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IL-5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效果的影响 被引量：7
1
作者 郭斐 陆柔剑 +4 位作者 孙朝晖 马海伦 张颖妹 马大龙 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期225-230,共6页
利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基... 利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基因的插入。鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实 ,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ12 3Δ11β75 )增加约 2倍 ,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞 (ASC)数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体 ,与对照组相比 ,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高 ,而IgG则无差异。本实验说明 :IL 5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中 ,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应 。 展开更多
关键词 白细胞介素5 非复制重组痘苗病毒 粘膜免疫 佐剂 免疫效果
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表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的非复制型重组痘苗病毒的构建 被引量：10
2
作者 魏滨 谷淑燕 +2 位作者 李燕 郭斐 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期29-33,共5页
利用非复制痘苗病毒质粒载体 pNEOCK11β75及 pNEOCK ,改造了表达EB病毒主要膜蛋白 gp35 0 /2 2 0的复制型重组痘苗病毒VMA ,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞 (CEF)中正常繁殖 ,而在人源细胞中不能正... 利用非复制痘苗病毒质粒载体 pNEOCK11β75及 pNEOCK ,改造了表达EB病毒主要膜蛋白 gp35 0 /2 2 0的复制型重组痘苗病毒VMA ,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞 (CEF)中正常繁殖 ,而在人源细胞中不能正常繁殖。在CEF中连续传代至第 2 5代 ,经PCR证明 ,该病毒符合非复制型重组痘苗病毒的特征。经免疫荧光及免疫酶斑法证实 ,VMAΔCK可稳定表达gp35 0 /2 2 0 ,且表达水平与VMA无明显差异。VMAΔCK经腹腔免疫Balb/C小鼠 ,4周后能诱生一定水平的抗 gp35 0 /2 2 0特异性抗体 ,加强免疫 2周后该抗体水平明显升高。这一结果类似于VMA免疫Balb/C小鼠的结果。初免后 ,VMAΔCK免疫组抗痘苗抗体水平明显低于VMA免疫组 ;加强免疫 2周后 ,两组小鼠的抗痘苗抗体水平趋于一致。上述结果证明 ,所构建的非复制痘苗病毒不影响目的抗原的表达 ,也不影响该抗原的免疫原性 ,但导致病毒毒力下降 ,而且用该病毒免疫小鼠后小鼠抗痘苗病毒载体的免疫反应明显下降。 展开更多
关键词 Eoskein-Barr病毒 gp350/220 非复制型重组痘苗病毒 体液免疫 膜蛋白
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表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建 被引量：1
3
作者 骆卫锋 韩立群 +4 位作者 任皎 田厚文 陆振华 谷淑燕 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期217-221,共5页
为研制HPV16的治疗性疫苗 ,首先将表达质粒 pJSA1175与非复制型痘苗病毒NTVJTK+ 进行同源重组 ,构建了痘苗重组病毒NTVJLac。再将表达质粒 pJSDME6E7R与NTVJLac进行同源重组 ,构建了表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒NTVJmE6E7... 为研制HPV16的治疗性疫苗 ,首先将表达质粒 pJSA1175与非复制型痘苗病毒NTVJTK+ 进行同源重组 ,构建了痘苗重组病毒NTVJLac。再将表达质粒 pJSDME6E7R与NTVJLac进行同源重组 ,构建了表达HPV16E6和E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒NTVJmE6E7,并对获得的重组病毒进行了鉴定。Southern杂交显示 ,重组痘苗病毒NTVJmE6E7基因组中有E6和E7基因插入。该重组病毒在人源细胞中不复制。Westernblot显示 ,重组病毒在人源TK-14 3细胞中能表达E6和E7蛋白。 展开更多
关键词 表达 HPV16E6 E7蛋白 非复制型重组痘苗病毒 乳头瘤病毒 宫颈肿瘤 疫苗 免疫治疗
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HIV-1复制型DNA疫苗与非复制型重组痘苗病毒疫苗在小鼠体内细胞免疫效果的研究 被引量：2
4
作者 齐香荣 高瑛瑛 +7 位作者 邓瑶 陆柔剑 孟昕 张陵林 王文 陈红 谭文杰 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2011年第1期6-10,共5页
目的:用HIV-1复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗(rNTV-C)进行单独免疫和联合免疫的研究(2种疫苗分别包含HIV-1 B'/C亚型的gp160、gag-pol、rev-tat-nef等6种基因),以了解这2种新型HIV疫苗单独免疫及联合免疫的效果,并为临床... 目的:用HIV-1复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗(rNTV-C)进行单独免疫和联合免疫的研究(2种疫苗分别包含HIV-1 B'/C亚型的gp160、gag-pol、rev-tat-nef等6种基因),以了解这2种新型HIV疫苗单独免疫及联合免疫的效果,并为临床免疫方案的制定提供实验依据。方法:将HIV-1 DNA疫苗和rNTV-C疫苗免疫BALB/c小鼠,设计rNTV-C单独免疫组、DNA单独免疫组,以及DNA初免、rNTV-C加强的联合免疫组,并设计不同免疫途径和不同剂量的各种组合。用IFN-γELISPOT检测各组的细胞免疫效果,用统计学方法分析比较各组细胞免疫效果的差异。结果:DNA疫苗和rNTV-C疫苗单独免疫时,二者都能诱发针对各抗原的特异性免疫反应;联合免疫能够诱发比DNA或rNTV-C单独免疫都强的特异性细胞免疫反应。统计分析显示,2种疫苗采用肌肉注射途径的免疫效果显著高于皮内注射,1μg和5μg DNA疫苗的免疫效果差异不显著,而1×108 PFU的rNTV-C比2×107PFU的免疫效果要强。结论:联合免疫策略能够显著增强HIV-1疫苗各抗原的免疫原性,通过对2种HIV-1疫苗单独免疫及二者联合免疫的细胞免疫反应的分析比较,确定了较好的免疫方案,为疫苗临床前免疫效果评价和临床方案的制定提供了实验依据。 展开更多
关键词 HIV-1疫苗 复制型DNA疫苗 非复制型重组痘苗病毒疫苗 HIV-1 B'/C亚型
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表达EB病毒主要膜蛋白gp340/220不同蛋白区段的非复制型重组痘苗病毒的构建
5
作者 齐建国 谷淑燕 +2 位作者 王卫东 周为民 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-27,共6页
Epstein Barr病毒 (EBV)主要膜蛋白 gp340 / 2 2 0 ,是研究EBV亚单位疫苗的主要抗原。为了更详细地研究gp340 / 2 2 0的免疫原性 ,用PCR法获得不同区段的EBVBLLF1基因 ,并将其克隆入表达载体 pNeock1 1 β7 5中 ,通过重组质粒与非复制... Epstein Barr病毒 (EBV)主要膜蛋白 gp340 / 2 2 0 ,是研究EBV亚单位疫苗的主要抗原。为了更详细地研究gp340 / 2 2 0的免疫原性 ,用PCR法获得不同区段的EBVBLLF1基因 ,并将其克隆入表达载体 pNeock1 1 β7 5中 ,通过重组质粒与非复制痘苗病毒在鸡胚成纤维细胞中同源重组 ,获得 3株表达EBVgp340 / 2 2 0不同区段的重组痘苗病毒。PCR和Southernblot结果证实 ,各个重组病毒基因组中有相应外源基因的整合。Westernblot结果表明 ,3种重组病毒感染人源细胞后都能够稳定表达蛋白 ,表达蛋白均为糖蛋白。免疫荧光结果表明 ,3种蛋白分布在细胞的不同部位。重组痘苗病毒的成功构建为更好地研究gp340 / 2 2 展开更多
关键词 EPSTEIN-BARR病毒 EBV 疱疹病毒科 膜蛋白 非复制型重组痘苗病毒
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表达EB病毒主要膜蛋白的非复制型重组痘苗病毒毒力及体液免疫反应
6
作者 魏滨 李燕 +2 位作者 周为民 李伯军 谷淑燕 《生物技术通讯》 CAS 2001年第1期28-31,共4页
利用表达EBVGP35 0 / 2 2 0的非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK及复制性重组痘苗病毒VMA ,注射乳鼠脑内 ,观察毒力。同时 ,用VMAΔCK及VMA免疫Balb/c小鼠 ,经ELISA测定其特异性抗体水平。免疫血清用抗体中和EBV感染Raji细胞抑制产生早期抗原... 利用表达EBVGP35 0 / 2 2 0的非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK及复制性重组痘苗病毒VMA ,注射乳鼠脑内 ,观察毒力。同时 ,用VMAΔCK及VMA免疫Balb/c小鼠 ,经ELISA测定其特异性抗体水平。免疫血清用抗体中和EBV感染Raji细胞抑制产生早期抗原 (NEA)法测定其中和抗体滴度。将免疫血清与P3HR 1细胞共同孵育后 ,测上清中EBV滴度以观察抗体抑制EBV从P3HR 1细胞中释放效应。结果发现 ,VMAΔCK毒力明显低于VMA ,其LD50为 4.5 0PFU/ 0 .0 2ml,而VMAΔCK的LD50 大于 10 6PFU/ 0 .0 2ml。VMAΔCK与VMA免疫血清中抗GP35 0 / 2 2 0抗体水平无明显差异 ,而初免后抗痘苗病毒抗体水平VMA免疫组较VMAΔCK免疫组高 5倍左右。VMAΔCK及VMA免疫组血清中和抗体水平没有明显差异。VMAΔCK免疫血清稀释度与P3HR 展开更多
关键词 EPSTEIN-BARR病毒 非复制型重组痘苗病毒 毒力 体液免疫
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表达粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的非复制痘苗病毒的抗肿瘤效果 被引量：1
7
作者 郭斐 陆柔剑 +4 位作者 许洪林 李军 张颖妹 马大龙 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期231-235,共5页
构建了表达GM CSF的非复制型重组痘苗病毒RVΔ11β75GMCSF。Southernblot证实重组病毒C K片段间基因缺失 ,同时插入GM CSF基因 ,GM CSF可以分泌形式良好表达。Wistar大鼠Walker's瘤内注射重组病毒RVΔ11β75GMCSF后 ,可以延长荷瘤... 构建了表达GM CSF的非复制型重组痘苗病毒RVΔ11β75GMCSF。Southernblot证实重组病毒C K片段间基因缺失 ,同时插入GM CSF基因 ,GM CSF可以分泌形式良好表达。Wistar大鼠Walker's瘤内注射重组病毒RVΔ11β75GMCSF后 ,可以延长荷瘤鼠的生存时间 ;重组病毒RVΔ11β6 5GMCSF修饰的肿瘤细胞裂解物(WRC2 5 6 )的肿瘤免疫治疗 ,可以抑制荷瘤大鼠的肿瘤生长 ,瘤重较对照组减轻。此结果提示 :非复制重组痘苗病毒表达的GM 展开更多
关键词 非复制重组痘苗病毒 细胞巨噬细胞集落刺激因子 免疫治疗 抗肿瘤作用
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表达HPV16型结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定 被引量：7
8
作者 韩立群 任皎 +6 位作者 梁雨 田厚文 职慧军 骆卫锋 陆振华 魏兰兰 阮力 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期256-260,共5页
目的　构建表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法　采用聚合酶链反应技术 (PCR)扩增并克隆HPV16主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2基因 ;将经过结构修饰的L1和L2基因插入痘苗病毒表达载体 ,通... 目的　构建表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法　采用聚合酶链反应技术 (PCR)扩增并克隆HPV16主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2基因 ;将经过结构修饰的L1和L2基因插入痘苗病毒表达载体 ,通过与痘苗病毒在宿主细胞中同源重组后 ,筛选共表达L1 L2蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果　DNA序列分析证实PCR扩增所获L1和L2克隆基因是正确的 ;斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1和L2基因插入 ;该重组病毒在人源细胞中不复制或低水平复制 ,但可稳定表达相对分子质量为 5 70 0 0的L1蛋白和相对分子质量为 90 0 0 0的L2蛋白。结论　获得 1株稳定表达HPV16L1 L2蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 乳头状瘤病毒 子宫颈癌 非复制型重组痘苗病毒 HPV16型结构蛋白
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共表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白的重组非复制型痘苗病毒构建及鉴定 被引量：2
9
作者 黄薇 田厚文 +5 位作者 任皎 范江涛 赵莉 边涛 陆振华 阮力 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期240-243,共4页
目的构建共表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1、L2、E6、E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术筛选共表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果该病毒在CEF细胞上连续... 目的构建共表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1、L2、E6、E7蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术筛选共表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果该病毒在CEF细胞上连续传至第15代,经斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1、L2、E6、E7基因插入;经WesternBlot检测,重组病毒能稳定表达HPV16L1、L2、E6、E7蛋白。结论非复制型重组痘苗病毒NTVJE6E7CKL1L2可作为预防和治疗HPV16相关肿瘤及其癌前病变候选疫苗。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒 人 宫颈肿瘤 痘苗病毒 疫苗 非复制型重组痘苗病毒 非复制型痘苗病毒 HPV16L1 E7蛋白 共表达 E6
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