目的:通过建立血浆游离DNA中肿瘤高甲基化基因1(hypermethylated in cancer 1, HIC-1)甲基化检测技术,评估其作为体液活检诊断方法在乳腺良恶性疾病鉴别中的价值。方法:收集35份乳腺疾病患者(其25例乳腺癌,10例乳腺良性疾病)及10份健康...目的:通过建立血浆游离DNA中肿瘤高甲基化基因1(hypermethylated in cancer 1, HIC-1)甲基化检测技术,评估其作为体液活检诊断方法在乳腺良恶性疾病鉴别中的价值。方法:收集35份乳腺疾病患者(其25例乳腺癌,10例乳腺良性疾病)及10份健康志愿者的血液样本,分离、提取血浆中的游离DNA。采用亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法,检测HIC-1基因启动子区域-636～-424 bp中16个CpG位点的甲基化水平。结果:在检测的16个CpG位点中,以-636～-617 bp中的4个位点甲基化最为明显。其中,乳腺癌组的这4个位点平均甲基化率为22.6%,而良性乳腺疾病组为8.5%,健康对照组为8.3%,3组间的差异有统计学意义(P<0.05)。进一步绘制受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve, ROC曲线)进行分析,发现以这4个位点的平均甲基化率诊断乳腺癌时,其曲线下面积(area under the cure AUC)为0.794,证实其对乳腺癌具有一定的诊断价值。结论:检测血浆游离DNA中抑癌基因HIC-1启动子区甲基化水平,在乳腺癌诊断中有一定参考价值。展开更多
目的基于尿液中的谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因,对微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测循环DNA甲基化的方法学进行性能评价。方法根据甲基化检测试剂盒相关IVD产品的注册指南,主要从引物探...目的基于尿液中的谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因,对微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测循环DNA甲基化的方法学进行性能评价。方法根据甲基化检测试剂盒相关IVD产品的注册指南,主要从引物探针特异性、灵敏度、批内精密度、批间精密度、准确度5个方面对数字PCR检测尿液循环DNA甲基化进行性能评价。结果GSTP1基因仅在前列腺癌样本中生成明显阳性微滴,在胃癌、肝癌、肾细胞癌、肺癌、膀胱癌、尿道癌、结直肠癌和胰腺癌中不生成阳性微滴,引物探针特异性良好;GSTP1基因的检测限为0.1ng/孔,当DNA输入量大于等于0.1ng/孔时,DNA甲基化情况都可以被检测到,灵敏度较好;批内精密度变异系数均小于6.25%,批间精密度变异系数均小于8.33%,符合CLSI参考文件的标准,表示精密度良好;通过比较数字PCR与荧光定量PCR(Methylight)检测前列腺癌尿液样本GSTP1甲基化情况,相关系数为0.9949,表明两种方法相关性较好,证明数字PCR准确度良好。结论数字PCR检测尿液循环GSTP1基因甲基化的方法在特异性、灵敏度、精密度、准确度均表现良好,符合临床实验室标准,是一种检测尿液循环DNA甲基化的可靠方法。展开更多
文摘目的:通过建立血浆游离DNA中肿瘤高甲基化基因1(hypermethylated in cancer 1, HIC-1)甲基化检测技术,评估其作为体液活检诊断方法在乳腺良恶性疾病鉴别中的价值。方法:收集35份乳腺疾病患者(其25例乳腺癌,10例乳腺良性疾病)及10份健康志愿者的血液样本,分离、提取血浆中的游离DNA。采用亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法,检测HIC-1基因启动子区域-636～-424 bp中16个CpG位点的甲基化水平。结果:在检测的16个CpG位点中,以-636～-617 bp中的4个位点甲基化最为明显。其中,乳腺癌组的这4个位点平均甲基化率为22.6%,而良性乳腺疾病组为8.5%,健康对照组为8.3%,3组间的差异有统计学意义(P<0.05)。进一步绘制受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve, ROC曲线)进行分析,发现以这4个位点的平均甲基化率诊断乳腺癌时,其曲线下面积(area under the cure AUC)为0.794,证实其对乳腺癌具有一定的诊断价值。结论:检测血浆游离DNA中抑癌基因HIC-1启动子区甲基化水平,在乳腺癌诊断中有一定参考价值。
文摘目的基于尿液中的谷胱甘肽硫转移酶P1(glutathione S-transferase pi-1,GSTP1)基因,对微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测循环DNA甲基化的方法学进行性能评价。方法根据甲基化检测试剂盒相关IVD产品的注册指南,主要从引物探针特异性、灵敏度、批内精密度、批间精密度、准确度5个方面对数字PCR检测尿液循环DNA甲基化进行性能评价。结果GSTP1基因仅在前列腺癌样本中生成明显阳性微滴,在胃癌、肝癌、肾细胞癌、肺癌、膀胱癌、尿道癌、结直肠癌和胰腺癌中不生成阳性微滴,引物探针特异性良好;GSTP1基因的检测限为0.1ng/孔,当DNA输入量大于等于0.1ng/孔时,DNA甲基化情况都可以被检测到,灵敏度较好;批内精密度变异系数均小于6.25%,批间精密度变异系数均小于8.33%,符合CLSI参考文件的标准,表示精密度良好;通过比较数字PCR与荧光定量PCR(Methylight)检测前列腺癌尿液样本GSTP1甲基化情况,相关系数为0.9949,表明两种方法相关性较好,证明数字PCR准确度良好。结论数字PCR检测尿液循环GSTP1基因甲基化的方法在特异性、灵敏度、精密度、准确度均表现良好,符合临床实验室标准,是一种检测尿液循环DNA甲基化的可靠方法。
