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Nested polymerase chain reaction in detection of Plasmodium vivax sporozoites in mosquitoes 被引量:1
1
作者 李凤舞 牛春 叶炳辉 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2001年第6期94-97,111,共5页
Objective To detect malaria DNA in mosquitoes.Methods A nested polymerase chain reaction (nested PCR) procedure which amplifies a 121 bp DNA of a SSUrRNA gene specific to Plasmodium vivax was used.Results In labora... Objective To detect malaria DNA in mosquitoes.Methods A nested polymerase chain reaction (nested PCR) procedure which amplifies a 121 bp DNA of a SSUrRNA gene specific to Plasmodium vivax was used.Results In laboratory-infected mosquitoes, nested PCR could detect as few as 3 sporozoites or 1 infected mosquito mixed in a group of 99 normal ones. Furthermore, no specific 121?bp band was seen with DNA templates from other malaria parasites or negative mosquitoes.Conclusion Sensitivity and specificity obtained indicated an advantage of the nested PCR over DNA probes or direct PCR for the detection of Plasmodium vivax sporozoites in mosquitoes with low-grade parasitic infections. 展开更多
关键词 plasmodium vivax · mosquito · nested polymerase chain reaction · detection
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套式/多重PCR方法应用于疟疾诊断与监测的初步评价 被引量:12
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作者 郭传坤 黎学铭 +5 位作者 林珍 王光泽 杨亚明 李锦辉 蒋智华 黄天谊 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期277-280,共4页
目的与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR(UT-PCR)在疟疾监测中的应用价值。方法在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较... 目的与镜检法比较评价标签引物-套式/多重PCR(UT-PCR)在疟疾监测中的应用价值。方法在海南、云南省恶性疟和间日疟混合流行区和广西疟疾控制区的疟疾监测中,采集初诊为疟疾或疑似疟疾的发热患者的血片与滤纸血样400份,在双盲条件下比较镜检法与UT-PCR的初检结果,对结果不一致的血片再次镜检复查,同时对其滤纸血样重复PCR2~3次;评估UT-PCR与镜检法的敏感性和特异性。结果400例发热患者血样中,镜检法初检检出疟原虫阳性234例,其中恶性疟125例,间日疟109例;UT-PCR检出疟原虫阳性235例,其中恶性疟124例,间日疟109例;恶性疟和间日疟混合感染2例。两法初检结果一致的血样占92.5%(370/400),其中阴性154例,阳性216例(间日疟117例,恶性疟99例)。复查25份初检结果不一致的血样,包括镜检阴性PCR阳性11例,镜检阳性PCR阴性10例,镜检为恶性疟PCR为间日疟3例,镜检为间日疟而PCR为混合感染1例,其中15份与UT-PCR的初检结果一致,7份"假阳性"原因不明,仅3份为PCR的假阴性。根据复查结果评估PCR的敏感性为99.6%,特异性为98.8%。结论采用更敏感的UT-PCR疟疾诊断方法有助于解决疟疾诊断与鉴别诊断中的疑难问题,提高疟疾监测的质量和效率。 展开更多
关键词 疟疾诊断 间日疟 恶性疟 套式 多重pcr
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套式PCR检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性 被引量:5
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作者 李凤舞 牛春 +2 位作者 叶炳辉 诸欣平 陈佩惠 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期164-167,共4页
目的:分析套式聚合酶链反应技术检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性。方法:采用2对针对间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)的特异引物,利用套式PCR技术,从蚊体DNA样本中,扩增间日疟原虫SSUrDNA... 目的:分析套式聚合酶链反应技术检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性。方法:采用2对针对间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因(SSUrDNA)的特异引物,利用套式PCR技术,从蚊体DNA样本中,扩增间日疟原虫SSUrDNA片段,进行间日疟原虫的检测。结果:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可见扩增出特异的约121bp大小的DNA片段,估测每份蚊虫DNA样本中含有3个以上子孢子或100只蚊中含有1只阳性蚊即可得此片段,而对恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、约氏疟原虫及正常蚊虫DNA不能扩增出此片段。结论:此法具有高度的敏感性和特异性。 展开更多
关键词 疟原虫 间日疟原虫 蚊虫 套式pcr
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套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性和稳定性初探 被引量:8
4
作者 郭传坤 黎学铭 +4 位作者 李锦辉 毛玮 林珍 杜进发 黄天谊 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期213-216,共4页
目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感... 目的提高标签引物-套式/多重PCR诊断疟疾的敏感性、特异性与稳定性。方法用滤纸法采集非疟疾发热病人血样30份及其他传染病(感冒,流感,伤寒,肝炎等)患者血样20份;抽取恶性疟和间日疟各1例患者血4m1,进行系列稀释制备不同疟原虫含量的感染血样;健康者血样作对照。用热裂解法制备DNA模板,用线粒体细胞色素氧化酶基因作为靶基因,应用相关软件和网络资源(PrimerPremier5.0,PUBMED,NCBI-BLAST和Mfold服务器)设计和优化标签引物-套式/多重PCR,并用于检测所采集制备的各种血样。结果间日疟与恶性疟患者血系列稀释为含1000、100、10和1个虫/μl后经标签引物-套式/多重PCR检测,恶性疟和间日疟患者各稀释含虫血样分别在611bp和255bp出现1条带,能检测到原虫密度均为1个虫/μl血;非疟疾发热病人血样30份及其他传染病患者血样均为阴性;健康者血样未出现扩增条带,每种血样反复测试3次以上均获得同样结果。结论经优化的标签引物-套式/多重PCR在疟疾诊断中具有较高的敏感性、特异性和稳定性。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 间日疟原虫 套式/多重pcr 标签引物 疟疾诊断
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巢氏PCR检测血片中低密度间日疟原虫的研究 被引量:1
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作者 尚婧晔 郁涛 +2 位作者 邹晏 李黎 刘阳 《西部医学》 2018年第6期798-802,共5页
目的探讨巢式PCR应用于检测低密度疟原虫血片DNA的方法。方法以健康人抗凝血为稀释液提取不同浓度梯度间日疟原虫血片DNA,测定其最低检出限,将一份含有高密度间日疟原虫的抗凝血样按照1:10、1:100、1:1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:1... 目的探讨巢式PCR应用于检测低密度疟原虫血片DNA的方法。方法以健康人抗凝血为稀释液提取不同浓度梯度间日疟原虫血片DNA,测定其最低检出限,将一份含有高密度间日疟原虫的抗凝血样按照1:10、1:100、1:1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000比例进行稀释,制成9个浓度梯度血样。每个浓度血样按照厚血膜5ul、薄血膜2ul同时制作2张血片,连续稀释(9个稀释度)一份含有高密度间日疟原虫的EDTA抗凝血样本,制作标准血片,同时进行所制得的血片中厚、薄血膜通过显微镜计数后,分别用以提取DNA,进行和巢式PCR检测。结果间日疟原虫血片厚血膜的检出限为1:16000(0.8个虫/μl血),薄血膜检出限为1:100,与镜下计数水平一致。结论巢式PCR适用于低密度血片中间日疟原虫DNA的检测,具有较高的检测意义。 展开更多
关键词 间日疟原虫 低密度 血片 巢氏pcr
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应用CSP基因型简捷PCR鉴定法对间日疟原虫分型的初步评价
6
作者 董莹 刘慧 张再兴 《实用寄生虫病杂志》 2001年第2期67-69,共3页
目的初步评价 CSP基因型简捷 PCR鉴定法在对间日疟原虫进行分型时的实用性。方法利用套式等位特异 PCR,检测间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因结构多态 ,以产生的多样性 DNA片段作为对间日疟原虫分型的依据。结果经检测 4 2份被镜检确... 目的初步评价 CSP基因型简捷 PCR鉴定法在对间日疟原虫进行分型时的实用性。方法利用套式等位特异 PCR,检测间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因结构多态 ,以产生的多样性 DNA片段作为对间日疟原虫分型的依据。结果经检测 4 2份被镜检确诊为间日疟滤纸血样 ,被分型 3 3份 ,分型率为 78.57% ,温带型占 3 0 .3 0 % (1 0 / 3 3 ) ,热带型占 69.70 % (2 3 / 3 3 ) ,未检到 PV- 型间日疟原虫。当第二次对 3 3份血样检测时93 .94 % (3 1 / 3 3 )被分型 ,其分型符合率为 77.4 2 % (2 4 / 3 1 )。结论该方法简便、快速 ,且分型不受采血时机限制 ,但作为云南间日疟的分型方法时 。 展开更多
关键词 间日疟原虫 环子孢子蛋白基因 套式等位特异 多样性DNA片段
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多重巢式PCR检测恶性疟和间日疟原虫 被引量:5
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作者 孙菲 万向阳 +2 位作者 李欢 文岚 王晓春 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期565-567,共3页
目的建立鉴别诊断恶性疟原虫(P.f)和间日疟原虫(P.v)的多重巢式PCR法。方法针对P.f、P.v 18S rRNA基因设计外引物和内引物,优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的多重巢式PCR,并检测54例疑似疟疾临床标本,以镜检法... 目的建立鉴别诊断恶性疟原虫(P.f)和间日疟原虫(P.v)的多重巢式PCR法。方法针对P.f、P.v 18S rRNA基因设计外引物和内引物,优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的多重巢式PCR,并检测54例疑似疟疾临床标本,以镜检法为金标准评价敏感性和特异性等指标。结果该方法可扩增出162 bp(P.f)和112 bp(P.v)基因片段,并能检出混合感染。该方法检测P.f,敏感性为87.50%、特异性为63.33%;检测P.v,敏感性为69.23%、特异性为68.29%。结论所建立的多重巢式PCR方法能可靠诊断疟疾并鉴别虫种,敏感性高,在混合感染的诊断方面具有优越性。 展开更多
关键词 疟疾 恶性疟原虫 间日疟原虫 多重巢式pcr
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套式PCR检测不同地理株间日疟原虫及部分SSU rRNA基因序列鉴定 被引量:1
8
作者 刘强 诸欣平 +2 位作者 甘绍伯 周蕾 姜洪杰 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1999年第3期177-179,共3页
为了确定扩增的特定 S S Ur R N A 基因片段是否适用于不同地理株间日疟原虫的检测,在以往工作的基础上,用同一套式 P C R 体系对 22 例四川和 30 例云南患者及1 例在印度感染疟疾的归国患者进行间日疟筛查,并从 P.... 为了确定扩增的特定 S S Ur R N A 基因片段是否适用于不同地理株间日疟原虫的检测,在以往工作的基础上,用同一套式 P C R 体系对 22 例四川和 30 例云南患者及1 例在印度感染疟疾的归国患者进行间日疟筛查,并从 P.v 阳性的四川和云南血样中任取 1 例,与 P.v 阳性的印度血样分别扩增,用 P C R 产物测序,结果显示3 者序列完全一致;与美国 N C B I的网上基因数据库比较,发现这3 者又与萨尔瓦多等其他5 个间日疟原虫不同地理株的小亚单位核糖体核糖核酸相应基因片段完全一致。该结果进一步证实了所扩增的片段确为目的片段,并提示该诊断体系可以适用于不同地区的间日疟原虫地理株的检测。 展开更多
关键词 套式pcr 间日疟原虫 地理株 DNA序列 鉴定
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检测滤纸干血滴中间日疟原虫(英文) 被引量:3
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作者 牛春 诸欣平 +1 位作者 周蕾 刘强 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2000年第1期7-10,共4页
从滤纸干血滴上用Chelex处理洗脱下的疟原虫DNA,经套式PCR扩增间日疟原虫SSUrRNA基因特异性121bp片段,分析该方法的敏感性和特异性。37例血样检测结果全部阳性,当原虫密度低至25个原虫/uL血时仍可成功检测到该特异条带,且其它三种人疟原... 从滤纸干血滴上用Chelex处理洗脱下的疟原虫DNA,经套式PCR扩增间日疟原虫SSUrRNA基因特异性121bp片段,分析该方法的敏感性和特异性。37例血样检测结果全部阳性,当原虫密度低至25个原虫/uL血时仍可成功检测到该特异条带,且其它三种人疟原虫(恶性疟原虫,三日疟原虫和卵形疟原虫)血样均为阴性。提示滤纸干血滴与PCR扩增技术相结合,是疟疾诊断或流行病学调查的实用工具。 展开更多
关键词 间日疟原虫 套式pcr 滤纸于血滴 Chelex 疟疾
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广东省中山市间日疟原虫CSP基因型初步调查 被引量:1
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作者 黄志彪 阮彩文 +1 位作者 黄建康 潘波 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2000年第4期250-251,共2页
应用改良的 Chelex- 10 0滤纸处理法对广东省中山市 40例间日疟病人滤纸血标本进行处理后经 PCR扩增 ,根据扩增结果判别 CSP基因型。结果 40例全部为 PV- 型温带族 ,未发现有 PV- 型热带族和 PV- 型病例。表明广东省中山市间日疟病... 应用改良的 Chelex- 10 0滤纸处理法对广东省中山市 40例间日疟病人滤纸血标本进行处理后经 PCR扩增 ,根据扩增结果判别 CSP基因型。结果 40例全部为 PV- 型温带族 ,未发现有 PV- 型热带族和 PV- 型病例。表明广东省中山市间日疟病人所感染的疟原虫优势虫株为 PV- 型温带族。 展开更多
关键词 间日疟原虫 环子孢子蛋白 套式pcr 基因型鉴定
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两种检测方法在间日疟和卵形疟诊断中的应用分析 被引量:4
11
作者 李联军 贾西帅 周水茂 《热带病与寄生虫学》 2018年第1期9-11,44,共4页
目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012~2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占... 目的分析疟原虫镜检和巢式PCR检测间日疟和卵形疟效果。方法收集2012~2016年输入性间日疟和卵形疟病例血样,巢式PCR检测疟原虫ssRNA基因,并与显微镜检结果进行比对。结果显微镜检和巢式PCR检测71份血样,间日疟、卵形疟、混合感染分别占74.6%、25.4%、0%和63.4%、29.6%、7%,符合率为81.7%;亚洲23份血样,镜检与巢式PCR均为间日疟,符合率为100%,巢式PCR检测非洲血样48份,间日疟、卵形疟和混合感染分别占45.8%、43.8%和10.4%,镜检与巢式PCR符合率为72.9%;巢式PCR检测26份卵形疟,经典curtisi、变种wallikeri和混合感染分别占80.8%、11.5%和7.7%,检出变种wallikeri总数占卵形疟19.2%。结论巢式PCR检测疟原虫虫种鉴别优于传统镜检法,可提高疟疾病例诊断水平。 展开更多
关键词 镜检 巢式pcr 间日疟 卵形疟
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云南省边境地区疟原虫18S rRNA基因种类鉴定与序列分析 被引量:3
12
作者 张苍林 周红宁 +4 位作者 聂仁华 刘慧 王剑 李春富 杨亚明 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期220-226,共7页
目的使用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对云南省边境地区镜检为恶性疟和间日疟的患者血样进行鉴定,分析该地区疟原虫18S rRNA基因序列之间的差异。方法 2004-2011年在云南省边境地区西双版纳勐腊、保山腾冲和德宏盈江,及缅甸那威、南... 目的使用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对云南省边境地区镜检为恶性疟和间日疟的患者血样进行鉴定,分析该地区疟原虫18S rRNA基因序列之间的差异。方法 2004-2011年在云南省边境地区西双版纳勐腊、保山腾冲和德宏盈江,及缅甸那威、南卡江、芒东和拉咱等7个县(市)收集镜检为单一感染恶性疟原虫或间日疟原虫的全血或滤纸血样品。采用基于18S rRNA基因的巢式PCR方法对所有血样进行鉴定,阳性PCR产物进行测序。所获序列进行Blastn比对。应用MEGA 6.06软件采用邻接法构建系统进化树。结果 475份镜检为恶性疟原虫(256份)和间日疟原虫(219份)感染的血样中,经18S rRNA基因检测为恶性疟原虫感染的有242例,间日疟原虫感染176例和混合感染57例。镜检法和巢式PCR法检测结果一致的血样占81.7%(388/475)。两法检测不一致的血样发生频率与其原虫密度显著相关(Spearman’s r=-0.408,P<0.05)。多序列比对分析结果显示,共计得到11条、10条恶性疟原虫、间日疟原虫18S rRNA基因同源序列,变异位点分别占2.9%(6/205)和22.5%(27/120)。所获恶性疟原虫18S rRNA基因序列与来自喀麦隆(Gen Bank登录号KC428742)等基因序列聚在一个大的分支,与来自荷兰和巴西的3个恶性疟原虫S型18S rRNA基因序列(GenBank登录号U36465、U36466和U36467)的亲缘关系较远。所获间日疟原虫序列与来自泰国的间日疟原虫A型小亚单位核糖体核糖核酸(SSU r RNA)基因序列(Gen Bank登录号U07367)等聚在一支,与来自泰国的间日疟原虫C型基因序列(Gen Bank登录号U07368)等参考序列亲缘关系较远。结论镜检为单一感染的血样中,巢式PCR检出57例混合感染。云南省边境地区7个县(市)疟原虫18S rRNA基因序列之间无明显差异。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 间日疟原虫 18S RRNA基因 巢式pcr 聚类分析
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缅甸拉咱市2018年蚊类和按蚊疟原虫子孢子感染调查 被引量:2
13
作者 田鹏 孙晓东 +5 位作者 段凯霞 徐艳春 周耀武 郭祥瑞 李仕刚 林祖锐 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期412-416,共5页
目的了解缅甸拉咱市蚊虫种类和按蚊疟原虫子孢子感染情况,为当地疟疾防治提供依据。方法2018年7-9月在缅甸拉咱市选择边境县2 km内的4个居民点为调查点,每个调查点选择5间人房作为捕蚊点,每月2次每次3 d在室内外各悬挂1台诱蚊灯通宵诱蚊... 目的了解缅甸拉咱市蚊虫种类和按蚊疟原虫子孢子感染情况,为当地疟疾防治提供依据。方法2018年7-9月在缅甸拉咱市选择边境县2 km内的4个居民点为调查点,每个调查点选择5间人房作为捕蚊点,每月2次每次3 d在室内外各悬挂1台诱蚊灯通宵诱蚊,捕获的蚊虫进行形态学鉴定。鉴定后的按蚊按5只/组,采用巢式聚合酶链式反应(PCR)检测按蚊疟原虫子孢子阳性率。结果共捕获蚊虫4属2041只,其中库蚊属占39.93%(815/2041),伊蚊属占0.78%(16/2041),阿蚊属占22.20%(453/2041),按蚊属占37.09%(757/2041)。共捕获按蚊10种,其中微小按蚊650只,占捕获按蚊总数的85.87%,为当地优势蚊种;其次为库态按蚊,占5.02%。PCR检测135组667只蚊虫,共有11组样品扩增出间日疟原虫目标片段,均标记为微小按蚊,检出率为8.15%。检测出的11组中,每组至少有1只微小按蚊携带间日疟原虫子孢子,推算微小按蚊疟原虫子孢子最低感染率为1.69%(11/650),其中扎突拱和纯木翁调查点最低感染率分别为1.74%和1.89%,但二者差异无统计学意义(χ^(2)=0.012,P=0.912);吉阳卡和盆龙样调查点疟原虫子孢子感染率均为0。结论微小按蚊是缅甸拉咱市优势按蚊,是当地主要传疟媒介,且疟原虫子孢子感染率较高。 展开更多
关键词 缅甸 拉咱市 蚊虫 按蚊 疟原虫子孢子 巢式聚合酶链式反应
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