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基于不同配体的蛋白质纯化技术的研究与应用
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作者 庞晓敏 李岩异 《生物技术进展》 2025年第1期50-57,共8页
蛋白质作为生命的物质基础,是生命活动的主要载体。针对下游工艺,不断开发出新的配体纯化技术,能够更安全、经济、高效地去除复杂蛋白质样品中的各种杂质。归纳了具有不同配体的介质材料(包括疏水配体、离子交换配体、混合模式配体和短... 蛋白质作为生命的物质基础,是生命活动的主要载体。针对下游工艺,不断开发出新的配体纯化技术,能够更安全、经济、高效地去除复杂蛋白质样品中的各种杂质。归纳了具有不同配体的介质材料(包括疏水配体、离子交换配体、混合模式配体和短肽仿生配体)和蛋白质分离技术(包括聚合物接枝技术和连续柱层析技术)的研究现状、创新应用及其发展前景,以期在蛋白质纯化过程中获取有效资源,为下游纯化技术发展提供参考。 展开更多
关键词 蛋白质纯化 配体修饰 混合模式配体 聚合物接枝技术 连续柱层析
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内含肽介导的新型蛋白质纯化技术 被引量:3
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作者 孙永福 王凤山 张敏 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期146-148,共3页
内含肽(intein)的自切割功能在蛋白质工程领域有着广泛的应用,尤其是在蛋白质纯化方面,将内含肽与亲和纯化技术联合应用,使得传统的亲和纯化方式有了重大的突破。近年来,随着内含肽的研究不断深入,一批内含肽介导的新型蛋白质纯化技术... 内含肽(intein)的自切割功能在蛋白质工程领域有着广泛的应用,尤其是在蛋白质纯化方面,将内含肽与亲和纯化技术联合应用,使得传统的亲和纯化方式有了重大的突破。近年来,随着内含肽的研究不断深入,一批内含肽介导的新型蛋白质纯化技术不断出现。新技术依靠内含肽的自切割功能去除亲和标签,避免了传统工艺中因外加蛋白酶而带来的诸多麻烦;新的聚合材料的引入又成功地避开了亲和树脂柱的使用,不仅优化了工艺,也大大降低了纯化的成本,为在工业化大生产中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 内含肽 亲和纯化 蛋白质纯化
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计算机模拟蛋白质纯化实验 被引量:3
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作者 朱涛 段明星 +1 位作者 陈坚刚 周广业 《大学化学》 CAS 1998年第6期30-33,共4页
将计算机辅助教学手段(即CAI)用于高等学校的教学工作,近年来已取得了很大发展,这是高校教学改革的重要方向。而将CAI用于实验教学,模拟动态的实验过程,则难度相对较大,目前成熟的实用软件还不多见。在生物化学大实验中使... 将计算机辅助教学手段(即CAI)用于高等学校的教学工作,近年来已取得了很大发展,这是高校教学改革的重要方向。而将CAI用于实验教学,模拟动态的实验过程,则难度相对较大,目前成熟的实用软件还不多见。在生物化学大实验中使用计算机模拟纯化生物大分子的实验软... 展开更多
关键词 蛋白质纯化 实验教学 软件 计算机模拟 生物化学
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致病疫霉NLP家族基因PiNLP30的克隆、原核表达及蛋白质纯化 被引量:1
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作者 朱丽丹 朱杰华 +2 位作者 赵冬梅 杨志辉 徐进 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第10期74-78,共5页
为了制备致病疫霉NLP家族中PiNLP30蛋白的多克隆抗体,根据GenBank中PiNLP30的cDNA序列及原核表达载体pET28b中的多克隆位点设计引物,对PiNLP30基因进行RT-PCR扩增和重组质粒pET28b-PiNLP30的构建,将重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)表达体... 为了制备致病疫霉NLP家族中PiNLP30蛋白的多克隆抗体,根据GenBank中PiNLP30的cDNA序列及原核表达载体pET28b中的多克隆位点设计引物,对PiNLP30基因进行RT-PCR扩增和重组质粒pET28b-PiNLP30的构建,将重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)表达体系中进行诱导表达,通过SDS-PAGE检测蛋白质表达,并利用镍琼脂糖亲和层析进行蛋白质纯化。克隆和序列分析显示,该基因cDNA全长714bp,编码237个氨基酸。该基因编码蛋白质是一个主要由不规则卷曲组成的亲水蛋白,含有一段19个氨基酸的信号肽序列。预测蛋白质分子量为26.6kD,等电点5.49。经PCR、酶切及测序验证,成功构建了原核表达载体pET28b-PiNLP30,使用0.6mmol/L IPTG于37℃下诱导6h后蛋白质大量表达,表达的蛋白质主要以包涵体形式存在。经镍琼脂糖亲和层析进行纯化,获得了纯化的PiNLP30蛋白,其质量浓度约为0.3mg/mL。 展开更多
关键词 致病疫霉 PiNLP30 基因 序列分析 原核表达 蛋白质纯化
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“干实验”研究——在微机上模拟蛋白质纯化实验
5
作者 陈坚刚 余冰宾 《实验技术与管理》 CAS 2008年第12期123-126,共4页
在微机上模拟蛋白质纯化实验又称“干实验”,它是通过模拟软件完成的。文章论述了该教学软件开发的思路及过程,介绍了教学软件的教学效果、使用情况和学生的评价。最后提出了软件进一步升级和后续开发的构想。
关键词 干实验 计算机辅助教学 蛋白质纯化
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反胶束用于蛋白质纯化和生物转化的研究进展
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作者 彭文岚 高静 刘文娜 《上海化工》 CAS 2009年第11期18-20,共3页
反胶束是表面活性剂分子在非极性有机溶剂中自发形成的具有热力学稳定性的纳米级聚集体,其内部可溶解水和其他亲水性分子,包括多种生物活性物质,在生物技术领域应用广泛。综述了反胶束中蛋白质纯化和生物转化的研究进展,对存在的问题进... 反胶束是表面活性剂分子在非极性有机溶剂中自发形成的具有热力学稳定性的纳米级聚集体,其内部可溶解水和其他亲水性分子,包括多种生物活性物质,在生物技术领域应用广泛。综述了反胶束中蛋白质纯化和生物转化的研究进展,对存在的问题进行了评述,并对其应用前景作了展望。 展开更多
关键词 反胶束 蛋白质纯化 生物转化
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“吸附功能分离膜及其在蛋白质纯化中应用研究”项目通过天津市科委验收
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作者 郭建辉 《天津工业大学学报》 CAS 2008年第3期59-59,共1页
由我校中空纤维膜材料与膜过程教育部重点实验室副主任张玉忠教授主持完成的天津市应用基础研究计划重点项目“吸附功能分离膜及其在蛋白质纯化中应用研究”,于2007年12月29日通过了由天津市科委组织的专家验收.
关键词 蛋白质纯化 吸附功能 天津市 分离膜 应用 科委 教育部重点实验室 基础研究
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参与碱基切除修复的AP内切酶1的克隆和蛋白质纯化
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作者 顾永清 KAMIYA Kenji 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第6期713-716,共4页
碱基切除修复途径是去除氧化和甲基化碱基的最主要途径。在碱基切除修复过程中,多个蛋白质,诸如DNA糖基酶、APE1内切酶、DNA聚合酶beta和DNA连接酶在体内的精密调节下高度协调地作用,从而切除受损碱基,使DNA恢复正常序列。碱基切除修复... 碱基切除修复途径是去除氧化和甲基化碱基的最主要途径。在碱基切除修复过程中,多个蛋白质,诸如DNA糖基酶、APE1内切酶、DNA聚合酶beta和DNA连接酶在体内的精密调节下高度协调地作用,从而切除受损碱基,使DNA恢复正常序列。碱基切除修复对维持基因组的稳定及抑制肿瘤发生等生理过程有重要作用。为了进一步从分子水平阐明APE1的作用机制,我们从HeLa细胞的cDNA文库中克隆得到APE1基因,使APE1在大肠杆菌中得到表达,并用蛋白质纯化的快速液相层析法经过一系列层析柱纯化了重组APE1蛋白质,APE1的生物化学功能研究正在进行中。 展开更多
关键词 碱基切除修复 AP内切酶1 蛋白质纯化
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《蛋白质纯化技术》理论与实验课程教学探索
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作者 辛瑜 《教育教学论坛》 2019年第47期269-270,共2页
《蛋白质纯化技术》课程是大学生物学科教学中的一门较为特殊的课程,是生物学的下游技术集成,也是多学科的交叉。论文针对《蛋白质纯化技术》课程,进行了课程教学的探索与改革,构建了贴近领域前沿的开放性教学模式,由教师引导学生自主... 《蛋白质纯化技术》课程是大学生物学科教学中的一门较为特殊的课程,是生物学的下游技术集成,也是多学科的交叉。论文针对《蛋白质纯化技术》课程,进行了课程教学的探索与改革,构建了贴近领域前沿的开放性教学模式,由教师引导学生自主选择浸入,进行对等式的教学,帮助学生完成差异性的特色鲜明的实验自主设计。 展开更多
关键词 蛋白质纯化技术 开放式教学 自主浸入 对等式教学 实验自主设计
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蛋白质纯化分析仪关键参数计量方法研究
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作者 陈鸿飞 陈琳 惠文珊 《计量与测试技术》 2023年第10期88-91,共4页
随着我国生物医药产业快速发展,蛋白质药物相关产业对大众医疗健康具有重要意义,其技术作为蛋白质组学的关键技术,广泛应用于生命科学研究和生物制药产业中。蛋白质纯化分析仪自动化程度较高,已基本完全替代传统的蛋白质纯化柱的模式。... 随着我国生物医药产业快速发展,蛋白质药物相关产业对大众医疗健康具有重要意义,其技术作为蛋白质组学的关键技术,广泛应用于生命科学研究和生物制药产业中。蛋白质纯化分析仪自动化程度较高,已基本完全替代传统的蛋白质纯化柱的模式。本文系统分析了蛋白质纯化分析仪的关键计量参数,并针对各项参数建立了校准方法,为蛋白质分析仪校准提供了技术依据和质量控制方法,为国家校准规范制定奠定基础。 展开更多
关键词 计量学 生物计量 蛋白质纯化 蛋白质纯化分析仪 校准方法
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蛋白质纯化虚拟仿真课程的教学设计 被引量:2
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作者 马骋 宫彩霞 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第10期2063-2074,共12页
目的蛋白质纯化是医学与生物学实验教学课程中的一个重要内容,本文通过设计新的蛋白质纯化虚拟仿真教学内容,开发虚拟仿真教学系统,希望学生能够更有效率地掌握蛋白质纯化技术的要点,提升教学质量。方法利用3D虚拟仿真技术,构建虚拟仿... 目的蛋白质纯化是医学与生物学实验教学课程中的一个重要内容,本文通过设计新的蛋白质纯化虚拟仿真教学内容,开发虚拟仿真教学系统,希望学生能够更有效率地掌握蛋白质纯化技术的要点,提升教学质量。方法利用3D虚拟仿真技术,构建虚拟仿真实验室。结合线下教学经验,确定虚拟仿真教学中需要体现的教学内容、教学重点、核心仪器的特色、评分指标、考核方式、操作体验等。结果本文基于3D虚拟仿真技术构建了蛋白质纯化虚拟仿真实验室,和传统教学相比,虚拟仿真教学可以提高教学效率,节省教学成本和场地占用;教学设计和虚拟仿真教学系统融合了教学、练习和考核模块,根据以往的教学经验优化了评分体系,保证学生更加有效、严谨地掌握技术细节;涵盖了全新的教学内容——荧光检测联用的分子排阻层析,添加了蛋白质层析的常用案例,保证了内容的新颖与实用;完全再现了现实实验室中仪器设备的搭建模式,实现虚拟学习与实际操作的无缝衔接。结论蛋白质纯化虚拟仿真教学系统由虚及实,由点及面,把控细节,保证学生动手能力和探索能力的提高,学以致用,并且拥有传统教学模式不可比拟的优势。 展开更多
关键词 蛋白质纯化 荧光检测联用的分子排阻层析 虚拟仿真 实验教学
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GE医疗在中国和全球同步上市新一代层析系统AKTATM pure开创蛋白质纯化新纪元
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《中国医疗设备》 2012年第9期176-177,共2页
8月24日,GE医疗在成都市举办的全国生物化学与分子生物学学术大会上宣布,将在中国和全球同步发售新一代层析系统AKTATM pure。
关键词 GE医疗 PURE 蛋白质纯化 系统 层析 同步 中国 生物化学与分子生物学
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书讯:《蛋白质纯化与鉴定实验指南》
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《生物技术通讯》 CAS 2004年第1期19-19,共1页
关键词 蛋白质纯化与鉴定实验指南》 胰岛素受体 分子生物学 细胞生物学 微生物学
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《蛋白质纯化与鉴定实验指南》
14
《生物技术通讯》 CAS 2004年第2期200-200,共1页
关键词 蛋白质纯化 鉴定实验
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蛋白质纯化指南(原书第2版)
15
作者 R.R.伯吉斯 陈薇 《中国科技信息》 2013年第21期101-101,共1页
《蛋白质纯化指南》的第一版在二十年前出版.一直被广泛用来指导学生和研究人员纯化、鉴定、处理蛋白质和酶。这一新版本修改和更新了内容,但仍然延续了本书的传统,呈现清晰、易于遵循的方式,使专家和新手科学家都可以成功地掌握实... 《蛋白质纯化指南》的第一版在二十年前出版.一直被广泛用来指导学生和研究人员纯化、鉴定、处理蛋白质和酶。这一新版本修改和更新了内容,但仍然延续了本书的传统,呈现清晰、易于遵循的方式,使专家和新手科学家都可以成功地掌握实验室的前沿技术和经典方法。 展开更多
关键词 蛋白质纯化 指南 研究人员 经典方法 实验室 科学家
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蛋白质纯化与分析技术
16
《中国科技信息》 2014年第1期109-109,共1页
作者:汪少芸编出版社:中国轻工业出版社出版时间:2014-01-011SBN:9787501974;599所属分类:图书〉科学与自然〉生物科学 《蛋白质纯化与分析技术》以蛋白质纯化与分析技术为核心,对其基本原理及应用实例做了详细的阐述。主要内... 作者:汪少芸编出版社:中国轻工业出版社出版时间:2014-01-011SBN:9787501974;599所属分类:图书〉科学与自然〉生物科学 《蛋白质纯化与分析技术》以蛋白质纯化与分析技术为核心,对其基本原理及应用实例做了详细的阐述。主要内容包括:蛋白质纯化的依据与设计、蛋白质的提取技术、蛋白质的纯化技术、特征蛋白质的纯化技术以及定量与分析检测技术。 展开更多
关键词 蛋白质纯化 提取技术 分析检测技术 生物科学 纯化技术 出版社 轻工业
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蛋白质纯化的新选择Mixed模式成为蛋白质A相似性色谱分离法的替代方案
17
作者 Dirk Sievers Christina Brunter 《流程工业》 2008年第20期81-82,共2页
生物技术的进步也使得医药产品生产流程的要求发生了明显的改变。近年来在上游技术领域中,生产效率的提高也要求下游流程工艺技术随之发生变化,要求它们有着可持续性的优化改进。尤其是在蛋白质提纯的色谱分离方法中,对高性能的色谱... 生物技术的进步也使得医药产品生产流程的要求发生了明显的改变。近年来在上游技术领域中,生产效率的提高也要求下游流程工艺技术随之发生变化,要求它们有着可持续性的优化改进。尤其是在蛋白质提纯的色谱分离方法中,对高性能的色谱分离技术有着强烈的市场需求。该领域有什么新的替代方案或者新的发展吗?本文将对此加以介绍。 展开更多
关键词 色谱分离法 蛋白质A 蛋白质纯化 相似性 色谱分离技术 生物技术 生产流程 医药产品
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重组蛋白质纯化中切割蛋白酶的选择与应用进展
18
作者 吕游 魏彤同 《中文科技期刊数据库(文摘版)医药卫生》 2016年第6期271-271,共1页
在社会的发展下,人们对于药品质量的要求也越来越高,为了提升药品的质量,就需要采取科学有效的措施提升蛋白质的天然性,而使用切割蛋白酶就能够很好的达到这一目标,本文主要从凝血酶、凝血因子十、肠激酶与3C 蛋白酶的角度来分析重组蛋... 在社会的发展下,人们对于药品质量的要求也越来越高,为了提升药品的质量,就需要采取科学有效的措施提升蛋白质的天然性,而使用切割蛋白酶就能够很好的达到这一目标,本文主要从凝血酶、凝血因子十、肠激酶与3C 蛋白酶的角度来分析重组蛋白质纯化中切割蛋白酶的选择与应用进展。 展开更多
关键词 重组蛋白质纯化 切割蛋白 选择 应用进展
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EB病毒LMP1-CTAR2结构域的原核表达及蛋白质纯化 被引量:1
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作者 余琳 张雪雁 李孜 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第7期1583-1585,共3页
目的:构建LMP1-CTAR2原核表达载体,纯化LMP1羧基端活化区2(CTAR2)蛋白。方法:通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBVLMP1 CTAR2 cDNA,克隆至PGEM-T载体后测序。运用亚克隆技术构建PGEX-6P-3-CTAR2重组表达载体。用SDS-PAGE与western blot... 目的:构建LMP1-CTAR2原核表达载体,纯化LMP1羧基端活化区2(CTAR2)蛋白。方法:通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBVLMP1 CTAR2 cDNA,克隆至PGEM-T载体后测序。运用亚克隆技术构建PGEX-6P-3-CTAR2重组表达载体。用SDS-PAGE与western blot对表达产物进行鉴定,利用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行分离和纯化。结果:PCR扩增出225 bp的基因片段,测序结果与已知的LMP1 CTAR2序列吻合。成功构建PGEX-6P-3-CTAR2原核表达载体,western blot分析表明表达产物能与抗LMP1单克隆抗体特异结合。成功分离出Mr约37000的PGEX-6P-3-CTAR2融合蛋白,纯化出Mr约15000的LMP1 CTAR2蛋白。结论:成功获得EBV LMP1 CTAR2蛋白,可用于噬菌体筛库和CTAR2致瘤机制研究。 展开更多
关键词 EPSTEIN-BARR病毒 羧基端活化区2 原核表达 蛋白质纯化
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三种甘蔗叶片蛋白质分离纯化方法比较及双向电泳体系优化
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作者 周桂 邹成林 +4 位作者 丘立杭 刘小霞 毛江江 杨丽涛 李杨瑞 《中国糖料》 2017年第2期1-5,共5页
为了优化适用于甘蔗叶片蛋白质的分离纯化方法与双向凝胶电泳体系,比较了3种蛋白质分离纯化方法对甘蔗叶片蛋白质的SDS-PAGE电泳图谱、蛋白质提取率以及双向凝胶电泳的影响,同时优化了双向电泳条件。结果显示,SDS提取法的SDS-PAGE电泳... 为了优化适用于甘蔗叶片蛋白质的分离纯化方法与双向凝胶电泳体系,比较了3种蛋白质分离纯化方法对甘蔗叶片蛋白质的SDS-PAGE电泳图谱、蛋白质提取率以及双向凝胶电泳的影响,同时优化了双向电泳条件。结果显示,SDS提取法的SDS-PAGE电泳图谱中条带较少,蛋白质沉淀杂质多,效果差;三氯乙酸/丙酮沉淀法蛋白质沉淀得率高,但沉淀复溶性差,蛋白质溶液浓度低,难于满足双向电泳大胶的高上样量要求;酚抽提法蛋白质沉淀得率虽低,但沉淀纯度高、复溶性好,蛋白质溶液浓度高,是适合双向电泳分离纯化甘蔗叶片蛋白质的理想方法。酚抽提法蛋白质双向凝胶电泳合适的胶条p H范围为4~7,17 cm大胶合适的上样量为800μg,平均可分离出954个蛋白点。 展开更多
关键词 甘蔗叶片 蛋白质纯化 SDS-PAGE 双向凝胶电泳 条件优化
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