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hERR1/HBD酵母表达质粒的构建及初步鉴定 被引量:2
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作者 陈敏 李渝萍 +2 位作者 陈健 陈彬 周度金 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期51-53,共3页
目的 构建酵母双杂合系统诱饵蛋白表达质粒pGBT9 hERR1 HBD。方法 PCR扩增hERR1 HBD(激素激活域 )cDNA ,与酵母Gal4 DBD(DNA结合域 )表达质粒pGBT9重组构建融合蛋白表达质粒 ,酶切、测序鉴定后 ,用于酵母双杂合分析 ,检查其自主转录... 目的 构建酵母双杂合系统诱饵蛋白表达质粒pGBT9 hERR1 HBD。方法 PCR扩增hERR1 HBD(激素激活域 )cDNA ,与酵母Gal4 DBD(DNA结合域 )表达质粒pGBT9重组构建融合蛋白表达质粒 ,酶切、测序鉴定后 ,用于酵母双杂合分析 ,检查其自主转录激活作用及与已知hERR1辅活化子PNRC的相互作用。结果 该质粒有正确的阅读框 ,其表达蛋白不具有自主转录激活作用 ,与已知核受体辅活化子PNRC有明显的相互作用。结论 成功构建了表达质粒pGBT9 hERR1 HBD ,并证实该质粒可作为酵母双杂合系统的诱饵蛋白质粒 ,用于乳腺组织中与hERR1有相互作用的蛋白质基因的筛选。 展开更多
关键词 酵母表达质粒 乳腺癌 雌激素受体相关受体-1 酵母双杂合系统 乳腺肿瘤 聚合酶链反应
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弓形虫酵母表达质粒pPIC9K-GRA1的构建及鉴定 被引量:2
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作者 谢荣华 吴翔 +4 位作者 舒衡平 蒋立平 范久波 谭逵 张琼 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第2期115-117,共3页
目的构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)的酵母表达质粒,为进一步研究GRA1蛋白功能奠定基础。方法PCR扩增编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/NotⅠ分别对扩增产物和酵母表达质粒pPIC9K进行双酶切,将GRA1定向克隆到pPIC9K的EcoRⅠ/NotⅠ位点,对重... 目的构建弓形虫致密颗粒抗原-1(GRA1)的酵母表达质粒,为进一步研究GRA1蛋白功能奠定基础。方法PCR扩增编码GRA1目的基因,用EcoRⅠ/NotⅠ分别对扩增产物和酵母表达质粒pPIC9K进行双酶切,将GRA1定向克隆到pPIC9K的EcoRⅠ/NotⅠ位点,对重组质粒进行PCR,双酶切初步鉴定后做序列测定。结果特异扩增出预期的GRA1片段,大小为573 bp,扩增产物经双酶切后成功连接到pPIC9K中,经PCR,双酶切及序列测定证明重组质粒中含有GRA1读框。结论成功构建弓形虫GRA1酵母真核表达质粒。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 GRA1 酵母表达质粒 构建 鉴定
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利用酵母表达质粒检测甜菜黄化病毒蛋白质间相互作用的遗传学研究 被引量:1
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作者 金红 V.V.Doljia V.V.Peremyslov 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1998年第2期57-63,共7页
利用酵母双杂合体系统,检测与植物线状病毒组中热休克蛋白HSP70相结合的其它相关的BYV蛋白。在体外构建两种编码融合蛋白的酵母表达质粒:一组为将编码转录激活区域的基因与HSP70r基因融合并克隆到pACT质粒中(pA... 利用酵母双杂合体系统,检测与植物线状病毒组中热休克蛋白HSP70相结合的其它相关的BYV蛋白。在体外构建两种编码融合蛋白的酵母表达质粒:一组为将编码转录激活区域的基因与HSP70r基因融合并克隆到pACT质粒中(pACT·HSP70r),它编码转录激活区域与HSP70蛋白的融合蛋白;另一组为将编码DNA结合区域的基因分别与甜菜黄化病毒基因组其它7个基因融合并克隆到pAS质粒中(pAS·-),分别编码7个融合蛋白。经两质粒共转化酵母细胞后,通过双报告基因(Lacz基因和组氨酸His3基因)筛选获得阳性菌落,以阳性菌落总DNA为模板,经体外特异性引物的PCR扩增,检测出HSP70蛋白与p20蛋白之间的相互作用,并证实这一相互作用是特异的。 展开更多
关键词 甜菜 黄化病毒 蛋白质相互作用 酵母表达质粒
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猪β_2肾上腺素受体基因克隆及重组酵母表达质粒的构建
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作者 王健 李永飞 +2 位作者 佘永新 金茂俊 王静 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第18期156-159,共4页
克隆猪β2AR基因并进行序列分析,构建其重组酵母表达质粒。采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,经RT-PCR扩增、克隆及鉴定,获得猪β2AR的c DNA序列,并对该序列及编码的氨基酸序列进行分析。同时将目的基因插入p PICZαA酵母表达载体,构建重组... 克隆猪β2AR基因并进行序列分析,构建其重组酵母表达质粒。采集新鲜猪肝组织,提取总RNA,经RT-PCR扩增、克隆及鉴定,获得猪β2AR的c DNA序列,并对该序列及编码的氨基酸序列进行分析。同时将目的基因插入p PICZαA酵母表达载体,构建重组表达质粒。克隆获得猪β2AR基因c DNA序列1257 bp,Genbank登录号为KF023571.1,编码418个氨基酸,蛋白分子质量46.73 ku。生物信息学分析表明,该基因与其他物种的β2AR基因相似性较高,均在83%以上,具有较高的同源性。经PCR和双酶切鉴定以及测序分析,证明成功构建了重组酵母表达质粒p PICZαA-β2AR。本研究为猪β2AR基因在毕赤酵母系统的表达及建立基于受体的β激动剂多残留检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 Β2肾上腺素受体 克隆 酵母表达质粒
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家蚕BmNaPi基因的克隆表达与酵母穿梭表达质粒的构建 被引量:3
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作者 孔卫青 杨金宏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期51-55,共5页
磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕... 磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕8号染色体,编码区长1 437 bp,有10个外显子,编码478个氨基酸,预测蛋白序列在氨基末端含有一信号肽,序列中间有8个转膜结构域,与登录号为AAF57968、XP_001602874、EAA00281、XP_393759、XP_001950194等同源蛋白的一致性均在70%及以上。RT-PCR检测该基因在5龄3 d家蚕幼虫9种组织中的血液、体壁、生殖腺和头中表达,而中肠、丝腺、马氏管和脂肪体中没有表达。最后成功构建了该基因的酵母穿梭表达质粒pG-BKT7-BmNaPi。 展开更多
关键词 家蚕 BmNaPi 克隆 组织表达 酵母穿梭表达质粒
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激素和活性多肽
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《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第9期75-78,共4页
912999 人类催乳激素在大肠杆菌中的表达和部分纯化[英]/Gilbert,M.S.…∥Int.J.Biochem.-1991,23(1).-107~114[译自DBA,1991,10(3),91-01334] 在大肠杆菌HB101中克隆并表达了一种编码人催乳激素的基因.将编码信号肽序列和全长催乳激... 912999 人类催乳激素在大肠杆菌中的表达和部分纯化[英]/Gilbert,M.S.…∥Int.J.Biochem.-1991,23(1).-107~114[译自DBA,1991,10(3),91-01334] 在大肠杆菌HB101中克隆并表达了一种编码人催乳激素的基因.将编码信号肽序列和全长催乳激素分子的cDNA片段克隆到表达载体质粒pUR291中。 展开更多
关键词 融合蛋白 表达载体质粒 催乳激素 片段克隆 酵母表达质粒 活性多肽 β-葡糖苷酸酶 基因克隆 信号肽序列 载体转化
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Cloning and expression in Saccharomyces cerevisiae of chit2 gene from Beauveria bassiana
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作者 宋金柱 杨晓雪 +1 位作者 王允 杨谦 《Journal of Harbin Institute of Technology(New Series)》 EI CAS 2009年第4期453-456,共4页
To study recycled trashes from shrimps and crabs in the sea through chitinase secreted by microorganisms,the chitinase gene chit2 was cloned and sequenced from Beauveria bassiana by the polymerase chain reaction(PCR),... To study recycled trashes from shrimps and crabs in the sea through chitinase secreted by microorganisms,the chitinase gene chit2 was cloned and sequenced from Beauveria bassiana by the polymerase chain reaction(PCR),and was ligated into the yeast expression vector pYES2.The expression vector plasmid was transformed into Saccharomyces cerevisiae H158.Gene expression took place upon induction with 2% galactose.The measurement of enzyme activity shows that the expression production can be expressed in active forms and secreted to the medium.The enzyme activity approaches the peak of 0.63 U/mL when the culture time is 36 h. 展开更多
关键词 Beauveria bassiana CHITINASE Saccharomyces cerevisiae EXPRESSION
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