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口蹄疫病毒P12A和3C基因重组逆转录病毒表达载体的构建 被引量：8
1
作者 刘艳红 李炯 +3 位作者 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期606-610,共5页
以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMD... 以A型口蹄疫病毒(FMDV)AV88(L)和XJ99株的P12X基因和AV88(L)3C基因的阳性克隆质粒为模板,用PCR扩增各基因片段,酶切后分步定向亚克隆至逆转录病毒表达载体pBABE-puro上经PCR、酶切鉴定及测序。结果表明,获得了2个含不同RGD基序的A型FMDV衣壳蛋白和蛋白酶基因的重组逆转录病毒表达载体pBABE-AV88(L)P1 2X3C和pBABE-XJ99 P1 2X3C,为研究安全、高效、低成本的FMDV空衣壳亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 衣壳蛋白基因 蛋白酶基因 重组逆转录病毒表达载体
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反义及正义Vim重组逆转录病毒表达载体的构建 被引量：1
2
作者 林江凯 蔡文琴 《华南国防医学杂志》 CAS 2005年第1期21-24,F003,共5页
目的构建反义及正义波形蛋白重组逆转录病毒载体,研究波形蛋白在反应性胶质化中的功能与作用。方法应用分子克隆方法克隆、鉴定、包装并感染培养的星形胶质细胞。结果同时获得全长反义及正义Vim逆转录病毒克隆细胞株和较高滴度的病毒上... 目的构建反义及正义波形蛋白重组逆转录病毒载体,研究波形蛋白在反应性胶质化中的功能与作用。方法应用分子克隆方法克隆、鉴定、包装并感染培养的星形胶质细胞。结果同时获得全长反义及正义Vim逆转录病毒克隆细胞株和较高滴度的病毒上清,反义Vim逆转录病毒抑制培养星形细胞的Vim表达。结论重组的反义及正义Vim逆转录病毒可用于进一步的实验研究。 展开更多
关键词 重组逆转录病毒表达载体 VIM 正义 重组逆转录病毒载体 反应性胶质化 星形胶质细胞 波形蛋白 克隆细胞株 分子克隆 方法应用 星形细胞 病毒抑制 实验研究 高滴度 培养
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人反义c-myc重组逆转录病毒表达载体pLNC-aM1的构建 被引量：7
3
作者 曾嵘 李进 《解剖科学进展》 CAS 1998年第1期60-63,共4页
ｃ－ｍｙｃ第一外显子在ｃ－ｍｙｃ转录调节中起着重要作用。为了解ｃ－ｍｙｃ第一外显子的生物学效应，探讨ｃ－ｍｙｃ的转录调控机制，为ｃ－ｍｙｃ表达增高性疾病的基因治疗提供依据，我们采用分子克隆技术，将１．３ｋｂ的人ｃ－ｍ... ｃ－ｍｙｃ第一外显子在ｃ－ｍｙｃ转录调节中起着重要作用。为了解ｃ－ｍｙｃ第一外显子的生物学效应，探讨ｃ－ｍｙｃ的转录调控机制，为ｃ－ｍｙｃ表达增高性疾病的基因治疗提供依据，我们采用分子克隆技术，将１．３ｋｂ的人ｃ－ｍｙｃ第一外显子片段经克隆载体ｐＵＣ１９换得适宜克隆位点，回收目的片段再反向导入逆转录病毒表达载体ｐＬＮＣＸ，构建成人ｃ－ｍｙｃ第一外显子反义载体ｐＬＮＣ－ａＭ１。 展开更多
关键词 C-MYC基因 重组体 逆转录病毒 载体构建
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mM-CSF及其剪切体重组逆转录病毒表达载体的构建
4
作者 马翠花 廖金凤 +3 位作者 王大刚 刘淑艳 任倩 郑国光 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第31期5-7,共3页
目的构建膜结合型M-CSF(mM-CSF)及其胞内区截短30个氨基酸的剪切体(mM-CSF-Δ)重组逆转录病毒表达载体。方法用DNA重组技术构建并鉴定mM-CSF和mM-CSF-Δ的重组逆转录病毒表达载体MSCVPGK-GFP-mM-CSF、MSCV-PGK-GFP-mM-CSF-Δ,与空载体对... 目的构建膜结合型M-CSF(mM-CSF)及其胞内区截短30个氨基酸的剪切体(mM-CSF-Δ)重组逆转录病毒表达载体。方法用DNA重组技术构建并鉴定mM-CSF和mM-CSF-Δ的重组逆转录病毒表达载体MSCVPGK-GFP-mM-CSF、MSCV-PGK-GFP-mM-CSF-Δ,与空载体对照MSCV-PGK-GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒,并感染HEK293细胞,通过流式分选术获得3种阳性细胞。结果经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染HEK293细胞,获得了稳定表达细胞株HEK293-M、HEK293-M-Δ和对照细胞株HEK293-V。RT-PCR以及Western blotting法检测发现HEK293细胞中有mM-CSF和mM-CSF-Δ的表达,HEK293-M细胞和HEK293-M-Δ细胞经流式抗体标记后均能检测到膜蛋白的表达。结论成功构建了mM-CSF及其剪切体的重组逆转录病毒表达载体。 展开更多
关键词 mM-CSF 剪切体 逆转录病毒表达载体 HEK293细胞系
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人反义c-myc重组逆转录病毒表达载体PLNC-myc1的构建
5
作者 曾嵘 李进 《解剖科学进展》 1997年第3期40-40,共1页
人反义ｃ－ｍｙｃ重组逆转录病毒表达载体ＰＬＮＣ－ｍｙｃ１的构建曾嵘李进（第一军医大学组胚教研室）在血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖、表型转换（由收缩型→合成型）与癌基因表达的关系上，核内原癌基因的变化尤为有意义，而ｃ－... 人反义ｃ－ｍｙｃ重组逆转录病毒表达载体ＰＬＮＣ－ｍｙｃ１的构建曾嵘李进（第一军医大学组胚教研室）在血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖、表型转换（由收缩型→合成型）与癌基因表达的关系上，核内原癌基因的变化尤为有意义，而ｃ－ｍｙｃ作为核内的一个早期反应基因，... 展开更多
关键词 重组逆转录病毒 表达载体 反义C-MYC 反义寡核苷酸 表型转换 外显子 反义核酸技术 酶切电泳 早期反应基因 限制性内切酶
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重组猪瘟病毒E2基因逆转录病毒载体的构建及其表达活性 被引量：5
6
作者 田宏 刘湘涛 +8 位作者 林彤 吴锦艳 龚真莉 郑海学 代兴国 孙世琪 尚佑军 谢庆阁 张彦明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期460-463,共4页
从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒... 从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白E2基因,定向克隆于逆转录病毒载体pBABEpuro,经PCR、酶切和序列分析鉴定,获取阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,并在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选表达猪瘟E2基因的细胞株。通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA检测表明,所筛的细胞细胞系能稳定表达猪瘟E2基因,而且表达产物具有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 猪瘟C株E2基因 重组逆转录病毒载体 PK15细胞 基因表达
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人白细胞介素2重组逆转录病毒载体的构建与表达 被引量：3
7
作者 章卫平 曹雪涛 +3 位作者 王建莉 马施华 黄欣 于益芝 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第3期186-190,共5页
通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA．并经核苷酸测序加以证实，将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN，构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2．体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10^4CFU／ml,NIH 3T3小鼠成纤... 通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA．并经核苷酸测序加以证实，将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN，构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2．体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10^4CFU／ml,NIH 3T3小鼠成纤维细胞感染hIL-2重组逆转录病毒后．分泌IL-2水平达118.2U／ml；PCR从其基因组DNA中扩增到NeoR基因片段．提示重组逆转录病毒载体已整合至宿主细胞的基因组DNA中。本研究为开展人IL-2基因治疗奠定了基础. 展开更多
关键词 人白细胞介素2 重组逆转录病毒载体 构建 表达 基因治疗 肿瘤瘤苗
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抗菌肽重组逆转录病毒载体的构建、重组病毒的包装及其在牛奶中的稳定表达 被引量：3
8
作者 张锦霞 张守峰 +1 位作者 郭学军 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1433-1437,共5页
将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN—bcp—LK（R）中，获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN—bcp-LfcinB-CE-MA（R），利用脂质体转染PA317包装细胞，G418进行筛选得到了阳性细胞克隆，克隆扩大培养后，用... 将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN—bcp—LK（R）中，获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN—bcp-LfcinB-CE-MA（R），利用脂质体转染PA317包装细胞，G418进行筛选得到了阳性细胞克隆，克隆扩大培养后，用病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定，最高滴度为1×10^4CFU／mL，用病毒上清转染妊娠中后期奶牛乳腺组织，产犊后采集的奶样经琼脂板溶圈法和Tricine-SDS-PAGE检测，结果表明乳汁中表达的抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显地抑菌活性，并能实现相对稳定的表达，表达可持续30-45d。 展开更多
关键词 抗菌肽 重组逆转录病毒 转染 包装 表达
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人P58.1重组逆转录病毒载体的构建及其在淋巴细胞中的表达 被引量：3
9
作者 曹东林 周思朗 +1 位作者 郭坤元 彭冬先 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期704-706,共3页
目的构建人P58.1基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在淋巴细胞中的表达。方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将白血病受者的P58.1基因导入健康供者的淋巴细胞中,并用逆转录聚合酶链式反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达。结果测序及... 目的构建人P58.1基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在淋巴细胞中的表达。方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将白血病受者的P58.1基因导入健康供者的淋巴细胞中,并用逆转录聚合酶链式反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达。结果测序及BglⅡ、EcoRⅠ双酶切鉴定证实,获得了P58.1基因且已正确插入载体pMSCV。流式细胞仪检测空载体、未转染及重组pMSCV转染供者淋巴细胞的P58.1分子表达率差异有显著性,重组逆转录病毒感染的供者淋巴细胞整合了受者的P58.1基因,且能转录为相应的mRNA并在细胞膜上有P58.1分子表达。结论成功获得P58.1基因并构建重组逆转录病毒载体,该基因已稳定整合入淋巴细胞的基因组中,且获得了表达。 展开更多
关键词 人P58.1基因 逆转录病毒载体 淋巴细胞 表达
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重组人CD80-SEA毒素逆转录病毒真核表达载体的构建 被引量：3
10
作者 李增山 隋延仿 +2 位作者 姜永强 雷祚荣 尚继栋 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第3期275-276,共2页
关键词 肿瘤 免疫基因治疗 CD80-SEA毒素 逆转录病毒 真核表达载体 构建
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蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK^R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达 被引量：2
11
作者 姚伟 任文陟 +3 位作者 张守峰 范志强 扈荣良 涂长春 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2005年第3期129-132,共4页
目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩... 目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染妊娠期奶山羊乳腺小叶组织,山羊产后采奶纤维蛋白平板溶圈法检测蚓激酶活性。结果产后奶样经纤维蛋白平板溶圈法检测羊奶具有明显纤溶活性。结论蚓激酶基因已经整合到奶山羊乳腺组织并能实现相对稳定的表达。 展开更多
关键词 蚓激酶 重组逆转录病毒 包装 转染 表达
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蚓激酶重组逆转录病毒载体的构建及其在牛乳腺中的表达 被引量：1
12
作者 刘殿峰 张嘉保 +3 位作者 张守峰 姚伟 李雪 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期519-521,共3页
将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶牛乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染NIH3T3细胞... 将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶牛乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL。进而用病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺小叶组织,产后奶样经FAPA法检测表明蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织,并能实现相对稳定的表达。 展开更多
关键词 蚓激酶 重组逆转录病毒 包装 转染 表达
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BDNF基因重组逆转录病毒表达载体pLEGFP-BDNF的构建与鉴定 被引量：1
13
作者 李佳楣 龙大宏 +3 位作者 冷水龙 罗秀梅 黄文燕 宣爱国 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期462-464,共3页
目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据 BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总 RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体p... 目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组逆转录病毒表达载体。方法根据 BDNF基因已知序列,设计合成一对引物并导入HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点;从大鼠海马组织提取总 RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码BDNF的基因片段,与克隆载体pMD 18-T Simple连接构建pMDT-BDNF质粒;经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,获得BDNF基因片断再克隆至逆转录病毒载体 pLEGFP-N1中构建重组质粒pLEGFP-BDNF。结果限制性内切酶酶切分析和PCR法鉴定表明为正确重组子,测序结果证实与已知序列吻合。结论构建的重组逆转录病毒表达载体 pLEGFP-BDNF含有序列正确的大鼠BDNF基因,可以作为今后治疗老年性痴呆动物模型转基因实验的基因来源。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 逆转录病毒载体 基因重组
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HSV1-tk基因重组逆转录病毒载体的构建与表达 被引量：1
14
作者 李爱华 刘天承 田竟生 《首都医科大学学报》 CAS 1999年第2期83-85,共3页
通过ＤＮＡ重组技术，将ＨＳＶ１ｔｋ基因片段重组到含有ＨＳＶ１ｔｋ启动子的ｐＮ２Ａ型逆转录病毒载体中。选取正向克隆的逆转录病毒重组ＤＮＡ，以磷酸钙法转染ψ２，ＰＡ３１７包装细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞上清能... 通过ＤＮＡ重组技术，将ＨＳＶ１ｔｋ基因片段重组到含有ＨＳＶ１ｔｋ启动子的ｐＮ２Ａ型逆转录病毒载体中。选取正向克隆的逆转录病毒重组ＤＮＡ，以磷酸钙法转染ψ２，ＰＡ３１７包装细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞上清能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３，细胞系测定平均滴度为６．２×１０５ＣＦＵ／ｍＬ，最高可达１．５×１０６ＣＦＵ／ｍＬ。 展开更多
关键词 HSV1-tk基因 逆转录病毒载体 基因转移 基因重组
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勘误:EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定
15
作者 陈云 周锋 +3 位作者 孙倍成 刘根焰 王冰 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期274-274,共1页
因本文作者失误,发表在《细胞与分子免疫学杂志》2009年第25卷第11期第1013-1015页的“EB病毒潜伏膜蛋白2A基因重组逆转录病毒载体和稳定表达细胞株的构建及鉴定”论文中,图2A及图3用错了荧光显微镜和流式细胞术的图像。
关键词 重组逆转录病毒载体 流式细胞术 稳定表达细胞株 荧光显微镜 A基因 《细胞与分子免疫学杂志》
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人 FN cDNA 重组逆转录病毒载体及高表达 FN 肿瘤细胞株的构建
16
作者 张文颖 潘颖 +1 位作者 徐勇 马腾骧 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1999年第4期493-495,共3页
目的：探讨 Ｆ Ｎ 对肿瘤细胞生物学行为的影响，将人 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 基因导入低表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株２５３ Ｊ中，构建高表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株２５３ Ｆ Ｎ。方法：通过 Ｄ Ｎ Ａ 重组技术，将人全长 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ... 目的：探讨 Ｆ Ｎ 对肿瘤细胞生物学行为的影响，将人 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 基因导入低表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株２５３ Ｊ中，构建高表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株２５３ Ｆ Ｎ。方法：通过 Ｄ Ｎ Ａ 重组技术，将人全长 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段插入到逆转录病毒载体ｐ Ｌ Ｊ中，经 Ｐ Ａ３１７细胞包装，生产出４代病毒液，感染 Ｎ Ｉ Ｈ３ Ｔ３细胞后，测得假病毒滴度。用高滴度病毒液感染２５３ Ｊ细胞，经４００ μｇ／ｍ ｌ Ｇ４１８筛选，产生抗性克隆。继续传代培养，一步法提取细胞总 Ｒ Ｎ Ａ，进行 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹杂交。结果：２５３ Ｆ Ｎ 细胞除７６ ｋｂ 处显示微弱的内源杂交带以外，在９６ ｋｂ 处有一条较强的杂交带；免疫组化结果显示２５３ Ｆ Ｎ 细胞的胞浆及胞膜均为棕红着色，而２５３ Ｊ细胞和空载体转染细胞仅轻微着色。结论：转染后的细胞染色体中成功地整合了 Ｆ Ｎ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段，并能够在转录水平和蛋白水平表达。从而建立了高表达 Ｆ Ｎ 的肿瘤细胞株，为深入研究肿瘤的转移机理奠定了基础。 展开更多
关键词 纤维粘连蛋白 逆转录病毒载体 肿瘤细胞株 表达
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蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK^R的构建及其在奶牛乳腺组织中的表达 被引量：1
17
作者 周兴 张居农 《中国奶牛》 2007年第S1期116-119,共4页
构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA的重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK^R,以200μg、500μg、1000μg、2 000μg的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg为最佳表达剂量。利用脂质体转染... 构建含有蚓激酶基因(Lumbrokinase,LK)cDNA的重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK^R,以200μg、500μg、1000μg、2 000μg的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,转染泌乳期奶牛乳腺组织获得暂时表达,并以500μg为最佳表达剂量。利用脂质体转染PA317包装细胞,通过G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后收集病毒上清感染NIH_3T_3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×10~4CFU/mL。再用收获的病毒上清转染妊娠期奶牛乳腺组织,产后奶样经FAPA法检测蚓激酶活性,结果表明牛奶具有明显的纤溶活性,即蚓激酶基因已经整合到奶牛乳腺组织并能实现相对稳定的表达。 展开更多
关键词 蚓激酶 重组逆转录病毒 包装 转染 表达
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人endostatin基因重组逆转录病毒载体的构建及其在NIH3T3细胞中表达
18
作者 王轩 李希 +2 位作者 刘福坤 黎介寿 徐根兴 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期693-697,共5页
　为探讨转人血管内皮抑制基因(endostatin)在转染细胞中的表达,利用逆转录病毒载体构建人endostatin基因的重组质粒,通过脂质体(lipofectamine)将重组质粒导入包装细胞PA317,制备重组病毒液.用重组病毒液感染NIH3T3细胞,经G418筛选获... 　为探讨转人血管内皮抑制基因(endostatin)在转染细胞中的表达,利用逆转录病毒载体构建人endostatin基因的重组质粒,通过脂质体(lipofectamine)将重组质粒导入包装细胞PA317,制备重组病毒液.用重组病毒液感染NIH3T3细胞,经G418筛选获得转人endostatin基因细胞株NIH3T3＿endo.同法制备对照细胞株NIH3T3＿pLncx.PCR检测NIH3T3＿endo细胞基因组,在扩增产物中有一550bp人endostatin基因特异性片段,对照组为阴性.免疫组化测定示仅NIH3T3＿endo细胞中有外源性endostatin蛋白的表达.说明人endostatin基因已被成功导入NIH3T3细胞,并获得稳定表达. 展开更多
关键词 人endostatin基因组 血管内皮抑制素 重组逆转录病毒 NIH3T3细胞 基因重组 基因表达 载体构建 抗肿瘤血管疗法
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人PD-L1(B7-H1)基因克隆及其逆转录病毒载体的构建和稳定表达 被引量：7
19
作者 陈永井 施勤 +5 位作者 葛彦 徐宽枫 古涛 孙建军 李文香 张学光 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第2期110-114,共5页
目的 :克隆人PD L1(B7 H1)基因 ,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体 ,获得稳定表达PD L1基因的L92 9细胞。方法 :从人心脏cDNA文库中扩增出PD L1基因 ,通过双酶切装入逆转录病毒载体 pGEZ Term中 ,脂质体法共转染包装细胞 2 93... 目的 :克隆人PD L1(B7 H1)基因 ,并构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体 ,获得稳定表达PD L1基因的L92 9细胞。方法 :从人心脏cDNA文库中扩增出PD L1基因 ,通过双酶切装入逆转录病毒载体 pGEZ Term中 ,脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,72h后 ,加入Zeocin进行筛选 ,挑选出能稳定表达PD L1蛋白的L92 9细胞株。结果 :构建了用于表达的含PD L1基因的重组逆转录病毒载体 ;经转染包装细胞 2 93T后 ,包装出具有感染能力的重组PD L1逆转录病毒 ;经RT PCR、流式细胞仪表型检测表明 ,筛选出的L92 9转基因细胞能稳定表达人PD L1蛋白。结论 :构建了含人PD L1基因重组逆转录病毒载体和稳定表达人PD L1蛋白的细胞株 ,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 PD-L1 基因克隆 逆转录病毒载体 构建 稳定表达
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增强型绿色荧光蛋白逆转录病毒载体的构建和表达 被引量：9
20
作者 傅建新 王玮 +2 位作者 卢大儒 岑建农 陈子兴 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期261-265,共5页
逆转录病毒载体被广泛用作对造血细胞进行基因转移的工具 ,转导方法的改进有赖于应用可快速分析并被高效选择的基因标志。为此 ,我们克隆了增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,并构建可表达EGFP的逆转录病毒载体LGSN ,通过脂质体转染和交... 逆转录病毒载体被广泛用作对造血细胞进行基因转移的工具 ,转导方法的改进有赖于应用可快速分析并被高效选择的基因标志。为此 ,我们克隆了增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因 ,并构建可表达EGFP的逆转录病毒载体LGSN ,通过脂质体转染和交互感染方法建立高滴度的逆转录产病毒细胞 ,用以分析对造血细胞标记EGFP基因的可行性。流式细胞术和荧光显微镜检测发现 ,EGFP病毒转录的GP +envAm12细胞和K5 62细胞均可发出稳定的绿色荧光信号 ,阳性率可分别达 97%和 86% ;聚合酶链反应分析显示LGSN转导细胞内有原病毒的整合。上述结果提示 ,作为新一代选择性标志 ,EGFP是适于研究对造血细胞基因转移与表达的报告基因 。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 逆转录病毒载体 基因表达 构建
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