目的探究瑞马唑仑(RZ)调节Notch-1/发状分裂相关增强子(Hes)信号通路对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、模型组(Model组)、低剂量RZ组(RZ-L组,3mg/kg RZ)、高剂量RZ组(RZ-H组,6mg/kg RZ)和高...目的探究瑞马唑仑(RZ)调节Notch-1/发状分裂相关增强子(Hes)信号通路对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、模型组(Model组)、低剂量RZ组(RZ-L组,3mg/kg RZ)、高剂量RZ组(RZ-H组,6mg/kg RZ)和高剂量RZ+Notch-1激活剂Jagged1组(RZ-H+Jagged1组,6mg/kg RZ+0.67mg/kg Jagged1),每组12只。在大鼠背部建立20%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤(烧伤)模型,之后注射铜绿假单胞菌制备烧伤脓毒症模型。HE染色观察回肠组织病理变化,并进行肠黏膜损伤评分(Chiu’s评分)。ELISA法检测血清内毒素、D-乳酸和二胺氧化酶(DAO)及回肠组织白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)的水平。RT-qPCR法检测回肠组织Notch-1,Hes mRNA表达。Western Blot检测回肠组织Notch-1/Hes信号通路相关蛋白表达。结果与Normal组相比,Model组大鼠肠黏膜损伤评分(5.30±0.48分vs 1.00±0.52分)、血清内毒素(135.69±16.24 pg/ml vs 62.48±3.23 pg/ml),D-乳酸(1403.58±68.97 pg/ml vs 752.06±25.29 pg/ml)和DAO水平(137.55±12.37 pg/ml vs 58.52±4.43 pg/ml)、回肠组织IL-6(186.45±16.37 ng/ml vs 21.32±3.66 ng/ml),TNF-α(163.37±11.40 ng/ml vs 15.52±1.03 ng/ml)和MPO水平(8.94±0.92 U/ml vs 2.35±0.33 U/ml)及Notch-1 mRNA(1.86±0.19 vs 1.00±0.10)和蛋白(0.79±0.08 vs 0.21±0.02),Hes-1 mRNA(2.13±0.21 vs 1.00±0.12)和蛋白(0.88±0.09 vs 0.32±0.03)表达水平均升高,差异具有统计学意义(t=14.294~47.368,均P<0.05)。与Model组相比,RZ-L组和RZ-H组相应指标变化与上述相反,差异具有统计学意义(tRZ-L=5.650~21.448,tRZ-H=4.435~42.403,均P<0.05)。Notch-1激活剂Jagged1减弱了RZ对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的治疗作用。结论RZ可能通过抑制Notch-1/Hes信号通路减轻烧伤脓毒症模型大鼠的肠道损伤。展开更多
目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建K...目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞。用Notch1/Hes1信号通路激动剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞进行干预。用CCK-8实验、蛋白印迹法、免疫荧光、流式细胞术检测细胞活性、细胞凋亡率、KIF2A、cleaved-caspase-3、Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 BEL7402/5-FU细胞具有强5-FU耐药性,其IC_(50)为344.2μmol/L,是BEL7402细胞的92倍(IC_(50)=3.730μmol/L)。与BEL7402细胞比较,BEL7402/5-FU细胞中KIF2A蛋白表达明显增加(P<0.001);与si-NC组比较,si-KIF2A组BEL7402/5-FU细胞活性明显下降(P<0.001)、凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.001),另外Notch1和Hes1蛋白表达明显减少(P<0.001);与si-NC+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU组BEL7402/5-FU细胞活性显著下降(P<0.001)、凋亡率显著增加(P<0.001);与si-KIF2A+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU+VPA组BEL7402/5-FU细胞活性明显提高(P<0.001)、凋亡率显著降低(P<0.001)、Notch1和Hes1蛋白表达量显著增加(P<0.001)。结论 KIF2A的沉默通过抑制Notch1/Hes1信号通路活性减弱BEL7402/5-FU细胞对5-FU的化疗耐药性。展开更多
目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Re...目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Res(M-Res)和high-Res(H-Res)3个浓度给药组。应用流式细胞术和瑞氏-吉姆萨染色法检测外周血及脾细胞悬液中白血病细胞百分比,HE染色法观察脾脏和骨髓组织病理形态,RT-q PCR法检测脾脏组织中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b和PTEN m RNA表达水平,Western blot法检测Notch1、Hes-1、c-Myc、p-PTEN和PTEN蛋白表达水平。结果:与对照组相比,T-ALL组小鼠外周血中白血病细胞明显增多,脾脏及骨髓组织中白血病细胞弥漫性浸润,脾脏中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b m RNA表达水平和Notch1、Hes-1、c-Myc蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),PTEN m RNA及其蛋白水平显著降低(P<0.01),经白藜芦醇处理后,H-Res组以上各项指标较T-ALL组均获得逆转。结论:白藜芦醇具有抗小鼠T-ALL的作用,其机制可能通过抑制Notch1信号通路发挥作用。展开更多
文摘目的探究瑞马唑仑(RZ)调节Notch-1/发状分裂相关增强子(Hes)信号通路对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的影响。方法将60只SD大鼠随机分为正常组(Normal组)、模型组(Model组)、低剂量RZ组(RZ-L组,3mg/kg RZ)、高剂量RZ组(RZ-H组,6mg/kg RZ)和高剂量RZ+Notch-1激活剂Jagged1组(RZ-H+Jagged1组,6mg/kg RZ+0.67mg/kg Jagged1),每组12只。在大鼠背部建立20%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤(烧伤)模型,之后注射铜绿假单胞菌制备烧伤脓毒症模型。HE染色观察回肠组织病理变化,并进行肠黏膜损伤评分(Chiu’s评分)。ELISA法检测血清内毒素、D-乳酸和二胺氧化酶(DAO)及回肠组织白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)的水平。RT-qPCR法检测回肠组织Notch-1,Hes mRNA表达。Western Blot检测回肠组织Notch-1/Hes信号通路相关蛋白表达。结果与Normal组相比,Model组大鼠肠黏膜损伤评分(5.30±0.48分vs 1.00±0.52分)、血清内毒素(135.69±16.24 pg/ml vs 62.48±3.23 pg/ml),D-乳酸(1403.58±68.97 pg/ml vs 752.06±25.29 pg/ml)和DAO水平(137.55±12.37 pg/ml vs 58.52±4.43 pg/ml)、回肠组织IL-6(186.45±16.37 ng/ml vs 21.32±3.66 ng/ml),TNF-α(163.37±11.40 ng/ml vs 15.52±1.03 ng/ml)和MPO水平(8.94±0.92 U/ml vs 2.35±0.33 U/ml)及Notch-1 mRNA(1.86±0.19 vs 1.00±0.10)和蛋白(0.79±0.08 vs 0.21±0.02),Hes-1 mRNA(2.13±0.21 vs 1.00±0.12)和蛋白(0.88±0.09 vs 0.32±0.03)表达水平均升高,差异具有统计学意义(t=14.294~47.368,均P<0.05)。与Model组相比,RZ-L组和RZ-H组相应指标变化与上述相反,差异具有统计学意义(tRZ-L=5.650~21.448,tRZ-H=4.435~42.403,均P<0.05)。Notch-1激活剂Jagged1减弱了RZ对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的治疗作用。结论RZ可能通过抑制Notch-1/Hes信号通路减轻烧伤脓毒症模型大鼠的肠道损伤。
文摘目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞。用Notch1/Hes1信号通路激动剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞进行干预。用CCK-8实验、蛋白印迹法、免疫荧光、流式细胞术检测细胞活性、细胞凋亡率、KIF2A、cleaved-caspase-3、Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 BEL7402/5-FU细胞具有强5-FU耐药性,其IC_(50)为344.2μmol/L,是BEL7402细胞的92倍(IC_(50)=3.730μmol/L)。与BEL7402细胞比较,BEL7402/5-FU细胞中KIF2A蛋白表达明显增加(P<0.001);与si-NC组比较,si-KIF2A组BEL7402/5-FU细胞活性明显下降(P<0.001)、凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.001),另外Notch1和Hes1蛋白表达明显减少(P<0.001);与si-NC+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU组BEL7402/5-FU细胞活性显著下降(P<0.001)、凋亡率显著增加(P<0.001);与si-KIF2A+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU+VPA组BEL7402/5-FU细胞活性明显提高(P<0.001)、凋亡率显著降低(P<0.001)、Notch1和Hes1蛋白表达量显著增加(P<0.001)。结论 KIF2A的沉默通过抑制Notch1/Hes1信号通路活性减弱BEL7402/5-FU细胞对5-FU的化疗耐药性。
文摘目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Res(M-Res)和high-Res(H-Res)3个浓度给药组。应用流式细胞术和瑞氏-吉姆萨染色法检测外周血及脾细胞悬液中白血病细胞百分比,HE染色法观察脾脏和骨髓组织病理形态,RT-q PCR法检测脾脏组织中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b和PTEN m RNA表达水平,Western blot法检测Notch1、Hes-1、c-Myc、p-PTEN和PTEN蛋白表达水平。结果:与对照组相比,T-ALL组小鼠外周血中白血病细胞明显增多,脾脏及骨髓组织中白血病细胞弥漫性浸润,脾脏中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b m RNA表达水平和Notch1、Hes-1、c-Myc蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),PTEN m RNA及其蛋白水平显著降低(P<0.01),经白藜芦醇处理后,H-Res组以上各项指标较T-ALL组均获得逆转。结论:白藜芦醇具有抗小鼠T-ALL的作用,其机制可能通过抑制Notch1信号通路发挥作用。
