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脱细胞软骨细胞外基质匀浆联合氧化苦参碱治疗大鼠骨关节炎
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作者 吴富章 张鹏礼 +2 位作者 章振华 何永兵 孙和炎 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2675-2682,共8页
背景:脱细胞软骨细胞外基质治疗骨关节炎具有一定的效果,但其单独应用时的治疗效果有限。氧化苦参碱可缓解白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡和细胞外基质降解。目的:观察不同剂量氧化苦参碱与脱细胞软骨细胞外基质联合膝关节腔注射对大... 背景:脱细胞软骨细胞外基质治疗骨关节炎具有一定的效果,但其单独应用时的治疗效果有限。氧化苦参碱可缓解白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡和细胞外基质降解。目的:观察不同剂量氧化苦参碱与脱细胞软骨细胞外基质联合膝关节腔注射对大鼠骨关节炎的治疗作用。方法:获取SD大鼠股骨软骨,采用物理、化学与酶相结合的方法制备脱细胞软骨细胞外基质。取50只SD大鼠,利用随机数字表法分为假手术组、骨关节炎组、单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组,每组10只,后4组采用改良Hulth法建立大鼠骨关节炎模型。造模成功后,单纯材料组大鼠膝关节腔注射脱细胞软骨细胞外基质匀浆,低剂量药物组、高剂量药物组膝关节腔分别注射含50,100μg氧化苦参碱的脱细胞软骨细胞外基质匀浆。注射4周后取材进行相关检测。结果与结论:①与假手术组比较,骨关节炎组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平升高(P<0.05),超氧化物歧化酶水平降低(P<0.05);与骨关节炎组比较,低剂量药物组、高剂量药物组关节腔积液中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子ɑ、丙二醛水平降低(P<0.05),超氧化物歧化酶水平升高(P<0.05),其中高剂量药物组变化更显著。②Tunel染色显示,与假手术组相比,骨关节炎组凋亡软骨细胞增多;与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组凋亡软骨细胞减少,其中高剂量药物组减少更显著。③苏木精-伊红与免疫组化染色显示,骨关节炎组大鼠膝关节软骨严重退变,软骨组织中Ⅱ型胶原表达降低(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,单纯材料组、低剂量药物组、高剂量药物组大鼠膝关节软骨退变明显改善,软骨组织中Ⅱ型胶原表达升高(P<0.05)、基质金属蛋白酶9表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善最显著。④Western blot检测显示,与假手术组相比,骨关节炎组软骨组织中Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与骨关节炎组相比,低剂量药物组、高剂量药物组Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、Bax蛋白表达降低(P<0.05),其中高剂量药物组改善更显著。⑤结果表明,膝关节腔内联合注射脱细胞软骨细胞外基质与氧化苦参碱可通过促进细胞外基质的合成、抑制炎症与氧化应激反应、抑制软骨细胞凋亡发挥骨关节炎治疗作用,该治疗作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。 展开更多
关键词 关节炎 细胞细胞 氧化苦参碱 细胞 细胞
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小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道
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作者 王丹 朱小军 +1 位作者 李志成 李娜 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第23期4907-4914,共8页
背景:小肠黏膜下层脱细胞基质已被临床与基础研究证实可用于尿道的修复重建,但其单独应用时存在宿主细胞生长缓慢、支架血管化不足而成活困难、重建尿道狭窄梗阻等问题,仅适用于较短的尿道狭窄。目的:探讨应用小肠黏膜下层脱细胞基质复... 背景:小肠黏膜下层脱细胞基质已被临床与基础研究证实可用于尿道的修复重建,但其单独应用时存在宿主细胞生长缓慢、支架血管化不足而成活困难、重建尿道狭窄梗阻等问题,仅适用于较短的尿道狭窄。目的:探讨应用小肠黏膜下层脱细胞基质复合外泌体构建组织工程尿道的可行性。方法:从新西兰大白兔骨髓间充质干细胞中分离提取外泌体;制备猪小肠黏膜下层脱细胞基质,将外泌体负载于小肠黏膜下层脱细胞基质上。将小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体(PKH26染料标记)复合物与脐静脉内皮细胞共培养12 h,观察细胞摄取外泌体情况。选取生长状态良好的脐静脉内皮细胞,分3组培养:空白组常规培养,对照组加入小肠黏膜下层脱细胞基质,实验组加入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,通过划痕实验、成管实验、血管生成因子分泌检测评估血管生成情况。取30只新西兰大白兔,建立长段(3 cm)尿道缺损模型,采用随机数字表法分3组干预(n=10):单独材料组植入小肠黏膜下层脱细胞基质,对照组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-骨髓间充质干细胞复合物,实验组植入小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体复合物,植入后12周进行尿道造影、尿动力学检查及重建尿道切片病理观察。结果与结论:(1)荧光显微镜下可见小肠黏膜下层脱细胞基质中的外泌体可被脐静脉内皮细胞摄取。(2)与空白组、对照组相比,实验组材料可促进脐静脉内皮细胞的迁移、成血管能力以及成血管因子血管内皮生长因子、肝细胞生长因子、白细胞介素8的分泌(P <0.05)。(3)尿道造影结果显示,单独材料组10只兔均出现尿道狭窄,对照组10只兔中2只出现尿道狭窄,实验组10只兔均未出现尿道狭窄。尿动力检查结果显示,单独材料组兔材料植入后12周的最大尿道压高于术前(P <0.05),对照组、实验组兔植入后12周的最大尿道压均低于空白组(P <0.05)。苏木精-伊红、Masson与免疫组化染色显示,单独材料组可见明显的再生上皮层、少量的皮下平滑肌与血管,以纤维组织增生为主,伴有明显炎性细胞浸润;对照组可见较完整的再生上皮与少量胶原,可见大量的皮下血管与平滑肌,伴有炎性细胞浸润;实验组可见完整的再生上皮层与大量的皮下血管、平滑肌,未见明显炎性细胞浸润,实验组AE1/AE3、ɑ-平滑肌肌动蛋白、CD31阳性表达均高于单独材料组、对照组(P <0.05)。(4)结果表明,小肠黏膜下层脱细胞基质-外泌体组织工程尿道可通过促进血管生成来修复尿道缺损。 展开更多
关键词 尿道损伤 尿道狭窄 小肠黏膜下层细胞 细胞 泌体 组织工程尿道
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补充重组人源胶原蛋白对离心运动后小鼠骨骼肌细胞外基质重塑的影响 被引量:1
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作者 赵莎莎 贺庆 +1 位作者 李佳 吴迎 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第16期2542-2549,共8页
背景:胶原蛋白是含量最为丰富的胞外基质成分,与骨骼肌细胞外基质的结构、功能密切相关,但补充由生物工程技术生产的重组人源胶原蛋白(recombinant human collagen,rhC)对骨骼肌细胞外基质的影响及机制尚不清楚。目的:探讨补充rhC对离... 背景:胶原蛋白是含量最为丰富的胞外基质成分,与骨骼肌细胞外基质的结构、功能密切相关,但补充由生物工程技术生产的重组人源胶原蛋白(recombinant human collagen,rhC)对骨骼肌细胞外基质的影响及机制尚不清楚。目的:探讨补充rhC对离心运动后骨骼肌细胞外基质重塑的影响及作用机制。方法:将104只8周龄健康雄性C57小鼠随机分为对照组(生理盐水)、rhC低剂量组(0.2 g/kg)、中剂量组(1.0 g/kg)和高剂量组(2.0 g/kg),连续7 d灌胃干预后每组选取2只小鼠,解剖各脏器进行苏木精-伊红染色判断炎性浸润情况,其余小鼠于第8天进行离心运动,分别在离心运动后即刻(0),24,48,96 h观察细胞外基质结构变化,检测小鼠抓握力、血清肌酸激酶活性、骨骼肌组织基质金属蛋白酶2,9,14和基质金属蛋白酶抑制剂2的蛋白水平。结果与结论:①苏木精-伊红染色观察短期补充rhC对心脏、肝脏、脾、肾无显著影响;②一次性离心运动后,rhC中、高剂量组小鼠抓握力恢复率显著升高(P<0.01);③各组肌酸激酶变化趋势一致,组间无显著性差异;④rhC低剂量组细胞外基质恢复进程快于对照组,rhC中、高剂量组肌束膜较为完整;⑤rhC高剂量组基质金属蛋白酶9蛋白水平显著降低(P<0.05);⑥rhC中、高剂量组基质金属蛋白酶14蛋白水平显著降低(P<0.05);⑦rhC中、高剂量组基质金属蛋白酶2蛋白水平显著降低(P<0.05);⑧rhC中、高剂量组基质金属蛋白酶抑制剂2蛋白水平显著升高(P<0.05);⑨rhC各剂量组基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶抑制剂2比值显著降低(P<0.05)。该研究发现连续7 d预补充1.0,2.0 g/kg rhC可通过调节基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶抑制剂来抑制运动后骨骼肌细胞外基质降解,从而促进小鼠骨骼肌力量恢复。 展开更多
关键词 重组人源胶原蛋白 离心运动 骼肌细胞 金属蛋白酶 金属蛋白酶抑制剂
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重组骨脱细胞细外基复合Wistar大鼠成骨细胞体外培养的形态学观察
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作者 田伟 贾长青 柏树令 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期314-316,共3页
目的新型重组骨脱细胞细胞外基质(REAECM)的制备及其细胞相容性的初步检测,为骨组织工程寻找一种新型的细胞外支架提供实验依据。方法应用体外细胞培养技术,对鼠成骨细胞和REAECM体外进行联合培养1~4周,通过相差显微镜、光镜、电镜观... 目的新型重组骨脱细胞细胞外基质(REAECM)的制备及其细胞相容性的初步检测,为骨组织工程寻找一种新型的细胞外支架提供实验依据。方法应用体外细胞培养技术,对鼠成骨细胞和REAECM体外进行联合培养1~4周,通过相差显微镜、光镜、电镜观察细胞在材料中的生长情况。结果成骨细胞可以在REAECM上发生良好的黏附、增殖,并且可以长入REAECM的孔隙内。结论REAECM可作为构建组织工程骨的一种较好的支架材料,具有网状孔隙结构;在体外和成骨细胞复合培养时表现出良好的细胞相容性,可以作为一种天然的骨组织替代材料。 展开更多
关键词 组织工程 细胞 重组骨脱细胞细胞外基质 联合培养 大鼠
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脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质成骨效果的对比研究 被引量:2
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作者 达尔亚·俄尼木拜 张迪 古丽努尔·阿吾提 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期28-36,共9页
目的比较骨缺损区植入脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质的成骨效果。方法制备脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质。将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为脱矿组(A组)、脱细胞组(B组)、Bio-Oss骨粉组(C组)、空白组(D组),每组6只大鼠,在麻醉条... 目的比较骨缺损区植入脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质的成骨效果。方法制备脱矿牙本质基质和脱细胞牙本质基质。将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为脱矿组(A组)、脱细胞组(B组)、Bio-Oss骨粉组(C组)、空白组(D组),每组6只大鼠,在麻醉条件下制备双侧股骨骨缺损。A、B、C组大鼠分别在骨缺损区植入脱矿牙本质基质、脱细胞牙本质基质、Bio-Oss骨粉,D组大鼠不植入任何材料。术后4周和8周,每组各随机处死3只大鼠。大体观察骨缺损区愈合情况,血清学检测成骨指标骨形态发生蛋白(BMP)-2及碱性磷酸酶(ALP)浓度,影像学观察骨缺损区高密度灰色区(代表骨愈合)分布情况,组织形态学观察新骨形成情况,计算新骨形成率。结果术后4周和8周,大体观察见A组成骨能力较其他组活跃,血清学检测A组BMP-2及ALP浓度均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。8周时,影像学观察可见A组骨缺损区高密度灰色区分布均匀,组织形态学观察见A组排列规则的骨基质。A组4、8周时的新骨形成率分别为28.51%±0.55%、32.57%±2.28%,均高于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脱矿牙本质基质比脱细胞牙本质基质具有更好的成骨潜能。 展开更多
关键词 矿牙本 细胞牙本 修复 移植材料
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超临界CO_(2)流体技术制备脱细胞外基质材料及其生物医学应用
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作者 吴冰 段又愈 陈爱政 《华侨大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第5期551-558,共8页
脱细胞外基质(decellularized extracellular matrix,dECM)材料在组织工程和再生医学中具有重要应用,超临界CO_(2)流体(supercritical CO_(2)fluid,SCF-CO_(2))技术已被证明可用于dECM材料的制备。文中综述了SCF-CO_(2)的基本原理、SCF-... 脱细胞外基质(decellularized extracellular matrix,dECM)材料在组织工程和再生医学中具有重要应用,超临界CO_(2)流体(supercritical CO_(2)fluid,SCF-CO_(2))技术已被证明可用于dECM材料的制备。文中综述了SCF-CO_(2)的基本原理、SCF-CO_(2)脱细胞及其灭菌机制,介绍了辅助溶剂的使用与预处理技术对SCF-CO_(2)脱细胞的影响,以及dECM材料的生物医学应用。结果表明:与常规方法相比,具有高渗透性、高扩散性的SCF-CO_(2)能更有效地保持细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的结构完整性和生物活性,同时展现出高效灭菌的优势,且制备的dECM材料在组织修复和再生医学领域具有显著应用潜力。 展开更多
关键词 超临界CO_(2)流体 细胞 超临界灭菌 组织工程
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脱细胞异种骨基质植入后受体外周血T淋巴细胞亚型的变化 被引量:13
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作者 孙新君 王正国 +4 位作者 朱佩芳 周萍 张宇 刘大维 张猛 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期322-325,共4页
目的 观察异种脱细胞去抗原骨基质植入后受体细胞免疫状态的变化。 方法 新西兰大耳白兔2 0只,随机分为4组,每组5只,制成股后肌袋模型,分别植入自体骨、异种脱细胞猪肋骨基质和酒精浸泡猪肋骨,设立假手术组作为对照。术后1、2、4和6... 目的 观察异种脱细胞去抗原骨基质植入后受体细胞免疫状态的变化。 方法 新西兰大耳白兔2 0只,随机分为4组,每组5只,制成股后肌袋模型,分别植入自体骨、异种脱细胞猪肋骨基质和酒精浸泡猪肋骨,设立假手术组作为对照。术后1、2、4和6周采集外周血,流式细胞仪检测外周血CD4 + 、CD8+ 和CD2 5 + T淋巴细胞的变化;分别于植入后2周和6周,将植入骨块连同周围组织取出,行组织学观察。 结果 同一时间点,外周血中CD4 +、CD8+ T淋巴细胞在酒精浸泡组显著增高,与其余组差异有统计学意义(P<0 .0 5 ) ,其余各组间差异无统计学意义(P>0 .0 5 ) ;CD2 5 + T淋巴细胞在酒精浸泡猪肋骨组2周后显著高于其它组,差异有统计学意义(P<0 .0 5 )。2周时局部组织中见炎性细胞浸润,以粒细胞为主;6周时自体骨及异种脱细胞骨基质组炎性细胞明显减少,代之以大量成纤维细胞及少量淋巴细胞,可见软骨岛形成。 结论 经脱细胞处理的异种骨基质植入后,近期对受体细胞免疫无明显影响。 展开更多
关键词 T淋巴细胞亚型 周血 植入后 受体 CD8+T淋巴细胞 异种细胞 流式细胞仪检测 细胞免疫状态 酒精浸泡 炎性细胞浸润 CD4+ 组织学观察 成纤维细胞 细胞处理 统计学 大耳白兔 周围组织 局部组织 自体 新西兰
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腺病毒介导BMP-2和EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞及种植脱钙骨的体外观察 被引量:9
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作者 陈佳滨 李强 +3 位作者 茹嘉 武成聪 宁寅宽 蔡伟良 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期869-874,共6页
目的用腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白-2及EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞(rBMSC),种植DBM(脱钙骨)支架体外构建组织工程骨。方法兔髓基质干细胞(rBMSC)的分离、培养;流式细胞仪检测细胞表面标记;转染后,荧光显微镜观察细胞最适感染复数... 目的用腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白-2及EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞(rBMSC),种植DBM(脱钙骨)支架体外构建组织工程骨。方法兔髓基质干细胞(rBMSC)的分离、培养;流式细胞仪检测细胞表面标记;转染后,荧光显微镜观察细胞最适感染复数(MOI)及蛋白印迹检测外源基因的表达情况;采用Urist提供的方法制备脱钙骨(DBM),用细胞计量法测定BMSCs与DBM复合培养的黏附率。然后将转染后细胞接种到DBM支架上,用荧光显微镜观察细胞是否成功粘附于支架材料上,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 BMSCs细胞表型鉴定:CD44表达阳性,CD45表达阴性;转染后,蛋白印迹试验检测到BMP-2表达增高;骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质的平均粘附率为(72.74±1.99)%;扫描电镜见转染细胞生长良好,伸出丝状突起,相互连接。结论成功培养及鉴定兔BMSCs,Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,转染后的细胞种植于DBM支架材料后生长状况良好,组织工程骨构建成功。 展开更多
关键词 腺病毒 形态发生蛋白 细胞 组织工程
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重组PcDNA3.1-hBMP-2转染骨髓基质干细胞及复合异种骨支架体外构建组织工程骨 被引量:5
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作者 卜丽莎 李建军 +4 位作者 韩东 景元海 王宏 王玲 徐莘香 《中国骨伤》 CAS 2004年第8期449-451,共3页
目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工... 目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工程骨。方法 :蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,碱性磷酸酶 (ALPase)活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 :转染后 ,BMSCs表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 :在脂质体介导下 ,BMP 2基因可导入细胞且稳定表达基因产物促进自身增殖分化 ,转染后细胞在支架材料上贴附生长良好 ,为进一步应用携带BMP 展开更多
关键词 转染 HBMP-2 组织工程 细胞 PCDNA3 支架 重组 构建 目的
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犬脱钙骨基质复合骨髓间充质干细胞的体外培养 被引量:7
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作者 陈立强 李宁毅 +3 位作者 袁荣涛 孙健 金晓明 刘斌钰 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2007年第3期255-258,共4页
目的:制备犬脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),研究DBM作为骨组织工程支架材料的可行性。方法:杂种犬的股骨行脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白、冷冻干燥、灭菌制成DBM,与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)复合,应用倒... 目的:制备犬脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),研究DBM作为骨组织工程支架材料的可行性。方法:杂种犬的股骨行脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白、冷冻干燥、灭菌制成DBM,与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)复合,应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察脱钙骨基质的结构及细胞在材料表面的生长情况。结果:犬脱钙骨基质具有三维立体网孔结构,平均孔隙直径为(254.39±88.71)μm,孔隙率约为70%。与MSCs复合培养后,细胞黏附其上,上架率高,生长状态良好,增殖迅速,并分泌大量细胞外基质。结论:DBM具有良好的生物相容性。 展开更多
关键词 髓间充细胞 组织工程
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骨髓基质干细胞与冻干脱矿骨基质材料体外附着的实验研究 被引量:4
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作者 阎俏梅 翁雨来 +3 位作者 崔磊 刘伟 张富强 曹谊林 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2003年第2期98-101,共4页
目的 :研究骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSCs)经诱导、扩增后与冻干脱矿骨基质 (freeze -drieddemineralizedbonematrix ,fdDBM)的相容性及体外附着规律 ,为进一步体内回植提供研究基础。方法 :抽取成年犬骨髓 ,用全骨髓... 目的 :研究骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSCs)经诱导、扩增后与冻干脱矿骨基质 (freeze -drieddemineralizedbonematrix ,fdDBM)的相容性及体外附着规律 ,为进一步体内回植提供研究基础。方法 :抽取成年犬骨髓 ,用全骨髓培养法获取单核细胞 ,经条件培养液体外诱导、扩增后 ,以不同浓度接种于制备的fdDBM上 ,通过倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞与材料的附着情况并以MTT实验了解适宜的接种浓度。结果 :当接种密度为 1.0× 10 6/cm2 时 ,细胞与支架材料之间有最大附着量。结论 :BMSCs能在fdDBM上粘附并生长 ,相容性良好 ,是理想的骨组织工程支架材料。 展开更多
关键词 细胞 冻干 相容性 附着 组织工程
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脱矿脱细胞骨基质环支架体外构建组织工程化椎间盘纤维环 被引量:4
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作者 潘勇 周跃 +5 位作者 郝勇 李长青 初同伟 张峡 王卫东 王建 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期451-457,共7页
目的:探计以脱矿脱细胞骨基质环为支架、纤维环细胞为种子细胞体外培养构建组织工程化椎间盘纤维环的可行性。方法:取兔椎间盘纤维环细胞培养,应用甲苯胺蓝染色和Ⅰ型、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色进行鉴定。用纤维蛋白凝胶接种技术将兔... 目的:探计以脱矿脱细胞骨基质环为支架、纤维环细胞为种子细胞体外培养构建组织工程化椎间盘纤维环的可行性。方法:取兔椎间盘纤维环细胞培养,应用甲苯胺蓝染色和Ⅰ型、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色进行鉴定。用纤维蛋白凝胶接种技术将兔椎间盘纤维环细胞接种到经脱矿脱细胞制备的骨基质环支架材料上,体外培养3个月。每月取培养的细胞支架复合体进行大体形态、HE染色光镜检查和扫描电镜观察,并用生化方法检测羟脯氨酸、氨基葡聚糖(GAG)、脱氧核糖核酸(DNA)含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅰ、Ⅱ型胶原信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫组化和蛋白质印迹方法检测Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白表达。结果:培养的第1代细胞甲苯胺蓝染色呈异染性,Ⅰ型、Ⅱ型胶原免疫组化染色均可见阳性表达,表明培养的第1代细胞具有椎间盘纤维环细胞的表型特点。构建的复合体体外培养1、2、3个月时大体呈白色半透明样环状,有光泽,质韧,具有一定弹性,可扭曲;HE染色光镜下见支架孔洞被红染的组织填充,且空洞内的细胞密度逐渐增加;扫描电镜观察材料表面逐渐被组织填充;Ⅰ型、Ⅱ型胶原免疫组化染色均为阳性;培养2个月时复合体羟脯氨酸、GAG、DNA含量明显高于1个月时(P<0.01),3个月时与2个月时比较无显著性差异(P>0.05),各时间点复合体羟脯氨酸、GAG、DNA含量均低于正常纤维环(P<0.05或<0.01);培养1个月时复合体可检测到Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达,2个月时与1个月时比较有显著性差异(P<0.01),3个月时与2个月时比较无显著性差异(P>0.05)。结论:以脱矿脱细胞骨基质环为支架、纤维环细胞为种子细胞构建的复合体在体外培养时,细胞能够保持表型特点、逐渐增殖和行使功能,此复合体可被鉴定为类纤维环组织,用其构建组织工程化椎间盘纤维环可行。 展开更多
关键词 组织工程 椎间盘纤维环 细胞
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牛松质骨脱细胞骨细胞外基质的制备 被引量:3
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作者 张永刚 王德超 +4 位作者 石辉 孙建华 史晨辉 董金波 刘维钢 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第5期556-560,共5页
为寻找适合骨移植的骨组织替代物-脱细胞骨细胞外基质(Acellular bone extracellular matrix,ABECM)制备最佳方法。方法:根据析因设计原理用不同浓度曲拉通X-100液分别与高渗和低渗液联合后对牛肱骨上端松质骨组织进行适当的脱细胞处理... 为寻找适合骨移植的骨组织替代物-脱细胞骨细胞外基质(Acellular bone extracellular matrix,ABECM)制备最佳方法。方法:根据析因设计原理用不同浓度曲拉通X-100液分别与高渗和低渗液联合后对牛肱骨上端松质骨组织进行适当的脱细胞处理,制成脱细胞牛松质骨,再进行HE染色,Massion染色及扫描电镜观察,寻求最佳的曲拉通X-100的浓度,脱细胞时间及最佳的制备脱细胞牛松质骨的方法。结果表明:10%氯化钠与0.5%曲拉通X-100联合处理48小时的脱细胞牛松质骨未见细胞成分,细胞外基质基本结构未被破坏。由此可见本方法可以成功的制备ABECM,曲拉通X-100是制备ABECM良好试剂,ABECM是一种新型的理想的骨替代物,有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 细胞细胞 替代材料 组织工程
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犬同种异体脱钙骨基质复合细胞片层的体外培养与观察(英文) 被引量:2
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作者 谭帅 荆恒 +1 位作者 高振华 李宁毅 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期555-558,共4页
背景:如何构建具有类似天然骨结构组织工程骨的问题是组织工程学发展的一个难题。细胞片层技术的出现,为其提供了新的途径。目的:观察细胞片层与脱钙骨基质的生物相容性及其在脱钙骨基质上的生长情况。设计、时间及地点:体外观察性实验,... 背景:如何构建具有类似天然骨结构组织工程骨的问题是组织工程学发展的一个难题。细胞片层技术的出现,为其提供了新的途径。目的:观察细胞片层与脱钙骨基质的生物相容性及其在脱钙骨基质上的生长情况。设计、时间及地点:体外观察性实验,于2009-06/2009-09在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:利用温度感应培养基制备犬骨髓基质细胞片层;脱脂、脱钙、脱非胶原蛋白方法制备犬脱钙骨基质。方法:将温度感应技术制备刮取的细胞片层铺盖于脱钙骨基质表面,用含体积分数为10%胎牛血清及成骨诱导剂的DMEM培养液浸没培养。主要观察指标:扫描电镜下观察脱钙骨基质的结构及细胞片层在脱钙骨基质上的附着、生长情况。计算脱钙骨基质孔隙率和孔径大小。结果:扫描电镜下观察可见脱钙骨基质呈三维立体网孔结构。材料孔隙率约为75%。平均孔隙直径为(250.11±98.89)μm,成正态性分布。扫描电镜下观察细胞片层在脱钙骨基质上的附着、生长状况良好,增殖迅速。结论:细胞片层与脱钙骨基质有较好的生物相容性,脱钙骨基质/细胞片层复合体能够应用于组织工程骨,为构建类似骨结构组织工程骨起到促进作用。 展开更多
关键词 细胞片层 组织工程 生物材料
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犬同种异体脱钙骨基质复合骨髓基质干细胞片层与内皮祖细胞的体外培养 被引量:1
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作者 谭帅 李宁毅 +2 位作者 荆恒 高振华 陈立强 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2010年第4期393-397,共5页
目的:观察犬骨髓基质干细胞(bone marrow stroma stem cells,BMSCs)细胞片层及内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)上的生长情况,探讨利用其复合体构建功能性血管化组织工程骨... 目的:观察犬骨髓基质干细胞(bone marrow stroma stem cells,BMSCs)细胞片层及内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)上的生长情况,探讨利用其复合体构建功能性血管化组织工程骨的可行性。方法:应用细胞片层技术制备BMSCs细胞片层,培养犬内皮祖细胞,制备犬同种异体DBM。将DBM分别与BMSCs细胞片层、内皮祖细胞复合。测量DBM孔隙率,倒置相差显微镜、扫描电镜下观察DBM的结构及BMSCs细胞片层、EPCs在DBM上的附着、生长情况。结果:成功构建DBM/BMSCs细胞片层、DBM/EPCs复合体,BMSCs细胞片层、EPCs在DBM上的附着、生长状况良好,增殖迅速。结论:DBM/BMSCs细胞片层、DBM/EPCs复合体能够为生成具有骨样结构的组织工程骨提供良好的条件,并为组织工程骨的血管化创造有利的环境。 展开更多
关键词 细胞片层 内皮祖细胞 组织工程
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不同退变程度人髓核脱细胞外基质支架的生物学特性研究
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作者 陈榕 冉兵 +4 位作者 钟瑞丹 宋婵婵 林志坚 张学良 魏俊 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期937-949,共13页
目的:探索不同退变程度(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度)人髓核脱细胞外基质(nucleus pulposus decellularized extracellular matrix,NP-dECM)支架的生物学特性,并选取出生物学特性最优的NP-dECM支架。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法提取人髓核间充质干细胞(... 目的:探索不同退变程度(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度)人髓核脱细胞外基质(nucleus pulposus decellularized extracellular matrix,NP-dECM)支架的生物学特性,并选取出生物学特性最优的NP-dECM支架。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化法提取人髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs),镜下观察人NPMSCs贴壁、细胞形态及生长情况,行流式细胞术检测细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、CD34、CD45、HLA-DR,并进行成脂、成骨、成软骨诱导分化,观察人NPMSCs的三系分化能力,以确定其为本研究所需要的种子细胞。采用物理、去污剂联合核酸酶法制备不同退变程度的人NP-dECM支架(分别为Ⅱ-D、Ⅲ-D、Ⅳ-D组)。通过肉眼观、DNA及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分的定量和定性检测、扫描电镜等对比,评价不同退变程度的人NP-dECM支架脱细胞的效果。并运用CCK-8法和活/死细胞染色体外评估不同退变程度人NP-dECM支架的细胞相容性。结果:从髓核组织分离培养的人NPMSCs贴壁生长,细胞呈短梭形、纺锤形,第3代人NPMSCs高表达CD73、CD90、CD105等表面标志物,低表达CD34、CD45、HLA-DR等表面标志物,同时人NPMSCs具有成脂、成骨和成软骨分化能力,符合间充质干细胞标准。三种退变程度的人NP-dECM支架肉眼观形态保持完好,电镜下各组支架疏松多孔。HE染色、DAPI染色及DNA测定结果显示三种退变程度的人NP-dECM支架均有效去除了细胞成分。GAG和HYP定量及定性检测结果均显示ECM成分保留良好,GAG保留量从高到低依次为Ⅱ-D组>Ⅲ-D组>Ⅳ-D组,Ⅱ-D组和Ⅲ-D组HYP含量差异无统计学意义,均高于Ⅳ-D组。CCK-8及活/死细胞染色结果表明Ⅱ-D组、Ⅲ-D组和Ⅳ-D组均表现出良好的细胞相容性。结论:Ⅱ度退变的人髓核组织为制备人NP-dECM支架最佳选择。 展开更多
关键词 髓核 退变程度 髓核细胞 组织工程
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消旋聚乳酸/羟基磷灰石/脱钙骨基质材料支架的体外细胞相容性实验研究 被引量:1
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作者 郭乔楠 赵建华 卢佳友 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第24期2216-2219,共4页
目的 研究一种新的骨替代材料———消旋聚乳酸 羟基磷灰石 脱钙骨基质 (PDLLA HA DBM)骨细胞界面形态 ,评价其生物相容性。方法 采用体外细胞培养技术 ,选用培养的人成骨细胞 ,通过光镜和扫描电镜等观察 ,了解细胞在材料中的生长... 目的 研究一种新的骨替代材料———消旋聚乳酸 羟基磷灰石 脱钙骨基质 (PDLLA HA DBM)骨细胞界面形态 ,评价其生物相容性。方法 采用体外细胞培养技术 ,选用培养的人成骨细胞 ,通过光镜和扫描电镜等观察 ,了解细胞在材料中的生长情况和相互关系 ,并与消旋聚乳酸 (PDLLA)及脱钙骨 (DBM)相比较。结果 随着培养时间的延长 ,细胞在PDLLA HA DBM材料表面的密度增加 ,未见细胞死亡。细胞以锚状结构牢固地附着于材料表面 ,并分泌细胞外基质 ,覆盖并完全包裹材料颗粒。结论 PDLLA HA DBM与人成骨细胞能早期形成骨性结合界面 ,具有良好的生物相容性 ,可望成为一种新的具有前景的骨替代材料。 展开更多
关键词 细胞 生物相容性 细胞培养 消旋聚乳酸/羟磷灰石/
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羟基丁酸-羟基辛酸共聚物/脱细胞软骨基质复合支架的制备与体外降解 被引量:2
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作者 张鹏 张永红 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第21期3811-3814,共4页
背景:羟基丁酸-羟基辛酸共聚物具有高生物相容性和降解性,但单一材料无法满足组织工程支架的要求。脱细胞软骨基质是制备复合支架的常用材料,具有良好的生物相容性和无抗原性等优点。目的:将羟基丁酸-羟基辛酸共聚物、脱细胞软骨基质以... 背景:羟基丁酸-羟基辛酸共聚物具有高生物相容性和降解性,但单一材料无法满足组织工程支架的要求。脱细胞软骨基质是制备复合支架的常用材料,具有良好的生物相容性和无抗原性等优点。目的:将羟基丁酸-羟基辛酸共聚物、脱细胞软骨基质以不同比例混合制备复合支架,观察其体外降解速率。方法:取新鲜猪关节软骨,用含有双抗的PBS液浸泡,放入含有苯甲基磺酰氟的tri-HCl缓冲液,加入DNase酶和RNase酶,用D-Hank’s液冲洗等步骤制备脱细胞软骨基质。采用溶剂浇注-颗粒沥滤的方法与羟基丁酸-羟基辛酸共聚物按不同浓度混合,制备出不同比例的复合支架。结果与结论:脱细胞软骨基质的比例不同,复合材料的完全降解时间也不同,8%含量的脱细胞软骨基质最符合软骨组织工程支架的要求。 展开更多
关键词 丁酸-羟辛酸共聚物 细胞 复合支架 降解速率 组织工程
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猪长骨脱细胞骨细胞外基质的制备及生物力学、组织学性质的初步检测 被引量:10
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作者 沙镝 姜英令 +1 位作者 高景恒 吕永利 《实用美容整形外科杂志》 2000年第6期331-334,共4页
目的 寻找适合骨移植的骨组织替代物—骨脱细胞细胞外基质 (ABECM )。方法 将猪股骨用组织工程学的方法进行适当的脱细胞处理 ,制成ABECM ,再进行HE染色和扫描电镜、透射电镜观察 ,及纵向压缩的生物力学性质的检测。结果 ABECM未见... 目的 寻找适合骨移植的骨组织替代物—骨脱细胞细胞外基质 (ABECM )。方法 将猪股骨用组织工程学的方法进行适当的脱细胞处理 ,制成ABECM ,再进行HE染色和扫描电镜、透射电镜观察 ,及纵向压缩的生物力学性质的检测。结果 ABECM未见细胞成分 ,细胞外基质基本结构未被破坏 ;ABECM在生物力学性质上与新鲜股骨无明显差异。结论 ABECM是一种新型的理想的骨替代物 。 展开更多
关键词 替代物 细胞细胞 生物力学性
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重组人骨形态发生蛋白2缓释体影响细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达
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作者 陈明 舒勇 +3 位作者 韩智敏 段满生 张志宏 闵燕 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第21期3851-3855,共5页
背景:目前,重组人骨形态发生蛋白2是否可以抑制炎性细胞因子的产生及活性,从而抑制溶骨反应的分子生物学机制仍不清楚。目的:观察重组人骨形态发生蛋白2缓释体在大鼠皮下气囊中的分子生物学反应,探讨人骨形态发生蛋白2抑制骨溶解生物活... 背景:目前,重组人骨形态发生蛋白2是否可以抑制炎性细胞因子的产生及活性,从而抑制溶骨反应的分子生物学机制仍不清楚。目的:观察重组人骨形态发生蛋白2缓释体在大鼠皮下气囊中的分子生物学反应,探讨人骨形态发生蛋白2抑制骨溶解生物活性的可能机制。方法:于鼠背部皮下注射过滤后的空气3mL,每2d1次,共6次。1周后,20只SD大鼠按注射成分的不同随机分为2组,每组10只。分别于囊腔内注射人骨形态发生蛋白2缓释体悬液(实验组)和生理盐水(对照组)。分别于1,2周后取囊腔组织进行光镜下观察,测定血清碱性磷酸酶水平;real-time PCR法检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)的mRNA水平;Western blotting法测定EMMPRIN的蛋白表达。结果与结论:光镜下实验组与对照组囊腔组织均未见明显组织细胞反应。实验组第1周血清碱性磷酸酶水平与实验组第2周及对照组相比,差异具有显著性意义(P<0.05),实验组第2周较对照组略低,但差异无显著性意义(P>0.05)。实验组EMMPRIN的mRNA及蛋白水平明显低于对照组,而且第2周小于第1周。提示重组人骨形态发生蛋白2缓释体抑制了溶骨性细胞因子的产生及活性,从而抑制溶骨反应。 展开更多
关键词 重组形态发生蛋白2 细胞 金属蛋白酶诱导因子 动物模型 溶解
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