期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到97篇文章
< 1 2 … 5 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒重组体的构建及鉴定 被引量：1
1
作者 李素芳 魏锐利 金玲 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第4期781-782,共2页
目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双... 目的:构建并鉴定含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒。方法:将抗凋亡基因bcl-2片段从载体pcDNA3.1中切下,定向插入逆转录病毒载体PLNCX2中,酶切鉴定;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定表达bcl-2的细胞株。结果:双酶切鉴定,成功构建重组逆转录病毒载体;重组逆转录病毒转入包装细胞PT67,经G418筛选,形成了抗性克隆,并测得病毒滴度为3×1011cfu/L,提示构建的含鼠bcl-2基因重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论:含抗凋亡基因bcl-2重组逆转录病毒载体构建成功。 展开更多
关键词 抗凋亡基因BCL-2 逆转录病毒重组体 酶切鉴定 基因重组逆转录病毒 重组逆转录病毒载体 PCDNA3.1 包装细胞系 bcl-2基因 脂质体法 稳定表达
在线阅读 下载PDF
反义及正义Vim重组逆转录病毒表达载体的构建 被引量：1
2
作者 林江凯 蔡文琴 《华南国防医学杂志》 CAS 2005年第1期21-24,F003,共5页
目的构建反义及正义波形蛋白重组逆转录病毒载体,研究波形蛋白在反应性胶质化中的功能与作用。方法应用分子克隆方法克隆、鉴定、包装并感染培养的星形胶质细胞。结果同时获得全长反义及正义Vim逆转录病毒克隆细胞株和较高滴度的病毒上... 目的构建反义及正义波形蛋白重组逆转录病毒载体,研究波形蛋白在反应性胶质化中的功能与作用。方法应用分子克隆方法克隆、鉴定、包装并感染培养的星形胶质细胞。结果同时获得全长反义及正义Vim逆转录病毒克隆细胞株和较高滴度的病毒上清,反义Vim逆转录病毒抑制培养星形细胞的Vim表达。结论重组的反义及正义Vim逆转录病毒可用于进一步的实验研究。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒表达载体 VIM 正义 重组逆转录病毒载体 反应性胶质化 星形胶质细胞 波形蛋白 克隆细胞株 分子克隆 方法应用 星形细胞 病毒抑制 实验研究 高滴度 培养
在线阅读 下载PDF
口蹄疫病毒P12A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建 被引量：8
3
作者 刘艳红 李炯 +3 位作者 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期606-610,共5页
以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMD... 以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88(L)P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C,为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 衣壳蛋白基因 蛋白酶基因 重组逆转录病毒表达载体
在线阅读 下载PDF
人G-CSF基因的克隆及其重组逆转录病毒载体的构建与初步应用 被引量：5
4
作者 章卫平 曹雪涛 +4 位作者 马施华 黄欣 张明徽 陶群 叶天星 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第1期26-32,共7页
利用RT-PCR方法克隆到包括有全部编码序列和部分5',3'端非编码序列的人G-CSF cDNA,并通过核苷酸测序得到证实。将其定向克隆至逆转录病毒载体pLXSN、构建成人G-CSF的重组逆转录病毒表达载体pLGSN。体外经CRE和CRIP细胞的两欹包... 利用RT-PCR方法克隆到包括有全部编码序列和部分5',3'端非编码序列的人G-CSF cDNA,并通过核苷酸测序得到证实。将其定向克隆至逆转录病毒载体pLXSN、构建成人G-CSF的重组逆转录病毒表达载体pLGSN。体外经CRE和CRIP细胞的两欹包装，病毒滴度达到了临床应用的水平(1.1×10^6CFU／m1)。hG-CSF逆转录病毒感染NIH3T3小鼠成纤维细胞后．分泌G-CSF达168U／m1．Southern分析表明hG-CSF基因己整合至NIH3T3-G-CSF细胞的基因组中，Northern和Western分析分别从mRNA和蛋白质水平证实了人G-CSF在ENIH3T3-G-CSF细胞的表达。NIH3T3-G-CSF细胞植入同系小鼠体内．能从血清中检测到持续表达的G-CSF活性。本研究为开展人G-CSF基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 人G-CSF基因 克隆 重组逆转录病毒载体 构建 应用 粒细胞集落刺激因子 基因治疗
在线阅读 下载PDF
NGF和GDNF基因重组逆转录病毒体外感染神经干细胞及其鉴定 被引量：5
5
作者 阮奕文 王传恩 +2 位作者 王宁利 谢瑶 姚志彬 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期297-300,T002,共5页
目的　探讨神经干细胞 (NSC)直接作为基因靶细胞能否被重组逆转录病毒感染以及感染后目的基因的表达。　方法　分别用NGF和GDNF基因重组逆转录病毒上清液感染NSC 2d ;G418筛选后加入bFGF扩增培养 ;取感染后的NSC培养液 (NGF GDNF条件培... 目的　探讨神经干细胞 (NSC)直接作为基因靶细胞能否被重组逆转录病毒感染以及感染后目的基因的表达。　方法　分别用NGF和GDNF基因重组逆转录病毒上清液感染NSC 2d ;G418筛选后加入bFGF扩增培养 ;取感染后的NSC培养液 (NGF GDNF条件培养液 )培养PC12细胞和中脑腹侧神经元 ;用免疫组织化学染色方法检测中脑腹侧多巴胺神经元的形态改变以及感染后NSC对目的基因的表达。　结果　经G418筛选后 ,约 5 0 %感染NGF和GDNF基因重组逆转录病毒的NSC呈G418抗性 ;这些感染后的NSC开始分化 ,分裂球向四周长出放射状突起 ,部分细胞沿突起向外迁移生长 ;感染NGF基因的NSC呈星形 ,胞体较大 ,突起较粗。感染GDNF基因的NSC呈梭形 ,胞体较小 ,突起较长。经NGF条件培养液培养的PC12细胞 ,数量增多 ,突起明显变长。经GDNF条件培养液培养的中脑多巴胺神经元 (TH阳性细胞 )其胞体亦增大 ,突起伸长。大部分G418抗性的NSC出现NGF和GDNF免疫染色。　结论　神经干细胞可直接作为基因靶细胞 ,能被NGF和GDNF基因重组逆转录病毒有效感染而表达和分泌有生物学活性的NGF和GDNF。 展开更多
关键词 神经干细胞 重组逆转录病毒 基因表达 感染 NGF基因 GDNF基因
在线阅读 下载PDF
原发性肝癌基因治疗研究—含人TNF基因重组逆转录病毒转移系统的构建与表达 被引量：8
6
作者 陆云飞 林进令 +2 位作者 邱庆明 黎乐群 廖清华 《广西医科大学学报》 CAS 1997年第4期1-3,共3页
将人ＴＮＦα基因克隆到重组逆转录病毒载体ｐＲＵＦｎｅｏ，构建了含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒载体ＲＵＦ－ＴＮＦ。将ＲＵＦ－ＴＮＦ转染包装细胞ＦｌｙＡ１３，经药物筛选获得稳定分泌含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒的细胞株Ｆｌｙ... 将人ＴＮＦα基因克隆到重组逆转录病毒载体ｐＲＵＦｎｅｏ，构建了含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒载体ＲＵＦ－ＴＮＦ。将ＲＵＦ－ＴＮＦ转染包装细胞ＦｌｙＡ１３，经药物筛选获得稳定分泌含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒的细胞株ＦｌｙＲＵＦＮ１４。ＦｌｙＲＵＦＮ１４产生的病毒上清液能直接转染靶细胞Ｓａｏｓ－２。本研究建立的逆转录病毒介导的ＴＮＦ基因转移系统为肝癌及其他恶性肿瘤的基因治疗提供了条件。 展开更多
关键词 TNFΑ基因 重组逆转录病毒 基因治疗 肝肿瘤
在线阅读 下载PDF
人白细胞介素2重组逆转录病毒载体的构建与表达 被引量：3
7
作者 章卫平 曹雪涛 +3 位作者 王建莉 马施华 黄欣 于益芝 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第3期186-190,共5页
通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA．并经核苷酸测序加以证实，将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN，构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2．体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10^4CFU／ml,NIH 3T3小鼠成纤... 通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA．并经核苷酸测序加以证实，将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN，构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2．体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10^4CFU／ml,NIH 3T3小鼠成纤维细胞感染hIL-2重组逆转录病毒后．分泌IL-2水平达118.2U／ml；PCR从其基因组DNA中扩增到NeoR基因片段．提示重组逆转录病毒载体已整合至宿主细胞的基因组DNA中。本研究为开展人IL-2基因治疗奠定了基础. 展开更多
关键词 人白细胞介素2 重组逆转录病毒载体 构建 表达 基因治疗 肿瘤瘤苗
在线阅读 下载PDF
抗菌肽重组逆转录病毒载体的构建、重组病毒的包装及其在牛奶中的稳定表达 被引量：3
8
作者 张锦霞 张守峰 +1 位作者 郭学军 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1433-1437,共5页
将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN—bcp—LK（R）中，获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN—bcp-LfcinB-CE-MA（R），利用脂质体转染PA317包装细胞，G418进行筛选得到了阳性细胞克隆，克隆扩大培养后，用... 将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN—bcp—LK（R）中，获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN—bcp-LfcinB-CE-MA（R），利用脂质体转染PA317包装细胞，G418进行筛选得到了阳性细胞克隆，克隆扩大培养后，用病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定，最高滴度为1×10^4CFU／mL，用病毒上清转染妊娠中后期奶牛乳腺组织，产犊后采集的奶样经琼脂板溶圈法和Tricine-SDS-PAGE检测，结果表明乳汁中表达的抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显地抑菌活性，并能实现相对稳定的表达，表达可持续30-45d。 展开更多
关键词 抗菌肽 重组逆转录病毒 转染 包装 表达
在线阅读 下载PDF
重组逆转录病毒浓缩方法研究 被引量：2
9
作者 王凤阳 扈荣良 +6 位作者 邹啸环 池海英 杜卫华 赵君 张守峰 李敏 殷震 《生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期11-13,共3页
选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ (Neor)的重组逆转录病毒载体 ,通过包装细胞进行包装 ,得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒溶液 ,该病毒溶液分别采用差速离心和滤膜截留两种方法进行浓缩 ,浓缩前、后的病毒溶液体外感染靶细胞NIH3T3以测... 选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ (Neor)的重组逆转录病毒载体 ,通过包装细胞进行包装 ,得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒溶液 ,该病毒溶液分别采用差速离心和滤膜截留两种方法进行浓缩 ,浓缩前、后的病毒溶液体外感染靶细胞NIH3T3以测定其滴度。结果显示 :差速离心法的浓缩效率要优于滤膜截留法的浓缩效率 ,其浓缩效率能达到 34 5%。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒 差速离心 滤膜截留 浓缩方法 载体
在线阅读 下载PDF
蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK^R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达 被引量：2
10
作者 姚伟 任文陟 +3 位作者 张守峰 范志强 扈荣良 涂长春 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2005年第3期129-132,共4页
目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩... 目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染妊娠期奶山羊乳腺小叶组织,山羊产后采奶纤维蛋白平板溶圈法检测蚓激酶活性。结果产后奶样经纤维蛋白平板溶圈法检测羊奶具有明显纤溶活性。结论蚓激酶基因已经整合到奶山羊乳腺组织并能实现相对稳定的表达。 展开更多
关键词 蚓激酶 重组逆转录病毒 包装 转染 表达
在线阅读 下载PDF
蚓激酶重组逆转录病毒载体的构建及其在牛乳腺中的表达 被引量：1
11
作者 刘殿峰 张嘉保 +3 位作者 张守峰 姚伟 李雪 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期519-521,共3页
将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶牛乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染NIH3T3细胞... 将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶牛乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。进而用病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺小叶组织,产后奶样经FAPA法检测表明蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织,并能实现相对稳定的表达。 展开更多
关键词 蚓激酶 重组逆转录病毒 包装 转染 表达
在线阅读 下载PDF
含LacZ重组逆转录病毒的制备及其在NIH_3T_3细胞的表达 被引量：1
12
作者 王凤阳 孟庆文 +4 位作者 扈荣良 池海英 张茂林 于康震 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期329-331,共3页
构建了含有 3.7kbLacZ的重组逆转录病毒载体 ,转染包装细胞系PA317后 ,经G418筛选 ,得到了G418抗性的产毒细胞系 ,用收获的含有重组逆转录病毒粒子的浓缩病毒上清 ,感染NIH3T3细胞 ,经X_gal染色检测 ,发现表达了LacZ的NIH3T3细胞呈蓝色。
关键词 重组逆转录病毒 LACZ NIH3T3细胞 基因表达 外源基因 转基因
在线阅读 下载PDF
重组逆转录病毒介导的neo^R基因在公鼠生殖系细胞的转移 被引量：1
13
作者 王凤阳 张守峰 +4 位作者 赵君 池海英 孟庆文 扈荣良 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期573-575,共3页
将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基... 将感染滴度为 10 6cfu/ m L、携带新霉素磷酸转移酶 (neo R)基因的重组逆转录病毒与台盼蓝、polybrene按一定比例配制成注射液 ,单侧睾丸注入 14～ 16日龄公鼠曲细精管以体内感染精原干细胞 ,进行重组逆转录病毒 -精原干细胞介导的基因转移研究。注射后 45 d,采集公鼠精液 ,进行精液品质与 PCR检测。结果表明 ,在优化的注射条件下 ,曲细精管内注射重组逆转录病毒后 ,不会干扰小鼠精子的正常发育能力 ,并能够将外源基因整合到精子基因组 ,从而首次通过重组逆转录病毒成功地实现了 neo 展开更多
关键词 重组逆转录病毒 neo^R基因 生殖系细胞 基因转移 小鼠
在线阅读 下载PDF
重组逆转录病毒载体的包装 被引量：1
14
作者 王凤阳 扈荣良 +3 位作者 张茂林 赵君 涂长春 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期128-130,共3页
将 3.7kb的 Lac Z基因片段克隆到含标志基因 Neor的逆转录病毒载体 p LXSN与 p LNCX的多克隆位点 ,构建了含有 Lac Z基因的重组逆转录病毒载体 p LLSN和 p LNCL。在测定了 G4 1 8对包装细胞系PA31 7的最小致死剂量后 (最小致死剂量为 0 ... 将 3.7kb的 Lac Z基因片段克隆到含标志基因 Neor的逆转录病毒载体 p LXSN与 p LNCX的多克隆位点 ,构建了含有 Lac Z基因的重组逆转录病毒载体 p LLSN和 p LNCL。在测定了 G4 1 8对包装细胞系PA31 7的最小致死剂量后 (最小致死剂量为 0 .3g/ L) ,通过脂质体 Lipofectin与磷酸钙 2种介质 ,分别将 2种重组逆转录病毒载体导入包装细胞系 PA31 7进行包装 ,并以 0 .3g/ L的 G4 1 8进行筛选 ,得到多个 G4 1 8抗性克隆。经扩大培养、传代 ,分别得到包装 p LLSN与 p LNCL的 2株阳性细胞。电镜下可见阳性细胞的培养上清中具有逆转录病毒形态特征的成熟病毒粒子。本研究为运用逆转录病毒载体系统 。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒载体 包装细胞系 基因转移 包装 转基因效率
在线阅读 下载PDF
重组逆转录病毒介导的转蚓激酶基因兔 被引量：1
15
作者 刘殿峰 张嘉保 +4 位作者 张守峰 任文陟 姚伟 张锐 扈荣良 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第6期449-452,I0005,共5页
目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清... 目的通过重组逆转录病毒介导获得转蚓激酶基因家兔。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清直接注射雄性兔的睾丸组织转染精原干细胞。结果病毒上清经NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。病毒注射3月龄兔睾丸组织,过1.5个月取其睾丸、肾、脾、肝、肺进行组织切片观察,结果正常。提取交配所得F0、F1代仔兔基因组,经PCR、Southern检测,转基因阳性率F0代为6.3%(2/32)、F1代为15.3%(2/13)。结论通过重组逆转录病毒直接注射3月龄兔睾丸组织可获得转基因兔,病毒对兔的脏器无损害。 展开更多
关键词 蚓激酶 重组逆转录病毒 包装 转染 转基因
在线阅读 下载PDF
重组逆转录病毒的制备、浓缩及保存研究 被引量：1
16
作者 王凤阳 扈荣良 +2 位作者 杜卫华 王铁东 殷震 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第1期3-6,共4页
选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮｅｏＲ）的重组逆转录病毒载体，用包装细胞进行包装，得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒上清，该病毒上清经差速离心法浓缩后，－８０℃无任何添加物的情况下保存３个月，体外感染靶细胞ＮＩＨ３Ｔ３... 选择含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ（ＮｅｏＲ）的重组逆转录病毒载体，用包装细胞进行包装，得到了含有重组逆转录病毒粒子的病毒上清，该病毒上清经差速离心法浓缩后，－８０℃无任何添加物的情况下保存３个月，体外感染靶细胞ＮＩＨ３Ｔ３以测定其滴度，冻存前后的浓缩病毒上清的感染滴度无明显降低，经过冻存的浓缩病毒上清的感染滴度仍可达到１０６ｃｆｕ／ｍｌ，具有理想的感染靶细胞的能力。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒 制备 浓缩 保存 载体系统
在线阅读 下载PDF
两种重组逆转录病毒浓缩方法的比较 被引量：1
17
作者 马进财 刘吉勇 刘绍玲 《山东医药》 CAS 北大核心 2006年第7期20-21,共2页
目的比较传统逆转录病毒浓缩方法(差速离心)与简便方法浓缩逆转录病毒效率的差异。方法选择含有新霉素磷酸转移酶(NeoR)的重组逆转录病毒载体,通过包装细胞得到含有重组逆转录病毒粒子、有感染力的病毒溶液,分别采用差速离心和简便方法... 目的比较传统逆转录病毒浓缩方法(差速离心)与简便方法浓缩逆转录病毒效率的差异。方法选择含有新霉素磷酸转移酶(NeoR)的重组逆转录病毒载体,通过包装细胞得到含有重组逆转录病毒粒子、有感染力的病毒溶液,分别采用差速离心和简便方法对该病毒溶液进行浓缩,将浓缩前后的病毒溶液体外感染靶细胞NIH3T3并测定其滴度,计算浓缩效率。结果简便方法与传统差速离心方法浓缩病毒上清效率分别为36.54%,38.46%,二者比较无差异(P>0.05)。结论简便方法浓缩逆转录病毒对设备要求较低,许多小实验室可推广应用。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒 差速离心 浓缩方法 病毒粒子
在线阅读 下载PDF
萤火虫荧光素酶报告基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定 被引量：1
18
作者 边素艳 盖鲁粤 +5 位作者 叶平 杨月峰 王荣亮 王华 郭子宽 王立生 《组织工程与重建外科杂志》 2009年第2期75-78,共4页
目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(... 目的构建含萤火虫荧光素酶报告基因的逆转录病毒载体,为进一步研究生物发光活体动物体内光学成像奠定基础。方法利用重组DNA技术,将荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic双酶切得到的目的基因fluc+亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(fluc)SN在脂质体介导下"乒乓"转染GP+E86和PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆。扩大培养,测定病毒滴度,并检测荧光素酶活性。结果经限制性酶切分析鉴定,载体插入基因大小、位置均正确,并用GP+E86和PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的重组逆转录病毒fluc细胞系,该细胞可高效表达荧光素酶。结论成功构建了重组质粒pL(fluc)SN,为标识干细胞进行基础研究提供了一种检测方法和平台。 展开更多
关键词 荧光素酶报告基因载体 pGL3-Basic 重组逆转录病毒载体 PLXSN 构建
在线阅读 下载PDF
人BDNF重组逆转录病毒载体的构建 被引量：1
19
作者 阳运康 林月秋 +1 位作者 汤逊 蔡培强 《中国骨肿瘤骨病》 2005年第4期224-227,共4页
目的构建PLEGFP—BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备。方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T... 目的构建PLEGFP—BDNF真核表达重组逆转录病毒,为进一步在细胞中表达及移植治疗作准备。方法按照hBDNF基因全长编码序列设计合成引物,从人基因组DNA中扩增出744bp的hBDNF基因片段,插入到PMD18-T载体上,转化DH5α大肠杆菌菌株,获得PMD18T—BDNF克隆,对该克隆进行限制性酶切分析和DNA序列测定;从阳性克隆中获取hBDNF全长编码片段,与真核表达载体PLEGFP质粒连接,构建PLEGFP—BDNF真核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌JM109,再经氨苄LB培养基筛选,酶切,PCR与测序鉴定。结果PLEGFP—BDNF重组逆转录病毒构建成功。结论hBDNF在大肠杆菌中的成功表达在转基因治疗CNS病变方面具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 HBDNF 基因克隆 重组逆转录病毒载体 质粒 BDNF基因 真核表达重组质粒 限制性酶切分析 全长编码序列 大肠杆菌菌株 真核表达载体
在线阅读 下载PDF
含人TNF-α基因的重组逆转录病毒载体的构建、包装及对人肝癌细胞的感染
20
作者 冯学胜 汤钊猷 +4 位作者 叶胜龙 戈凯 郑仲承 王立群 刘新垣 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期275-275,共1页
利用逆转录病毒载体LN系列的三种载体LXSN，LNCX和LNSX构建了插入TNFα基因的重组逆转录病毒载体L-tnfSN，LNC-tnf和LNS-tnf．重组载体用磷酸钙沉淀法引入病毒包装细胞PA317，经G418筛选后，用NIH3T3细胞测定病毒滴度，结果表明L-tnfSN... 利用逆转录病毒载体LN系列的三种载体LXSN，LNCX和LNSX构建了插入TNFα基因的重组逆转录病毒载体L-tnfSN，LNC-tnf和LNS-tnf．重组载体用磷酸钙沉淀法引入病毒包装细胞PA317，经G418筛选后，用NIH3T3细胞测定病毒滴度，结果表明L-tnfSN产生的病毒滴度最高(1×10^5CFU／ml)， 展开更多
关键词 人肝癌细胞 TNF-Α基因 病毒滴度 感染 重组逆转录病毒载体 TNFΑ基因 包装细胞 磷酸钙沉淀法 构建 NIH3T3细胞
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 5 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部