目的建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,...目的建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,建立实验室微环境中炭疽芽孢杆菌核酸定量方法;对比微滴式数字PCR方法和平板计数法的定量评估效果,分析ddPCR的灵敏性、特异性和重复性。结果建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900nmol·L^(-1)和250nmol·L^(-1),最佳退火温度为60℃,最佳升降温速度为1℃/s,本方法的最低检测下限为1.12copies·μL^(-1),未发现与常见疫病存在交叉反应,重复性试验的变异系数小于5%。结论本研究中建立的炭疽芽孢杆菌的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为疫情监测、流行病学调查和实验室污染微环境检测提供重要技术。展开更多
文摘目的建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,建立实验室微环境中炭疽芽孢杆菌核酸定量方法;对比微滴式数字PCR方法和平板计数法的定量评估效果,分析ddPCR的灵敏性、特异性和重复性。结果建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900nmol·L^(-1)和250nmol·L^(-1),最佳退火温度为60℃,最佳升降温速度为1℃/s,本方法的最低检测下限为1.12copies·μL^(-1),未发现与常见疫病存在交叉反应,重复性试验的变异系数小于5%。结论本研究中建立的炭疽芽孢杆菌的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为疫情监测、流行病学调查和实验室污染微环境检测提供重要技术。
