人热休克蛋白转录因子1 DNA结合结构域的表达、纯化和晶体生长

1

作者 回佳菡 唐咏 +2 位作者 张春玲 许凌峰 李雪梅 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期875-877,共3页

目的:获得大量热休克转录因子1(HSF1)DNA结合结构域(DBD)蛋白,用于晶体生长的三维结构解析。方法:将DBD基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中并获得高效表达,经过Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析、ResourceQ纯化后,蛋白纯度达到95... 目的:获得大量热休克转录因子1(HSF1)DNA结合结构域(DBD)蛋白,用于晶体生长的三维结构解析。方法:将DBD基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中并获得高效表达,经过Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析、ResourceQ纯化后,蛋白纯度达到95%以上。结果:圆二色谱仪分析蛋白质的二级结构结果显示α螺旋占33%,β折叠占15%;采用悬滴气相扩散法得到了针状DBD晶体。结论:纯化的蛋白质与同源性达68%的Kluyveromyceslactis的DBD有相似的空间构象。获得的蛋白质晶体为进一步的三维结构解析奠定了基础。 展开更多

关键词 人热休克蛋白转录因子1 dna结合结构域 表达 蛋白质纯化 晶体生长

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转录因子E2F-1的DNA结合结构域与GST的融合表达和纯化

2

作者 姜勇 徐应琪 +2 位作者 涂晓明 陈妍 施蕴渝 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期669-673,共5页

通过聚合酶链式反应方法扩增转录因子Ｅ２Ｆ－１中ＤＮＡ结合结构域的基因片段，并将其克隆到ｐＧＥＸ－２Ｔ表达载体中，转化ＢＬ２１菌株．经ＩＰＴＧ诱导，目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达，其表达量达１５％．经ＧＳＴ－Ａｇａｒ... 通过聚合酶链式反应方法扩增转录因子Ｅ２Ｆ－１中ＤＮＡ结合结构域的基因片段，并将其克隆到ｐＧＥＸ－２Ｔ表达载体中，转化ＢＬ２１菌株．经ＩＰＴＧ诱导，目的蛋白在大肠杆菌中得到高效表达，其表达量达１５％．经ＧＳＴ－Ａｇａｒｏｓｅ亲合层析，目的蛋白得到了高度纯化．经胶迁移率改变实验（ｇｅｌｓｈｉｆｔｍｏｂｉｌｉｔｙａｓａｙ）证明目的蛋白具有与腺病毒Ｅ２启动子ＤＮＡ片段结合的能力． 展开更多

关键词 转录因子 E2F-1 dna结合结构域 GST 纯化

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人源锌指蛋白ZNF24及其锌指结构域的表达、纯化及DNA结合性质的研究

3

作者 苏晓琴 高宝才 +2 位作者 纪锐 王森 李继喜 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期167-174,共8页

转录因子是调控基因表达的关键蛋白,能够以序列特异性方式结合DNA。ZNF24是Krüppel-like锌指转录因子家族成员之一,在细胞增殖和分化中起重要作用,能促进肝癌细胞的增殖,抑制神经元细胞的分化。ZNF24蛋白N端包含一个SCAN结构域,C... 转录因子是调控基因表达的关键蛋白,能够以序列特异性方式结合DNA。ZNF24是Krüppel-like锌指转录因子家族成员之一,在细胞增殖和分化中起重要作用,能促进肝癌细胞的增殖,抑制神经元细胞的分化。ZNF24蛋白N端包含一个SCAN结构域,C端为锌指区,由4个串联的C2H2型锌指结构组成。ZNF24能特异性识别和结合基因的启动子,参与基因的表达调控,但其发挥功能的具体分子机制并不清楚。本文我们在大肠杆菌中成功表达了人源锌指蛋白ZNF24全长和其锌指结构域ZNF24(243~368),ZNF24全长蛋白在溶液中以三聚体形式存在,而锌指结构域在溶液中为单体,表明ZNF24蛋白N端的SCAN结构域能够促进全长蛋白的寡聚化。凝胶迁移实验验证ZNF24全长蛋白和锌指结构域与双链DNA底物结合能力,为进一步研究锌指蛋白ZNF24调控基因表达提供理论基础,相关结果表明SCAN结构域介导的蛋白寡聚可能代表了一种新的转录活性调节机制。 展开更多

关键词 锌指蛋白 ZNF24 SCAN结构域 蛋白纯化 dna结合

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人源雄激素受体DNA结合结构域的原核表达与其响应元件的复合物结晶

4

作者 秦童 黄震 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1151-1156,共6页

为获得高分辨率的雄激素受体与其响应元件的复合物晶体结构,为前列腺癌的治疗提供药物靶点设计的理论基础.本研究构建了AR-DBD的原核表达载体,在0.5 mmol/L IPTG,16℃条件下诱导24 h表达该蛋白.通过与AR响应元件寡核酸的结合优化蛋白纯... 为获得高分辨率的雄激素受体与其响应元件的复合物晶体结构,为前列腺癌的治疗提供药物靶点设计的理论基础.本研究构建了AR-DBD的原核表达载体,在0.5 mmol/L IPTG,16℃条件下诱导24 h表达该蛋白.通过与AR响应元件寡核酸的结合优化蛋白纯化条件,使AR-DBD蛋白易于纯化.最终,蛋白核酸复合物晶体呈现出边缘清晰,短棒状的立体结构,本研究制备的蛋白核酸复合物晶体可直接用于X射线衍射分析. 展开更多

关键词 雄激素受体 前列腺癌 dna结合结构域 蛋白核酸复合物晶体 原核表达

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鲫鱼蛋白激酶PKR-like的Zα结构域与聚肌胞苷酸的结合 被引量：9

5

作者 胡成钰 谢宗波 +4 位作者 张义兵 陈玉栋 邓政东 蒋珺 桂建芳 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期237-242,共6页

根据鲫鱼类PKR蛋白激酶基因(CaPKR-like)的全长cDNA序列,克隆CaPKR-likeZα结构域cDNA(Zα1、Zα2和Zα1Zα2),原核表达成功获得3种融合蛋白PZα1、PZα2和PZα1Zα2。凝胶阻滞实验结果显示:PZα1、PZα2、PZα1和PZα2混合表达蛋白不... 根据鲫鱼类PKR蛋白激酶基因(CaPKR-like)的全长cDNA序列,克隆CaPKR-likeZα结构域cDNA(Zα1、Zα2和Zα1Zα2),原核表达成功获得3种融合蛋白PZα1、PZα2和PZα1Zα2。凝胶阻滞实验结果显示:PZα1、PZα2、PZα1和PZα2混合表达蛋白不能与聚肌胞苷酸(PolyI∶C)结合,而表达完整的Zα结构域的PZα1Zα2与PolyI∶C有明显的结合现象。另外,3种表达多肽PZα1、PZα2和PZα1Zα2在体外分别都能聚合形成二聚体。与PZα1相比,PZα2和PZα1Zα2二聚化现象显著。结果暗示病毒复制时产生的副产物dsRNA能与CaPKR-like蛋白的相关结构域结合从而调节其生理功能。 展开更多

关键词 鲫鱼类PKR蛋白激酶 Zα结构域 原核表达 Poly I:C结合 二聚化

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大豆ASR蛋白富含组氨酸结构域在结合金属离子中的作用 被引量：3

6

作者 郑易之 范文静 +2 位作者 刘科 刘昀 刘国宝 《华南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第5期91-98,共8页

利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2＋和Cd2＋结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力... 利用固相亲和层析实验结果表明,Gm ASR蛋白及其含组氨酸结构域A1-A5短肽可与金属离子Cu^2＋和Cd2＋结合;采用Cu-抗坏血酸体系检测了Gm ASR蛋白及A1-A5清除羟基自由基的能力,证明Gm ASR蛋白及A1-A5短肽中组氨酸数目与清除羟基自由基能力呈正相关;Gm ASR蛋白及A1-A5可保护DNA分子免受Cu^2＋造成的氧化损伤.CD实验和SDS-PAGE实验结果发现,Gm ASR蛋白及A1-A5短肽与Cu^2＋结合后将引起可逆性聚集及沉淀.可见Gm ASR蛋白通过组氨酸结合过多的金属离子,维持细胞内离子平衡,是保护植物免受重金属毒害的重要机制之一。 展开更多

关键词 GM ASR蛋白 富含组氨酸结构域 结合金属离子 清除羟基自由基 保护dna

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卤虫中编码DM结构域的DNA序列的克隆和初步研究(简报) 被引量：1

7

作者 曾辉 宋文芹 陈瑞阳 《实验生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期423-427,共5页

性别决定的分子机制复杂多样,但是处于动物性别决定的基因调控网络底部的一些调控基因具有相当高的保守性[1].doublesex(dsx)基因[2]和maleabnomal-3(mab-3)基因分别是果蝇(Drosophilamelanogaster)和线虫(Caenorhabditis elegans)性别... 性别决定的分子机制复杂多样,但是处于动物性别决定的基因调控网络底部的一些调控基因具有相当高的保守性[1].doublesex(dsx)基因[2]和maleabnomal-3(mab-3)基因分别是果蝇(Drosophilamelanogaster)和线虫(Caenorhabditis elegans)性别决定调控途径末端的重要基因,对这两个基因序列的比较导致了DM结构域的发现[3],它是已知在性别发育过程中最为保守的DNA结合结构域.目前,已在包括鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类等多种脊椎动物的不同基因中发现了DM结构域[4,5,6,7],其中一些基因的功能已经确定与雄性发育和性别逆转相关[8,9],如人类(Homo sapiens)和小鼠的DMRTl/dmrtl(doublesex and mab3-related transcriptionfactor 1)基因[10].在脊椎动物之外,Ohbayashi等[11]和Miller等[12]分别报道了家蚕(Bombyx mori)和珊瑚(Acropora millepora)中DM结构域的序列特征. 展开更多

关键词 DM 调控基因 分子机制 初步研究 结构域 dna序列 基因调控 性别决定 dna结合 克隆

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含磷酸结合口袋的BRCT结构域功能位点预测 被引量：1

8

作者 盛自章 黄京飞 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期509-514,共6页

BRCT(BRCA1C-terminus)是真核生物DNA损伤修复系统重要的信号传导和蛋白靶向结构域。为了探讨含磷酸结合口袋的BRCT与磷酸化配体结合的机制,对XRCC1BRCT1、PTIP BRCT4、ECT2BRCT1和TopBP1BRCT1进行了结构保守性和表面静电势分析。结果显... BRCT(BRCA1C-terminus)是真核生物DNA损伤修复系统重要的信号传导和蛋白靶向结构域。为了探讨含磷酸结合口袋的BRCT与磷酸化配体结合的机制,对XRCC1BRCT1、PTIP BRCT4、ECT2BRCT1和TopBP1BRCT1进行了结构保守性和表面静电势分析。结果显示,4个BRCT的磷酸结合口袋周围所存在的结构保守并带正电势的沟槽很可能是其功能位点,并且类似的沟槽在含磷酸结合口袋的BRCT中普遍存在。沟槽两侧及底部均带有极性氨基酸残基,两侧带正电荷,而底部疏水。这说明沟槽与配体的结合以静电和疏水相互作用为主。沟槽主要位于单个BRCT中,而且4个BRCT的沟槽在形状和电荷分布上都不同,说确明BRCT配体特异性主要由单个BRCT决定。磷酸结合口袋位于沟槽中心,说明沟槽可能同时结合磷酸化残基的N端和C端附近残基。 展开更多

关键词 BRCT结构域 磷酸结合口袋 dna损伤修复 表面静电势

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KIF4A尾部结构域与不同结构DNA的相互作用

9

作者 张壮壮 闫鲁霞 +1 位作者 程蓓蓓 朱长军 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第3期29-33,共5页

在有丝分裂期的细胞中,染色体驱动蛋白KIF4A的染色体定位对细胞分裂进程影响显著,KIF4A的羧基端尾部是参与调控其染色体定位的主要结构.为了探究KIF4A结合DNA的特性,利用细菌表达KIF4A尾部功能域蛋白KIF4A-C278,并应用纯化后的蛋白分别... 在有丝分裂期的细胞中,染色体驱动蛋白KIF4A的染色体定位对细胞分裂进程影响显著,KIF4A的羧基端尾部是参与调控其染色体定位的主要结构.为了探究KIF4A结合DNA的特性,利用细菌表达KIF4A尾部功能域蛋白KIF4A-C278,并应用纯化后的蛋白分别与线性双螺旋DNA和超螺旋DNA结合.实验结果显示,KIF4A-C278蛋白不与线性双螺旋质粒DNA结合,但可与高级结构的超螺旋质粒DNA结合.说明KIF4A羧基端尾部功能域会识别高级结构的DNA并与其相互作用.这预示着在有丝分裂初期染色质趋向于凝集成染色体时,DNA开始形成高级结构,KIF4A可能会借助于这一功能启动染色体定位. 展开更多

关键词 染色体驱动蛋白 KIF4A C-末端尾部结构域 dna结合

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乳腺癌组织中孕激素受体与雌激素受体DNA结合功能关系的研究 被引量：10

10

作者 杨红斌 付京 +3 位作者 张盈华 郝新保 邱福海 张利朝 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期743-746,共4页

目的：观察３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌患者组织ＰＲ 和ＥＲ ＤＮＡ 结合功能的关系，进而探讨（Ｅ２ ＋ ／ＰＲ＋ ） 表型内分泌治疗无反应的分子机制。方法：用激素结合法和迁移率改变法。结果：１） 用含有ＥＲ 的ＭＣＦ－ ７ 细胞... 目的：观察３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌患者组织ＰＲ 和ＥＲ ＤＮＡ 结合功能的关系，进而探讨（Ｅ２ ＋ ／ＰＲ＋ ） 表型内分泌治疗无反应的分子机制。方法：用激素结合法和迁移率改变法。结果：１） 用含有ＥＲ 的ＭＣＦ－ ７ 细胞株作为阳性对照，２２ ℃Ｍｇ２ ＋ 存在条件下，迁移率改变法中ＥＲ－ ＥＲＥ 复合物的形成是激素依赖性的，证实了ＥＲ－ ＥＲＥ 复合物的特性。２） 激素结合法和迁移率改变法检测结果显示，３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌中有２５ 例相一致，其中两种方法都是阳性者（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ＋ ）１７ 例，都是阴性者（ＰＲ－ ／ＥＲＥ－ ）８ 例。３ 例肿瘤，激素结合法阳性而迁移率改变法阴性（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ－ ） 。８ 例肿瘤，激素结合法阴性而迁移率改变法阳性（ＰＲ－ ／ＥＲＥ＋ ） 。结论：乳腺癌组织中依赖ＥＲ 的ＰＲ 表达还有其它途径（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ－ ） ，且ＰＲ 阴性不能表示ＥＲ ＤＮＡ 结合功能状态有缺陷（ＰＲ－ ／ＥＲＥ＋ ） ，利用ＰＲ 评估ＥＲ ＤＮＡ 结合功能状态以指导乳腺癌的内分泌治疗存在约３０ ％ （１１／３６） 的误差率。因此，传统的激素结合法检测结果（Ｅ２ 、ＰＲ） 同迁移率改变法检测结果（ＥＲＥ） 相结合，能更准确地反应ＥＲ 展开更多

关键词 乳腺癌 孕激素受体 雌激素受体 dna结合结构域

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LIM结构域蛋白KyoT基因剔除小鼠的建立和表型分析 被引量：1

11

作者 韩骅 王冀姝 +3 位作者 李荣 牛利国 孙强 周鹏 《自然科学进展（国家重点实验室通讯）》 北大核心 2001年第2期136-141,共6页

KyoT为一LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用而调节其转录活性.构建了KyoT基因剔除载体,转染小鼠胚胎干细胞(ES细胞)后得到同源重组的ES细胞克隆.将此ES细胞注射入小鼠的囊胚泡得到嵌合小鼠,再经小鼠培育得到KyoT基因被剔除的小... KyoT为一LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用而调节其转录活性.构建了KyoT基因剔除载体,转染小鼠胚胎干细胞(ES细胞)后得到同源重组的ES细胞克隆.将此ES细胞注射入小鼠的囊胚泡得到嵌合小鼠,再经小鼠培育得到KyoT基因被剔除的小鼠.纯合子KyoT基因剔除小鼠不能表达有功能的KyoT蛋白.表型分析表明纯合子KyoT基因剔除小鼠腹腔B1B细胞数增加,提示KyoT可能参与B淋巴细胞的发育. 展开更多

关键词 KYOT基因 基因剔除 B淋巴细胞 转录因子 dna结合蛋白 LIM结构域蛋白

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多发性骨髓瘤U266细胞株DNA甲基转移酶和甲基结合蛋白的表达

12

作者 许闪闪 李智 +2 位作者 何丽梅 翁文浩 于慧 《检验医学》 CAS 北大核心 2010年第8期632-636,共5页

目的检测多发性骨髓瘤（MM）细胞DNA甲基转移酶（DNMTs）及甲基结合结构域（MBD）蛋白[包括甲基CpG结合结构域蛋白（MeCP2）和MBD2]的表达状况,探索其在基因甲基化过程的作用。并观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和/或曲古霉素A（... 目的检测多发性骨髓瘤（MM）细胞DNA甲基转移酶（DNMTs）及甲基结合结构域（MBD）蛋白[包括甲基CpG结合结构域蛋白（MeCP2）和MBD2]的表达状况,探索其在基因甲基化过程的作用。并观察5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和/或曲古霉素A（TSA）对DNMTs及MeCP2和MBD2的作用。方法利用荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析MMU266细胞株DNMTs（DNMT1、DNMT3a、DNMT3b）及MeCP2和MBD2蛋白的mRNA水平,与10名正常人单个核细胞（PBMC）mRNA比较。4μmol/L5-Aza-CdR和/或0.1μmol/LTSA与U266细胞共培养,分析MBD2和MeCP2蛋白mRNA的变化情况。WesternBlot检测这2种药物对U266细胞MBD2蛋白的影响。结果各甲基化调控蛋白mRNA与PBMCmRNA相比,差异有统计学意义（P均〈0.05）。其中DNMTs和MBD2蛋白在U266细胞中表达升高,而MeCP2蛋白表达下降。经5-Aza-CdR和/或TSA作用后,MBD2表达下降,MeCP2升高。5-Aza-CdR在蛋白水平对MBD2的作用亦不显著;TSA可明显降低MBD2的表达,且具有时间依赖性。结论 DNMTs和MBD2、MeCP2蛋白在MMU266细胞中表达异常,可能与U266细胞多个抑癌基因启动子高甲基化相关。5-Aza-CdR和TSA可以逆转U266细胞MBD2和MeCP2的表达。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 表观遗传学 dna甲基转移酶 甲基结合结构域蛋白

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用酵母单杂交系统筛选人IL-2Rα基因NIRS元件结合蛋白的cDNA

13

作者 盛德乔 陆瑜 +2 位作者 李宏帆 吴宁华 沈珝琲 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第3期214-218,共5页

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和... 目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和βgal活性;测序后分析发现它们分别属于4个不同蛋白的cDNA克隆。其中一个是已知的反式作用因子Ku抗原,另一个是RNA聚合酶Ⅰ的转录终止因子。它们的C末端分别含有SAP和SANTDNA结合结构域。结论在Jurkat细胞中存在与NIRS元件相互作用的结合蛋白,相关的研究正在进行中。 展开更多

关键词 NIRS 结合蛋白 人IL-2 筛选 Ra基因 杂交系统 酵母 白细胞介素2受体 人外周血淋巴细胞 dna结合结构域 Jurkat细胞 相互作用 HTLV-1 cdna文库 cdna克隆 反式作用因子 RNA聚合酶 阳性克隆 Ku抗原 杂交体 gal 假阳性 SAP C末端

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人同源异型框Csx及其变体的克隆、在大肠杆菌中的表达及其DNA结合性能研究 被引量：1

14

作者 应华 赵景晖 +2 位作者 金卫新 陈允梓 华子春 《南京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期170-175,共6页

人心脏同源异型框基因Csx是同源异型框基因家族NK2的成员之一 ,也是心脏早期发育必须的转录因子之一 .虽然目前关于Csx基因在发育中的作用及其与先天性心脏病的关系得到了广泛的关注 ,并研究得较为深入 ,然而Csx本身的结构与功能的关系... 人心脏同源异型框基因Csx是同源异型框基因家族NK2的成员之一 ,也是心脏早期发育必须的转录因子之一 .虽然目前关于Csx基因在发育中的作用及其与先天性心脏病的关系得到了广泛的关注 ,并研究得较为深入 ,然而Csx本身的结构与功能的关系仍不十分清楚 .Csx包含了 3个保守的结构域 :TN结构域、同源异型框结构域和NK2 SD结构域 .通过选择合适的酶切位点 ,构建了Csx的 5个变体 ,分别缺失了不同的结构域 ,并将Csx及这 5个变体克隆到pET32系列载体中 .将这 6个构建好的质粒转化E .coliBL2 1 (DE3) ,在IPTG的诱导下 ,得到了Csx基因及 5个变体在大肠杆菌中的可溶性表达 .凝胶阻滞实验显示 :同源异型框是Csx与DNA相互作用的区域 ,缺失了同源异型框结构域 ,Csx就无法和靶序列结合 . 展开更多

关键词 同源异型框结构域 同源异型框基因 Csx 克隆 大肠杆菌 基因表达 dna结合性能

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有关序列特异性DNA结合蛋白的一些最新研究进展

15

作者 魏荣 李佐 杜翠花 《山西农业大学学报》 CAS 2000年第1期83-85,共3页

本文对有关序列特异性DNA结合蛋白的最新研究情况作了叙述。在其结构研究中 ,介绍了同源结构域的拓扑学结构 ,同源结构域上的氨基酸基序 ,共价和非共价二聚结构域。在其作用研究中 ,介绍了非放射标记的凝胶阻滞分析法 ,C/EBP调节启动子... 本文对有关序列特异性DNA结合蛋白的最新研究情况作了叙述。在其结构研究中 ,介绍了同源结构域的拓扑学结构 ,同源结构域上的氨基酸基序 ,共价和非共价二聚结构域。在其作用研究中 ,介绍了非放射标记的凝胶阻滞分析法 ,C/EBP调节启动子活性的机制 ,雌激素受体在前转录起始复合物形成中的作用以及一种新的人SPI激活转录必需的共激活因子———CRSP复合物。在编码基因与其DNA序列上的结合位点研究中 ,介绍了荧光原位杂交技术进行染色体定位 ,C/EBP家族在小鼠的乳腺泌乳期和回复期的表达 ,HNF— 1结合位点对SI基因启动子上葡萄糖阻遏作用的操纵 。 展开更多

关键词 结构域 启动子 HNF-1结合位点 dna结合蛋白

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核因子I/A(NFIA)依赖其N末端的DNA结合结构域抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制 被引量：2

16

作者 赵旭阳 史西保 +4 位作者 张小转 陈静 王丽 邓瑞广 张改平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1087-1095,共9页

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害世界养猪业,目前仍无有效防控策略,因此探究宿主内源性蛋白拮抗PRRSV的分子机理意义重大。前期试验发现核因子I/A(nuclear factor I/A,NFIA... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害世界养猪业,目前仍无有效防控策略,因此探究宿主内源性蛋白拮抗PRRSV的分子机理意义重大。前期试验发现核因子I/A(nuclear factor I/A,NFIA)可以有效抑制PRRSV复制,故本试验以非洲绿猴胚胎肾细胞Marc-145细胞为模型,对NFIA抑制PRRSV复制的分子机理进行了深入探究。首先,构建NFIA的N末端DNA结合结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔN和C末端转录激活结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-ΔC并分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后用qRT-PCR和Western blot的试验方法分别检测病毒N蛋白的RNA和蛋白表达水平。结果显示ΔC仍能有效降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,但ΔN则不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,这表明NFIA的N末端结构域是抑制病毒的关键。其次,对NFIA全长质粒pcDNA3.1-Flag-WT进行N末端结构域内不同功能位点的双碱基突变,分别破坏掉NFIA的促腺病毒复制功能(Mut1,YR86~87WL)、DNA结合功能(Mut2,LR119~120VD)和二聚化功能(Mut3,LF135~136VD),将突变质粒分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后通过qRT-PCR和Western blot检测发现,Mut2和Mut3不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,说明N端结构域的DNA结合功能位点和二聚化功能位点是NFIA抑制PRRSV复制的关键。结果表明,核因子I/A(NFIA)主要依赖其DNA结合结构域的二聚化与DNA结合功能来抑制PRRSV复制。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) NFIA dna结合/二聚化结构域 位点突变

原文传递

应用功能化氧化硅泡沫负载甲基化结合结构域建立一种富集甲基化DNA的方法

17

作者 陈雅婷 韩路 +2 位作者 赵东元 屠波 马端 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期284-288,共5页

目的用功能化氧化硅泡沫负载甲基化CpG结合域（methyl—CpGbindingdomain，MBD）建立一种用于大样本初筛时富集甲基化DNA的方法。方法将具有超大介孔尺寸的氧化硅泡沫（mesocellularsilicafoam，MCF）功能化并负载融合蛋白GST-MBD以结... 目的用功能化氧化硅泡沫负载甲基化CpG结合域（methyl—CpGbindingdomain，MBD）建立一种用于大样本初筛时富集甲基化DNA的方法。方法将具有超大介孔尺寸的氧化硅泡沫（mesocellularsilicafoam，MCF）功能化并负载融合蛋白GST-MBD以结合甲基化DNA。结果MCF功能化后仍保持较大的笼状孔结构，孔径约为55Dm，窗口约30nm，空隙容积高达1．0m^3／g，MBD蛋白负载量达53wt％。具有较高的结合甲基化DNA的活性和稳定性。在缓冲液盐浓度为500～550mmol／L时，MCF-MBD能较为专一地区分并富集混合溶液中的甲基化DNA。结论该方法为高通量和自动化检测DNA甲基化提供了一个较好的选择和分子生物学依据，为临床应用和DNA甲基化相关疾病的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 甲基化结合结构域 甲基化dna 功能化氧化硅泡沫 富集

原文传递

多聚ADP-核糖结合蛋白的鉴定

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作者 沈莉芳 张弛 吴家雪 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期36-42,50,共8页

多聚ADP-核糖基化(poly(ADP-ribose),PAR)是一种蛋白翻译后修饰方式,在很多细胞生命过程中行使重要的功能.近年来已经鉴定了许多被PAR修饰或与PAR结合的蛋白.本研究中,通过亲和纯化和质谱分析的方法发现了很多与PAR结合的蛋白,其中包括... 多聚ADP-核糖基化(poly(ADP-ribose),PAR)是一种蛋白翻译后修饰方式,在很多细胞生命过程中行使重要的功能.近年来已经鉴定了许多被PAR修饰或与PAR结合的蛋白.本研究中,通过亲和纯化和质谱分析的方法发现了很多与PAR结合的蛋白,其中包括一些已经报道的与PAR结合的蛋白,但大部分是未知的.通过体外实验,我们进一步验证了HRP-2,CDK9,EWSR和FXR1与PAR的结合,并发现HRP家族的PWWP结构域是一个特异的与PAR结合的结构域.此外,HPR-2缺失的细胞对DNA损伤试剂敏感,说明HRP-2参与了DNA的损伤应答过程,可能在DNA损伤修复中起到非常重要的作用. 展开更多

关键词 ADP核糖基化 PAR结合结构域 HRP-2 PWWP结构域 dna损伤应答

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灭癌素链霉菌中磷硫酰化修饰DNA结合结构域的功能分析

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作者 陈英 孔令新 +1 位作者 邓子新 由德林 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期543-555,共13页

【目的】DNA磷硫酰化(phosphorothioation,PT)是由硫原子取代DNA骨架磷原子上的非桥联氧原子形成的一种新型DNA修饰。PT修饰除参与组成限制修饰系统外,其更为广泛的生物学功能仍有待揭示。PT修饰现有的检测方法操作复杂、成本高、耗时长... 【目的】DNA磷硫酰化(phosphorothioation,PT)是由硫原子取代DNA骨架磷原子上的非桥联氧原子形成的一种新型DNA修饰。PT修饰除参与组成限制修饰系统外,其更为广泛的生物学功能仍有待揭示。PT修饰现有的检测方法操作复杂、成本高、耗时长,而具有操作简便、成本低、耗时短等特点的酶联免疫检测(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)成为新PT检测方法开发的优选。灭癌素链霉菌(Streptomyces gancidicus)中具有天蓝色链霉菌中PT修饰依赖的IV型限制酶(ScoMcrA)的同源酶,暗示其同样含有特异性结合PT修饰DNA的硫结合结构域(sulfur binding domain,SBD)。本文对灭癌素链霉菌中的SBD(简称为Sg-SBD)与PT修饰DNA的亲和力进行定性检测与定量表征,评估其用于PT修饰ELISA方法开发的潜力。【方法】对ScoMcrA-SBD和Sg-SBD的氨基酸序列进行比对分析,利用ScoMcrA-SBD为模板进行同源建模。在大肠杆菌中异源表达Sg-SBD,利用纯化的Sg-SBD进行凝胶迁移(electrophoresis mobility shift assays,EMSA)检测。利用生物膜层干涉(biolayer interferometry,BLI)技术进行Sg-SBD结合PT修饰DNA的定量表征。【结果】生物信息学分析揭示了Sg-SBD含有结合硫原子的保守的氨基酸残基,同时表明Sg-SBD具有与ScoMcrA-SBD相似的结构。EMSA实验发现Sg-SBD可以结合PT修饰DNA形成明显的迁移带,初步证实Sg-SBD结合PT修饰DNA的活性。BLI数据显示,Sg-SBD具有比ScoMcrA-SBD更强的PT修饰DNA结合能力,其与PT修饰DNA的亲和力常数在nmol/L级别,并且Sg-SBD不结合非PT修饰DNA。【结论】Sg-SBD结合PT修饰DNA活性接近抗原-抗体的反应水平,可用于PT修饰DNAELISA快速检测方法的开发。 展开更多

关键词 dna磷硫酰化修饰 硫结合结构域 凝胶迁移 生物膜层干涉 酶联免疫检测

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MYB转录因子在调控植物响应逆境胁迫中的作用 被引量：2

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作者 胡雅丹 伍国强 +1 位作者 刘晨 魏明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期5-22,共18页

MYB作为植物中最大的多功能转录因子(transcription factors,TFs)家族之一,在基因转录水平上广泛地参与调控植物生长发育、激素信号转导及逆境胁迫应答等过程。该类转录因子N端含有典型的MYB结构域,根据MYB结构域中R重复序列的数量分为... MYB作为植物中最大的多功能转录因子(transcription factors,TFs)家族之一,在基因转录水平上广泛地参与调控植物生长发育、激素信号转导及逆境胁迫应答等过程。该类转录因子N端含有典型的MYB结构域,根据MYB结构域中R重复序列的数量分为不同的亚组;而C端结构域差异较大,因此功能上具有多样性。大量研究表明,在受到外界环境信号的激活后,MYB可单独或通过和其他蛋白互作后,与下游靶基因启动子区域的顺式作用元件MYBCORE和AC-box结合,参与调控下游胁迫应答相关基因的表达,从而调节植物对逆境胁迫的耐受性。另外,MYB也通过参与脱落酸(abscisic acid,ABA)、油菜素内酯(brassinolide,BR)、茉莉酸(jasmonic acid,JA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)等信号通路的方式,对非生物胁迫以及生物胁迫做出应答反应。论文对植物MYB家族的结构与分类及其作用方式进行了归纳,重点对植物MYB参与调控响应盐、干旱、极端温度、营养亏缺、重金属以及病原菌等非生物和生物逆境胁迫的作用机制进行了综述,并对未来重点研究方向提出了展望,为今后农作物的抗逆性遗传改良和生物育种提供优异基因资源和理论支持。 展开更多

关键词 MYB转录因子 转录调控 dna结合结构域 非生物胁迫 生物胁迫 抗逆性 基因表达 蛋白互作

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