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铜绿假单胞菌PA0057基因的克隆、表达及其重组蛋白活性的初步研究
1
作者 李明轩 关新宇 +4 位作者 杜星 徐海津 白艳玲 张秀明 乔明强 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期1-7,共7页
铜绿假单胞菌PA0057基因为Ⅳ类未知基因,通过NCBI比对,发现PA0057基因编码的蛋白与金属β-内酰胺酶同源性为96%,因此推测PA0057蛋白可能具有金属β内酰胺酶活性.提取铜绿假单胞菌PAOI基因组DNA,利用设计的引物通过PCR方法扩增得到PA005... 铜绿假单胞菌PA0057基因为Ⅳ类未知基因,通过NCBI比对,发现PA0057基因编码的蛋白与金属β-内酰胺酶同源性为96%,因此推测PA0057蛋白可能具有金属β内酰胺酶活性.提取铜绿假单胞菌PAOI基因组DNA,利用设计的引物通过PCR方法扩增得到PA0057基因,将其克隆至克隆载体pGEM-T,并转化人大肠杆菌DH5α;而后将其克隆至表达载体pET28a中,转化人大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,并通过Ni-NTA亲和柱进行纯化,纯化后蛋白超滤浓缩得高浓度蛋白;通过药敏纸片检测PA0057蛋白活性. 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 金属Β-内酰胺酶 PA0057基因 蛋白的表达纯化
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PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用
2
作者 王守俊 王姮 +2 位作者 萧新华 李玉秀 孙琦 《中国现代医生》 2007年第09S期21-22,F0003,共3页
目的探讨PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护棕榈酸引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡过程,保护其三维... 目的探讨PDX-1蛋白对棕榈酸诱导的大鼠胰岛凋亡的保护作用。方法PDX-1基因克隆及表达质粒的构建,PDX-1蛋白的表达、纯化和鉴定,PDX-1蛋白保护棕榈酸引起的胰岛细胞凋亡的研究。结果PDX-1蛋白可以延缓胰岛细胞的自然凋亡过程,保护其三维形态;可以降低处理后的胰岛Caspase-3活性,同时可以增加葡萄糖刺激胰岛素释放,PDX-1蛋白干预后的棕榈酸组(1.560±0.074)uIU/mL,与对照组(1.426±0.056)uIU/mL相比有显著差异(P<0.05)。结论表明PDX-1蛋白可以减少棕榈酸诱导的胰岛凋亡,保护β细胞功能。 展开更多
关键词 PDX-1蛋白 蛋白的表达和纯化 凋亡 棕榈酸 大鼠胰岛
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13C6-酪氨酸标记的蛋清溶菌酶的表达及NMR测定
3
作者 王瑞英 余飞 刘万卉 《烟台大学学报（自然科学与工程版）》 CAS 2019年第3期233-237,共5页
针对蛋白质核磁共振(NMR)信号复杂难以解析的问题,选用选择性标记方法可简化蛋白质NMR谱图。本实验以蛋清溶菌酶(HEL)为目标蛋白,构建了pET-HEL蛋白表达载体,转入到大肠杆菌Ε.coliBL21(DE3)中,得到重组菌株。然后通过改变诱导温度、诱... 针对蛋白质核磁共振(NMR)信号复杂难以解析的问题,选用选择性标记方法可简化蛋白质NMR谱图。本实验以蛋清溶菌酶(HEL)为目标蛋白,构建了pET-HEL蛋白表达载体,转入到大肠杆菌Ε.coliBL21(DE3)中,得到重组菌株。然后通过改变诱导温度、诱导浓度以及诱导时间等条件来优化HEL在大肠杆菌Ε.coliBL21(DE3)中的表达条件,通过SDS-PAGE电泳分析,确定了最佳表达条件:37℃、0.4mmol/LIPTG诱导8h。按最佳条件于诱导前加入13C6-酪氨酸进行选择性标记,扩大表达,经过变复性处理与Ni柱纯化后,获得选择性标记的HEL。进一步制备标记蛋白核磁样品进行测定,得到简化的NMR谱。本研究为采用NMR简化分析蛋白质的结构奠定了基础。 展开更多
关键词 选择性标记 NMR 蛋清溶菌酶 酪氨酸 蛋白质的表达纯化 包涵体
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