山羊GATA3基因克隆及其真核表达载体构建 被引量：1

1

作者 吴玉莲 叶升 +2 位作者 王国栋 刘权辉 黄奔 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期12-21,共10页

本研究旨在克隆山羊GATA3(GATA binding protein 3)基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊GATA3基因编码区为种子序列(GenBank登录号:XM_018056969.1),通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增... 本研究旨在克隆山羊GATA3(GATA binding protein 3)基因,构建其真核表达载体,并对该基因进行生物信息学分析。以山羊GATA3基因编码区为种子序列(GenBank登录号:XM_018056969.1),通过SnapGene 4.1.9软件设计引物序列,应用RT-PCR方法扩增山羊GATA3基因完整编码区序列,测序鉴定后基于其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,并构建pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1慢病毒重组质粒。利用脂质体转染方法将慢病毒重组质粒pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1与病毒包膜质粒pCMV-VSVG、包装质粒pNRF共转染HEK-293T细胞,进行慢病毒包装后收集病毒上清液,成功感染山羊耳尖成纤维细胞。结果显示,山羊GATA3基因编码区序列全长1335 bp,编码444个氨基酸,分子质量为47.94 ku,分子式为C2093H3234N626O625S24,等电点为9.47,其中丝氨酸含量最高(13.3%),色氨酸含量最低(1.1%)。山羊GATA3基因核苷酸序列与牛、猪、驴、马、小鼠及人的相似性分别为97.7%、94.2%、92.2%、92.4%、88.0%和90.1%,不同物种间相似性较高,进化过程中具有高度保守性。系统进化树分析表明,山羊与牛、猪、驴、马及人聚为一支,亲缘关系较近,与非洲蟾蜍、斑马鱼亲缘关系较远。跨膜结构域及亲/疏水性预测结果显示,山羊GATA3蛋白不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白。信号肽预测结果表明,该蛋白定位于细胞质中。通过构建山羊GATA3基因慢病毒真核表达载体pLVX-GATA3-IRES-ZsGreen1,细胞水平上转染HEK-293T和山羊耳尖成纤维细胞,过表达GATA3基因,产生绿色荧光信号。本研究结果为山羊GATA3基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究GATA3基因在山羊泌乳中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊 gata3基因 克隆 载体构建 乳腺发育

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gata3基因表达与人乳腺肿瘤病理特征的相关性分析 被引量：1

2

作者 钱卫东 沈兰芳 +3 位作者 王婷 刘翌超 石丽 李永东 《陕西科技大学学报》 CAS 2019年第4期40-45,63,共7页

为了检测gata3基因在不同乳腺肿瘤组织中的相对表达情况,分析gata3基因表达与乳腺肿瘤不同临床特征的相关性.自主设计了gata3基因的引物和探针,建立检测gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法,进而用建立的方法对130例临床乳腺肿瘤... 为了检测gata3基因在不同乳腺肿瘤组织中的相对表达情况,分析gata3基因表达与乳腺肿瘤不同临床特征的相关性.自主设计了gata3基因的引物和探针,建立检测gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法,进而用建立的方法对130例临床乳腺肿瘤冰冻组织样本中gata3基因的mRNA表达进行检测,并分析gata3基因表达与乳腺肿瘤患者临床病理特征的关系.结果表明:gata3基因mRNA的相对表达量在瘤旁组织中显著高于肿瘤组织(9.1392E-02Vs5.0548E-02,p=0.0071),在良性纤维腺瘤中显著高于恶性肿瘤(6.87E-02Vs3.42E-02,p=0.002);在乳腺浸润性导管癌中,gata3基因的表达与ER表型和Luminal分子亚型显著正相关(rER表型=0.512***;r分型=0.459***);而在Luminal亚型乳腺癌样本中,gata3基因的表达与肿瘤TNM高、分化级别高显著负相关(rTNM分期=-0.111*,r分化=-0.147*).gata3基因异常低表达可能促进乳腺癌的发生、发展和转移,而gata3基因高表达的乳腺癌组织多伴随ER分子高表达,对内分泌药物相对敏感、预后较好.研究建立的gata3基因mRNA表达的一步法qRT-PCR检测方法可以为乳腺癌诊断和预后评估提供新的参考方法. 展开更多

关键词 gata3基因 QRT-PCR 乳腺肿瘤 病理特征 临床诊断

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导致HDR综合征的2例GATA3基因变异的致病性分析 被引量：1

3

作者 李林珂 耿佳 +7 位作者 申恬 钟鸣骏 熊文羽 赵海燕 卢宇 袁慧军 刘世喜 孙艺 《中国听力语言康复科学杂志》 2021年第3期175-178,共4页

目的分析两个HDR综合征家系的临床特征及致病基因鉴定。方法对两家系成员进行病史、临床信息采集,应用高通量测序和生物信息学分析进行致病基因鉴定。结果在2个家系中仅表现为感音神经性耳聋的先证者的GATA3基因发现两个新发位点,分别为... 目的分析两个HDR综合征家系的临床特征及致病基因鉴定。方法对两家系成员进行病史、临床信息采集,应用高通量测序和生物信息学分析进行致病基因鉴定。结果在2个家系中仅表现为感音神经性耳聋的先证者的GATA3基因发现两个新发位点,分别为c.186dup(p.Tyr63Leufs*240)和c.835_836dup(p.Gly280Argfs*15),根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传性听力损失判读指南显示,这两突变分别为先证者的致病变异。结论GATA3基因为这两先证者的致病基因,c.186dup(p.Tyr63Leufs*240)和c.835_836dup(p.Gly280Argfs*15)进一步完善了GATA3基因的突变谱。对仅表现感音神经性耳聋的患者,应重视部分表型不完全外显的综合征型耳聋。 展开更多

关键词 HDR综合征 gata3基因 感音神经性耳聋 遗传性听力损失

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GATA3基因rs3824662位点多态性与妊娠期糖尿病相关性研究

4

作者 李犀 苏进娣 +4 位作者 林圣 汪保江 姚克勤 赖丽萍 段山 《基层医学论坛》 2021年第7期899-902,共4页

目的探讨GATA3(GATA binding protein 3)基因rs3824662位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)孕妇遗传易感性的相关性。方法选取2012年7月—2013年5月在深圳市布吉人民医院和深圳市龙岗人民医院就诊的GD... 目的探讨GATA3(GATA binding protein 3)基因rs3824662位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)孕妇遗传易感性的相关性。方法选取2012年7月—2013年5月在深圳市布吉人民医院和深圳市龙岗人民医院就诊的GDM孕妇241例为患者组,同期入院的健康孕妇139例为对照组。采用飞行时间质谱技术检测GATA3基因rs3824662位点的基因型,采用二元逻辑回归在3种不同遗传模型中分析该位点与GDM易感性的关系。结果对妊娠年龄和孕前BMI等多项混杂因素进行校正后的加性[OR(95%CI)=1.127(0.490,2.591);P=0.779]、显性[OR(95%CI)=0.976(0.638,1.492);P=0.910]及隐性[OR(95%CI)=1.153(0.515,2.584);P=0.729]遗传模型均显示rs3824662位点多态性与GDM无相关性。结论GATA3基因rs3824662位点单核苷酸多态性(SNP)与GDM的发生在中国人群中可能不具有相关性。 展开更多

关键词 妊娠期糖尿病 gata3基因 单核苷酸多态性 相关性

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小鼠GATA3基因重组腺病毒载体的构建和病毒制备

5

作者 方杰 郑金旭 +2 位作者 吴燕 曹晓霞 许化溪 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2009年第12期1686-1689,共4页

目的:在已克隆的小鼠GATA3基因基础上构建腺病毒载体,制备GATA3-adv。方法:Ad-Easy法通过同源臂重组的方式在细菌中获得重组腺病毒基因组质粒。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的质粒共转化BJ5183细菌,在... 目的:在已克隆的小鼠GATA3基因基础上构建腺病毒载体,制备GATA3-adv。方法:Ad-Easy法通过同源臂重组的方式在细菌中获得重组腺病毒基因组质粒。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的质粒共转化BJ5183细菌,在细菌重组酶的作用下经抗性筛选获得重组腺病毒基因组质粒,将其线性化后转染HEK293中获得有活性的包装腺病毒。腺病毒荧光检测试剂盒定量腺病毒浓度。结果:成功制备了小鼠Adv-GATA3,其浓度为3.34×109copies/ml。结论:小鼠GATA3基因重组腺病毒载体的成功构建为进一步在基因水平进行免疫紊乱性疾病的干预研究奠定了基础。 展开更多

关键词 gata3基因 基因重组 腺病毒载体

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GATA3基因变异导致甲状旁腺功能减退症患者的临床特征和分子机制 被引量：1

6

作者 杨静 王亚冰 +5 位作者 聂敏 姜艳 李梅 夏维波 邢小平 王鸥 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期66-71,共6页

目的分析GATA3基因变异导致甲状旁腺功能减退症(hypoparathyroidism,HP)患者的临床特点及分子机制。方法在1975年至2020年间于北京协和医院内分泌科随诊并行靶向基因捕获联合二代测序的198例未成年人(≤18岁)起病的非手术性HP患者中筛查... 目的分析GATA3基因变异导致甲状旁腺功能减退症(hypoparathyroidism,HP)患者的临床特点及分子机制。方法在1975年至2020年间于北京协和医院内分泌科随诊并行靶向基因捕获联合二代测序的198例未成年人(≤18岁)起病的非手术性HP患者中筛查到5例GATA3基因致病/可疑致病性变异,回顾性收集分析其临床资料,并对基因检测结果进行生物信息学分析。结果5例患者HP的起病年龄为0.5(0.1,1.3)岁,发病至诊断为HP和甲状旁腺功能减退-耳聋-肾发育不良(hypoparathyroidism-deafness-renal dysplasia,HDR)综合征的时间分别为(7.0±5.2)年和(15.0±5.4)年。临床表现为手足搐搦伴癫痫样发作、颅内钙化各5例,白内障1例,听力减退4例,肾脏畸形或缺如2例。治疗前血钙和血甲状旁腺激素(PTH)分别为(1.65±0.31)mmol/L和(4.64±2.63)ng/L。5例患者GATA3基因的杂合变异,分别引起无义突变、移码突变和剪接位点突变,经Clin Var数据库预测及美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)分级为致病性或可能致病性变异。结论对于儿童期起病的HP,应注意遗传性疾病的筛查,其中对于合并听力下降或肾脏发育异常的患者要考虑到HDR综合征的可能,有条件时应筛查GATA3基因以明确诊断。 展开更多

关键词 甲状旁腺功能减退症 儿童/青少年起病 gata3基因 聋 肾发育不良

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鼻腔滴入IFN-γ对AR大鼠鼻腔黏膜中GATA-3表达的影响及意义 被引量：2

7

作者 李钦 张永东 +4 位作者 孙崇伟 陈彦林 杜英华 赵广娟 张大良 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第14期27-28,共2页

目的探讨鼻腔吸入IFN-γ对大鼠变应性鼻炎(AR)的治疗作用及其机制。方法将32只大鼠随机分为四组,各8只。A组为阴性对照组。B、C、D组采用卵清蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型,B组为阳性对照组、C组为IFN-γ治疗组、D组为丙酸倍氯米松治疗... 目的探讨鼻腔吸入IFN-γ对大鼠变应性鼻炎(AR)的治疗作用及其机制。方法将32只大鼠随机分为四组,各8只。A组为阴性对照组。B、C、D组采用卵清蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型,B组为阳性对照组、C组为IFN-γ治疗组、D组为丙酸倍氯米松治疗对照组。B、C、D组于模型建立后第31～38天,每只每日每侧鼻腔分别滴入PBS50μl、IFN-γ1μg和丙酸倍氯米松3.5μg。第39天取鼻腔黏膜,观察鼻腔组织病理学改变,用免疫组化SP法检测转录因子GATA3。结果与A组相比,B组鼻黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,有嗜酸细胞为主的炎性细胞浸润,GATA3表达增加;C、D组上述炎性改变明显减轻,鼻黏膜中GATA3表达减少。结论鼻腔滴入IFN-γ治疗AR可能与阻断GATA3表达,从而继发抑制Th2型反应有关。 展开更多

关键词 干扰素 变应性鼻炎 gata3基因 大鼠

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SLE患者PBMCs中T-bet、GATA3和Foxp3 mRNA的表达变化及意义

8

作者 张洁 李冬芹 +2 位作者 尹光文 李付广 代永霞 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第47期20-21,共2页

目的检测系统性统斑狼疮(SLE)患者单个核细胞(PBMCs)中转录因子T-bet、GATA3和Foxp3表达情况,并探讨其意义。方法采集系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs),提取总RNA,利用SYBRGreenⅠ逆转录荧光定量PCR方法,以β-actin为内... 目的检测系统性统斑狼疮(SLE)患者单个核细胞(PBMCs)中转录因子T-bet、GATA3和Foxp3表达情况,并探讨其意义。方法采集系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs),提取总RNA,利用SYBRGreenⅠ逆转录荧光定量PCR方法,以β-actin为内对照基因,检测PBMCs中T-bet、GATA3和Foxp3mRNA的相对表达水平。结果SLE患者PBMCs中T-bet、GATA3、Foxp3mRNA表达水平低于正常对照组,且活动期高于稳定期。结论SLE患者PBMCs中转录因子T-bet、GATA3和Foxp3表达降低;三者可能参与SLE的发病机制。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 转录因子 外周血单个核细胞 T-BET基因 gata3基因 FOXP3基因

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靶向沉默Gata3对妊娠期哮喘小鼠树突状细胞表型及效应T细胞失衡表达的影响

9

作者 马佳佳 陈必良 Nick Lu 《现代妇产科进展》 CSCD 2014年第7期512-516,共5页

目的:研究慢病毒介导siRNA靶向沉默Gata3基因表达对妊娠哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)抗原递呈及其免疫生物学特性的影响。方法:以脂质体DNA沉淀法将重组慢病毒干扰质粒与包装质粒共转染AD293细胞,包装生成慢病毒感染体外诱导DC,R... 目的:研究慢病毒介导siRNA靶向沉默Gata3基因表达对妊娠哮喘模型小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)抗原递呈及其免疫生物学特性的影响。方法:以脂质体DNA沉淀法将重组慢病毒干扰质粒与包装质粒共转染AD293细胞,包装生成慢病毒感染体外诱导DC,RT-PCR、Western blot分析其对siGata3基因的整合转录效果;流式细胞术观察细胞表型变化。通过尾静脉注射将pSH1/siGata3转移至小鼠体内,ELISA法测定其肺泡灌洗液(BALF)中的炎性因子含量;MTT法验证混合淋巴细胞反应(MLR)后T细胞增殖能力。结果:经重组、包装携有Gata3特异siRNA慢病毒感染DC成功,其siRNA靶点Gata3 mRNA及蛋白的转录表达分别下调87.30%和81.33%(P<0.05);同时降低DCs膜表面CD86荧光强度(P<0.05)。减少pSH1/siGata3组小鼠BALF中IL-5、IL-17分泌而提升IL-12水平(P<0.05);MLR证实,共培养感染DC激活T细胞的能力明显不足(P<0.05)。结论:siRNA干扰可有效抑制模型小鼠免疫微环境特定Gata3通路,阻遏T细胞及其亚群分化由此来诱导DC免疫耐受,为妊娠期哮喘防治奠定基础并提供新的思路和手段。 展开更多

关键词 gata3基因 小分子RNA干扰 哮喘 妊娠 树突状细胞 免疫耐受

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2例甲状旁腺功能减低-感音神经性聋-肾发育不良综合征患者临床特点分析

10

作者 刘敏 孟黎平 +3 位作者 季慧 范烨 王莹莹 洪琴 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期422-426,共5页

目的探讨2例甲状旁腺功能减低-感音神经性聋-肾发育不良综合征(hypoparathyroidism sensorineural deafness-renal dysplasia syndrome,HDR)患者的临床特征和遗传学病因。方法回顾性分析2例确诊为HDR患者的听力学、基因检测及其他临床... 目的探讨2例甲状旁腺功能减低-感音神经性聋-肾发育不良综合征(hypoparathyroidism sensorineural deafness-renal dysplasia syndrome,HDR)患者的临床特征和遗传学病因。方法回顾性分析2例确诊为HDR患者的听力学、基因检测及其他临床资料。结果病例1新生儿听力筛查(耳声发射+自动听性脑干反应)双耳未通过,诊断为中度感音神经性听力损失,随访血钙、甲状旁腺激素检测正常,泌尿系统和甲状旁腺超声检查未见异常。病例2新生儿听力筛查(耳声发射)通过,3岁时体检耳声发射双耳未通过,诊断为中度感音神经性听力损失,随访血钙、甲状旁腺激素检测正常,甲状旁腺超声检查未见异常,泌尿系统超声示双肾小结晶,形态正常。2例经基因检测,诊断为HDR,分别为GATA3基因突变位点c.867dup和c.65_68dup位点突变,患儿双亲均未携带该突变,均为首次报道。结论HDR临床表型差异较大,对听力损伤怀疑合并甲状旁腺功能降低或肾功能异常的患儿应尽早完善基因检测,避免漏诊。 展开更多

关键词 甲状旁腺功能减低-感音神经性聋-肾发育不良综合征 感音神经性听力损失 gata3基因

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一例新生儿甲状旁腺功能减低-感音神经性耳聋-肾发育不良综合征患儿的临床及遗传学分析 被引量：1

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作者 邵巧燕 吴沛霖 +3 位作者 林碧云 陈森婧 刘健 陈素清 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2022年第2期222-226,共5页

目的分析甲状旁腺功能减低-感音神经性耳聋-肾发育不良(hypoparathyroidism-sensorineural deafness-renal dysplasia, HDR)综合征的临床表型与基因变异特点。方法对1例HDR综合征新生儿进行全基因组拷贝数变异(copy number variation, C... 目的分析甲状旁腺功能减低-感音神经性耳聋-肾发育不良(hypoparathyroidism-sensorineural deafness-renal dysplasia, HDR)综合征的临床表型与基因变异特点。方法对1例HDR综合征新生儿进行全基因组拷贝数变异(copy number variation, CNVs)以及外显子组检测, 并分析其临床资料和相关文献。结果患儿为男性, 新生儿期起病, 表现为特殊面容、通贯掌、骶尾部赘生物。血清学检查提示低钙血症、低甲状旁腺激素。听力检测提示双侧感音神经性耳聋。超声检查提示右肾缺如, CNVs检测提示染色体10p15.3-p13(chr10: 105 001_12 815 001)区存在12.71 Mb的缺失, 全外显子测序提示GATA3基因缺失。患儿经补充钙剂及维生素D治疗, 病情有所好转。结论患儿的10p15.3-p13缺失与甲状旁腺功能减退、感音神经性耳聋和右肾缺如等临床表型相关。HDR综合征是罕见的遗传性疾病, 应提高对其的认识, 减少漏诊。 展开更多

关键词 甲状旁腺功能减低感音神经性耳聋-肾发育不良综合征 甲状旁腺功能减退症 感音神经性耳聋 肾发育不良 gata3基因

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