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枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究
被引量：
43
1
作者
李瑞芳
薛雯雯
+2 位作者
黄亮
熊前程
王彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期227-230,共4页
为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质...
为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响。结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DB1342的转化率为750 CFU/μgDNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/μg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg DNA。根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内。
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关键词
枯草芽孢杆菌
感受态细胞
质粒转化方法
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职称材料
通过DNA释放及感受态建立进行的枯草杆菌细胞间自然转化
被引量：
2
2
作者
李美菊
陈向东
+1 位作者
谢志雄
沈萍
《武汉大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期514-518,共5页
以平板转化法研究了枯草杆菌在液体基本培养基 (MM)及LB中培养时通过DNA释放和感受态建立进行的细胞间自然转化 .结果表明 ,该菌在这两种培养基中培养时均可在对数生长期向培养液中主动分泌有生物活性的DNA ,且细胞间接触有利于转化过...
以平板转化法研究了枯草杆菌在液体基本培养基 (MM)及LB中培养时通过DNA释放和感受态建立进行的细胞间自然转化 .结果表明 ,该菌在这两种培养基中培养时均可在对数生长期向培养液中主动分泌有生物活性的DNA ,且细胞间接触有利于转化过程的进行 ,暗示在本实验条件下DNA供体细胞可能具有某种主动功能 .对感受态建立的研究表明 ,不仅是MM培养物 ,而且通常被认为不能形成自然感受态的LB培养物 ,当涂布于MM选择平板后均可利用细胞分泌或提取的DNA进行自然转化 ,其转化高峰均出现在对数生长末期 ,转化频率分别可达到 3× 10 -3 和 1.9× 10 -6.
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关键词
枯草杆菌
细胞间自然遗传转化
DNA释放
感受态
微生物遗传学
平板转化法
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职称材料
基于游离质粒的木糖诱导型枯草芽孢杆菌转化体系的建立及其应用
被引量：
1
3
作者
田辉
王帅
刘波
《生物技术进展》
2021年第6期741-748,共8页
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为食品级安全菌株,因其具有理化特征清晰、培养发酵方便等特点,广泛应用于异源蛋白质的高效表达以及高附加值物质的合成。传统的B.subtilis遗传转化方法存在操作流程繁琐、效率低等缺点,因此,开发方...
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为食品级安全菌株,因其具有理化特征清晰、培养发酵方便等特点,广泛应用于异源蛋白质的高效表达以及高附加值物质的合成。传统的B.subtilis遗传转化方法存在操作流程繁琐、效率低等缺点,因此,开发方便高效的遗传转化系统具有重要意义。转录因子ComK被证实能调控B.subtilis感受态的形成,并在B.subtilis高效转化中有重要作用。构建1个含有木糖诱导启动子P_(xyl)调控comK表达的穿梭质粒pUBC01⁃P_(xyl)⁃comK的菌株B.subtilis K1,经木糖诱导条件优化后,质粒pHY300⁃p43⁃egfp的转化效率达到4.8×10^(3) CFU·μg^(-1)。此外,质粒pUBC01⁃P_(xyl)⁃comK可在无胁迫条件下连续培养及消除。木糖诱导感受态体系及质粒消除极大地提高了芽孢杆菌基因编辑和菌株改造的便捷性,同时增强了菌株尤其是生产菌株的性状稳定性。
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关键词
枯草芽孢杆菌
ComK
感受态
木糖诱导
质粒消除
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职称材料
题名
枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究
被引量：
43
1
作者
李瑞芳
薛雯雯
黄亮
熊前程
王彬
机构
河南工业大学生物工程学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期227-230,共4页
基金
国家自然科学基金项目(31071922)
河南省重点科技攻关项目(0623030300)
文摘
为便于枯草芽孢杆菌工业化生产应用,对Spizizen创立的枯草芽孢杆菌DNA转化方法进行改进。用GMI和GMII溶液处理枯草芽孢杆菌野生型菌株BS501a、营养缺陷型突变株DB1342和非营养缺陷型突变株WB800,用改进的方法制备感受态细胞,用7.5 kb质粒pSBPTQ进行转化,并研究RNA、酵母粉、水解酪蛋白、培养方法对枯草芽孢杆菌质粒转化的影响。结果表明,该方法适用于不同基因型枯草芽孢杆菌的质粒转化,营养缺陷型突变株DB1342的转化率为750 CFU/μgDNA,非营养缺陷型突变株WB800转化率为1 070 CFU/μg DNA,野生型菌株BS501a转化率为270 CFU/μg DNA。根据影响转化效率的因素,推测在该方法中,枯草芽孢杆菌质粒转化原理:一定生物量的枯草芽孢杆菌在外界营养条件和钙、镁离子作用下,细胞壁和细胞膜形成缺陷,使外源DNA转入枯草芽孢杆菌细胞内。
关键词
枯草芽孢杆菌
感受态细胞
质粒转化方法
Keywords
bacillus subtilis competent cell plasmid transformation method
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
通过DNA释放及感受态建立进行的枯草杆菌细胞间自然转化
被引量：
2
2
作者
李美菊
陈向东
谢志雄
沈萍
机构
武汉大学生命科学学院
出处
《武汉大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期514-518,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 0 70 0 10 )
文摘
以平板转化法研究了枯草杆菌在液体基本培养基 (MM)及LB中培养时通过DNA释放和感受态建立进行的细胞间自然转化 .结果表明 ,该菌在这两种培养基中培养时均可在对数生长期向培养液中主动分泌有生物活性的DNA ,且细胞间接触有利于转化过程的进行 ,暗示在本实验条件下DNA供体细胞可能具有某种主动功能 .对感受态建立的研究表明 ,不仅是MM培养物 ,而且通常被认为不能形成自然感受态的LB培养物 ,当涂布于MM选择平板后均可利用细胞分泌或提取的DNA进行自然转化 ,其转化高峰均出现在对数生长末期 ,转化频率分别可达到 3× 10 -3 和 1.9× 10 -6.
关键词
枯草杆菌
细胞间自然遗传转化
DNA释放
感受态
微生物遗传学
平板转化法
Keywords
bacillus
subtilis
cell
-to-
cell
natural genetic
transformation
competence
DNA release
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
基于游离质粒的木糖诱导型枯草芽孢杆菌转化体系的建立及其应用
被引量：
1
3
作者
田辉
王帅
刘波
机构
中国农业科学院生物技术研究所
出处
《生物技术进展》
2021年第6期741-748,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31671802)。
文摘
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为食品级安全菌株,因其具有理化特征清晰、培养发酵方便等特点,广泛应用于异源蛋白质的高效表达以及高附加值物质的合成。传统的B.subtilis遗传转化方法存在操作流程繁琐、效率低等缺点,因此,开发方便高效的遗传转化系统具有重要意义。转录因子ComK被证实能调控B.subtilis感受态的形成,并在B.subtilis高效转化中有重要作用。构建1个含有木糖诱导启动子P_(xyl)调控comK表达的穿梭质粒pUBC01⁃P_(xyl)⁃comK的菌株B.subtilis K1,经木糖诱导条件优化后,质粒pHY300⁃p43⁃egfp的转化效率达到4.8×10^(3) CFU·μg^(-1)。此外,质粒pUBC01⁃P_(xyl)⁃comK可在无胁迫条件下连续培养及消除。木糖诱导感受态体系及质粒消除极大地提高了芽孢杆菌基因编辑和菌株改造的便捷性,同时增强了菌株尤其是生产菌株的性状稳定性。
关键词
枯草芽孢杆菌
ComK
感受态
木糖诱导
质粒消除
Keywords
bacillus
subtilis
ComK
competent
cell
s
xylose induction
plasmid
curing
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及质粒转化方法研究
李瑞芳
薛雯雯
黄亮
熊前程
王彬
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
43
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
通过DNA释放及感受态建立进行的枯草杆菌细胞间自然转化
李美菊
陈向东
谢志雄
沈萍
《武汉大学学报（理学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
基于游离质粒的木糖诱导型枯草芽孢杆菌转化体系的建立及其应用
田辉
王帅
刘波
《生物技术进展》
2021
1
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