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基于TLR4/NF-κB信号通路探讨重组BPI对肺炎支原体感染小鼠肺炎症反应的影响 被引量：6
1
作者 韩红 陈旭霞 +1 位作者 逯建立 韩艳珺 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第8期90-97,共8页
目的探讨重组BPI对肺炎支原体感染小鼠肺炎症反应及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法67只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、肺炎支原体(MP)模型组和重组BPI蛋白高、中、低剂量组。除正常对照组外对其余小鼠连续4 d鼻滴1×10^(6) CCU/m... 目的探讨重组BPI对肺炎支原体感染小鼠肺炎症反应及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法67只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、肺炎支原体(MP)模型组和重组BPI蛋白高、中、低剂量组。除正常对照组外对其余小鼠连续4 d鼻滴1×10^(6) CCU/mL(100μL)的MP菌液建立MP模型。造模成功后,重组BPI蛋白各治疗组小鼠腰静脉注射1.5 mL浓度分别为0.45、0.3和0.15 mol/L的重组BPI蛋白溶液,空白对照组和模型组腰静脉给予等量生理盐水注射,所有小鼠均采用不同方法干预4周。末次给药收集小鼠肺组织和血清,计算小鼠肺指数和干湿比;HE染色法观察各组小鼠肺组织病理改变并进行肺组织病理评分;ELISA法检测血清炎症因子水平;RT-PCR检测肺组织中mRNA表达;Western blot检测肺组织蛋白表达。结果与MP模型组比较,重组BPI蛋白各组小鼠肺指数降低(P<0.05),干湿比增加(P<0.05),血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05);与MP模型组比较,重组BPI各组小鼠肺组织TLR4、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达明显下调(P<0.05),I-κBαmRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论重组BPI蛋白可能通过调控TLR/NF-κB信号通路抑制TNF-α、IL-1β、IL-6的产生,从而起到减轻小鼠肺部炎症反应的作用。 展开更多
关键词 重组bpi 肺炎支原体 炎症 NF-κB p65 信号通路
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定点突变对BPI_(23)-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响 被引量：4
2
作者 安云庆 柯岩 +1 位作者 靖学芳 杨贵贞 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第3期197-201,共5页
为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前... 为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前提高约 1 0 % ;②表达时间提前约 1h ;③抗菌活性未受影响 ; 展开更多
关键词 定点突变 pBV-bpi600-Fcγ1700重组表达载体 bpi23-Fcγ1重组抗菌蛋白
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BPI_(23)-Fcγ1重组融合蛋白在E.coli中的表达 被引量：3
3
作者 柯岩 安云庆 杨贵贞 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期451-455,共5页
目的　构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载... 目的　构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α诱导表达BPI2 3 Fcγ1抗菌重组蛋白。方法　采用RT PCR技术 ,从HL 6 0细胞和正常人白细胞mRNA中扩增编码BPI2 3 和IgG1Fc(Fcγ1)的基因 ;通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体 ;转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白。结果　 (1)RT PCR获得预期的扩增产物BPI60 0bp和Fcγ170 0bp基因片段 ;(2 )成功构建pUC18 BPI180 、pUC18 BPI4 2 0 、pUC18 Fcγ170 0 重组克隆载体 ,DNA测序结果与文献报道一致 ;(3)成功构建pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体 ,酶切图谱分析与预期结果相符 ;(4 )转化感受态E .coliDH5α细胞 ,通过温控诱导表达BPI2 3 Fcγ1重组蛋白 ,表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 %～ 30 % ;(5 )复性后重组蛋白具有抗菌活性和结合蛋白A的作用。结论　pBV BPI60 0 Fcγ170 0 重组表达载体构建成功 ;在E .coli中得到表达 ,获得具有抗菌活性的BPI2 3 展开更多
关键词 bpi23-Fcγ1重组蛋白 聚合酶链反应 抗菌蛋白
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rAAV2-BF增强两品系小鼠抗致死剂量细菌感染
4
作者 关翔宇 刘振龙 +3 位作者 吕喆 孔庆利 王炜 安云庆 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第9期918-924,共7页
目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌... 目的通过观测rAAV2-BPI1-199-Fcγ1重组病毒(rAAV-BF)感染对不同品系小鼠的抗细菌感染保护作用。方法采用dot blot、Western blot、免疫组化、改良ELISA方法和内毒素检测试剂盒,检测重组BPI1-199-Fcγ1(rBF)蛋白在CHO细胞和小鼠骨骼肌细胞中的表达及血清中内毒素含量的变化;建立最小致死量(MLD)E.coli致死模型,检测rBF基因转染小鼠对MLDE.coli感染的抵抗作用。结果(1)rBF蛋白在CHO细胞和两品系小鼠骨骼肌细胞中成功表达,血清中rBF蛋白具有中和内毒素和杀伤E.coli的作用;(2)在MLDE.coli腹腔感染后,两品系小鼠rAAV-BF感染组存活率均显著高于空载体对照组小鼠;基因转染组小鼠血清内毒素含量明显低于空载体对照组;rAAV-BF感染与头孢呋辛钠联合应用具有协同抗菌作用,两品系小鼠存活率明显高于单纯rAAV-BF感染组。结论rAAV-BF感染组小鼠对致死性E.coli感染具有抵抗作用。 展开更多
关键词 AAV2-bpi1-199-Fcγ1重组病毒 bpi1-199-Fcγ1重组蛋白 革兰阴性菌 内毒素 最小致死量
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