通用模板信号扩增技术(UT-PCR)

1

作者 曹卫 李文全 《中国医药导刊》 2003年第1期19-21,共3页

PCR是最常用的分子生物学诊断技术,但常用的PCR都存在种种不足,制约了其在临床的应用。通用模板信号扩增技术(UT-PCR)解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因/多位点同时检测两大难题。UT-PCR具有灵敏度高、特异... PCR是最常用的分子生物学诊断技术,但常用的PCR都存在种种不足,制约了其在临床的应用。通用模板信号扩增技术(UT-PCR)解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因/多位点同时检测两大难题。UT-PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低,并能实现高通量检测,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间。 展开更多

关键词 通用模板信号扩增技术 分子生物学诊断技术 PCR 临床应用

在线阅读 下载PDF 职称材料

通用模板信号扩增技术 被引量：2

2

作者 曹卫 李文全 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2002年第3期181-182,共2页

CR是最常用的分子生物学诊断技术 ,但目前常用的PCR都存在种种不足 ,制约了其在临床的应用。我们在Taq man荧光PCR的基础上开发了通用模板信号扩增技术 (UT PCR)比较好的解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因 ... CR是最常用的分子生物学诊断技术 ,但目前常用的PCR都存在种种不足 ,制约了其在临床的应用。我们在Taq man荧光PCR的基础上开发了通用模板信号扩增技术 (UT PCR)比较好的解决了传统PCR核酸模板质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因 /多位点同时检测两大难题。UT PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低 ,并能实现高通量检测 ,在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间。 展开更多

关键词 通用模板信号扩增 UT-PCR PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

检测严重急性呼吸综合征相关冠状病毒的通用模板信号扩增技术

3

作者 李文全 耿海峰 +2 位作者 何剑军 宋军 曹卫 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期638-639,共2页

关键词 严重急性呼吸综合征 冠状病毒 通用模报信号扩增技术 非典型肺炎

在线阅读 下载PDF 职称材料

采用PCR技术从高GC含量绿脓杆菌模板中扩增长片段外毒素A全基因 被引量：5

4

作者 胡晓梅 饶贤才 +3 位作者 黄建军 金晓琳 朱军民 胡福泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期833-834,共2页

关键词 PCR技术 高GC含量 绿脓杆菌模板 DNA 外毒素A PCR扩增 长片段基因

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于信号扩增的荧光技术检测MicroRNAs的研究进展

5

作者 朱桂池 许文静 张春阳 《集成技术》 2015年第4期1-9,共9页

基于信号扩增的荧光技术结合了荧光检测与扩增技术两者的优点,是一种拥有广阔发展前景的生化分析方法。因其具有扩增效率高、信号易于读取和实时分析等优点,正成为核酸检测中的一个研究热点。文中综述了近年来基于信号扩增的荧光技术应... 基于信号扩增的荧光技术结合了荧光检测与扩增技术两者的优点,是一种拥有广阔发展前景的生化分析方法。因其具有扩增效率高、信号易于读取和实时分析等优点,正成为核酸检测中的一个研究热点。文中综述了近年来基于信号扩增的荧光技术应用于micro RNAs检测的最新进展,包括链置换扩增、滚环扩增、基于外切酶的信号扩增、基于双链特异性核酸酶的信号扩增和无酶信号扩增等,并对今后的发展方向进行了展望。 展开更多

关键词 荧光 信号扩增技术 MICRORNAS 超灵敏检测 生物标志物

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于滚环扩增技术耦合切刻内切酶信号放大技术的新型超灵敏miRNA-122荧光传感器

6

作者 王煦 徐成功 +1 位作者 王敬峰 王玉 《传感器技术与应用》 2017年第4期53-62,共10页

MicroRNA-122 (miRNA-122)的异常表达与肝癌的发生、发展及转移紧密相关,发展简单、快速、高灵敏和高特异性的miRNA-122检测方法对于肝癌的早期诊断和预后评估具有非常重要的意义。本文报道了一种基于滚环扩增技术(RCA)耦合切刻内切酶... MicroRNA-122 (miRNA-122)的异常表达与肝癌的发生、发展及转移紧密相关,发展简单、快速、高灵敏和高特异性的miRNA-122检测方法对于肝癌的早期诊断和预后评估具有非常重要的意义。本文报道了一种基于滚环扩增技术(RCA)耦合切刻内切酶信号放大(NESA)技术的新型荧光传感器并用于超灵敏和高选择性检测miRNA-122。该方法涉及了两个阶段的反应机制,第一阶段,目标物激活切刻内切酶辅助的聚合反应,用以实现目标物与次级目标物循环放大以及生成RCA引物;第二阶段,利用RCA耦合NESA反应,实现信号传导以及多重信号放大。实验结果证明,该传感器表现出对miRNA-122的非常高的灵敏度和特异性,检测下限达到3.9 aM,较之前报道的方法,灵敏度有明显的提高。另外,该方法整个过程只需一步反应,具有操作简便、成本低、检测时间短的优势。所以,所提出的基于RCA耦合NESA的荧光传感器有望建立一个简单而实用的生物传感新平台,并应用于miRNA检测以及癌症的早期诊断和预后评估。 展开更多

关键词 滚环扩增技术 切刻内切酶信号放大 荧光传感器 miRNA-122

在线阅读 下载PDF 职称材料

31个SNP位点多重PCR扩增和芯片分型技术的建立及其法医学应用 被引量：10

7

作者 李莉 李荣宇 +5 位作者 李成涛 柳燕 林源 阙庭志 孙美倩 李瑶 《法医学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期90-95,共6页

目的对SNP基因分型芯片在个体识别中的应用价值进行研究。方法根据SNP不同等位基因的序列设计探针,制成分型芯片。采用4个复合PCR体系,用末端标记了Cy5的引物进行复合PCR扩增,产物与寡核苷酸探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值确定... 目的对SNP基因分型芯片在个体识别中的应用价值进行研究。方法根据SNP不同等位基因的序列设计探针,制成分型芯片。采用4个复合PCR体系,用末端标记了Cy5的引物进行复合PCR扩增,产物与寡核苷酸探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值确定样品在各SNP位点的基因型。将这一方法应用于109份样本的分型,根据基因型分布统计分析31个SNP位点的法医学应用价值。同时,进行家系调查和方法灵敏度分析。结果方法的灵敏度为1ng;所检测的31个SNP位点的累积个体识别率为0.9999999999979(偶合率为2.13×10-12),二联体亲子鉴定中累积非父排除率为0.9609,三联体亲子鉴定中累积非父排除率为0.9970。家系调查的结果表明,这些位点等位基因由亲代向子代的传递符合孟德尔遗传定律。结论上述31个SNP位点为中高信息量位点,适用于法医学个体识别,可作为当前STR系统的补充。 展开更多

关键词 SNP位点 PCR扩增 法医学应用 分型技术 芯片 非父排除率 多重 寡核苷酸探针 等位基因 应用价值 个体识别 家系调查 亲子鉴定 复合PCR 灵敏度分析 基因型分布 序列设计 基因分型 末端标记 统计分析 方法应用 光信号 lng

在线阅读 下载PDF 职称材料

核酸扩增检测技术的研究进展 被引量：3

8

作者 傅占江 刘晓达 王全立 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 2002年第1期18-20,共3页

核酸扩增技术在病原体诊断与分子生物学研究领域占有重要的地位。随着分子生物学的发展与生物物理学在该领域的广泛应用 ,新的核酸扩增技术不断涌现。

关键词 核酸扩增 检测技术 研究进展 信号放大

在线阅读 下载PDF 职称材料

微卫星PCR扩增反应技术条件优化探讨 被引量：2

9

作者 盛浩伟 王金玉 +1 位作者 戴国俊 Olowofeso Olajide 《四川畜牧兽医》 2004年第4期31-32,共2页

微卫星PCR扩增反应受诸多因素的影响,不同的Mg2+浓度、退火温度、引物浓度、dNTP浓度、模板量、不同厂家的TaqDNA聚合酶、不同的PCR仪等都会对扩增反应结果有不同程度的影响。在进行PCR反应前,须对这些条件反复摸索优化,以获得最佳反应... 微卫星PCR扩增反应受诸多因素的影响,不同的Mg2+浓度、退火温度、引物浓度、dNTP浓度、模板量、不同厂家的TaqDNA聚合酶、不同的PCR仪等都会对扩增反应结果有不同程度的影响。在进行PCR反应前,须对这些条件反复摸索优化,以获得最佳反应体系。 展开更多

关键词 微卫星PCR扩增反应 反应条件优化 技术原理 模板 退火温度 引物浓度 dNTP浓度 PCR仪

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于G-四链体的PCR-RCA双重扩增技术检测沙门氏菌 被引量：5

10

作者 刘健慧 张先舟 +5 位作者 张蕴哲 李兰茹 王红静 高洁 耿凤珍 檀建新 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第12期325-333,共9页

将聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与滚环扩增技术(rolling circle amplification,RCA)联用,并把G-四链体互补序列嵌入到RCA扩增所需的哑铃环状模板上,通过PCR和RCA的双重扩增及特异性结合G-四链体的硫黄素T荧光信号增... 将聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)与滚环扩增技术(rolling circle amplification,RCA)联用,并把G-四链体互补序列嵌入到RCA扩增所需的哑铃环状模板上,通过PCR和RCA的双重扩增及特异性结合G-四链体的硫黄素T荧光信号增强的作用,达到基于G-四链体的PCR-RCA技术检测沙门氏菌(Salmonella)的目的。在优化的检测体系下,确定了沙门氏菌基因组DNA浓度对数与486 nm波长处的荧光信号强度具有良好的线性关系,回归方程为y=2.101x+2.8723(R^(2)=0.9925),线性范围为17 fg/μL~1.7 ng/μL。根据实验的特异性分析,表明此方法适用于沙门氏菌属的检测,对人工污染沙门氏菌牛奶样品进行检测,检出限为4.28 CFU/mL。该方法具有特异性强、灵敏度高、检出限低等优点,为实现食源性致病菌的快速检测提供新的方法。 展开更多

关键词 G-四链体 聚合酶链式反应 滚环扩增技术 沙门氏菌 荧光信号检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

FISH检测宫颈上皮hTERC基因扩增制片方式的比较及初步临床应用

11

作者 吴晓宇 沈景丰 +6 位作者 李招云 杨幼萍 张黎明 梁军兵 赵玲萍 蒋盈盈 陈静 《浙江医学》 CAS 2009年第12期-,共5页

目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈细胞hTERC基因扩增研究中脱落细胞样本采集及制片的最佳方法.方法 采集在浙江省台州市中心医院就诊的99例患者的宫颈脱落细胞,分别应用新鲜细胞直接涂片、生理盐水制片、TCT(液基薄层细胞技术)... 目的 探讨荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈细胞hTERC基因扩增研究中脱落细胞样本采集及制片的最佳方法.方法 采集在浙江省台州市中心医院就诊的99例患者的宫颈脱落细胞,分别应用新鲜细胞直接涂片、生理盐水制片、TCT(液基薄层细胞技术)低渗制片三种方法取材制片后再应用双色间期FISH法检测宫颈脱落细胞hTERC基因的表达率,并通过对比分析三种取材制片法的杂交成功率、载玻片背景清晰比例、无/少信号比例选择FISH检测宫颈细胞hTERC基因扩增研究中脱落细胞样本采集及制片的最佳方法.结果 直接涂片法、生理盐水制片法、TCT低渗制片法的杂交成功率分别是46.2%(12/26)、55.1%(16/29)、和81.8%(36/44),TCT低渗片与直接涂片法和生理盐水制片法比较有统计学差异(p<0.05);三种制片方法的玻片背景清晰比例分别为34.6%(9/26)、48.2%(14/29)和70.4(31/44)%,各组之间有统计学差异(P<0.05);3组的无/少信号比例分别为15.3%(4/26)、13.7%(4/29)和13.6%(6/44),各组之间无统计学差异(P>0.05).结论 应用双色间期FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因时,以TCT低渗制片操作方法简单快速,玻片背景最为清晰,杂交成功率最高. 展开更多

关键词 FISH技术 检测 宫颈上皮 基因扩增 制片法 初步临床应用 detection 宫颈脱落细胞 统计学差异 直接涂片法 生理盐水 最佳方法 成功率 荧光原位杂交技术 样本采集 宫颈细胞 低渗 信号比 玻片 TCT

在线阅读 下载PDF 职称材料

以核酸序列为基础的扩增

12

作者 阎力 《国外医学情报》 1991年第15期13-14,共2页

核酸扩增技术已迅速成为分子生物学家研究中所使用的重要手段之一。它以聚合酶链反应(PCR)为基础,可在3～4小时内使DNA扩增一百多万倍,但此方法需样品温度迅速改变,为此通常需使用特殊的热循环装置。本文作者报道了一种用于核酸扩增的... 核酸扩增技术已迅速成为分子生物学家研究中所使用的重要手段之一。它以聚合酶链反应(PCR)为基础,可在3～4小时内使DNA扩增一百多万倍,但此方法需样品温度迅速改变,为此通常需使用特殊的热循环装置。本文作者报道了一种用于核酸扩增的快捷方法——以核酸序列为基础的扩增(NASBA)法。此法可在约2小时内使RNA扩增十亿倍。此外,由于NASBA是一种连续恒温过程,所以无需专门的设备。 展开更多

关键词 核酸序列 聚合酶链反应 核酸扩增技术 重要手段 逆转录酶 靶序列 快捷方法 分子生物学 模板分子 反应混合物

在线阅读 下载PDF 职称材料

PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对常见食源性感染致病菌23S rDNA基因的鉴定 被引量：4

13

作者 洪帮兴 江丽芳 +3 位作者 胡玉山 方丹云 晏辉钧 侯红斌 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期13-15,共3页

目的　探讨应用PCR RFLP和PCR SSCP进行食源性感染常见致病菌鉴定的可行性。方法　选择细菌 2 3SrDNA基因作为靶基因 ,设计合适的通用引物进行PCR扩增 ,对 13种食源性感染常见致病菌扩增产物的酶切片段进行RFLP和SSCP分析。结果　通用... 目的　探讨应用PCR RFLP和PCR SSCP进行食源性感染常见致病菌鉴定的可行性。方法　选择细菌 2 3SrDNA基因作为靶基因 ,设计合适的通用引物进行PCR扩增 ,对 13种食源性感染常见致病菌扩增产物的酶切片段进行RFLP和SSCP分析。结果　通用引物可以扩增出 13种食源性感染常见致病菌的 2 3SrDNA基因 ,HpaⅡ酶切产物的RFLP分析表明 ,不同种属的致病菌表现出不同的RFLP图谱 ;SSCP分析表明 ,13种食源性感染常见致病菌SSCP图谱变异性更大 ,不利于种属间鉴别 ,但有利于种内的鉴定。结论　运用PCR RFLP和PCR 展开更多

关键词 食源性感染 常见致病菌 PCR-RFLP PCR-SSCP技术 RDNA基因 鉴定 通用引物 酶切 种属 扩增产物

在线阅读 下载PDF 职称材料

荧光定量PCR技术原理及在分子诊断中的应用进展 被引量：12

14

作者 张金波 罗佳滨 +2 位作者 张春斌 朱金玲 吕冬霞 《中国优生与遗传杂志》 2006年第12期13-14,共2页

聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)可对特定基因进行扩增,因此被广泛应用于获取特定基因或基因片段及临床基因诊断等领域。聚合酶链式反应(PCR)技术发明至今已近20年了,近年来出现的荧光定量PCR(F lurogen ic Quantitativ... 聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)可对特定基因进行扩增,因此被广泛应用于获取特定基因或基因片段及临床基因诊断等领域。聚合酶链式反应(PCR)技术发明至今已近20年了,近年来出现的荧光定量PCR(F lurogen ic Quantitative Polym erase Chain Reaction,FQ-PCR)实现了PCR从定性到定量的飞跃,它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具。 展开更多

关键词 荧光定量PCR技术 基因扩增 基因表达 荧光信号

在线阅读 下载PDF 职称材料

关于RAPD技术中几个条件的探讨 被引量：1

15

作者 徐晓立 杨建军 《草食家畜》 2002年第2期1-2,共2页

本文通过对RAPD反应中模板抽提、模板浓度、Mg2 + 和dNTP浓度、样本选择及取样大小的分析 ,探讨了RAPD的反应条件。高纯度的模板DNA是反应进行的基础 ;模板的用量一般在 2 5～ 10 0ng为佳 ;对每一引物、模板都应反复摸索 ,以获得最佳Mg2... 本文通过对RAPD反应中模板抽提、模板浓度、Mg2 + 和dNTP浓度、样本选择及取样大小的分析 ,探讨了RAPD的反应条件。高纯度的模板DNA是反应进行的基础 ;模板的用量一般在 2 5～ 10 0ng为佳 ;对每一引物、模板都应反复摸索 ,以获得最佳Mg2 + 与dNTP浓度 ;群体扩增产物出现的多态性比个体的更为丰富明显 ;取样大小对结果的统计分析影响不大。只有在充分优化RAPD反应条件的基础上 。 展开更多

关键词 RAPD技术 条件优化 模板抽提 生物技术遗传育种 DNA 群体扩增产物

在线阅读 下载PDF 职称材料

检测A组轮状病毒的微阵列技术初探

16

作者 黄海燕 韩金祥 +4 位作者 王健伟 高雪芹 潘继红 刘毅 朱波 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期79-83,共5页

采用荧光染料TAMRA标记上游引物 ,经RT semi nestedPCR扩增A组轮状病毒的保守区域 ,并将扩增产物与自行研制的玻片微阵列进行杂交。经杂交信号扫描分析 ,可简便快速地检出A组轮状病毒 ,并能达到高灵敏性 ,为下步进入临床打下了基础。

关键词 A组轮状病毒 微阵列技术 检出 临床 杂交信号 荧光染料 玻片 扩增产物 引物 PCR扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响

17

作者 李菲菲 刘雷 +5 位作者 郑红 周颖 余科科 程洁 王本忠 汪思应 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第3期206-210,共5页

目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pCDNA3.1(hismycTec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体... 目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pCDNA3.1(hismycTec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体瞬时转染Hela细胞,用Western方法检测Tec蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因系统,检测Tec是否参与HGF刺激信号途径的活化。结果构建的Tec真核表达载体使Hela细胞高表达Tec蛋白;并发现Tec在HGF介导下,对Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强作用。结论构建了Tec真核表达载体,并能使HGF介导的MAPK途径活化,提示Tec可能参与HGF介导肝细胞增殖的信号调控。 展开更多

关键词 真核表达载体构建 TEC 细胞信号 Hela细胞 酪氨酸蛋白激酶 Western pcDNA3 基因重组技术 MAPK途径 信号途径 荧光素酶 肝细胞再生 PCR扩增 肝细胞增殖 HGF 瞬时转染 脂质体法 基因系统 增强作用 信号分子 信号调控 c蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

强力打造民族品牌──晶芯~荧光定量PCR系列通用试剂盒

18

作者 王艳 《中国医疗器械信息》 2007年第9期67-68,共2页

荧光定量基因扩增PCR检测技术近几年来得到长足发展，已广泛应用于医院、大学、研究机构、检验检疫等从事基因诊断和研究的部门。该项技术可应用于传染病（如肝炎、性病、非典、禽流感、爱滋病等），遗传病，癌症等以检测核酸DNA／RNA... 荧光定量基因扩增PCR检测技术近几年来得到长足发展，已广泛应用于医院、大学、研究机构、检验检疫等从事基因诊断和研究的部门。该项技术可应用于传染病（如肝炎、性病、非典、禽流感、爱滋病等），遗传病，癌症等以检测核酸DNA／RNA为特征的疾病诊断，以及转基因生物改良、动植物检疫、动物性别判断和法医等方面。随着PCR检测技术的普及， 展开更多

关键词 荧光定量PCR PCR检测技术 试剂盒 荧光定量基因扩增 通用 品牌 民族 转基因生物

在线阅读 下载PDF 职称材料

用PCR技术筛选小分子DNA重组菌落的研究 被引量：1

19

作者 孙雨葳 廖世奇 +4 位作者 张小爱 张雪力 王黎 张春梅 王晓辉 《青海科技》 2003年第3期27-28,共2页

为解决小分子DNA与质粒载体连接,转化入大肠杆菌后,蓝白斑不能很好鉴别非重组菌落与重组菌落的问题,本实验拟建立用PCR技术快速筛选小分子DNA重组菌落的方法,并对比研究特异引物扩增和通用引物扩增的可靠性。

关键词 PCR技术 小分子DNA 重组菌落 蓝白斑筛选 特异引物扩增 通用引物扩增 基因克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

结核杆菌检测中聚合酶链反应技术的初步探讨

20

作者 肖同浩 张素娟 +1 位作者 张盛 戚沛霖 《华南国防医学杂志》 CAS 1996年第4期354-355,共2页

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)检测结核杆菌是近年来结核病快速诊断的一项重大突破,克服了痰涂片染色找抗酸杆菌阳性率不高,而分离培养病原菌需时较长等缺点,是一种特异、敏感、快速地检测和鉴定结核杆菌的方法。本文结... 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)检测结核杆菌是近年来结核病快速诊断的一项重大突破,克服了痰涂片染色找抗酸杆菌阳性率不高,而分离培养病原菌需时较长等缺点,是一种特异、敏感、快速地检测和鉴定结核杆菌的方法。本文结合对100例结核杆菌PCR检测,从方法学角度作一初步探讨。 展开更多

关键词 结核杆菌PCR 反应技术 聚合酶链 模板DNA 蛋白酶K 分离培养 DNA的提取 PCR检测技术 基因扩增 阳性率

在线阅读 下载PDF 职称材料