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Native-PAGE染色法用于过氧化氢酶-3酶活性定量分析
被引量：
2
1
作者
董晴
韩晓云
+1 位作者
王颖
何群
《中国科技论文》
CAS
北大核心
2016年第12期1398-1402,1430,共6页
通过定量比较过氧化氢酶-3(catalase-3,Cat-3)的酶活性与其蛋白量及mRNA的关系,确定Native-PAGE染色法能够直接反映出Cat-3蛋白含量,进而探究该方法用于定性和定量检测Cat-3活性的准确性。采用同源重组的方法进行cat-3基因敲除;通过大...
通过定量比较过氧化氢酶-3(catalase-3,Cat-3)的酶活性与其蛋白量及mRNA的关系,确定Native-PAGE染色法能够直接反映出Cat-3蛋白含量,进而探究该方法用于定性和定量检测Cat-3活性的准确性。采用同源重组的方法进行cat-3基因敲除;通过大肠杆菌表达重组GST-Cat-3蛋白制备多克隆抗体;通过Western blotting检测、Northern杂交以及Native-PAGE染色法对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定量分析。得到cat-3基因缺失突变体;获得特异性很高的Cat-3蛋白的多克隆抗体,并对H_2O_2胁迫处理和未处理的菌丝体中Cat-3表达量进行分析、比较。与Northern杂交和Western blotting检测相比,NativePAGE染色法能够非常准确地反映出Cat-3蛋白表达量的变化,因而该方法不但能够对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定性分析,还能进行定量分析。
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关键词
生物化学
粗糙脉孢菌
过氧化氢
酶
-
3
NATIVE-PAGE
染色法
过氧化氢
酶
-
3
酶
活性
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职称材料
玉米catalase-3基因克隆及低温表达研究
被引量：
11
2
作者
刘汉梅
张怀渝
+1 位作者
谭振波
黄玉碧
《四川农业大学学报》
CSCD
2006年第3期272-275,共4页
应用RT-PCR技术,从玉米自交系承18经14℃冷锻炼处理的芽鞘中扩增出长1491 bp的Cat3全长cDNA。以pGEM-T Easy为载体,克隆了扩增片段,经酶切鉴定和DNA序列测定,确认为玉米Cat3基因。序列分析结果表明,该序列与GenBank中accession number:L...
应用RT-PCR技术,从玉米自交系承18经14℃冷锻炼处理的芽鞘中扩增出长1491 bp的Cat3全长cDNA。以pGEM-T Easy为载体,克隆了扩增片段,经酶切鉴定和DNA序列测定,确认为玉米Cat3基因。序列分析结果表明,该序列与GenBank中accession number:L05934的序列仅在两个核苷酸位点存在差异。同时采用Northern杂交方法对Cat3在不同低温处理的玉米芽鞘中的表达特性进行了研究,结果显示Cat3在经14℃冷锻炼处理的芽鞘中表达增强,表明该基因受低温的诱导表达,为玉米抗寒基因,对提高玉米的抗寒力起积极作用。
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关键词
玉米
过氧化氢酶3
RT—PCR
抗寒
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职称材料
题名
Native-PAGE染色法用于过氧化氢酶-3酶活性定量分析
被引量：
2
1
作者
董晴
韩晓云
王颖
何群
机构
中国农业大学生物学院
农业生物技术国家重点实验室
中国农业大学农业微生物资源及其利用农业部重点实验室
黑龙江大学生命科学学院
出处
《中国科技论文》
CAS
北大核心
2016年第12期1398-1402,1430,共6页
基金
高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20110008110027)
国家基础科学人才培养基金资助项目(J1103520)
文摘
通过定量比较过氧化氢酶-3(catalase-3,Cat-3)的酶活性与其蛋白量及mRNA的关系,确定Native-PAGE染色法能够直接反映出Cat-3蛋白含量,进而探究该方法用于定性和定量检测Cat-3活性的准确性。采用同源重组的方法进行cat-3基因敲除;通过大肠杆菌表达重组GST-Cat-3蛋白制备多克隆抗体;通过Western blotting检测、Northern杂交以及Native-PAGE染色法对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定量分析。得到cat-3基因缺失突变体;获得特异性很高的Cat-3蛋白的多克隆抗体,并对H_2O_2胁迫处理和未处理的菌丝体中Cat-3表达量进行分析、比较。与Northern杂交和Western blotting检测相比,NativePAGE染色法能够非常准确地反映出Cat-3蛋白表达量的变化,因而该方法不但能够对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定性分析,还能进行定量分析。
关键词
生物化学
粗糙脉孢菌
过氧化氢
酶
-
3
NATIVE-PAGE
染色法
过氧化氢
酶
-
3
酶
活性
Keywords
biochemistry
Neurospora crassa
catalase-
3
Native-PAGE
staining method
catalase-
3
activities
分类号
Q5-33 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
玉米catalase-3基因克隆及低温表达研究
被引量：
11
2
作者
刘汉梅
张怀渝
谭振波
黄玉碧
机构
四川农业大学生命理学院
北京农林科学院北京农业生物技术研究中心
四川农业大学农学院
出处
《四川农业大学学报》
CSCD
2006年第3期272-275,共4页
基金
北京市自然科学基金项目(5022004)
文摘
应用RT-PCR技术,从玉米自交系承18经14℃冷锻炼处理的芽鞘中扩增出长1491 bp的Cat3全长cDNA。以pGEM-T Easy为载体,克隆了扩增片段,经酶切鉴定和DNA序列测定,确认为玉米Cat3基因。序列分析结果表明,该序列与GenBank中accession number:L05934的序列仅在两个核苷酸位点存在差异。同时采用Northern杂交方法对Cat3在不同低温处理的玉米芽鞘中的表达特性进行了研究,结果显示Cat3在经14℃冷锻炼处理的芽鞘中表达增强,表明该基因受低温的诱导表达,为玉米抗寒基因,对提高玉米的抗寒力起积极作用。
关键词
玉米
过氧化氢酶3
RT—PCR
抗寒
Keywords
maize
catalase-
3
RT-PCR
chilling resistant
分类号
S513 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Native-PAGE染色法用于过氧化氢酶-3酶活性定量分析
董晴
韩晓云
王颖
何群
《中国科技论文》
CAS
北大核心
2016
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
玉米catalase-3基因克隆及低温表达研究
刘汉梅
张怀渝
谭振波
黄玉碧
《四川农业大学学报》
CSCD
2006
11
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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