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表皮生长因子受体介导的多肽载体系统对人喉鳞状细胞癌的基因导入研究 被引量：5
1
作者 肖水芳 锡琳 +3 位作者 周毅丁 王成元 田培坤 顾健人 《中华耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期283-287,共5页
目的　检测一种新的以头颈肿瘤细胞表面受体为靶向的多肽基因导入系统对人喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )的基因导入效果。方法　链霉亲和素标记生物素 (labeledstreptavidinbiotin ,LSAB)法检测喉癌组织标本和培养的Hep2喉癌细胞表皮生长因... 目的　检测一种新的以头颈肿瘤细胞表面受体为靶向的多肽基因导入系统对人喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )的基因导入效果。方法　链霉亲和素标记生物素 (labeledstreptavidinbiotin ,LSAB)法检测喉癌组织标本和培养的Hep2喉癌细胞表皮生长因子受体 (epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)的表达。建立人喉癌裸鼠移植瘤模型 ,分别构建绿色荧光蛋白标记基因和多肽载体系统、半乳糖苷酶报告基因和多肽载体系统四元复合物 ,分别进行报告基因和标记基因的体内外导入实验。结果　EGFR在 6 5 % (15 / 2 3)喉癌组织标本呈阳性表达。Hep2细胞的EGFR亦呈阳性表达。EGFR主要位于细胞膜 ,部分位于细胞质内。绿色荧光蛋白基因转染Hep2后 4 8h显微镜下可见荧光 ,72h达高峰 ,导入率大于 80 % (78/ 97)。β 半乳糖苷酶报告基因荷人喉癌裸鼠移植瘤瘤内转染 12h即表达蓝染 ,2 4h蓝染程度加深 ,72h仍有表达。　结论　EGFR广泛存在于人喉癌细胞 ,新的多肽基因导入系统借助于EGFR可靶向性将报告或标记基因导入体内外人喉癌细胞 ,并得到高效表达 ,为头颈鳞癌的基因治疗提供了一个新的靶向高效的基因导入系统。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 多肽载体系统 喉鳞状细胞癌 基因导入 检测
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新多肽配体GE11与表皮生长因子受体的结合能力分析 被引量：3
2
作者 郭妍 李宗海 +1 位作者 顾健人 徐宇虹 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1318-1321,共4页
应用亲和毛细管电泳(ACE)分析方法,对表皮生长因子受体(EGFR)和新多肽配体GE11之间的结合能力进行分析。结果表明,EGFR与多肽配体GE11之间存在特异性相互作用,考察EGFR在不同浓度GE11溶液中的迁移情况,采用非线性、双倒数、Y-倒数和X-倒... 应用亲和毛细管电泳(ACE)分析方法,对表皮生长因子受体(EGFR)和新多肽配体GE11之间的结合能力进行分析。结果表明,EGFR与多肽配体GE11之间存在特异性相互作用,考察EGFR在不同浓度GE11溶液中的迁移情况,采用非线性、双倒数、Y-倒数和X-倒数4个数据处理方法得到较好的数据拟合,并测得结合常数。该文为筛选多肽配体以及测定受体与多肽配体之间的结合常数提供了简便的方法,将有力推动肿瘤靶向药物输送的研究。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 多肽配体 亲和毛细管电泳 结合常数
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靶向表皮生长因子受体的小分子RNA干扰抑制人脑胶质瘤Notch1表达的实验研究 被引量：1
3
作者 裘明哲 浦佩玉 +4 位作者 康春生 张志勇 王广秀 贾志凡 江荣才 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2006年第3期198-202,共5页
目的探讨RNA干扰表皮生长因子受体后Notch1在人脑胶质瘤中的表达变化。方法应用免疫组织化学方法检测不同级别脑胶质瘤组织标本中Notch1的表达水平,并进行相关分析。选择人表皮生长因子受体的两个RNA干扰靶序列构建靶向表皮生长因子受体... 目的探讨RNA干扰表皮生长因子受体后Notch1在人脑胶质瘤中的表达变化。方法应用免疫组织化学方法检测不同级别脑胶质瘤组织标本中Notch1的表达水平,并进行相关分析。选择人表皮生长因子受体的两个RNA干扰靶序列构建靶向表皮生长因子受体的RNA干扰表达质粒,进行脂质体介导的TJ905人脑恶性胶质瘤细胞系表达;应用荧光定量逆转录-聚合酶链反应仪观察RNA干扰表皮生长因子受体后TJ905人脑恶性胶质瘤细胞系Notch1的表达变化。结果免疫组织化学检测显示,在不同级别胶质瘤组织标本中Notch1的阳性表达率分别为Ⅳ级93.33%(14/15);Ⅲ级92.31%(12/13);Ⅱ级68.42%(13/19)。Ⅱ级阳性表达程度较Ⅲ、Ⅳ级弱,组间差异有高度统计学意义(H=6.944,P<0.01),提示高级别胶质瘤Notch1阳性表达率高于低级别。RNA干扰表皮生长因子受体后,Notch1在TJ905胶质母细胞瘤细胞系中的表达下降(F=578.728,P<0.01):TJ905组与TJ905+空载组相比,差异无统计学意义(P>0.05);TJ905+空载组与TJ905+516组相比,差异有统计学意义(q=6.359,P<0.05);TJ905+516组与TJ905+2400组比较,差异有统计学意义(q=4.501,P<0.05);TJ905组与TJ905+2400组相比差异亦有统计学意义(q=10.015,P<0.05)。责任基因相对表达量,TJ905组和TJ905+空载组均为2.48×10-5,TJ905+516组为6.64×10-6,TJ905+2400组为2.08×10-7。结论表皮生长因子受体与Notch1关系密切,对二者关系的进一步研究可为胶质瘤的基因治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 RNA 信使 RNA干扰 受体 表皮生长因子 脑肿瘤 神经胶质瘤
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RNA干扰表皮生长因子受体对骨肉瘤细胞凋亡的影响 被引量：1
4
作者 赵成利 李祖国 +1 位作者 匡斌 郭爱林 《实用医学杂志》 CAS 2007年第19期2972-2974,共3页
目的:探讨小发夹RNA载体介导抑制骨肉瘤细胞中表皮生长因子受体(EGFR)的表达和对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法:构建pSilencer-EGFR短发夹状小干扰RNA(siRNA)真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到骨肉瘤细胞中,用Wester... 目的:探讨小发夹RNA载体介导抑制骨肉瘤细胞中表皮生长因子受体(EGFR)的表达和对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法:构建pSilencer-EGFR短发夹状小干扰RNA(siRNA)真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到骨肉瘤细胞中,用Western印迹法、RT-PCR检测EGFR基因在骨肉瘤细胞中的表达;通过原位末端标记(TUNEL)法,DNA片段化检测观察其对骨肉瘤细胞凋亡的影响。结果:成功构建pSilencer-EGFR短发夹状siRNA真核基因表达载体,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的骨肉瘤细胞中EGFR基因表达显著抑制(60%)。与对照组比较,pSilencer-EGFR转染组骨肉瘤细胞培养48h后,DNA片段化检测出"DNA ladder"和TUNEL法显示细胞典型凋亡特征。结论:EGFR小发夹RNA质粒载体可显著抑制骨肉瘤细胞中EGFR基因的表达,促进骨肉瘤细胞凋亡,EGFR基因具有抑制凋亡的作用。 展开更多
关键词 骨肉瘤 RNA干扰 表皮生长因子受体 凋亡
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RNA干扰技术对Hep-2细胞表皮生长因子受体表达的抑制作用及诱导凋亡 被引量：2
5
作者 张世文 何晓光 +3 位作者 李晓江 王苑伶 武要洪 奚艳 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 2012年第1期47-48,共2页
表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）是广泛表达于上皮源性肿瘤细胞膜上的一类跨膜糖蛋白,与肿瘤的增殖、转移和凋亡密切相关。本文通过构建EGFR基因的siRNA表达载体,观察抑制人Hep-2喉鳞状细胞癌（简称喉癌）... 表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）是广泛表达于上皮源性肿瘤细胞膜上的一类跨膜糖蛋白,与肿瘤的增殖、转移和凋亡密切相关。本文通过构建EGFR基因的siRNA表达载体,观察抑制人Hep-2喉鳞状细胞癌（简称喉癌）细胞株EGFR的表达及诱导凋亡情况,为喉癌的基因治疗提供一定的基础理论依据。 展开更多
关键词 癌 鳞状细胞(Carcinoma SquamousCell) RNA干扰(RNA Interference) 细胞凋亡(Apoptosis) 受体 表皮生长因子(Receptor EPIDERMAL Growth Factor)
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表皮生长因子受体干扰序列与白细胞介素24融合蛋白的原核表达 被引量：1
6
作者 樊欣迎 包乐媛 +2 位作者 朱婧 刘翊 杜连祥 《生物技术通讯》 CAS 2009年第1期43-46,共4页
目的:在大肠杆菌中表达表皮生长因子受体干扰序列(EGFRi)与白细胞介素24(IL-24)的融合蛋白。方法:人工合成肿瘤细胞表面受体特异性结合位点EGFRi核苷酸序列,应用重叠延伸PCR技术将其与IL-24基因连接,其间引入一段柔软短肽编码基因;将融... 目的:在大肠杆菌中表达表皮生长因子受体干扰序列(EGFRi)与白细胞介素24(IL-24)的融合蛋白。方法:人工合成肿瘤细胞表面受体特异性结合位点EGFRi核苷酸序列,应用重叠延伸PCR技术将其与IL-24基因连接,其间引入一段柔软短肽编码基因;将融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达条件进行优化;用His.Bind纯化试剂盒对表达产物进行纯化,SDS-PAGE进行鉴定。结果:酶切和测序结果证实EGFRi-IL-24融合基因的原核表达载体构建正确;在IPTG浓度为0.8mol/L、28℃诱导10h的条件下,可溶性融合蛋白表达量最高;表达产物的相对分子质量与预期值一致,为22000;经纯化得到了均一的融合蛋白。结论:获得大肠杆菌表达的融合蛋白EGFRi-IL-2,可用于活性分析。 展开更多
关键词 白细胞介素24 表皮生长因子受体干扰序列 融合蛋白 原核表达
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RNA干扰技术抑制乳腺癌表皮生长因子受体的表达 被引量：1
7
作者 吴伟东 方驰华 +1 位作者 杨正心 包佳巾 《国际医药卫生导报》 2010年第16期1934-1938,共5页
目的 探讨采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）技术是否能有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞表皮生长因子受体（EGFR）表达,以及抑制EGFR基因表达后乳腺癌细胞生物学特性的改变,以期... 目的 探讨采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰（RNAi）技术是否能有效抑制乳腺癌细胞株MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞表皮生长因子受体（EGFR）表达,以及抑制EGFR基因表达后乳腺癌细胞生物学特性的改变,以期为肿瘤治疗提供新的思路和实验依据.方法 （1）建立检测EGFR数量的方法,测定MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞株EGFR的表达.（2）观察dsRNA-EGFR/Lipofectamine 2000对EGFR表达的抑制作用.（3）采用流式细胞仪测定细胞周期,采用ELISA法观察抑制EGFR表达后,MDA-MB231,MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞生物学特性的改变.结果 MDA-MB231、MDA-MB-453S、ZR-75-30、ZR-75细胞株存在EGFR高表达.转染dsRNA-EGFR后可将MDA-MB231、MDA-MB-453S细胞对5-Fu的敏感性提高约4倍.细胞周期分析结果表明dsRNA-EGFR组G0-G1期细胞百分数较对照组增加了17.48%,进入S期的细胞百分数较对照组减少了19.20%.转染dsRNA-EGFR后可将ZR-75-30、ZR-75细胞对5-Fu的敏感性提高约7倍.结论 （1）乳腺癌细胞株存在EGFR高表达.（2）dsRNA-EGFR可序列特异性下调乳腺癌细胞EGFR基因水平,显著降低EGFR蛋白表达.（3）dsRNA-EGFR通过抑制EGFR表达可显著抑制细胞增生和细胞迁移,降低配体EGF的含量,将更多的细胞阻滞在G0-G1期,增加细胞对5-Fu的敏感性,有效逆转乳腺癌细胞的恶性表型,从而为乳腺癌基因治疗提供了新策略. 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 RNA干扰 小干扰RNA 双链RNA 乳腺癌
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针对表皮生长因子受体基因RNA干扰质粒表达载体的构建
8
作者 栾建刚 刘立中 +3 位作者 田聆 文艳君 李炯 梁传余 《华西医学》 CAS 2006年第1期86-88,共3页
目的:表皮生长因子受体(EGFR)是一种酪氨酸激酶跨膜受体,人类的多种恶性肿瘤的发生与表皮生长因子受体过度表达有关。EGFR已成为阳性表达肿瘤的重要治疗靶标。在哺乳动物细胞中,RNA干扰是通过与目的基因特异互补的21-23个硷基的小双链RN... 目的:表皮生长因子受体(EGFR)是一种酪氨酸激酶跨膜受体,人类的多种恶性肿瘤的发生与表皮生长因子受体过度表达有关。EGFR已成为阳性表达肿瘤的重要治疗靶标。在哺乳动物细胞中,RNA干扰是通过与目的基因特异互补的21-23个硷基的小双链RNA来抑制该基因的表达。有研究表明表达小发夹RNA的载体能诱导产生更好的RNA干扰效果。本实验通过向pSIREN-Shuttle质粒插入一段可被转录成小发夹RNA的双链寡核苷酸序列(其中含有于EGFR基因序列相同的19nt序列)重构了RNAi质粒表达载体。通过细胞转染评价该载体对人鼻咽癌细胞株(HNE1)EGFR基因的mRNA表达抑制效果。结果显示HNE1细胞的EGFR基因mRNA被明显抑制。提示shRNA质粒表达载体介导对EGFR基因的RNA干扰可能是鼻咽癌干预治疗的一种有效手段。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 信使核糖核酸 RNA干扰 小发夹RNA
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RNA干扰下调不同肿瘤细胞表皮生长因子受体表达及其意义
9
作者 祝蓉 白莉 +1 位作者 白春学 张新 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第4期278-282,共5页
背景与目的:表皮生长因子受体在多种上皮源性肿瘤中过表达,与肿瘤的发生、发展密切相关,是肿瘤治疗的重要靶点。本研究采用针对EGFR的小干扰RNA(siRNA),探讨其在不同类型肿瘤细胞A431、HeLa、SPC-A-1中的RNA干扰效应。方法:化学合成针对... 背景与目的:表皮生长因子受体在多种上皮源性肿瘤中过表达,与肿瘤的发生、发展密切相关,是肿瘤治疗的重要靶点。本研究采用针对EGFR的小干扰RNA(siRNA),探讨其在不同类型肿瘤细胞A431、HeLa、SPC-A-1中的RNA干扰效应。方法:化学合成针对EGFR的siRNA,转染A431、HeLa、SPC-A-1细胞,通过定量RT-PCR、免疫荧光染色和流式细胞仪检测EGFR表达;通过集落形成实验观察细胞集落形成能力,分析不同类型肿瘤细胞的RNA干扰效应。结果:转染siRNA-EGFR后,3种肿瘤细胞的EGFR表达均明显下调。在A431细胞,其mRNA水平下调73.9%,蛋白水平下调77.0%。在HeLa和SPC-A-1细胞,mRNA水平的下调分别为44.6%和57.7%,蛋白水平下调61.3%和65.2%。EGFR下调后细胞集落形成能力均出现抑制,A431、HeLa和SPC-A-1的集落形成抑制率分别为27.2%、53.9%和59.1%。结论:siRNA-EGFR可在不同类型肿瘤细胞中产生RNA干扰效应,抑制细胞集落形成能力。RNA干扰技术在开发广谱抗肿瘤靶向治疗药物中具有应用价值。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 RNA干扰 肿瘤靶向治疗
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表皮生长因子受体基因RNA干扰慢病毒载体的构建和鉴定研究
10
作者 金晶 马跃辉 +2 位作者 詹仁雅 周永庆 俞建波 《临床合理用药杂志》 2013年第15期16-18,共3页
目的构建表皮生长因子受体(EGFR)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,为其体内外实验研究提供依据。方法合成EGFR基因的miRNA干扰序列,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-EGFR质粒,测序验证插入序列正确,连接到慢病毒载体pLenti6.3-MCS/V5 DEST中,... 目的构建表皮生长因子受体(EGFR)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,为其体内外实验研究提供依据。方法合成EGFR基因的miRNA干扰序列,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-EGFR质粒,测序验证插入序列正确,连接到慢病毒载体pLenti6.3-MCS/V5 DEST中,获得pLenti6.3-EGFR-miRNA质粒,与慢病毒包装质粒Packaging MIX、POLOdelivererTM3000 Transfection Reagent共转染293T细胞株,细胞包装产生慢病毒颗粒,测定慢病毒滴度。结果 PCR和测序结果证实,EGFR miRNA核苷酸链序列插入正确,包装慢病毒产生病毒悬液滴度为1.8×106ifu/ml。结论成功构建EGFR基因RNAi慢病毒载体,为研究其在胶质瘤细胞中的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 受体 表皮生长因子 RNA干扰 慢病毒载体
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β-内啡肽、生长抑素、表皮细胞生长因子及其受体测定在肠癌上表达的初步研究
11
作者 许瑞吉 赵技文 +1 位作者 张中书 张捷 《放射免疫学杂志》 CAS 1994年第6期335-337,共3页
目前，国内外学者已经开展对肠癌组织多肽激素的有关研究，而对多项多酞激素联合测定的报告甚少。笔者对20例肠癌组织进行β-EP、SS、hEGF、hEGF-R含量测定，旨在为肠癌早期诊断、预后观察提供参考。
关键词 肠癌 Β-内啡肽 表皮细胞生长因子 癌组织 生长抑素 受体 表达 多肽激素 初步研究 EGF
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RNA干扰表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌治疗中的研究进展
12
作者 王慧 魏志平 刘彦群 《医学综述》 2010年第10期1482-1484,共3页
RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默现象,是研究基因功能的重要工具。表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌中过度表达,且EGFR信号通路的启动后可促进细胞增殖、转移、血管生成及阻断细胞凋亡,因此被作为开发... RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默现象,是研究基因功能的重要工具。表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌中过度表达,且EGFR信号通路的启动后可促进细胞增殖、转移、血管生成及阻断细胞凋亡,因此被作为开发肿瘤治疗方法的新靶点。现将对RNA干扰表皮生长因子受体在皮肤鳞状细胞癌中的治疗作用予以综述。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 小干扰RNA 皮肤鳞癌
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人γ干扰素（IFN－γ）－表皮生长因子（EGF）融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用与靶细胞的EGF受体有关 被引量：1
13
作者 陈望秋 张笑冰 +4 位作者 迟捷 李玉英 段书敏 张丽兰 侯云德 《病毒学报》 CSCD 北大核心 1995年第4期322-326,共5页
采用表皮生长因子（ＥＧＦ）受体丰富的Ａ４３１细胞进一步研究了人ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白￣〔１〕的抗细胞分裂活性，以及它和靶细胞ＥＧＦ受体的关系。结果表明，ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用明显高于其... 采用表皮生长因子（ＥＧＦ）受体丰富的Ａ４３１细胞进一步研究了人ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白￣〔１〕的抗细胞分裂活性，以及它和靶细胞ＥＧＦ受体的关系。结果表明，ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用明显高于其母体分子。￣１２５Ｉ－ＥＧＦ受体竞争抑制试验表明，ＩＦＮ－γ可与ＥＧＦ竞争Ａ４３１细胞的ＥＧＦ受体，而ＩＮＦ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的ＥＧＦ受体竞争抑制作用更为明显，说明人ＩＦＮ－γ和ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞分裂活性，与靶细胞ＥＧＦ受体被竟争抑制密切相关。 展开更多
关键词 Γ干扰素 融合蛋白 表皮生长因子 受体 抗肿瘤性
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奥曲肽和表皮生长因子受体单克隆抗体诱导人胃癌细胞凋亡
14
作者 陈穗 范平 +2 位作者 齐凤 尹格平 李定国 《胃肠病学》 2002年第2期90-90,118,共2页
目的：定量检测奥曲肽（ＳＭＳ）和表皮生长因子受体单克隆抗体（ＥＧＦＲＭＣＡｂ）对人胃癌细胞系 ＳＧＣ－７９０１的诱 导凋亡作用。方法：将不同浓度的ＳＭＳ和ＥＧＦＲＭｃＡｂ与胃癌细胞共同孵育，用流式细胞术分析其细胞凋亡情... 目的：定量检测奥曲肽（ＳＭＳ）和表皮生长因子受体单克隆抗体（ＥＧＦＲＭＣＡｂ）对人胃癌细胞系 ＳＧＣ－７９０１的诱 导凋亡作用。方法：将不同浓度的ＳＭＳ和ＥＧＦＲＭｃＡｂ与胃癌细胞共同孵育，用流式细胞术分析其细胞凋亡情况。 结果：ＳＭＳ ５ × １０－５和ＥＧＦＲＭｃＡｂ１：１００与胃癌细胞共同孵育７２ ｈ，胃癌细胞凋亡率分别为７．９６％和７．４９％，与对 照组（１．１９％湘比，有显著差异ｐ＜０．０５）。结论：诱导细胞凋亡是胃肠肽类激素发挥其抗肿瘤作用的重要途径之一。 展开更多
关键词 奥曲肽 脱噬作用 流式细胞术 表皮生长因子-尿抑胃素受体 单克隆抗体 抗肿瘤作用 胃肿瘤 细胞凋亡
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RNAi抑制鼻咽癌细胞表皮生长因子受体表达对细胞生长的影响 被引量：9
15
作者 翁德胜 吴正蓉 +1 位作者 王爽 丁彦青 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期71-74,共4页
目的利用RNAi技术抑制鼻咽癌细胞5-8F表皮生长因子受体(EGFR)表达,观察细胞生长变化,探讨EGFR与鼻咽癌发生发展之间的相关性。方法利用体外转录法合成EGFR特异性siRNA,将其瞬时转染5-8F,收集转染后细胞总RNA和蛋白,利用RT-PCR和Westernb... 目的利用RNAi技术抑制鼻咽癌细胞5-8F表皮生长因子受体(EGFR)表达,观察细胞生长变化,探讨EGFR与鼻咽癌发生发展之间的相关性。方法利用体外转录法合成EGFR特异性siRNA,将其瞬时转染5-8F,收集转染后细胞总RNA和蛋白,利用RT-PCR和Westernblot法测定EGFR表达水平的变化,并检测EGFR表达抑制后细胞生长速度和生长周期的变化。结果合成的3对siRNA中,有一对使EGFRmRNA表达下降67．5％,蛋白表达下降77％。EGFR表达抑制后5-8F生长速度减慢,并诱导细胞周期停止在G1期。结论RNAi沉默EGFR表达可抑制鼻咽癌细胞生长,并诱导癌细胞停止在G1期．RNAi可作为探索鼻咽癌发生发展机制和基因治疗的有效工具。 展开更多
关键词 RNA干扰 表皮生长因子受体 鼻咽癌 基因沉默
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双位点小干扰RNA靶向抑制表皮生长因子受体促大肠癌细胞凋亡和5-氟尿嘧啶化疗增效的实验研究 被引量：1
16
作者 吴相柏 陶凯雄 王国斌 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期668-668,共1页
为观察针对单位点与双位点的RNA干扰技术抑制大肠癌LoVo细胞表皮生长因子受体（EGFR）的表达，诱导细胞凋亡以及对5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的差异。构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2，脂质体转染人大肠癌LoVo细胞，... 为观察针对单位点与双位点的RNA干扰技术抑制大肠癌LoVo细胞表皮生长因子受体（EGFR）的表达，诱导细胞凋亡以及对5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的差异。构建质粒表达载体pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2，脂质体转染人大肠癌LoVo细胞，G418筛选4周，分5组：1组为LoVo细胞，2组为对照质粒载体HK，3组为pU6-EGFR-shRNA-1，4组为pU6-EGFR-shRNA-2，5组为pU6-EGFR-shRNA-1和pU6-EGFR-shRNA-2各半量，实时荧光定量PCR和Western blot检测mRNA和蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率，细胞增殖分析试剂CCK-8（Cell CountingKit-8）测定5-FU不同浓度和时间对LoVo细胞的抑制率和半数抑制浓度（IC50）。 展开更多
关键词 大肠癌LOVO细胞 表皮生长因子受体 5-氟尿嘧啶 小干扰RNA 双位点 癌细胞凋亡 实验研究 化疗增效
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靶向表皮生长因子受体psiRNA抑制人脑胶质瘤细胞系U251生长的体外研究 被引量：5
17
作者 韩磊 张安玲 +5 位作者 康春生 许鹏 王广秀 贾志凡 张春智 浦佩玉 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2008年第5期442-448,共7页
目的探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)RNA干扰(RNAi)技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251EGFR表达后,在体外对细胞增殖活性和侵袭能力的抑制作用。方法应用流式细胞术、Annexin V法、MTT法、Matrigel细胞外基质生长实验和Transwell细胞侵袭实... 目的探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)RNA干扰(RNAi)技术抑制人脑胶质瘤细胞系U251EGFR表达后,在体外对细胞增殖活性和侵袭能力的抑制作用。方法应用流式细胞术、Annexin V法、MTT法、Matrigel细胞外基质生长实验和Transwell细胞侵袭实验评价由脂质体Lipofectamine 2000介导转染的人脑胶质瘤细胞系U251转染前后细胞增殖活性和侵袭能力的变化;Western blotting检测EGFR和PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质的表达水平。结果与对照组和psiRNA-scr组比较,psiRNA-EGFR组EGFR以及PI3K/Akt信号转导通路中相关蛋白质表达水平降低(均P=0.000)。转染后,psiRNA-EGFR组细胞阻滞于G0和G1期,S期细胞数目减少(均P=0.000);其细胞凋亡率为(9.60±0.26)%,高于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.000);自培养第2天其细胞增殖速率即呈下降趋势,且低于对照组和psiRNA-scr组(均P=0.001)。结论靶向表皮生长因子受体RNAi技术可以序列特异性地抑制人脑胶质瘤细胞系U251细胞表皮生长因子受体表达,在体外对U251细胞生长具有明显抑制作用。靶向表皮生长因子受体psiRNA基因治疗可能成为脑胶质瘤治疗的新策略。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 RNA 小分子干扰 受体 表皮生长因子 转染
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RNAi技术抑制乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的在体实验研究 被引量：2
18
作者 吴伟东 方驰华 +1 位作者 杨正心 包佳巾 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期60-64,共5页
目的探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据。方法(1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率。(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿... 目的探讨采用体外化学合成的小干扰RNA(siRNA)结合阳离子脂质体是否能有效在体转染乳腺癌细胞,以期为RNAi的在体实验研究提供实验数据和理论依据。方法(1)建立裸鼠肿瘤动物模型,计算成瘤率。(2)体外转染乳腺癌细胞,常规动物接种,测量肿瘤体积和动物重量,计算肿瘤抑制率。(3)采用免疫组化和Western blotting技术测定肿瘤组织的表皮生长因子受体蛋白水平,采用Real-time PCR检测表皮生长因子受体基因水平,采用ELISA检测动物血清及肿瘤抽提蛋白中EGF含量。结果MDA-MB-231、ZR-75细胞成瘤率依次为30.00%、88.89%,MDA-MB-231细胞的成瘤能力明显弱于ZR-75细胞。ELISA检测结果证实dsRNA-表皮生长因子受体可将血清及肿瘤组织抽提蛋白中的EGF含量分别降低16.77%、12.59%。Real-time PCR结果表明dsRNA-表皮生长因子受体可将表皮生长因子受体基因表达下调21.05%。结论(1)采用体外化学合成的siRNA结合阳离子脂质体可有效在体转染乳腺癌细胞。(2)在体实验中RNAi效应持续的时间明显长于体外实验。(3)针对表皮生长因子受体基因序列设计的siRNA可作为极具开发前途的抗肿瘤新药,其在体实验中触发RNAi可能的作用机制尚需进一步深入探讨。 展开更多
关键词 RNA干扰 乳腺癌 表皮生长因子受体 小干扰RNA 成瘤率 肿瘤抑制率
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盐酸伊托必利联合奥美拉唑治疗反流性食管炎疗效及对胃肠激素和表皮生长因子受体水平的影响 被引量：18
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作者 王勇 邓飞 《中国药业》 CAS 2018年第10期39-41,共3页
目的观察盐酸伊托必利联合奥美拉唑治疗反流性食管炎(RE)的临床疗效及对血清胃泌素(GAS)、黏膜血管活性肠肽(VIP)和表皮生长因子受体(EGFR)水平的影响。方法将医院收治的96例RE患者随机分为治疗组和对照组,各48例。治疗组给予盐酸伊托必... 目的观察盐酸伊托必利联合奥美拉唑治疗反流性食管炎(RE)的临床疗效及对血清胃泌素(GAS)、黏膜血管活性肠肽(VIP)和表皮生长因子受体(EGFR)水平的影响。方法将医院收治的96例RE患者随机分为治疗组和对照组,各48例。治疗组给予盐酸伊托必利+奥美拉唑治疗,对照组给予盐酸伊托必利+法莫替丁治疗,均持续2个月。结果治疗组总有效率和EGFR阳性率分别为95.83%和68.75%,显著大于对照组的81.25%和31.25%(P<0.05);两组GAS水平均较治疗前上升,VIP水平均较治疗前降低,且治疗组改变幅度更大(P<0.05),两组患者各项症状评分均较治疗前降低,且治疗组降低幅度大于对照组(P<0.05)。结论盐酸伊托必利联合奥美拉唑治疗RE疗效显著,可改善相关症状,并对GAS和VIP水平及EGFR表达有一定调节作用。 展开更多
关键词 盐酸伊托必利 奥美拉唑 反流性食管炎 胃泌素 黏膜血管活性肠肽 表皮生长因子受体
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SiRNA-EGFR对人乳腺癌细胞表皮生长因子受体表达的影响 被引量：1
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作者 吴伟东 方驰华 +1 位作者 杨正心 包佳巾 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1260-1263,共4页
目的探讨SiRNA-EGFR对人乳腺癌细胞乳腺癌表皮生长因子受体表达的影响。方法应用RT-PCR测定RNA干扰人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30后Hyase基因的mRNA的表达变化。结果 SiRNA-EGFR作用于表达不同水平透明质酸酶... 目的探讨SiRNA-EGFR对人乳腺癌细胞乳腺癌表皮生长因子受体表达的影响。方法应用RT-PCR测定RNA干扰人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75和ZR-75-30后Hyase基因的mRNA的表达变化。结果 SiRNA-EGFR作用于表达不同水平透明质酸酶的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-453S、ZR-75-30和ZR-75后能明显抑制其乳腺癌表皮生长因子受体的mRNA表达水平(P<0.05)。结论 SiRNA-EGFR作用于人乳腺癌细胞后能特异性抑制EGFR的mRNA的表达水平。 展开更多
关键词 人乳腺癌细胞 RNA干扰 表皮生长因子受体
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