柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达

1

作者 彭天庆 杨英珍 +1 位作者 李光地 孔玉英 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期323-329,共7页

将编码柯萨奇Ｂ３ 病毒（ＣＶＢ３） 衣壳蛋白ＶＰ１ 和ＶＰ２ 的基因，分别克隆到具有７．５ｋ 启动子的痘苗病毒表达载体ｐＧＪＰ５ 上；将ＣＶＢ３ 衣壳蛋白全基因克隆到具有Ｔ７ 启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１ 上，并筛选到相应的... 将编码柯萨奇Ｂ３ 病毒（ＣＶＢ３） 衣壳蛋白ＶＰ１ 和ＶＰ２ 的基因，分别克隆到具有７．５ｋ 启动子的痘苗病毒表达载体ｐＧＪＰ５ 上；将ＣＶＢ３ 衣壳蛋白全基因克隆到具有Ｔ７ 启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１ 上，并筛选到相应的重组痘苗病毒ＶＶＰ１ 、ＶＶＰ２ 和ＶＶＰ／４／２／３／１ 。ＶＶＰ１ 和ＶＶＰ２ 稳定表达产物为ＣＶＢ３ 衣壳蛋白ＶＰ１ 和ＶＰ２ ，而ＶＶＰ／４／２／３／１ 的产物ＶＰ４／２／３／１ 为一无分泌性的多聚蛋白，且这三种表达产物均属无分泌性蛋白。为了表达成熟的ＣＶＢ３ 衣壳蛋白，将去除５′端非编码区的ＣＶＢ３ 全基因克隆到具有Ｔ７ 启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１ 上，利用重组痘苗病毒ＶＴ７ 所提供的Ｔ７ＲＮＡ 聚合酶，在哺乳动物细胞中进行了暂时表达研究。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析提示，ＶＰ１、ＶＰ２ 和ＶＰ３ 蛋白得到成熟表达，且发现表达产物具有分泌性。本研究将为今后研究ＣＶＢ免疫性打下基础。 展开更多

关键词 衣壳蛋白 重组痘苗病毒 基因表达 CVB3 免疫性

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HIV－1gag基因重组痘苗病毒的构建和高效表达 被引量：9

2

作者 毛春生 金宁一 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第6期561-569,共9页

Ｇａｇ蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）重要的结构蛋白，可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将ＨＩＶ－１不同长度的长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘病毒启动子控制下，经过同源重组、红细胞吸附试... Ｇａｇ蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）重要的结构蛋白，可诱导机体产生体液和细胞免疫应答。本试验将ＨＩＶ－１不同长度的长末端重复序列（ＬＴＲ）和全长的ｇａｇＯＲＦ置于痘病毒启动子控制下，经过同源重组、红细胞吸附试验筛选和间接免疫荧光试验鉴定，分离了６株重组痘苗病毒。免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫酶试验检测表明，６株病毒均能表达ｇａｇ基因，其中以ｖ１６ＬＧ△２的Ｇａｇ蛋白表达量最高，占细胞裂解物上清的５．１９％，相当于１４．７μｇ／１０６细胞，接近杆状病毒的表达产量。重组蛋白主要为ｐ５５ｇａｇ蛋白前体，但也有一部分被加工，生成成熟蛋白ｐ２４ｇａｇ、ｐ１７ｇａｇ及其中间蛋白。表达的重组蛋白可形成病毒样粒子（ＶＬＰ）。 展开更多

关键词 HIV-1 GAG蛋白 高效表达 重组痘苗病毒

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重组人白细胞介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建与鉴定 被引量：2

3

作者 郜恒骏 朱红音 +3 位作者 顾伟齐 楼屹 任卫平 萧树东 《胃肠病学》 2000年第4期231-233,257,共4页

目的：构建含人白细胞介素－２（ｈＩＬ－２）基因的痘菌病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１，为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准备。方法：利用质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化和ＤＮＡ序... 目的：构建含人白细胞介素－２（ｈＩＬ－２）基因的痘菌病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１，为进一步实施胃癌的基因治疗作必要准备。方法：利用质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、目的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化和ＤＮＡ序列分析等多种基因工程技术，将纯化回收的ｈＩＬ－２基因分别与质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋／－及ｐＭＪ６０１进行连接、转化并签定。结果：克隆有ｈＩＬ－２基因的ｐＬＸＳＮ经ＥｃｏＲＩ－ＢａｍＨＩ酶切后，ｈＩＬ－２基因被成功地连接到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋／－上，再经Ｓａｉｌ－ＢａｍＨＩ酶切后，ｈＩＬ－２基因又被克隆到ｐＭＪ６０１真核表达载体上。结论：重组ｈＩＬ－２基因痘苗病毒真核表达载体ｐＭＪ６０１的构建为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。 展开更多

关键词 重组人白细胞介素2 痘苗病毒 真核表达载体 胃癌 基因治疗

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HIV-1结构基因与白细胞介素基因在重组痘苗病毒中的共表达研究 被引量：1

4

作者 王玉红 金宁一 +6 位作者 李体远 王宏伟 王弘郡 刘素寰 李萍 安汝国 殷震 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期30-30,共1页

关键词 HIV 结构基因 白细胞介素 重组痘苗病毒 表达

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HIV-2 env 基因在重组痘苗病毒中的表达

5

作者 田梅 金宁一 +4 位作者 王秀清 郭志儒 方厚华 范洪学 殷震 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第4期48-52,共5页

以痘苗病毒复制非必需区血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将人Ⅱ型免疫缺陷病毒ｇｐ１２０和ｇｐ３６基因分别置于不同类型的自然型痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选，获得了４株重组痘苗病毒，... 以痘苗病毒复制非必需区血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将人Ⅱ型免疫缺陷病毒ｇｐ１２０和ｇｐ３６基因分别置于不同类型的自然型痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒，经同源重组和血凝素阴性空斑筛选，获得了４株重组痘苗病毒，经免疫荧光试验和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测证明，４株重组病毒均能表达目的蛋白。在重组病毒感染早期、晚期，不同株表达量略有不同，表达产物分子量分别约为５７ｋＤａ和４２ｋＤａ，具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 HIV-2 ENV基因 重组痘苗病毒 表达

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利用重组痘苗病毒表达人 CD2 0基因

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作者 洪海燕 郭燕翔 +2 位作者 舒翠玲 戚中田 沈倍奋 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期325-327,共3页

目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到... 目的获得重组人 CD2 0分子并研究编码人 CD2 0的基因在痘苗病毒中的表达。方法从 p GEM- T- EASY/ CD2 0载体上酶切下编码人 CD2 0分子的 c DNA,亚克隆到 p JSA1175载体上 ,重组质粒与野生痘苗病毒共转染 TK- 143细胞。结果APAAP检测到重组病毒感染的细胞表面有 CD2 0分子表达 ,富集后病毒滴度约为 1× 10 9pfu/ ml。结论人 CD2 0基因在痘苗病毒中表达 。 展开更多

关键词 人CD20基因 重组痘苗病毒 基因表达

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人Ⅰ型免疫缺陷病毒gag-env嵌合基因在重组痘苗中的表达

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作者 毛春生 金宁一 +2 位作者 佟明华 郭志儒 殷震 《生物工程进展》 CSCD 2000年第4期26-29,10,共5页

Gag和Env蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒 (Humanimmunodeficiencyvirustype 1,HIV 1)的结构蛋白 ,是HIV 1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多次亚克隆 ,将env基因以正确的三联密码读框插入 gag基因的下游 ,制备了HIV 1g... Gag和Env蛋白是人Ⅰ型免疫缺陷病毒 (Humanimmunodeficiencyvirustype 1,HIV 1)的结构蛋白 ,是HIV 1诱导机体产生体液免疫和细胞免疫的主要抗原。本实验通过多次亚克隆 ,将env基因以正确的三联密码读框插入 gag基因的下游 ,制备了HIV 1gag env嵌合基因 ,并将嵌合基因分别置于痘苗病毒 p7 5启动子和牛痘病毒A型包涵体 (ATI)启动子的下游 ,经过同源重组和红细胞吸附试验筛选 ,获得了 2株重组痘苗病毒。免疫荧光试验和酶免疫试验证明 ,两株重组痘苗病毒均能正确地表达HIV 1gag env嵌合基因。动物实验表明 ,gag env嵌合基因重组痘苗病毒可诱导小鼠产生抗HIV特异性抗体。这些结果为艾滋病颗粒化疫苗的研制提供了借鉴。 展开更多

关键词 HIV-1 gag-env嵌合基因 表达 重组痘苗病毒

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脊髓灰质炎病毒与痘苗病毒重组体的构建及表达

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作者 戴长柏 李奇涵 +4 位作者 袁天喜 胡凝珠 苏晔 郭仁 候云德 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1991年第4期147-150,共4页

含脊髓灰质炎病毒1型(简称 PV1)全基因7.4Kb cDNA 和编码 PV1外壳蛋白 VP12.5Kb 的 cDNA 片段的两株重组痘苗病毒(RV-1和 RV-2)表达了 PV1抗原。经荧光标记的抗 PV1型特异性单克隆抗体检测,感染了 RV-1和 RV-2的 Herp-2细胞呈阳性荧光... 含脊髓灰质炎病毒1型(简称 PV1)全基因7.4Kb cDNA 和编码 PV1外壳蛋白 VP12.5Kb 的 cDNA 片段的两株重组痘苗病毒(RV-1和 RV-2)表达了 PV1抗原。经荧光标记的抗 PV1型特异性单克隆抗体检测,感染了 RV-1和 RV-2的 Herp-2细胞呈阳性荧光反应。免疫印迹实验证实两株重组痘苗病毒分别表达 PV1抗原三条和两条特异性蛋白带。免疫家兔后能诱导产生抗 PV1中和抗体。本文对重组病毒表达 PV1抗原的效率进行了初步讨论。 展开更多

关键词 脊髓灰质炎病毒 重组痘苗病毒基因表达

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用重组痘苗病毒作载体表达甲型肝炎病毒抗原 被引量：9

9

作者 高峰 刘崇柏 +2 位作者 伊瑶 阮力 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1989年第4期303-311,共9页

含有甲型肝炎病毒基因组全部开放读码框架cDNA的重组痘苗病毒,感染143TK^-细胞后,成功地表达了甲肝病毒抗原。ELISA测定其滴度为1:8。免疫荧光法显示,荧光呈颗粒状分布在胞浆内。Western blot证实,重组痘苗病毒表达的甲肝病毒抗原有两... 含有甲型肝炎病毒基因组全部开放读码框架cDNA的重组痘苗病毒,感染143TK^-细胞后,成功地表达了甲肝病毒抗原。ELISA测定其滴度为1:8。免疫荧光法显示,荧光呈颗粒状分布在胞浆内。Western blot证实,重组痘苗病毒表达的甲肝病毒抗原有两条特异性带,一条分子量为29kd,与甲肝病毒抗原VP2相对应;另一条分子量为64kd,可能是未全裂解的甲肝病毒抗原蛋白或聚合体。初步动物免疫实验表明,痘苗病毒表达的甲肝病毒抗原具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 甲肝病毒 重组痘苗病毒 基因表达

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甲3型流感病毒M2基因在痘苗病毒天坛株中的表达 被引量：10

10

作者 王文玲 黄保英 +3 位作者 邓瑶 王秀平 谭文杰 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期377-383,共7页

为获得表达甲3型流感病毒(H3N2)M2蛋白的重组天坛株痘苗病毒RVJ1175M2,使用PCR方法扩增流感病毒全长M2基因,将其克隆到天坛株痘苗病毒同源重组质粒pJSC1175中,获得重组质粒pJSC1175M2,通过与痘苗病毒载体同源重组,构建了含流感病毒M2基... 为获得表达甲3型流感病毒(H3N2)M2蛋白的重组天坛株痘苗病毒RVJ1175M2,使用PCR方法扩增流感病毒全长M2基因,将其克隆到天坛株痘苗病毒同源重组质粒pJSC1175中,获得重组质粒pJSC1175M2,通过与痘苗病毒载体同源重组,构建了含流感病毒M2基因的重组痘苗病毒株RVJ1175M2。PCR检测结果证明,流感病毒(H3N2)M2蛋白基因准确插入到天坛株痘苗病毒TK区;Western blot、免疫荧光和流式细胞计数表明重组病毒RVJ1175M2可以有效地表达M2蛋白,表达的M2蛋白有两条带,分别为15kD和13kD,与相关文献报道一致;M2蛋白可有效分布在感染细胞的细胞膜上。这些结果表明重组痘苗病毒株RVJ1175M2可以有效地表达流感病毒M2蛋白,为使用表达M2蛋白的不同类型疫苗进行广谱流感疫苗效果的比较研究奠定了基础。 展开更多

关键词 流感病毒A3型 M2蛋白 重组痘苗病毒 基因表达

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乙型脑炎重组痘苗病毒的抗原表达及其免疫保护性 被引量：11

11

作者 娄元梅 刘启富 +1 位作者 朱德钟 蹇锐 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期317-321,共5页

采用乙型脑炎重组痘苗病毒Ｊ１和Ｊ３株，两者均含乙脑病毒（ＪＥＶ）的Ｅ、ＮＳ１和ＮＳ２Ａ基因，后者还含ＰｒＭ基因，在ＢＨＫ－２１－１５细胞中培养表达，经免疫荧光法（ＩＦＡ）测定，两者均可高效表达ＪＥＶ特异性抗原。用该重... 采用乙型脑炎重组痘苗病毒Ｊ１和Ｊ３株，两者均含乙脑病毒（ＪＥＶ）的Ｅ、ＮＳ１和ＮＳ２Ａ基因，后者还含ＰｒＭ基因，在ＢＨＫ－２１－１５细胞中培养表达，经免疫荧光法（ＩＦＡ）测定，两者均可高效表达ＪＥＶ特异性抗原。用该重组病毒免疫瑞士种小鼠，经ＩＦＡ检测证明Ｊ１、Ｊ３均可诱生抗ＪＥＶ抗体，其中Ｊ３免疫鼠还产生中和抗体（Ｎ）和血抑抗体（ＨＩ），且其抗ＪＥＶ攻击能力显著增高。 展开更多

关键词 乙型脑炎 重组痘苗病毒 抗原表达 免疫保护性

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基因重组修饰痘苗病毒表达SARS病毒S蛋白产生针对S蛋白受体结合区的保护性抗体

12

作者 孔琪 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第1期26-26,共1页

关键词 SARS病毒 S蛋白 受体结合区 保护性抗体 基因重组修饰痘苗病毒 基因表达

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表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建 被引量：1

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作者 骆卫锋 韩立群 +4 位作者 任皎 田厚文 陆振华 谷淑燕 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期217-221,共5页

为研制HPV16的治疗性疫苗 ,首先将表达质粒 pJSA1175与非复制型痘苗病毒NTVJTK+ 进行同源重组 ,构建了痘苗重组病毒NTVJLac。再将表达质粒 pJSDME6E7R与NTVJLac进行同源重组 ,构建了表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒NTVJmE6E7... 为研制HPV16的治疗性疫苗 ,首先将表达质粒 pJSA1175与非复制型痘苗病毒NTVJTK+ 进行同源重组 ,构建了痘苗重组病毒NTVJLac。再将表达质粒 pJSDME6E7R与NTVJLac进行同源重组 ,构建了表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒NTVJmE6E7,并对获得的重组病毒进行了鉴定。Southern杂交显示 ,重组痘苗病毒NTVJmE6E7基因组中有E6和E7基因插入。该重组病毒在人源细胞中不复制。Westernblot显示 ,重组病毒在人源TK-14 3细胞中能表达E6和E7蛋白。 展开更多

关键词 表达 HPV16E6 E7蛋白 非复制型重组痘苗病毒 乳头瘤病毒 宫颈肿瘤 疫苗 免疫治疗

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重组痘苗狂犬病毒糖蛋白的构建、表达及其遗传稳定性研究 被引量：1

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作者 李萍萍 陈乃民 +3 位作者 应保龄 江立新 徐葛林 朱家鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期18-20,共3页

狂犬病毒糖蛋白基因的痘苗病毒表达质粒 pWS 4在鸡胚细胞内与野生型痘苗病毒天坛株 (痘苗病毒 )同源重组 ,经蚀斑纯化 ,获得表达狂犬病毒糖蛋白基因的重组痘苗病毒 (重组病毒 )。该重组病毒DNAdotblot显示强阳性信号 ,间接免疫荧光试验... 狂犬病毒糖蛋白基因的痘苗病毒表达质粒 pWS 4在鸡胚细胞内与野生型痘苗病毒天坛株 (痘苗病毒 )同源重组 ,经蚀斑纯化 ,获得表达狂犬病毒糖蛋白基因的重组痘苗病毒 (重组病毒 )。该重组病毒DNAdotblot显示强阳性信号 ,间接免疫荧光试验胞膜及胞浆均见到强阳性荧光反应 ,Westernblot分析仅在 6 4ku处呈现一条狂犬病毒非融合性糖蛋白带。免疫小鼠和狗 ,第 2 8d抗狂犬病毒中和抗体滴度分别达 2 4 30和 >6 96。初免后 14d用 5 0～ 10 0LD50 狂犬病毒CVS株对小鼠脑内攻击 ,保护率达 80 %以上。致病性明显减弱。从第 11代起连续传至 30代 ,病毒纯度、病毒滴度、血凝滴度、蛋白的表达、抗原活性和保护性均无差异 ,说明该重组病毒有良好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 狂犬病毒 糖蛋白基因 重组痘苗病毒 遗传稳定性 表达

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HIV-1结构蛋白在重组痘苗病毒中的高效表达研究

15

作者 金宁一 毛春生 +6 位作者 王秀清 郭志儒 田梅 李体远 李钟洙 王宏伟 殷震 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期101-102,共2页

HIV-1粒子中含有3类结构蛋白,即核心蛋白(Gag)、聚合酶(pol)和外膜蛋白(Env)。Gag蛋白既具有诱导体液免疫和细胞免疫的抗原决定簇。

关键词 重组痘苗病毒 高效表达 HIV-1 结构蛋白 GAG基因 抗原决定簇 外膜蛋白 细胞免疫 体液免疫 GAG蛋白

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EIAV env基因在痘苗病毒中的表达及其免疫效果的观察

16

作者 代春铭 张晓燕 +1 位作者 邵一鸣 沈荣显 《中国病毒学》 CSCD 2003年第5期473-477,共5页

将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVenv和rvv-LNenv,Western blot检测目的蛋白的表达,结果表... 将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVenv和rvv-LNenv,Western blot检测目的蛋白的表达,结果表明重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAV Env蛋白,其肌肉接种免疫小鼠后,表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答,其中以细胞免疫效果更为显著,CTL特异性裂解最高可达28％。本研究为EIAV基因工程疫苗的开发研制奠定了基础。 展开更多

关键词 重组痘苗病毒 免疫应答 马传染性贫血病病毒 EIAVEnv蛋白基因 痘苗病毒 表达

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癌胚抗原重组痘病毒治疗CEA阳性肿瘤的机制及其CEA基因表达的研究

17

作者 赵青 陶沙 +1 位作者 杨洁 罗超权 《广州医学院学报》 2002年第2期1-4,共4页

目的 :探讨癌胚抗原重组痘病毒 (carcinoembryonicantigenrecombinantvacciniavirus,CEA -rV)治疗CEA阳性肿瘤的作用部位及其CEA基因表达的情况。方法 :采用PCR法探测CEA rV的作用部位 ,RT -PCR检测接种CEA -rV鼠腹腔MΦ 内CEA的基因表... 目的 :探讨癌胚抗原重组痘病毒 (carcinoembryonicantigenrecombinantvacciniavirus,CEA -rV)治疗CEA阳性肿瘤的作用部位及其CEA基因表达的情况。方法 :采用PCR法探测CEA rV的作用部位 ,RT -PCR检测接种CEA -rV鼠腹腔MΦ 内CEA的基因表达 ,免疫组化法检测各组小鼠腹腔MΦCEA的蛋白表达。结果 :腹腔接种的CEA -rV主要感染腹腔MΦ;皮下接种的CEA -rV主要感染皮肤局部组织。CEA -rV腹腔接种小鼠 ,其腹腔MΦ有CEAmRNA表达及CEA蛋白表达。结论 :推测无论通过腹腔接种还是通过皮肤局部接种 ,GEA -rV一般多在注射局部表达。CEA -rV不仅可以进入MΦ,而且其CEA基因可以有效地表达 ,并可使MΦ 表面分子MHC -Ⅱ与B7- 2表达增强 ,然后递呈CEA给Th淋巴细胞 ,使之分泌足够的IL - 2 ,激活Tc细胞分化为CTL 。 展开更多

关键词 癌胚抗原 重组痘苗病毒 作用部位 基因表达 治疗

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痘苗病毒天坛株非必需区TA25R…TA36L的两步重组表达载体的构建 被引量：1

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作者 邹艳 阮力 +4 位作者 娄元梅 朱诚 陆柔剑 孙朝晖 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期97-103,共7页

针对痘苗病毒天坛株非必需区ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ，构建了可去除ＴＡ２６Ｒ至ＴＡ３５Ｌ的１０个ＯＲＦｓ，并同时表达ＬａｃＺ基因的两步重组表达载体ｐＡ２４２７ＬａｃＺ。通过两种方法（一步重组和两步重组）获得了在该区域表达... 针对痘苗病毒天坛株非必需区ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ，构建了可去除ＴＡ２６Ｒ至ＴＡ３５Ｌ的１０个ＯＲＦｓ，并同时表达ＬａｃＺ基因的两步重组表达载体ｐＡ２４２７ＬａｃＺ。通过两种方法（一步重组和两步重组）获得了在该区域表达ＬａｃＺ基因的重组痘苗病毒ＲＶＡ２４２７ＬａｃＺ。实验表明，一步重组法获得重组病毒的机率大约为１‰，两步重组法的机率可达６２．５‰。由此可见，两步重组法可显著提高重组病毒的筛选机率。ＬａｃＺ基因可以在该区域中稳定表达，重组病毒与野毒株在繁殖能力上没有明显差别，表明ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ是较稳定的外源基因插入区域。上述结果对于深入研究该非必需区的功能特点。 展开更多

关键词 痘苗病毒 天坛株 非必需区 重组 表达载体

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重组痘苗病毒(RVV)表达载体系统研究进展 被引量：1

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作者 谭伟 丁锡申 《生物工程进展》 CSCD 1992年第3期26-30,共5页

天花是烈性传染病,曾在历史上给人类带来过极大的苦难。早在1798年,英国医生Jenner首次报导采用牛痘病毒进行皮肤划痕,可以予防天花病毒的感染。这一发现为全球消灭天花发挥了极为重要的作用。1979年12月9日世界卫生组织向全世界宣布。

关键词 重组痘苗病毒 表达载体系统

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汉滩病毒糖蛋白G1 G2和核蛋白NP在痘苗病毒天坛株中的联合表达 被引量：5

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作者 姚树元 杭长寿 +5 位作者 邱建明 马章亮 李德新 薛颖 李川 宋干 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期121-125,共5页

将汉滩病毒７６／１１８株Ｍ、Ｓ片段分别插入转染质粒ｐＪＳＢ１１７５的Ｐ１１和Ｐ７．５启动子下游，构建成重组质粒ｐＪＳＢ１１Ｍ７．５Ｓ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染技术将重组质粒分别与痘苗病毒天坛株ＴＫ＋ｖｖ和表达Ｓ片... 将汉滩病毒７６／１１８株Ｍ、Ｓ片段分别插入转染质粒ｐＪＳＢ１１７５的Ｐ１１和Ｐ７．５启动子下游，构建成重组质粒ｐＪＳＢ１１Ｍ７．５Ｓ。采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染技术将重组质粒分别与痘苗病毒天坛株ＴＫ＋ｖｖ和表达Ｓ片段的重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５Ｓ进行共转染，免疫酶斑和蓝白斑法筛选并纯化，得到了重组病毒ｖＪＳＢ１１Ｍ７５Ｓ。Ｂｕｄｒ的选择压力试验表明，外源基因确实插入在ＴＫ基因区；ＰＣＲ及打点杂交证实了两个片段的插入；重组痘苗病毒基因组的部分序列分析显示，两个片段与各自的启动子连接正确；间接免疫荧光及放免沉淀证明了糖蛋白Ｇ１、Ｇ２和核蛋白ＮＰ的表达。 展开更多

关键词 汉坦病毒 重组痘苗病毒 基因表达 糖蛋白 核蛋白

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