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蛋白质/多肽片段互补分析法检测alpha-突触核蛋白在细胞中的聚集
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作者 郑媛 渠静 +3 位作者 任晓曦 郑焱 杨慧 张建亮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1374-1378,共5页
Alpha-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集是引起帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发生发展主要原因。本文用蛋白质/多肽片段互补分析法(protein-fragment complementation assays,PCAs)检测α-syn在细胞内的聚集。分别构建融合α-... Alpha-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集是引起帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发生发展主要原因。本文用蛋白质/多肽片段互补分析法(protein-fragment complementation assays,PCAs)检测α-syn在细胞内的聚集。分别构建融合α-syn与人工改造的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase(h GLuc)蛋白N端或C端蛋白的质粒,共转入人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过检测酶活性来确定野生型(wild type,WT)及A53T突变体α-syn在细胞中的聚集情况。结果表明WT和A53T突变α-syn都能使荧光素酶活性增强,而且与野生型α-syn相比,突变体A53T的荧光素酶活性更强,说明二者都能聚集,而且A53T聚集程度高于WT。PCAs法具有高灵敏度,不仅能检测α-syn在细胞内的聚集,而且能反映其聚集的程度,为研究帕金森病提供了研究思路和相应药物筛选的有效工具。 展开更多
关键词 Α-突触核蛋白 聚集 蛋白质/多肽片段互补分析法 荧光素酶
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液相色谱/电喷雾质谱(LC/ESI/MS)在蛋白质分析鉴定中的应用 被引量:1
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作者 郭寅龙 刘晗青 余翀天 《分析测试技术与仪器》 CAS 2001年第3期129-133,共5页
对液相色谱 /电喷雾质谱 (LC/ESI/MS)在蛋白质分子量测定、一级结构的分析、蛋白质和多肽纯度的鉴定、肽质量酶谱、蛋白质分子内二硫键的定量和定位、磷酰化位置的测定以及在蛋白质组中的应用等方面进行了综述和讨论 .
关键词 液相色谱 电喷雾质谱 质量指纹图谱 分子内二硫键 分析 鉴定 糖基化位置 磷酸化位置 蛋白质
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针对无标签鸟枪法蛋白质定量的新方法 被引量:1
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作者 江丹阳 郑浩然 《北京生物医学工程》 2018年第4期351-355,391,共6页
目的通过所检测到的肽段丰度计算蛋白质丰度是蛋白质组学的一个重要部分。由于退化肽段的丰度可能由多个蛋白质提供,简单剔除退化肽段可消除这种不确定性并简化问题。但是由于退化肽段的信息没有被充分利用,蛋白质定量的准确性会受到影... 目的通过所检测到的肽段丰度计算蛋白质丰度是蛋白质组学的一个重要部分。由于退化肽段的丰度可能由多个蛋白质提供,简单剔除退化肽段可消除这种不确定性并简化问题。但是由于退化肽段的信息没有被充分利用,蛋白质定量的准确性会受到影响,还可能显著降低可以定量的蛋白质规模。如何充分利用退化肽段的信息,提高蛋白定量的准确性和全面性,并且不会导致问题规模更为复杂,成为一个重要的问题。方法为了在不引入更多误差的情况下充分利用退化肽段来进行更准确的定量,本文提出一个基于误差最小化的方法(error-minimization-based quantification for protein,EMQ)。不同于以往的大多数算法,EMQ利用退化肽段中的信息,最大限度地将肽段层面信息还原到蛋白质层面,得到了更多的蛋白质定量结果并提高了结果的精度。结果多个实验数据上的表现证明本方法可以在较小的时间代价下获得更高的精度,并提高结果的规模。结论本文提出的基于误差最小化的方法可以快速准确地对大规模蛋白质组学问题进行定量。 展开更多
关键词 质谱分析 鸟枪蛋白质组学 退化 蛋白质绝对定量 多肽
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外来入侵植物加拿大一枝黄花居群间遗传差异分析 被引量:31
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作者 黄华 郭水良 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期197-204,共8页
采用三种不同的方法提取外来入侵植物加拿大一枝黄花总DNA,并应用RAPD技术分析了浙沪地区4个加拿大一枝黄花居群间的遗传分化。结果表明: (1) 2×CTAB法提取的DNA具有较好的完整性,能较好地去除蛋白质、酚类和多糖杂质,是比较适合... 采用三种不同的方法提取外来入侵植物加拿大一枝黄花总DNA,并应用RAPD技术分析了浙沪地区4个加拿大一枝黄花居群间的遗传分化。结果表明: (1) 2×CTAB法提取的DNA具有较好的完整性,能较好地去除蛋白质、酚类和多糖杂质,是比较适合加拿大一枝黄花总DNA提取的方法; (2)加拿大一枝黄花的遗传多态性非常高, 13个引物在4个居群中共检测到102条扩增片段,多态带84条,多态率达到82. 35%;特有带41条,占40. 20%。居群之间的多态性分别是上海嘉定(73. 13% ) >嘉兴乍浦(68. 97% ) >杭州(68. 42% ) >金华(57. 14% ); (3)13个引物检测的平均纯合度(J)为0. 38,平均杂合度(H)为0. 62; (4)Nei基因相似系数、聚类分析和主成分分析表明,加拿大一枝黄花不同居群间的遗传差异程度较大,居群间的遗传分化与地理位置存在对应关系; (5)加拿大一枝黄花的入侵居群的适应性进化与杂草特性紧密相关。 展开更多
关键词 加拿大一枝黄花 外来入侵植物 居群 差异分析 总DNA提取 遗传分化 CTAB 遗传多态性 平均杂合度 适应性进化 技术分析 RAPD 扩增片段 相似系数 聚类分析 遗传差异 对应关系 地理位置 蛋白质 纯合度 i基因 分析 主成分
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基于MRM-MS技术的蛋白质生物标志物研究的前景 被引量:2
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作者 韩冰 王立顺 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期484-488,共5页
随着蛋白质组学技术的兴起,疾病生物标志物的研究发展迅速,但筛选出的海量候选标志物却极少进入临床应用。近几年,基于MRM—MS技术的方法和策略凭借其低成本、耗时短、高灵敏度、高准确性等优势引起了国内外检验医学界的广泛关注。基... 随着蛋白质组学技术的兴起,疾病生物标志物的研究发展迅速,但筛选出的海量候选标志物却极少进入临床应用。近几年,基于MRM—MS技术的方法和策略凭借其低成本、耗时短、高灵敏度、高准确性等优势引起了国内外检验医学界的广泛关注。基于MRM—MS的技术,特别是SISCAPA技术,可能在不远的将来将逐步发展成为蛋白质生物标志物研究的快车道。本文分析了当前生物标志物研究领域的瓶颈,系统阐述了MRM—MS技术的原理和特点,以及近年来该技术在蛋白质生物标志物研究领域的主要应用现状,并展望其发展前景。 展开更多
关键词 生物学标记 蛋白质 质谱分析
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维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖和迁移侵袭的作用机制 被引量:6
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作者 陈蔚 余铃 +2 位作者 陈敬腾 夏露 郭卫春 《安徽医药》 CAS 2019年第12期2337-2341,共5页
目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤MG63细胞,采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK 8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、... 目的探讨维替泊芬影响骨肉瘤MG63细胞增殖及迁移侵袭的的作用机制。方法体外培养骨肉瘤MG63细胞,采用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK 8)检测不同浓度(0、2、4、6、8、10μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞增殖影响;流式细胞术分析(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞周期分布及凋亡的影响;划痕实验和TranswellTM侵袭实验检测(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对骨肉瘤MG63细胞迁移及侵袭能力的影响;蛋白质印迹法(Western Blot)检测(0、2、4、6、8μmol/L)维替泊芬对Hippo信号通路中Yes 相关蛋白1(YAP1)、TEA转录因子1(TEAD1)、磷酸化Yes 相关蛋白1(pYAP1)的蛋白表达水平。结果CCK 8结果显示维替泊芬能够抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖,24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(6.592±0.121)μmol/L、(4.668±0.075)μmol/L、(2.953±0.078)μmol/L,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞术结果表明维替泊芬以浓度依赖的方式诱导骨肉瘤MG63细胞凋亡,使骨肉瘤MG63细胞周期阻滞于G0/G1期;划痕实验和TranswellTM侵袭实验结果表明维替泊芬可抑制MG63细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法结果显示维替泊芬处理的MG63细胞中YAP1、TEAD1蛋白表达水平降低,而pYAP1蛋白表达水平保持不变。结论维替泊芬能抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、促进细胞凋亡、导致细胞周期阻滞,以及抑制细胞迁移和侵袭,并且下调YAP1及TEAD1表达,维替泊芬阻碍YAP1和TEAD1相互作用可能是抗骨肉瘤的作用机制。 展开更多
关键词 骨肉瘤 维替泊芬 Hippo信号通路 增殖 迁移 侵袭 流式细胞术 细胞迁移分析 印迹 蛋白质 人胆囊收缩素/缩胆囊素八
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新闻
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《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1309-1311,共3页
肽质量指纹图谱法(PMF)是获得蛋白质结构信息和鉴定蛋白质的常用方法。蛋白质的酶解是蛋白-质组学研究中蛋白质分析的关键步骤,将蛋白分解成肽段,然后用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-Ms)或液相色谱电喷雾质谱(LC-... 肽质量指纹图谱法(PMF)是获得蛋白质结构信息和鉴定蛋白质的常用方法。蛋白质的酶解是蛋白-质组学研究中蛋白质分析的关键步骤,将蛋白分解成肽段,然后用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-Ms)或液相色谱电喷雾质谱(LC-ESI-MS)分析多肽混合物,获得肽质量指纹图谱。由于传统的溶液酶解方法耗时(12h以上),建立高效快速的蛋白酶解新技术具有重要意义。 展开更多
关键词 质量指纹图谱 蛋白质分析 电离飞行时间质谱 蛋白酶解 新闻 指纹图谱 多肽混合物 电喷雾质谱
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改进的质谱兼容的胶内酶切方法 被引量:14
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作者 王鸿丽 刘炳玉 +4 位作者 谷苗 刘锋 吴胜明 张学敏 魏开华 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第2期168-172,共5页
目的:改善胶内酶切的肽段回收率,提高蛋白质的有效鉴定率。方法:将改进的胶内酶切“四步提取法”,应用到96个双向电泳蛋白质斑点分析。结果:该方法提高了胶内蛋白质酶切肽段的回收率,改善了质谱图谱的质量。蛋白质的有效鉴定率达89.6%,... 目的:改善胶内酶切的肽段回收率,提高蛋白质的有效鉴定率。方法:将改进的胶内酶切“四步提取法”,应用到96个双向电泳蛋白质斑点分析。结果:该方法提高了胶内蛋白质酶切肽段的回收率,改善了质谱图谱的质量。蛋白质的有效鉴定率达89.6%,其中,数据库检索得分80分以上者达82%。另外,证实了酶解原液直接用于质谱分析可获得较好信噪比的谱图。结论:应用“四步提取法”使得酶解肽段提取率和蛋白质的有效鉴定率明显提高。 展开更多
关键词 胶内酶切 四步提取 质量指纹图谱 蛋白质组学 光谱分析 质量 酶类
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抗心肌缺血损伤活性多肽的分离纯化与鉴定 被引量:1
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作者 曹冬 张养军 +5 位作者 唐敏 梁强 韩春光 邓玉林 蔡耘 钱小红 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2009年第4期322-325,共4页
目的:分离纯化心肌肽混合溶液中具有心肌损伤保护活性的单一有效成分。方法:采用体外活性测定追踪、反相色谱分离结合生物质谱检测技术对心肌肽溶液中的活性成分进行纯化及结构鉴定。结果:从心肌肽混合溶液中分离出一活性多肽并确定了... 目的:分离纯化心肌肽混合溶液中具有心肌损伤保护活性的单一有效成分。方法:采用体外活性测定追踪、反相色谱分离结合生物质谱检测技术对心肌肽溶液中的活性成分进行纯化及结构鉴定。结果:从心肌肽混合溶液中分离出一活性多肽并确定了其氨基酸序列为KGAW SNVLRGMGGAF;人工合成上述肽段,体外多柔比星(阿霉素)损伤心肌细胞活性测定结果表明,此多肽能明显抑制阿霉素对心肌细胞的损伤。结论:得到一种新的具有心肌细胞保护活性的多肽。 展开更多
关键词 心肌缺血 HSP70热休克蛋白质 质谱分析
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膀胱移行细胞癌CDH1基因启动子C/A单核苷酸多态性与其蛋白表达关系的研究 被引量:1
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作者 阮黎 张旭 +4 位作者 马鑫 李功成 黄皓 张军 付斌 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期595-597,共3页
目的探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)中E-钙粘连素(CDH1)基因启动子-160处C/A单核苷酸多态性(SNP)与CDH1表达的关系。方法BTCC患者36例,男24例,女12例,分别取血液和膀胱肿瘤组织标本。对照组36例,为非肿瘤患者,男30例,女6例,取膀胱组织标本。P... 目的探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)中E-钙粘连素(CDH1)基因启动子-160处C/A单核苷酸多态性(SNP)与CDH1表达的关系。方法BTCC患者36例,男24例,女12例,分别取血液和膀胱肿瘤组织标本。对照组36例,为非肿瘤患者,男30例,女6例,取膀胱组织标本。PCR-限制性片段长度多态性分析法检测血液标本中CDH1基因启动子上游-160处C/ASNP。免疫组化方法检测组织CDH1的表达情况。比较2组组织CDH1表达情况,分析BTCC组C/ASNP与CDH1表达的关系。结果BTCC组和对照组CDH1阳性率分别为61%(22/36)和86%(31/36),P<0.05。BTCC组14例CDH1表达阴性者中,AA基因型8例、AC型3例、CC型3例,A等位基因频率为68%(19/28);22例CDH1表达阳性者中,AA型3例、AC型11例、CC型8例,A等位基因频率为39%(17/44);2组中AA基因型发生率与AC、CC基因型比较差异均有统计学意义(P<0.05),A等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论CDH1基因启动子-160处C/ASNP在TBCC的CDH1表达过程中可能具有重要作用,A等位基因对CDH1表达下调可能发挥主要作用。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 E-钙粘连素 单核苷酸多态性 蛋白质 膀胱移行细胞癌 基因启动子 C/A单核苷酸多态性 限制性片段长度多态性分析 表达关系 单核苷酸多态性(SNP)
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IgA肾病患者血清肽谱的差异性研究
11
作者 陈洁晶 张岳 +4 位作者 眭维国 刘华英 唐立红 邹贵勉 戴勇 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2010年第5期434-437,共4页
目的 研究IgA肾病患者血清肽谱的差异性,筛选IgA肾病早期诊断的生物标记.方法 选取解放军第一八一医院肾脏科2008年8月至2009年3月就诊的患者或体检的健康人为研究对象,分为试验组和对照组,试验组为33例IgA肾病患者,对照组为10例健康志... 目的 研究IgA肾病患者血清肽谱的差异性,筛选IgA肾病早期诊断的生物标记.方法 选取解放军第一八一医院肾脏科2008年8月至2009年3月就诊的患者或体检的健康人为研究对象,分为试验组和对照组,试验组为33例IgA肾病患者,对照组为10例健康志愿者、12例微小病变、10例局灶硬化和10例膜性肾病患者.ClinProt系统下采用磁珠浓缩和基质辅助激光解吸电离-飞行时间-质谱技术分析IgA肾病组与其他各组研究对象血清肽谱的差异.结果 分别筛选出5个、5个、3个、3个差异性多肽作为诊断IgA肾病与健康者、微小病变、局灶硬化、膜性肾病的潜在生物标记.结论 应用蛋白质组学技术成功建立了IgA肾病患者血清肽谱的诊断模型,为蛋白质组学技术用于IgA肾病的早期诊断提供了新的思路. 展开更多
关键词 肾病 IgA 蛋白质组学 质谱分析 ClinProt系统
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TAT-BPI融合蛋白原核表达载体的构建
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作者 赵院霞 阚全程 余祖江 《中国实用医刊》 2010年第9期33-35,共3页
目的 探讨使BPI能高效率穿透细胞膜或多种屏障,中和不同解剖部位的LPS,构建TAT-BPI原核表达载体并鉴定的方法,为研制多肽抗生素打下基础.方法 人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pUC57后得到pUC57-TAT重组质粒;提取正常人外... 目的 探讨使BPI能高效率穿透细胞膜或多种屏障,中和不同解剖部位的LPS,构建TAT-BPI原核表达载体并鉴定的方法,为研制多肽抗生素打下基础.方法 人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pUC57后得到pUC57-TAT重组质粒;提取正常人外周血多形核粒细胞总RNA, 采用RT-PCR技术扩增BPI N端cDNA片段,构建pUC57-TAT-BPI克隆载体;用酶切和双脱氧测序法进行鉴定.结果 获得含有约630 bp的TAT-BPI融合蛋白基因片段序列,测序分析与Genebank中该序列相符,同源性分析TAT序列中第10、30位核苷酸有突变,氨基酸同源性为93%,蛋白质同源性为90%,在BPI序列中234、454、495、556位核苷酸有突变,氨基酸同源性为98%,蛋白质同源性为95%.结论 成功构建了TAT-BPI融合蛋白的原核表达载体,为进一步研究BPI的抗菌作用奠定了基础. 展开更多
关键词 融合蛋白 原核表达载体 表达载体的构建 expression vector BPI Restriction enzyme 氨基酸同源性 TAT protein POLYMORPHONUCLEAR neutrophils DNA sequence analysis 基因片段序列 human cell membrane 双脱氧测序 核苷酸 多形核粒细胞 蛋白质 DNA fragment 同源性分析 多肽抗生素
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人工神经网络肿瘤标志物模型的建立及应用研究 被引量:3
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作者 杨美琴 郁琳琳 +2 位作者 余捷凯 姜铁军 郑树 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期492-494,共3页
目的 建立8种血清肿瘤标志物(TM)人工神经网络(ANN)诊断模型,以验证其在鉴别恶性肿瘤和提示原发灶不明肿瘤的原发部位中的应用价值。方法 用酶联免疫吸附法及时间分辨荧光分析法分别测定73例肺癌、60例肝癌、76例肠癌、78例胃癌和51... 目的 建立8种血清肿瘤标志物(TM)人工神经网络(ANN)诊断模型,以验证其在鉴别恶性肿瘤和提示原发灶不明肿瘤的原发部位中的应用价值。方法 用酶联免疫吸附法及时间分辨荧光分析法分别测定73例肺癌、60例肝癌、76例肠癌、78例胃癌和51例乳腺癌患者, 4例原发灶不明恶性肿瘤患者血清标本中,癌胚抗原(CEA)、α- 甲胎蛋白(AFP)、糖抗原19 9 (CA199)、糖抗原242(CA242)、癌抗原72 4(CA724)、细胞角蛋白19片段(CA211)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和组织多肽抗原(TPA)的含量,结合ANN进行数据建模分析,并用盲法验证模型,对原发灶不明肿瘤的鉴别准确率进行评价。结果 肺癌和肝癌ANN模型,对肺癌和肝癌的鉴别准确率达90 .9%;肠癌和肝癌ANN模型,对肠癌和肝癌的鉴别准确率为88 .9%;肝癌和胃癌ANN模型,对肝癌和胃癌的鉴别准确率为93. 5%;乳腺癌和肺癌ANN模型,对乳腺癌和肺癌的鉴别准确率为80. 5%;用肠癌和肝癌ANN模型鉴别2例原发灶不明肿瘤(术后病理诊断为肠癌)为肠癌;用肝癌和胃癌ANN模型鉴别2例原发灶不明肿瘤(术后病理诊断为肠癌)为胃癌。结论 ANN结合8种TM建立的诊断模型分析法可有效鉴别肺癌等5种肿瘤,并且可能提示原发灶不明的恶性肿瘤的原发部位。 展开更多
关键词 神经元特异性烯醇化酶(NSE) 人工神经网络(ANN) 物模型 时间分辨荧光分析 癌胚抗原(CEA) 细胞角蛋白19片段 原发灶不明 血清肿瘤标志物 酶联免疫吸附 病理诊断为 恶性肿瘤患者 组织多肽抗原 诊断模型 原发部位 乳腺癌患者
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作为美国资产阶级文化一个部门的描写语言学 被引量:2
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作者 高名凯 《当代语言学》 1964年第3期74-102,共29页
一美国某些语言学家所建立的描写语言学(descrip-tive linguistics)是现代欧美资产阶级语言学中的一个派别,也就是现代语言学中的结构主义语言学的一个派别。美国人曾经大事宣传这一学派语言学的所谓“功绩”,美国语言学家豪根(E.Haugen... 一美国某些语言学家所建立的描写语言学(descrip-tive linguistics)是现代欧美资产阶级语言学中的一个派别,也就是现代语言学中的结构主义语言学的一个派别。美国人曾经大事宣传这一学派语言学的所谓“功绩”,美国语言学家豪根(E.Haugen)就曾宣称美国描写语言学家们所建立的分配法(参阅下面的论述)“也许是现代语言学的主要发明”。①由于美国人的这种宣传,美国描写语言学也就引起了人们的注意,于是,就有人把它说成是现代最伟大的语言科学的成就,甚至于把它说成是唯一正确的、马克思主义的语言学。例如邵武勉就曾赞扬美国描写语言学,认为包括美国描写语言学在内的欧美结构主义语言学是“唯一正确的、马克思主义的、现代化的语言科学”,“是现代语言科学的一切部门的基础”,并且认为它“不仅在理论上是重要的,而且还具有重大的国民经济和国防的意义”,“结构语言学(按,即结构主义语言学)的基础不是唯心主义,不是唯心主义的原则,而是反映客观现实的极科学的原则”,“马克思主义语言学不是别的。 展开更多
关键词 分析 形位 音位 环境 互补分配 哈里斯 出现于 美国描写语言学 成分 片段
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