MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体的制备、纯化及初步应用 被引量：2

1

作者 尹金良 徐文 +6 位作者 郭占龙 郭丹丹 姚为民 赵大鹏 张雪梅 常军亮 吴业红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期176-180,191,共6页

目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂... 目的制备MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,并进行纯化及初步应用,为进一步研制宿主细胞残留蛋白检测试剂盒奠定基础。方法无血清悬浮培养MDCK细胞,采用不同方法(反复冻融、裂解液、超声)裂解细胞获得全细胞蛋白抗原。将抗原与弗氏佐剂乳化后经背部多点皮下免疫家兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,当抗体效价≥1×106时,经家兔颈动脉采血,获得含多克隆抗体的血清。血清先经硫酸铵盐析粗提,再经DEAE-Sepharose Fast Flow和Protein A精纯,获得多克隆抗体,分析抗体蛋白回收率、纯度及抗原覆盖率。应用制备的多克隆抗体,Western blot法检测MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺各阶段样品的宿主细胞残留蛋白。结果采用不同方法裂解细胞与不同离心力制备的抗原无区别,免疫家兔后,血清抗体效价最高可达320 000;纯化后的多克隆抗体纯度> 94%,DEAE-sepharose Fast Flow柱纯化效果优于Protein A柱;MDCK细胞培养流感病毒纯化初期存在较多的宿主细胞蛋白,经多步骤纯化后,单价原液中未见残留蛋白,仅含流感病毒蛋白。结论成功制备了MDCK宿主细胞残留蛋白多克隆抗体,可定性分析纯化各阶段样品的残留蛋白。 展开更多

关键词 mdck宿主细胞残留蛋白 多克隆抗体 纯化 DEAE-sepharose Fast Flow Protein A

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地高辛标记探针检测重组白细胞抑制因子-水蛭肽嵌合蛋白宿主DNA残留量的研究 被引量：2

2

作者 蔡晓娜 王鹏 +4 位作者 贺晓强 刘立平 陈海容 郭晋霞 范开 《中国医药生物技术》 2014年第1期66-68,共3页

重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善... 重组白细胞抑制因子一水蛭肽嵌合蛋白（recombinantneutrphilinhibitoryfactorandhiruloghybrid，TNHH）是一种通过基因工程技术改造的新型嵌合蛋白，临床上可用于急性脑栓塞后的脑组织损伤修复，减少脑水肿，防止微小血栓形成从而改善微循环，是一种有前景的心脑血管疾病治疗创新药物， 展开更多

关键词 白细胞抑制因子 嵌合蛋白 DNA残留量 水蛭肽 地高辛标记 探针检测 重组 宿主

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MDCK细胞宿主蛋白含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：3

3

作者 罗剑 张敏 +3 位作者 周琳婷 李贝贝 刘旭平 谭文松 《微生物学免疫学进展》 2019年第4期1-6,共6页

目的建立检测犬肾细胞(madin-darby canine kidney, MDCK)宿主细胞蛋白(host cell protein, HCP)含量的双抗体夹心ELISA。方法从MDCK细胞中提取细胞总蛋白,免疫新西兰兔制备兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体,抗体经辛酸-硫酸铵沉淀和Protein ... 目的建立检测犬肾细胞(madin-darby canine kidney, MDCK)宿主细胞蛋白(host cell protein, HCP)含量的双抗体夹心ELISA。方法从MDCK细胞中提取细胞总蛋白,免疫新西兰兔制备兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体,抗体经辛酸-硫酸铵沉淀和Protein A层析纯化后,采用SDS-PAGE分析抗体纯度,Western blot检测抗体特异性。用纯化的多克隆抗体作为包被抗体,并采用改良过碘酸钠标记法制备酶标抗体,建立ELISA并确定包被抗体浓度和辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体稀释度等最适条件。确定该方法较佳的线性范围及检测限,并对该法特异性、准确度、精密性和重复性进行验证。最后,用该方法分别对接种流感病毒的MDCK细胞上清收获液和纯化样品进行MDCK细胞蛋白含量检测,初步验证其在纯化工艺开发中的适用性。结果通过免疫新西兰兔制备了高滴度的兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体血清,滴度可达1∶8 000。纯化后的兔抗MDCK细胞蛋白多克隆抗体纯度>90%,并可与MDCK细胞蛋白特异性结合。建立的双抗体夹心ELISA的理想包被抗体质量浓度为10μg/mL,酶标抗体的工作浓度为1∶500稀释。该方法的线性范围为50~2 500 ng/mL,检测限为50 ng/mL;该方法对Vero细胞、293T细胞和Mrc-5细胞等其他细胞HCP无交叉反应,特异性良好;不同浓度的MDCK细胞HCP回收率在98.5%~111.9%之间,变异系数均<10%。接种流感病毒的MDCK细胞培养上清经多步纯化后MDCK细胞蛋白质量浓度逐渐降低至<900 ng/mL,纯化工艺可有效去除MDCK细胞蛋白残留。结论建立双抗体夹心ELISA检测MDCK细胞残余HCP含量的方法,可用于基于MDCK细胞培养的流感疫苗下游工艺开发中宿主细胞残留HCP含量监测。 展开更多

关键词 犬肾(mdck)细胞 宿主细胞蛋白 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 流感疫苗

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质谱技术在单克隆抗体类药物宿主细胞残留蛋白检测中的应用进展

4

作者 于继伟 尹红锐 邵泓 《药物流行病学杂志》 CAS 2023年第4期458-465,共8页

单克隆抗体类药物是近年来生物制药领域增长率最快的一类生物技术药物,以其靶向性强、治疗效果明显等优势在癌症、自身免疫性疾病等领域应用广泛。宿主细胞残留蛋白(HCP)是其生产中无法去除且易引起免疫原性的一类工艺杂质,HCP含量测定... 单克隆抗体类药物是近年来生物制药领域增长率最快的一类生物技术药物,以其靶向性强、治疗效果明显等优势在癌症、自身免疫性疾病等领域应用广泛。宿主细胞残留蛋白(HCP)是其生产中无法去除且易引起免疫原性的一类工艺杂质,HCP含量测定是单抗药物质量控制中重要的一项指标。酶联免疫法(ELISA)是目前HCP检测最常用的方法,可以定量检测HCP的总量,但存在局限性。而质谱法作为一种高精密度高准确性的检测方法,已被应用于单克隆抗体类生物药物生产工艺中HCP的监测,可以与ELISA形成互补,弥补ELISA方法存在的不足,为生产条件优化、纯化效果验证提供了依据。文中将从样品前处理技术、分离技术以及数据采集技术3个方面介绍近年来质谱技术在单克隆抗体类药物HCP研究中的应用与进展,为后续质谱法应用于HCP检测研究提供了参考和指导。 展开更多

关键词 单克隆抗体类药物 宿主细胞残留蛋白 质谱 质量控制 检测方法

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不同方法测定基因工程药物中中国仓鼠卵巢细胞蛋白残留量的比较与分析 被引量：4

5

作者 侯继锋 程雅琴 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2002年第4期168-170,共3页

目的对不同中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞蛋白检测试剂盒进行比较分析以确定最佳检测方法。方法用4种不同的CHO细胞蛋白检测试剂对 32批用CHO细胞表达的基因工程产品原液进行检测 ;用标准品替换方法分析 3批红细胞生成素供试品 ;并对 2种CHO... 目的对不同中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞蛋白检测试剂盒进行比较分析以确定最佳检测方法。方法用4种不同的CHO细胞蛋白检测试剂对 32批用CHO细胞表达的基因工程产品原液进行检测 ;用标准品替换方法分析 3批红细胞生成素供试品 ;并对 2种CHO细胞蛋白标准品和 4种供试品进行SDS PAGE分析。结果不同的检测方法之间的结果存在较大的偏差 ;同一检测试剂盒替换标准品后测得结果有较大差异 ;标准品的组成成分和比例存在较大差异。 展开更多

关键词 卵巢细胞 宿主细胞蛋白 基因工程药物原液 酶联免疫吸附试验 测定方法 蛋白残留量

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宿主细胞残留蛋白质对单克隆抗体药物质量影响及其质量控制 被引量：5

6

作者 刘国芳 刘晓志 +1 位作者 高健 王志明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期105-111,共7页

以单克隆抗体药物(monoclonal antibodies,mAbs)为代表的生物制品药物销售在不断扩大,并呈现持续上升势头,mAbs的使用为疾病治疗提供了新策略。随着mAbs使用量增大,对产品质量提出了更高要求,随着宿主细胞表达mAbs水平的不断提高,宿主... 以单克隆抗体药物(monoclonal antibodies,mAbs)为代表的生物制品药物销售在不断扩大,并呈现持续上升势头,mAbs的使用为疾病治疗提供了新策略。随着mAbs使用量增大,对产品质量提出了更高要求,随着宿主细胞表达mAbs水平的不断提高,宿主细胞蛋白(host cell proteins,HCP)含量也随之增加,上下游生产工艺面临不断挑战。HCP所含蛋白质异常复杂,虽然一些HCP可能会被降解,但残留HCP仍会引起药物临床使用中的不良反应,从而影响药物的安全性和有效性。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunesorbent assays,ELISAs)是目前HCP检测的重要方法之一,ELISAs可以定量检测药物中总HCP含量,但存在局限性。对正在开发的包括LC-MS/MS在内的多种分析方法进行HCP检测,将为药物工艺过程开发和验证提供更多依据。讨论了以CHO(Chinese hamster ovary,中国仓鼠卵巢)细胞系为宿主的mAbs生产中,HCP的质量控制及检测分析方法的研究进展。 展开更多

关键词 单克隆抗体药物 宿主细胞残留蛋白质 质量控制 检测方法

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补料优化降低抗体生产过程中宿主细胞蛋白残留的研究 被引量：1

7

作者 支文标 李巍巍 +2 位作者 李士杭 陶菊红 Strubbe Steven 《现代生物医学进展》 CAS 2020年第9期1656-1662,共7页

目的:通过上游工艺中补料培养基优化以降低单克隆抗体生产中的宿主细胞蛋白(HCP)水平。方法:本文在3 L反应器的工艺开发过程中考察了不同的商品化补料培养基和细胞接种密度对HCP水平的影响,筛选出最优条件后,进行了补料工艺的优化和金... 目的:通过上游工艺中补料培养基优化以降低单克隆抗体生产中的宿主细胞蛋白(HCP)水平。方法:本文在3 L反应器的工艺开发过程中考察了不同的商品化补料培养基和细胞接种密度对HCP水平的影响,筛选出最优条件后,进行了补料工艺的优化和金属离子的添加试验,最后将优化后的工艺放大至200 L中试规模。结果:在小试阶段发现Cellvento 4Feed可以显著降低HCP,同时CuSO4可以进一步促进HCP降低的水平,最终将工艺放大至200 L中试进行生产并取得了相似的结果,验证了工艺的稳定性和可放大性,中试规模的HCP水平相比最初的工艺降低了65%左右。结论:补料培养基优化可以有效降低细胞对HCP的比生产速率,使收获液中整体的HCP水平显著下降。 展开更多

关键词 宿主细胞蛋白 补料优化 工艺放大 抗体生产 蛋白残留

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ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量的验证 被引量：1

8

作者 程小玲 罗敏 +6 位作者 程尧 申瑷琳 郭依依 张娟 李娟娟 施金荣 段凯 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第5期33-38,共6页

目的验证ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)中Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量的适用性。方法用同一批ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量,验证其... 目的验证ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)中Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量的适用性。方法用同一批ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量,验证其专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、范围、定量限和耐用性等指标。结果将样品用2种不同稀释液(样品稀释液和疫苗稀释液)稀释后,检测Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明该方法专属性强;同一检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL;不同检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明具有良好的重复性和中间精密度;准确度试验中回收率均在99%~106%,CV为2%;在12.5~400.0 ng/mL的线性范围内,标准曲线线性良好(R^(2)>0.98);定量限为50.0 ng/mL;显色时间在25~35 min内对实验无影响,显色温度在36~37℃内对实验无影响,耐用性良好。结论ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量具有较好的专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性和耐用性,可用于sIPV中Vero细胞HCP残留量的检测。 展开更多

关键词 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗 VERO细胞 宿主细胞蛋白残留量 酶联免疫吸附试验 验证

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流感疫苗工艺特异性MDCK宿主蛋白ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1

9

作者 韩天 邓涛 +2 位作者 张哲罡 张家友 杨晓明 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第6期29-37,共9页

目的建立一种能够检测MDCK细胞基质流感疫苗中宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)含量的双抗体夹心ELISA并进行验证。方法通过培养MDCK细胞获取工艺特异性的MDCK HCP,进一步处理获得参考品。将MDCK HCP分别免疫新西兰兔和波尔山羊获得... 目的建立一种能够检测MDCK细胞基质流感疫苗中宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)含量的双抗体夹心ELISA并进行验证。方法通过培养MDCK细胞获取工艺特异性的MDCK HCP,进一步处理获得参考品。将MDCK HCP分别免疫新西兰兔和波尔山羊获得抗HCP的多克隆抗体。抗体经纯化后进行SDS-PAGE分析,间接ELISA分析鉴定抗体效价并验证特异性,选择效价较高的兔抗体作为包被抗体,使用HRP标记羊抗体获得显示抗体,从而建立检测MDCK HCP的双抗体夹心ELISA。确定该方法所用抗体的工作浓度以及线性范围,验证准确性、重复性、中间精密度、耐用性和特异性。然后,使用该方法对生产过程中的样品进行检定,并将检测结果与商品试剂盒的检测结果进行比对。结果制备的HCP参考品相对分子质量分布在25000~80000之间,抗原质量浓度为31.74μg/mL。免疫新西兰兔和波尔山羊获得高质量抗体,抗体效价分别为1∶512000、1∶128000,纯化后的多抗特异性良好。选择抗体效价较高的兔抗体作为包被抗体,工作浓度较高的酶标羊抗作为显示抗体建立双抗体夹心ELISA。方阵滴定法确定了包被抗体工作质量浓度为4μg/mL,显示抗体的工作浓度为1∶3200,该方法在20~400 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)>0.99),不同浓度的MDCK HCP回收率在95.62%~113.82%之间,CV<10%,重复性和中间精密度结果的CV<10%,显示抗体孵育时间在0.5~1.5 h内对实验无影响,显色时间在10~20 min内对实验无影响,特异性良好。使用该方法对生产样品进行检测,与商用试剂盒的检测结果差异无统计学意义(P=0.236,P>0.05)。结论建立了能检测MDCK细胞基质流感疫苗中残留HCP的双抗体夹心ELISA,方法学验证结果良好,可用于MDCK细胞基质流感疫苗生产中残留HCP的检定,对疫苗生产质量控制具有重要意义。 展开更多

关键词 宿主细胞蛋白 mdck细胞 工艺特异性 ELISA 质量控制

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无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺的初步建立 被引量：6

10

作者 刘丽 郭骐源 +3 位作者 郝建丽 郭丹丹 张雪梅 吴业红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1100-1104,1110,共6页

目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase■核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核... 目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase■核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件。采用两步层析法,探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)和上样缓冲液盐离子浓度(150、500、1 000 mmol/L)对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)对离子层析介质纯化效果的影响。根据确定的参数进行3批次纯化工艺样品的检测。结果病毒浓缩液经10 U/mL Benzonase?核酸酶37℃酶解6 h后,DNA去除率即可达99%以上。确定复合介质的流速为60 cm/h,上样缓冲液组成为150 mmol/L NaCl+50 mmol/L Tris,pH 7.4,确定离子交换介质流速为150 cm/h。3批纯化工艺样品去除了99.94%的宿主细胞残留蛋白和99.99%的残留DNA,残留DNA达欧盟标准,不高于10 ng/剂。结论初步建立了无血清悬浮MDCK细胞流感疫苗的下游纯化工艺。 展开更多

关键词 核酸酶 悬浮mdck细胞 无血清培养 流感病毒 残留DNA 残留蛋白 柱层析

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酿酒酵母残留蛋白ELISA定量检测方法的建立 被引量：3

11

作者 赵玉秀 马可 +5 位作者 梁宏阳 苏桂民 赵硕 李爱灵 张月兰 王辉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第8期1039-1042,共4页

目的建立酿酒酵母残留蛋白(Host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法,为重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)及相关生物制品的质量控制提供依据。方法制备酿酒酵母全细胞蛋白参考品,以其为抗原,免疫家兔,采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,SDS-PAG... 目的建立酿酒酵母残留蛋白(Host cell protein,HCP)ELISA定量检测方法,为重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)及相关生物制品的质量控制提供依据。方法制备酿酒酵母全细胞蛋白参考品,以其为抗原,免疫家兔,采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗体,SDS-PAGE分析纯度,免疫双向扩散法测定抗体效价,Western blot法分析抗体的特异性。以制备的抗酿酒酵母多克隆抗体作为包被抗体,HRP标记的抗酿酒酵母多克隆抗体作为检测抗体,建立酿酒酵母抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法;梯度稀释酿酒酵母蛋白抗原参考品,并绘制标准曲线,确定该方法的线性范围及检测限,并进行特异性、准确度、精密度及适用性验证。结果共制备3批酿酒酵母抗原蛋白,其平均含量分别为1.61、1.64和1.63 mg/ml;纯化的IgG抗体纯度为91.7%,抗体效价为1∶64,能与酿酒酵母蛋白多数条带结合;酿酒酵母蛋白抗原浓度在6.25～200 ng/ml的范围内,线性关系良好(R2>0.99),最低检测限为6.25 ng/ml;用建立的方法检测小牛血清、人血白蛋白、MEM培养基、Vero细胞上清蛋白、Vero细胞乙型脑炎疫苗及PHK细胞狂犬疫苗,均无交叉反应,特异性良好;检测不同浓度的抗原回收率为97.6%～107.00%,变异系数均<10%,最低定量检测限为25 ng/ml;检测3批酿酒酵母重组乙型肝炎疫苗生产各工序中酿酒酵母蛋白的残留量,能有效反映杂蛋白去除率。结论成功建立了酿酒酵母HCP双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法特异性强,精密度及准确度良好,可用于生物制品中酿酒酵母HCP的检测。 展开更多

关键词 酿酒酵母 多克隆抗体 双抗体夹心法 宿主细胞残留蛋白

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细胞培养流感病毒H5N1的纯化方法研究 被引量：2

12

作者 张哲罡 罗丹 +8 位作者 张家友 赵巍 王英 邱冉 孟子延 韩天 夏志武 李长贵 杨晓明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期933-936,共4页

目的降低H5N1甲型流感病毒中宿主细胞残留蛋白质和DNA含量。方法首先使用Core 700分子筛去除宿主残留蛋白质,再使用Capto Q阴离子交换层析柱去除宿主残留DNA,对多批次MDCK细胞培养的H5N1病毒液进行纯化。纯化后的病毒液经荧光定量PCR、... 目的降低H5N1甲型流感病毒中宿主细胞残留蛋白质和DNA含量。方法首先使用Core 700分子筛去除宿主残留蛋白质,再使用Capto Q阴离子交换层析柱去除宿主残留DNA,对多批次MDCK细胞培养的H5N1病毒液进行纯化。纯化后的病毒液经荧光定量PCR、血凝试验、单扩试验等结果综合评价纯化效果。除层析外,本实验还设置了广谱核酸酶对照组。结果在不使用广谱核酸酶的条件下,宿主DNA去除率为99.62%,宿主蛋白质残留去除率为98.1%,血凝素(HA)抗原回收率为66.96%。结论本研究提供了一套对于以细胞基质制备的流感疫苗有较好效果的纯化策略,宿主细胞的DNA和蛋白质有较高去除率,且HA回收率较高,纯化结果不劣于添加广谱核酸酶的方法,有可能应用于实际疫苗生产。 展开更多

关键词 流感病毒 mdck细胞 宿主蛋白 宿主DNA 纯化

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正辛酸沉淀在单克隆抗体纯化中的工艺优化与应用 被引量：2

13

作者 杨忠华 周建芹 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3757-3771,共15页

为应对治疗性抗体快速增长的市场需求,抗体上游细胞培养规模和表达量水平已显著提高,而下游纯化工艺的生产效率则相对落后,下游处理能力已成为限制抗体产能的瓶颈。本研究以单克隆抗体mab-X为实验材料,优化了细胞培养液、低pH病毒灭活... 为应对治疗性抗体快速增长的市场需求,抗体上游细胞培养规模和表达量水平已显著提高,而下游纯化工艺的生产效率则相对落后,下游处理能力已成为限制抗体产能的瓶颈。本研究以单克隆抗体mab-X为实验材料,优化了细胞培养液、低pH病毒灭活收集液2种模式的正辛酸(caprylic acid,CA)沉淀工艺条件,并研究了CA处理去除聚体、CA处理灭活病毒等2种应用,在小试的基础上,采用低pH病毒灭活收集液CA沉淀的模式进行了500 L细胞培养规模生产放大研究,对沉淀前后的产品质量和收率进行了检测和对比。结果显示,两种模式的CA沉淀均可显著降低宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留和聚体含量,在聚体去除实验中CA沉淀可去除约15%的聚体,病毒灭活研究显示CA对逆转录模型病毒具有完全的病毒灭活能力。在放大生产规模中,下游依次进行了深层过滤收获、亲和层析、低pH病毒灭活、CA沉淀及深层过滤、阳离子交换层析,CA沉淀过程中混合时间和搅拌速度显著影响CA沉淀效果,CA沉淀处理后低pH病毒灭活液中的HCP残留量降低了895倍,沉淀后产品纯度和HCP残留均已控制在单克隆抗体质量要求范围内,CA沉淀可以减少传统纯化工艺中的一个精纯步骤。总之,下游工艺中采用CA沉淀,能够精简传统纯化工艺,并完全满足mab-X的纯化质量要求,而且能提高生产效率、降低生产成本。本研究结果将推动CA沉淀在单克隆抗体下游纯化生产中的应用,为解决目前传统纯化工艺的问题提供参考。 展开更多

关键词 工艺放大 宿主细胞蛋白残留 聚体 病毒灭活 Triton X-100替换

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应用Passing-Bablok回归对试剂盒批间检测差异性的评估 被引量：2

14

作者 李黎 施金荣 +1 位作者 郭靖 杨爽 《国际生物制品学杂志》 CAS 2020年第4期181-184,共4页

目的用Passing-Bablok回归分析同一厂家不同批次宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留检测试剂盒测量差异性。方法用3个不同批次(A、B、C)试剂盒在检测浓度范围内测定不同浓度样品的HCP残留。应用Passing-Bablok回归分析测定结果。... 目的用Passing-Bablok回归分析同一厂家不同批次宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留检测试剂盒测量差异性。方法用3个不同批次(A、B、C)试剂盒在检测浓度范围内测定不同浓度样品的HCP残留。应用Passing-Bablok回归分析测定结果。结果批次A与批次B、C之间测量结果相关系数均>96%(P<0.01)。批次A和B测定结果回归方程为Y=-0.39+1.00X,截距95%置信区间(confidential interval,CI)-0.67~0.24,斜率95% CI 1.00~1.01;批次A和C测定结果回归方程为Y=-2.23+1.02X,截距95% CI-4.48^-1.16,斜率95%CI 1.00~1.04。结论批次A和B测定结果一致性良好,批次A与C测定结果存在误差。Passing-Bablok回归可用于不同批次间试剂盒检测差异性分析。 展开更多

关键词 回归分析 试剂盒 宿主细胞蛋白残留 一致性

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