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透明颤菌血红蛋白研究进展及其在芽孢杆菌属中的应用 被引量:3
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作者 冯静 施庆珊 +2 位作者 疏秀林 欧阳友生 陈仪本 《化学与生物工程》 CAS 2007年第11期5-8,共4页
透明颤菌血红蛋白(VHb)可在低氧条件下提高细胞对氧气的利用效率,促进细胞的生长和代谢产物的合成,因而被广泛应用于多种异源微生物的研究中。简述了VHb的结构特征、在细胞内的定位、编码基因vgb的表达调控及其生物化学功能;介绍了VHb... 透明颤菌血红蛋白(VHb)可在低氧条件下提高细胞对氧气的利用效率,促进细胞的生长和代谢产物的合成,因而被广泛应用于多种异源微生物的研究中。简述了VHb的结构特征、在细胞内的定位、编码基因vgb的表达调控及其生物化学功能;介绍了VHb在芽孢杆菌属中的应用情况及其在芽孢杆菌属菌株外源表达中的重要意义。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白(VHb) 透明颤菌血红蛋白编码基因(vgb) 芽孢杆
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利用透明颤菌血红蛋白基因在谷氨酸棒杆菌中的表达提高谷氨酸和谷氨酰胺的产量 被引量:8
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作者 孙智杰 梁楠 +2 位作者 李润东 沈忠耀 陈国强 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第2期180-184,共5页
为了降低谷氨酰胺 (glutamine,Gln)生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求 ,在谷氨酸棒杆菌 C.glutamicum ATCC14 0 6 7中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因 (Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb) ,以此提高细胞的摄氧能力及能量... 为了降低谷氨酰胺 (glutamine,Gln)生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求 ,在谷氨酸棒杆菌 C.glutamicum ATCC14 0 6 7中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因 (Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb) ,以此提高细胞的摄氧能力及能量的供给水平 .对得到的重组菌和野生菌进行了发酵实验 .在溶氧只有 5 %的条件下 ,重组菌比野生菌细胞干重提高了 1.2倍 ,单位细胞谷氨酸的生产能力提高了 6 .5倍 ,单位细胞谷氨酰胺的生产能力提高了 1.4倍 .对比结果显示 ,含有 vgb基因的重组菌比野生菌在细胞生长。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因 谷氨酸棒杆 谷氨酸 谷氨酰胺 发酵
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透明颤菌血红蛋白基因vgb和腈水解酶基因bxn在毕赤酵母中的表达研究 被引量:9
3
作者 王清路 张锐 +2 位作者 倪万潮 陈毓荃 郭三堆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期730-735,共6页
为获得高效表达外源蛋白的Pichiapastoris菌株而设计了重组质粒pPIC9K_vgbbxn ,其中透明颤菌血红蛋白基因vgb胞内表达以提高菌体的发酵密度 ,腈水解酶基因bxn分泌表达。转化GS115菌株后 ,通过PCR、SDS_PAGE检测证实两基因已经整合进酵... 为获得高效表达外源蛋白的Pichiapastoris菌株而设计了重组质粒pPIC9K_vgbbxn ,其中透明颤菌血红蛋白基因vgb胞内表达以提高菌体的发酵密度 ,腈水解酶基因bxn分泌表达。转化GS115菌株后 ,通过PCR、SDS_PAGE检测证实两基因已经整合进酵母基因组且能高效表达 ,以及用准确的蛋白活性测定方法成功地检测到二者所表达的产物均具有正常的活性。摇瓶发酵实验证明 。 展开更多
关键词 毕赤酵母 分泌型表达载体 腈水解酶 透明颤菌血红蛋白
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透明颤菌血红蛋白在肉桂地链霉菌中的表达对其细胞生长及抗生素合成的影响 被引量:17
4
作者 文莹 宋渊 李季伦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期24-28,共5页
肉桂地链霉菌 (S .cinnamonensis)是莫能菌素 (Monensin)的产生菌。大肠杆菌 链霉菌穿梭表达载体pHZ12 5 2中的透明颤菌血红蛋白基因 (vhb)位于硫链丝菌素诱导启动子PtipA之下 ,它在肉桂地链霉菌中的结构不稳定 ,发生了重组缺失 ,缺失... 肉桂地链霉菌 (S .cinnamonensis)是莫能菌素 (Monensin)的产生菌。大肠杆菌 链霉菌穿梭表达载体pHZ12 5 2中的透明颤菌血红蛋白基因 (vhb)位于硫链丝菌素诱导启动子PtipA之下 ,它在肉桂地链霉菌中的结构不稳定 ,发生了重组缺失 ,缺失的片段包括大肠杆菌质粒部分和vhb基因。但来自阿维链霉菌 (S .avermitilis)中缺失了大肠杆菌质粒部分却保留了完整的vhb基因及tipA启动子的 pHZ12 5 2 ,可在肉桂地链霉菌中稳定复制 ,不再发生缺失 ,经硫链丝菌素诱导表达出了有生物活性的VHb蛋白。摇瓶发酵实验证明 ,VHb蛋白在氧限条件下可明显促进肉桂地链霉菌的菌体生长和抗生素合成。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 肉桂地链霉 vhB基因表达 抗生素 合成
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D-氨基酸氧化酶与麦芽糖结合蛋白和透明颤菌血红蛋白的融合表达 被引量:5
5
作者 于慧敏 马现锋 +2 位作者 罗晖 文程 沈忠耀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1004-1009,共6页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达,分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N-端融合蛋白。其中,MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pM... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达,分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N-端融合蛋白。其中,MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pMKC-DAAO)和诱导型菌株(JM105/pMKL-DAAO)中表达时,目标蛋白的可溶性表达量分别达到全细胞蛋白表达量的28%以上和17%左右,比无MBP融合的对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO分别提高3.7和1.8倍;但其酶活水平显著下降。VHb融合蛋白VHb-TvDAAO在重组菌BL21(DE3)/pET-VDAAO中摇瓶诱导表达时,DAAO酶活达到了3.24u/mL,比对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO提高了约90%。 展开更多
关键词 D-氨基酸氧化酶 大肠杆麦芽糖结合蛋白 透明颤菌血红蛋白 融合表达
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透明颤菌血红蛋白的研究进展及其在发酵工业中的应用 被引量:4
6
作者 裴海生 杨光 +2 位作者 李春 张刚 曹竹安 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期133-138,共6页
透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin,VHb)是20世纪70年代后期发现的一种血红蛋白,该蛋白质能使透明颤菌在低氧的环境下生存,并保持较高的生长速率。随着其作用机理的深入研究,VHb在生物工程领域的应用越来越广泛。总结了近年来VH... 透明颤菌血红蛋白(vitreoscilla hemoglobin,VHb)是20世纪70年代后期发现的一种血红蛋白,该蛋白质能使透明颤菌在低氧的环境下生存,并保持较高的生长速率。随着其作用机理的深入研究,VHb在生物工程领域的应用越来越广泛。总结了近年来VHb的研究进展,包括蛋白结构、细胞定位、基因改组、作用机理等方面的研究,并概述了其在微生物发酵工业中的应用。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 微生物发酵 DNA改组 抗生素
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将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)转移到链霉菌染色体整合载体的构建 被引量:4
7
作者 张桂敏 周秀芬 +1 位作者 邓子新 庄永红 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期602-605,共4页
链霉菌抗生素的生物合成对培养环境中氧的供应相当敏感 ,为了改善这一溶氧问题 ,本研究通过将透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)克隆到含ФC31int,attP基因的诱导型表达载体pIJ86 0 0上 ,构建了可接合转移到链霉菌的整合型表达vgb基因的质粒 p... 链霉菌抗生素的生物合成对培养环境中氧的供应相当敏感 ,为了改善这一溶氧问题 ,本研究通过将透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)克隆到含ФC31int,attP基因的诱导型表达载体pIJ86 0 0上 ,构建了可接合转移到链霉菌的整合型表达vgb基因的质粒 pHZ12 76。pHZ12 76通过接合转移导入变铅青链霉菌 (Streptomyceslivi dans) ,所得重组子经Southern杂交验证后 ,进行诱导表达 ,菌体经破碎后所得蛋白粗提物经Western杂交和CO结合试验表明vgb基因在该菌中表达出了有活性的VHb蛋白。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因 变铅青链霉 整合型 基因表达
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透明颤菌血红蛋白基因的克隆及其在林可链霉菌中的表达 被引量:6
8
作者 杨洪涛 刘瑞华 +1 位作者 何建勇 曾红 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期657-662,共6页
目的通过将透明颤菌血红蛋白基因vgb克隆到林可链霉菌染色体黑色素生物合成基因m elC位点,使m elC基因被破坏失活,vgb基因实现表达同时提高林可霉素产量。方法构建大肠杆菌-链霉菌重组质粒pYHT04,通过接合转移实验将重叠延伸PCR得到的... 目的通过将透明颤菌血红蛋白基因vgb克隆到林可链霉菌染色体黑色素生物合成基因m elC位点,使m elC基因被破坏失活,vgb基因实现表达同时提高林可霉素产量。方法构建大肠杆菌-链霉菌重组质粒pYHT04,通过接合转移实验将重叠延伸PCR得到的具有红霉素抗性基因启动子的透明颤菌血红蛋白基因,以双交换的方式整合进林可链霉菌黑色素生物合成基因m elC中。采用不同装瓶量摇瓶发酵,HPLC检测发酵液中林可霉素含量。结果重组菌株颜色变浅,CO结合差光谱显示在420 nm处有明显吸收峰,随着装瓶量的增加重组菌株发酵液中林可霉素效价与对照菌株相比降低幅度较小。结论重组菌株m elC基因失活不能继续合成黑色素,vgb基因得到表达并表现出生物学功能,限氧条件下重组菌株发酵液中林可霉素效价高于对照菌株,有希望应用于工业发酵生产。 展开更多
关键词 林可链霉 林可霉素 透明颤菌血红蛋白基因vgb 黑色素
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利用透明颤菌血红蛋白基因vgb改造毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的研究 被引量:4
9
作者 孟志刚 张锐 +1 位作者 陈毓荃 郭三堆 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期166-170,共5页
为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、... 为了解决酵母发酵时贫氧限制目的蛋白表达量,利用透明颤菌血红蛋白基因vgb设计毕赤酵母分泌 型表达载体pPIC9K-vgb,并以人乳铁蛋白基因为目的基因转入毕赤酵母GS115。研究结果表明,该表达载体具 有转化操作简单、后期工程菌筛选简便、菌体耐低氧能力强、目的蛋白摇瓶表达量高等优点。该表达载体也可 以通过直接替换目的基因而用于其他蛋白表达系统的开发研究。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因vgb 毕赤酵母 表达载体pPIC9K 人乳铁蛋白
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透明颤菌血红蛋白基因在提高枯草芽孢杆菌产脂肽功能中的研究 被引量:4
10
作者 王大威 胡鸢雷 +1 位作者 刘永建 林忠平 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期116-119,127,共5页
脂肽是一类具有特殊作用的生物表面活性剂。本实验将血红蛋白基因(vhb)置于RDR细菌启动子驱动下的质粒PSET中,构建PSET-RDR-vhb重组质粒,并通过电激作用转入脂肽代谢菌株-枯草芽孢杆菌株(bacillus subtilis)ZW-3中,转化菌株经酶切和PCR... 脂肽是一类具有特殊作用的生物表面活性剂。本实验将血红蛋白基因(vhb)置于RDR细菌启动子驱动下的质粒PSET中,构建PSET-RDR-vhb重组质粒,并通过电激作用转入脂肽代谢菌株-枯草芽孢杆菌株(bacillus subtilis)ZW-3中,转化菌株经酶切和PCR电泳检测鉴定,Southern-blot杂交显示部分转化菌株中外源基因插入基因组DNA,采用一氧化碳差异色谱法测定了血红蛋白的表达量。实验进一步对转化菌株的生长曲线、总蛋白量、过氧化氢酶活性、脂肽的产率进行了测定,结果显示,相比于原始菌株,转化菌株数据均有明显提高。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因 枯草芽孢杆 脂肽 表达
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透明颤菌血红蛋白基因的植物化改造合成及其在大肠杆菌中功能的鉴定 被引量:3
11
作者 吴巧雯 崔洪志 郭三堆 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1439-1443,共5页
根据透明颤菌血红蛋白(VHb)的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子,对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)进行优化改造,同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点,设计并合成了22条单链DNA短片段,通过拼接获得了全长450bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM,... 根据透明颤菌血红蛋白(VHb)的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子,对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)进行优化改造,同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点,设计并合成了22条单链DNA短片段,通过拼接获得了全长450bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM,并将其克隆至pUC19上,获得重组质粒pGSVHB。利用设计的引物,通过PCR在vgbM基因的5′端引入NcoⅠ位点,将其克隆到原核生物高效表达载体pBV221上,获得质粒pBV221SVHB。转化E.coli.BL21并经热激诱导表达后,在培养物中检测到了约16kD的VHb蛋白。经CO差示光谱分析测定,该蛋白具有生物活性。为透明颤菌血红蛋白基因vgbM在植物基因工程研究中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因 酶切位点 偏爱密码子 克隆 植物基因工程 原核生物 诱导表达 BV UC 大肠杆
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共表达透明颤菌血红蛋白对毕赤酵母产β-甘露聚糖酶发酵过程的影响 被引量:3
12
作者 张晓龙 肖静 +3 位作者 王瑞明 汪俊卿 王兴吉 王正祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期193-199,共7页
为了改善高密度发酵生产β-甘露聚糖酶过程中的溶氧限制,提高β-甘露聚糖酶产量,将VHb和β-甘露聚糖酶基因置于AOX1启动子调控之下,进行VHb和β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达。经密码子优化合成VHb基因,插入表达载体p PICZαA,... 为了改善高密度发酵生产β-甘露聚糖酶过程中的溶氧限制,提高β-甘露聚糖酶产量,将VHb和β-甘露聚糖酶基因置于AOX1启动子调控之下,进行VHb和β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达。经密码子优化合成VHb基因,插入表达载体p PICZαA,整合到β-甘露聚糖酶工程菌中,通过G418和Zeocin抗性筛选共表达VHb基因的重组酵母工程菌。在30 L发酵罐水平上分析共表达VHb菌株(VHb+)与初始菌株(VHb-)对β-甘露聚糖酶表达的差异。结果显示,限氧条件下,VHb+菌株的β-甘露聚糖酶的表达量比对照菌株VH b-高90%,且透明颤菌血红蛋白提高了甲醇耐受性,缩短发酵周期约40 h。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 Β-甘露聚糖酶 毕赤酵母 高密度发酵表达
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透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在阿维链霉菌的整合表达 被引量:4
13
作者 张桂敏 周秀芬 邓子新 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期138-142,共5页
pHZ1276是透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的诱导型表达载体,携带有硫链丝菌素诱导的强启动子PtipA和ФC31int,attP基因使载体整合在染色体上。本研究利用组成型启动子ermP1P2替代pHZ1276上的诱导型启动子PtipA构建了组成型表达血红蛋白基因... pHZ1276是透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的诱导型表达载体,携带有硫链丝菌素诱导的强启动子PtipA和ФC31int,attP基因使载体整合在染色体上。本研究利用组成型启动子ermP1P2替代pHZ1276上的诱导型启动子PtipA构建了组成型表达血红蛋白基因的质粒pHZ1291。将vgb基因去掉后构建了组成型链霉菌表达载体pHZ1294。将pHZ1276,pHZ1291导入阿维链霉菌(Streptomycesavermitilis)NRRL8165,所得重组子经Southern杂交验证后,蛋白粗提物经Western杂交和CO结合实验表明vgb基因在该菌中表达出了有活性的VHb蛋白。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因 阿维链霉 整合表达
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利用透明颤菌血红蛋白在低氧条件下提高毕赤酵母中植酸酶的表达 被引量:2
14
作者 唐辉桂 黄火清 +3 位作者 罗会颖 王亚茹 杨培龙 姚斌 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2008年第3期84-89,共6页
为了提高毕赤酵母(Pichia pastoris)中重组植酸酶的表达,在来源于Pichia stipitis的低氧诱导启动子PsADH2控制下,进行了透明颤菌血红蛋白基因vgb在重组P.pastoris中与植酸酶的共表达研究。结果表明,PsADH2启动子在低氧条件下被诱导启动... 为了提高毕赤酵母(Pichia pastoris)中重组植酸酶的表达,在来源于Pichia stipitis的低氧诱导启动子PsADH2控制下,进行了透明颤菌血红蛋白基因vgb在重组P.pastoris中与植酸酶的共表达研究。结果表明,PsADH2启动子在低氧条件下被诱导启动,表达的血红蛋白VHb对P.pastoris宿主细胞生长无明显影响,但使重组P.pastoris中共表达的植酸酶APPA活性提高了3倍。 展开更多
关键词 PsADH2启动子 透明颤菌血红蛋白VHb 低氧诱导 植酸酶 毕赤酵母
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透明颤菌血红蛋白的研究及应用 被引量:4
15
作者 周煜 刘涤 胡之璧 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第4期251-253,共3页
透明颤菌血红蛋白是来自专性好氧的革兰氏阴性细菌透明颤菌属的一种同源双亚基血红蛋白 ,其基因的转录受生境中氧浓度的调节。当这种蛋白在多种原核及真核生物中表达时 ,具有促进生长和提高各种有用代谢产物的作用。
关键词 透明颤菌血红蛋白 基因克隆 转基因
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透明颤菌血红蛋白基因的克隆与表达 被引量:5
16
作者 孙艳 郑煜焱 +2 位作者 王洪军 张志强 王立强 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期436-437,共2页
目的 用野生型透明颤菌菌株中获得的血红蛋白基因 ,构建透明血红蛋白 (VHb)重组表达质粒 ,并在大肠埃希菌 (E .cloi)中实现表达。方法 将环境中筛选出的透明颤菌菌株 ,直接通过聚合酶链式反应 (PCR)克隆血红蛋白基因 ,以质粒pBluescri... 目的 用野生型透明颤菌菌株中获得的血红蛋白基因 ,构建透明血红蛋白 (VHb)重组表达质粒 ,并在大肠埃希菌 (E .cloi)中实现表达。方法 将环境中筛选出的透明颤菌菌株 ,直接通过聚合酶链式反应 (PCR)克隆血红蛋白基因 ,以质粒pBluescriptSK为载体。构建透明颤菌血红蛋白重组表达质粒 pBlueV ,并转化到大肠埃希菌DH - 5a中 ,使用CO示差光谱、十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳 (SDS -PAGE)电泳和蛋白印记 (westernblot)进行分析。结果 PCR扩增的产物透明颤菌血红蛋白基因 (vgb)在琼脂糖凝胶电泳图 0 . 5kb处显示 1条亮带 ,测序结果证实与已发表的vgb序列的同源性 10 0 %。经质粒转化的大肠埃希菌菌株在 16kb处有 1条特征蛋白带 ,而未经质粒转化的菌株则没有。结论 成功构建透明颤菌血红蛋白重组质粒 ,并在大肠埃希菌中得到表达。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 大肠埃希 克隆 表达
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透明颤菌血红蛋白的分离纯化与分析检测 被引量:2
17
作者 于慧敏 史悦 沈忠耀 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第4期94-98,共5页
透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscillahemoglobin ,VHb)是惟一一种研究得较为透彻的原核生物氧结合蛋白血红蛋白。它支持细胞在微氧条件下进行好氧生长 ,克服发酵过程中的溶氧限制 ,因此在需氧微生物发酵工业中具有重要的应用价值。简述了VH... 透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscillahemoglobin ,VHb)是惟一一种研究得较为透彻的原核生物氧结合蛋白血红蛋白。它支持细胞在微氧条件下进行好氧生长 ,克服发酵过程中的溶氧限制 ,因此在需氧微生物发酵工业中具有重要的应用价值。简述了VHb的分离纯化过程 ,综述了VHb的各种定性检测和定量分析方法 ,比较了各种检测分析方法的优缺点和适用性。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白 分离 纯化 定性检测 定量分析 改进一氧化碳差光谱法 发酵工业 临界氧浓度
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响应面优化转透明颤菌血红蛋白基因里氏木霉液体发酵产纤维素酶的培养条件 被引量:2
18
作者 严琳 钟红梅 +4 位作者 左婕 陈智慧 罗又才 陈啟月 伍红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期663-672,共10页
研究采用响应面法并以滤纸酶活力(filter paper activity,FPA)作为响应值对转透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉(Trichoderma reesei)Tu6-VHb菌株液体发酵产纤维素酶的发酵条件进行优化。根据单因素试验结果设计P-B试验,筛选出影响Tu6-VH... 研究采用响应面法并以滤纸酶活力(filter paper activity,FPA)作为响应值对转透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉(Trichoderma reesei)Tu6-VHb菌株液体发酵产纤维素酶的发酵条件进行优化。根据单因素试验结果设计P-B试验,筛选出影响Tu6-VHb菌株发酵产酶的3个显著因素:吐温-80含量、发酵液体积(250 mL三角瓶发酵)、氮源浓度。用最陡爬坡路径法逼近最大响应值区域,运用响应面B-B试验设计确定3个显著因素之间的交互作用和最佳发酵条件。结果显示,Tu6-VHb产纤维素酶的最佳发酵条件是:吐温-80含量0.39%,发酵液体积61.32mL(250 mL三角瓶发酵),氮源浓度0.87%。经优化后,Tu6-VHb菌株发酵产纤维素酶酶活力达51.72U/mL,与模型预测值51.94U/mL相近,较优化前该菌株酶活力(39.984U/mL)提高了29.35%,是未转入透明颤菌血红蛋白基因的里氏木霉(Trichoderma reesei)Tu6菌株酶活力(35.904U/mL)的1.44倍。 展开更多
关键词 里氏木霉 纤维素酶 响应面法 液体发酵 透明颤菌血红蛋白
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低氧诱导透明颤菌血红蛋白基因在大肠杆菌中的表达 被引量:2
19
作者 张锋 赵晓瑜 周艳芬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2006年第B10期20-22,共3页
合成透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的天然低氧启动子,与vgb结构基因拼接得到570 bp的vgb基因,将该基因克隆到pUC18质粒中重组为pUC_LV质粒,转化大肠杆菌得到重组子。通过低氧诱导10 h后,重组菌的密度较对照增加了67.4%,经SDS_PAGE和CO差光... 合成透明颤菌血红蛋白基因(vgb)的天然低氧启动子,与vgb结构基因拼接得到570 bp的vgb基因,将该基因克隆到pUC18质粒中重组为pUC_LV质粒,转化大肠杆菌得到重组子。通过低氧诱导10 h后,重组菌的密度较对照增加了67.4%,经SDS_PAGE和CO差光谱分析证明重组菌表达了有活性的透明颤菌血红蛋白(VHb)。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白基因 天然启动子 大肠杆 低氧诱导
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透明颤菌血红蛋白的生理功能机制与应用 被引量:1
20
作者 周艳芬 赵晓瑜 +2 位作者 静天玉 李亚东 乔环宇 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第z1期139-141,共3页
透明颤菌在贫氧条件下能大量合成一种同源双亚基血红蛋白。在异源宿主中表达该蛋白常常可以促进微生物生长 ,提高降解有毒代谢物的能力 ,促进氧的存贮和氧的传递 ,增加氧的流量。最新研究显示 ,透明颤菌血红蛋白将氧直接传送给完整的细... 透明颤菌在贫氧条件下能大量合成一种同源双亚基血红蛋白。在异源宿主中表达该蛋白常常可以促进微生物生长 ,提高降解有毒代谢物的能力 ,促进氧的存贮和氧的传递 ,增加氧的流量。最新研究显示 ,透明颤菌血红蛋白将氧直接传送给完整的细胞色素bo末端氧化酶亚基Ⅰ ,并在亚基Ⅰ的双核心处将氧还原成水 。 展开更多
关键词 透明颤菌血红蛋白(VHb) 细胞色素bo末端氧化酶 结构 功能
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