【目的】本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Bcl-2家族同源基因,并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Bcl-2家族基因Bm Buffy,利用SSR分...【目的】本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Bcl-2家族同源基因,并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Bcl-2家族基因Bm Buffy,利用SSR分子标记连锁分析确定其染色体定位。同时,用RT-PCR和q PCR技术分析该基因在家蚕幼虫及变态期间不同组织中的表达。【结果】克隆获得全长家蚕Bcl-2家族同源基因Bm Buffy,证明该基因位于第4号染色体上,开放阅读框长879 bp,编码292 aa,预测其分子量大小为32.4 k Da,等电点为9.94,且第130-231位氨基酸之间存在1个Bcl-2_like Superfamily结构域。系统进化发育树表明,其与黑腹果蝇Drosophila melanogaster的Dm Buffy关系最近,氨基酸序列一致性为27%。Bm Buffy在幼虫组织中的表达结果显示,其在马氏管中表达量最高,而且在不同组织变态期的关键时间点均有明显变化。【结论】家蚕Bm Buffy具有Bcl-2家族典型结构域,Bm Buffy定位于第4号染色体上,Bm Buffy在家蚕变态期的组织生理变化中起到一定作用。本文为进一步研究家蚕Bcl-2家族基因的功能奠定基础。展开更多
文摘【目的】本研究旨在获得家蚕Bombyx mori Bcl-2家族同源基因,并分析其在不同组织和发育阶段的时空表达模式及功能。【方法】用c DNA末端快速扩增方法(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆家蚕Bcl-2家族基因Bm Buffy,利用SSR分子标记连锁分析确定其染色体定位。同时,用RT-PCR和q PCR技术分析该基因在家蚕幼虫及变态期间不同组织中的表达。【结果】克隆获得全长家蚕Bcl-2家族同源基因Bm Buffy,证明该基因位于第4号染色体上,开放阅读框长879 bp,编码292 aa,预测其分子量大小为32.4 k Da,等电点为9.94,且第130-231位氨基酸之间存在1个Bcl-2_like Superfamily结构域。系统进化发育树表明,其与黑腹果蝇Drosophila melanogaster的Dm Buffy关系最近,氨基酸序列一致性为27%。Bm Buffy在幼虫组织中的表达结果显示,其在马氏管中表达量最高,而且在不同组织变态期的关键时间点均有明显变化。【结论】家蚕Bm Buffy具有Bcl-2家族典型结构域,Bm Buffy定位于第4号染色体上,Bm Buffy在家蚕变态期的组织生理变化中起到一定作用。本文为进一步研究家蚕Bcl-2家族基因的功能奠定基础。
