陈安利博士领衔的“无残留速溶丝胶蛋白粉的制备及应用”团队,围绕丝胶蛋白提取过程中强酸强碱等有害物质难以去除及丝胶蛋白常温下难溶于水的难题,开发出一种全新的丝胶蛋白提取方法。该方法在不引入其他化学物质的情况下可完全... 由我校陈安利博士领衔的“无残留速溶丝胶蛋白粉的制备及应用”团队,围绕丝胶蛋白提取过程中强酸强碱等有害物质难以去除及丝胶蛋白常温下难溶于水的难题,开发出一种全新的丝胶蛋白提取方法。该方法在不引入其他化学物质的情况下可完全去除丝胶蛋白提取过程中加入的强碱,同时提取的丝胶蛋白粉在常温下可快速溶于水,解决了丝胶蛋白溶液低温易成胶的难题,有效拓展了丝胶蛋白的应用方向。 展开更多

关键词 丝胶蛋白 化学物质 有害物质 速溶 同时提取 提取过程 蛋白提取方法 制备及应用

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冬小麦叶片抗旱蛋白质组双向电泳技术体系的优化 被引量：6

12

作者 王娜 谢惠民 +1 位作者 王川 王宏礼 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期443-449,共7页

为给小麦抗旱蛋白质组学研究提供技术支撑,以两个抗旱性不同的冬小麦品种周麦18和晋麦47三叶期幼苗为材料,比较分析了PEG胁迫处理后两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和磷酸钠缓冲液研磨法对IEF/SDS-PAGE双向电泳的影响,并在IPG胶条pH... 为给小麦抗旱蛋白质组学研究提供技术支撑,以两个抗旱性不同的冬小麦品种周麦18和晋麦47三叶期幼苗为材料,比较分析了PEG胁迫处理后两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和磷酸钠缓冲液研磨法对IEF/SDS-PAGE双向电泳的影响,并在IPG胶条pH范围、蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面进行了探索与优化。结果表明,采用TCA/丙酮法提取叶片全蛋白,选用17 cmp、H4~7的IPG线性胶条,在上样量为150μg.胶条-1,以及12%SDS-PAGE胶浓度下进行双向凝胶电泳,蛋白质能够更好地被分离,2-DE图谱上可分辨出约400个蛋白点。利用该体系比较了PEG胁迫后两个品种双向电泳图谱的差异,周麦18有9个蛋白点存在差异,其中5个下调表达,4个上调表达（3个新诱导表达）;晋麦47有5个蛋白点存在差异,均上调表达（1个新诱导表达）。 展开更多

关键词 小麦 PEG胁迫 蛋白提取方法 双向电泳 差异表达蛋白

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小麦花药蛋白质组双向电泳技术体系的优化 被引量：42

13

作者 陈蕊红 张改生 +2 位作者 刘卫 叶景秀 牛娜 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期404-409,共6页

以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化。结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的... 以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化。结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的蛋白质所得的2-DE胶图谱上蛋白质点数增加,图谱背景也比较清晰;样品溶解于含有硫脲和TBP的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出554个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白多39个点。以TCA-丙酮法提取小麦花药组织中的蛋白,用蛋白质裂解液Ⅱ[7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质（其中0.1%pH 3-10,0.1%pH4-6）]溶解蛋白,以pH4-7线性17cm的IPG胶条进行双向凝胶电泳,在上样量为800μg,13%SDS-PAGE胶浓度下,蛋白质得到了更好的分离,2-DE图谱上可分辨出631个蛋白点,图谱质量最佳。优化后的双向电泳技术体系,适合于小麦花药全蛋白质的双向电泳分析。 展开更多

关键词 小麦 花药蛋白 蛋白质提取方法 蛋白质裂解液 双向电泳技术

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文冠果枝条韧皮部蛋白质双向电泳体系的建立 被引量：4

14

作者 刘昭军 张胜 +2 位作者 赵忠 张博勇 宗建伟 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期55-61,共7页

以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,... 以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,得到的图谱背景低,蛋白质点清晰;样品溶解于含有尿素和硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著地提高蛋白质的溶解性,获得的总蛋白溶液浓度远大于裂解液Ⅰ提取的总蛋白溶液浓度。在适宜的时间范围用超声波破碎仪处理蛋白质粉溶液有助于大幅度提高裂解液中蛋白质的浓度。等电聚焦条件宜根据样品特性选择,80 000Vh能够使得文冠果韧皮部蛋白质双向凝胶碱性端的横条纹大大减少。 展开更多

关键词 文冠果 韧皮部 蛋白质提取方法 蛋白质裂解液 双向电泳技术

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棉花纤维蛋白双向电泳体系的建立 被引量：2

15

作者 王娟 倪志勇 +4 位作者 石庆华 吕萌 李波 白岩 范玲 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期31-35,共5页

【目的】探索一套适合于棉花纤维蛋白的双向电泳技术,为研究棉花纤维发育的蛋白质组学奠定基础。【方法】以陆地棉徐州142为材料,比较了三种不同蛋白质提取方法以及不同裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白上样量和染色方法等方面进行... 【目的】探索一套适合于棉花纤维蛋白的双向电泳技术,为研究棉花纤维发育的蛋白质组学奠定基础。【方法】以陆地棉徐州142为材料,比较了三种不同蛋白质提取方法以及不同裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白上样量和染色方法等方面进行了探索与优化。【结果】利用饱和酚-甲醇醋酸铵法提取的棉花纤维蛋白,其蛋白含量较高,且SDS-PAGE电泳条带清晰;样品溶解于含有硫脲和CHAPS的裂解液中,其蛋白溶解度增加;不同的蛋白上样量比较结果表明,第一向等电聚焦固相pH梯度胶条(7 cm)的最适上样量为300μg;同时,经改良后的考马斯亮蓝染-脱色后,2-D图谱的背景清晰,分辨蛋白斑点数增加。【结论】研究建立了一套适用于棉花纤维蛋白总蛋白质组分析的双向电泳方法。 展开更多

关键词 棉花 纤维蛋白 蛋白质提取方法 双向电泳技术

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蛋白质技术在甘薯病毒病研究的应用 被引量：2

16

作者 任凤仪 房伯平 高峰 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第S1期59-62,共4页

甘薯病毒病是甘薯主要病害之一,对甘薯生产造成严重危害,是甘薯生产的一大问题。甘薯病毒种类多并且侵染存在复杂性给甘薯病毒研究以及防治带来困难。应用抗病毒蛋白是植物病毒病防治策略之一。通过对甘薯病毒、植物抗病毒蛋白相关研究... 甘薯病毒病是甘薯主要病害之一,对甘薯生产造成严重危害,是甘薯生产的一大问题。甘薯病毒种类多并且侵染存在复杂性给甘薯病毒研究以及防治带来困难。应用抗病毒蛋白是植物病毒病防治策略之一。通过对甘薯病毒、植物抗病毒蛋白相关研究以及蛋白质提取方法等方面的进展进行了综述,介绍蛋白质技术在甘薯病毒病中的应用。 展开更多

关键词 甘薯病毒 抗病毒蛋白 蛋白质提取方法

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塔玛亚历山大藻双向电泳蛋白的三种提取方法比较 被引量：5

17

作者 原雅纬 郑伟 +2 位作者 李少菁 王桂忠 郑天凌 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1113-1118,共6页

【目的】比较3种蛋白质提取方法,找到适用于塔玛亚历山大藻蛋白的最佳的提取方法,为后续用双向电泳(2-DE)技术研究不同条件下塔玛亚历山大藻蛋白的差异表达奠定基础。【方法】以塔玛亚历山大藻为研究对象,运用Tris-HCl提取法、TCA沉淀法... 【目的】比较3种蛋白质提取方法,找到适用于塔玛亚历山大藻蛋白的最佳的提取方法,为后续用双向电泳(2-DE)技术研究不同条件下塔玛亚历山大藻蛋白的差异表达奠定基础。【方法】以塔玛亚历山大藻为研究对象,运用Tris-HCl提取法、TCA沉淀法和lysis buffer提取法分别提取塔玛亚历山大藻蛋白,并通过双向电泳技术,对这3种方法进行了比较分析,筛选出最适于塔玛亚历山大藻的蛋白提取方法。并运用以上得出的方法,以不加杀藻物质的无菌塔玛亚历山大藻为对照,比较分析了塔玛亚历山大藻在加入杀藻物质后的蛋白差异表达状况。【结果】在这3种方法中,lysis buffer提取法得到的蛋白溶解性好,进行双向电泳时,可得到干净的背景、清晰的蛋白点,并且蛋白点的数目较多,酸性蛋白、碱性蛋白、大分子量和小分子量的蛋白均有提出来,蛋白点在胶面上分布均匀。用这种方法初步分析了加入杀藻物质后塔玛亚历山大藻蛋白的差异表达情况,并鉴定出14个与塔玛亚历山大藻生理活动密切相关的蛋白质。【结论】lysis buffer提取法获得了最多的蛋白点,双向电泳图谱清晰,适于用来提取塔玛亚历山大藻蛋白。 展开更多

关键词 塔玛亚历山大藻 甲藻 双向电泳 蛋白提取方法 蛋白质组学

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叶用莴苣叶片总蛋白质双向电泳影响因素的研究 被引量：2

18

作者 陈曙红 韩莹琰 +1 位作者 范双喜 李洋 《北京农学院学报》 2012年第2期14-16,共3页

以叶用莴苣叶片为试材,研究17cm固相pH梯度胶条(pH 4～7)体系下双向电泳不同的提取方法、上样体积、定量方法等影响因素,力求确定其理想的双向电泳条件。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对蛋白质提取更彻底,效果更好。对于蛋白质定量的试... 以叶用莴苣叶片为试材,研究17cm固相pH梯度胶条(pH 4～7)体系下双向电泳不同的提取方法、上样体积、定量方法等影响因素,力求确定其理想的双向电泳条件。结果表明,酚-甲醇/醋酸铵沉淀法对蛋白质提取更彻底,效果更好。对于蛋白质定量的试验,相比于常规的Bradford方法,利用无干扰蛋白质定量试剂盒具有更好的准确性。考虑叶片总蛋白质中大量Rubisco的存在,应相对增加上样量,采用考马斯亮蓝染色时取800μg到1 100μg蛋白质进行双向电泳比较合理。 展开更多

关键词 叶用莴苣 叶片 蛋白质提取方法 双向电泳技术

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土壤宏蛋白质组学蛋白质提取方法及其应用 被引量：5

19

作者 王小丽 GONZALEZ PEREZ Pablo +1 位作者 叶俊 黄丹枫 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期691-696,共6页

土壤宏蛋白质组学在揭示土壤微生物功能、代谢与环境相互作用方面具有广阔的应用前景,但由于土壤样品的特殊性,土壤蛋白质提取步骤是限制土壤宏蛋白质组学大规模应用的瓶颈之一.本文从样品制备、提取方法、影响因素等方面综述了土壤蛋... 土壤宏蛋白质组学在揭示土壤微生物功能、代谢与环境相互作用方面具有广阔的应用前景,但由于土壤样品的特殊性,土壤蛋白质提取步骤是限制土壤宏蛋白质组学大规模应用的瓶颈之一.本文从样品制备、提取方法、影响因素等方面综述了土壤蛋白提取方面的研究进展.一般来说,根据实验目的、蛋白种类及后续研究方法设计相应的分组成收集策略才能取得较好的提取效果.土壤总蛋白、胞内蛋白与胞外蛋白分别有不同的提取方法.总蛋白提取一般采用直接提取法;胞外蛋白不需要裂解;胞内蛋白提取方法有直接提取法和间接提取法等.裂解、浓缩、去除腐殖质的方法以及提取液、pH值的选择等也会影响提取效果.此外,简单介绍了土壤宏蛋白质组学的应用,并对今后的研究工作提出展望. 展开更多

关键词 土壤微生物 宏蛋白质组学 蛋白质提取方法 应用

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适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法 被引量：1

20

作者 施大伟 何梅 +2 位作者 梁霏霏 徐鸣 谢寅峰 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期51-56,共6页

【目的】获得银杏叶绿体蛋白质的提取方法,在蛋白质水平探讨银杏光合作用对环境的响应机制。【方法】建立一种适合银杏叶绿体蛋白双向电泳分离的实验体系,采用Tris-平衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提取,并与三氯乙酸(TCA)-丙酮沉降... 【目的】获得银杏叶绿体蛋白质的提取方法,在蛋白质水平探讨银杏光合作用对环境的响应机制。【方法】建立一种适合银杏叶绿体蛋白双向电泳分离的实验体系,采用Tris-平衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提取,并与三氯乙酸(TCA)-丙酮沉降法进行对比分析。【结果】Percoll密度梯度离心法适用于银杏叶绿体的提取,提取的叶绿体平均完整率在85%左右。单向电泳结果显示,与TCA-丙酮沉降法相比,在用Tris-平衡酚抽提法分离的叶绿体蛋白质泳道中,低分子质量蛋白质条带更多、更清晰。进一步的双向电泳结果表明,用Tris-平衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提取,蛋白质产量更高,图谱清晰,所分离的蛋白点更多,形态更好,条纹影响相对较小。【结论】Tris-平衡酚抽提法可有效地提取高质量的叶绿体蛋白质并进行双向电泳,可用于银杏叶绿体的蛋白质组学分析。 展开更多

关键词 银杏 叶绿体蛋白质组 蛋白质提取方法 双向电泳

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