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存活素siRNA表达质粒mU6/survivin的抑癌机制研究 被引量：1
1
作者 李莉萍 梁念慈 +1 位作者 张志珍 罗超权 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第11期2063-2067,共5页
目的:在本课题组报导存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)能高效剔降乳腺癌细胞MCF-7中存活素表达的基础上,进一步探讨其抑癌机制。方法:采用MTT法、流式细胞术、Hoechst细胞形态染色和Western blotting等检测mU6/survivin质粒对乳腺... 目的:在本课题组报导存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)能高效剔降乳腺癌细胞MCF-7中存活素表达的基础上,进一步探讨其抑癌机制。方法:采用MTT法、流式细胞术、Hoechst细胞形态染色和Western blotting等检测mU6/survivin质粒对乳腺癌MCF-7细胞多项生物学指标的影响。结果:mU6/survivin质粒作用后,MCF-7细胞的增殖明显地受到抑制;细胞周期被阻滞在G1期,细胞呈现多核化、巨核化;caspase-3被激活,表达升高;IκBα、Cyt C和P21WAF1蛋白表达升高,NF-κB(p65)蛋白表达无明显改变。结论:mU6/survivin质粒沉默MCF-7细胞中存活素表达后,DNA受损细胞停滞在G1期,细胞增殖受到抑制,此过程与Caspase级联放大、线粒体凋亡通路以及细胞周期调控等有关。细胞逃逸有丝分裂关卡的检查,阻断有丝分裂导致的细胞裂亡是其死亡的主要方式。 展开更多
关键词 存活素 sirna表达质粒 乳腺癌细胞 细胞裂亡
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靶向性血小板衍生生长因子siRNA表达质粒的构建及鉴定 被引量：1
2
作者 李发武 卢放根 +2 位作者 余治健 吴福全 王文琦 《中国实用医刊》 2010年第15期15-16,共3页
目的 构建靶向性血小板衍生生长因子(PDGF)B链的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,为进一步研究PDGF基因功能奠定基础.方法 根据PDGF-B链序列设计合成含靶向PDGF基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有Bam HI、HindIII酶切位点的pSilenc... 目的 构建靶向性血小板衍生生长因子(PDGF)B链的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,为进一步研究PDGF基因功能奠定基础.方法 根据PDGF-B链序列设计合成含靶向PDGF基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有Bam HI、HindIII酶切位点的pSilencer3.1-Hlhygro质粒连接,转化大肠杆菌,扩增、纯化得到所需质粒,通过琼脂糖凝胶电泳及基因测序鉴定其分子量及插入片段的序列.结果 PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实PDGF siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.结论 成功构建了靶向性PDGF基因的siRNAs表达质粒. 展开更多
关键词 靶向性 血小板衍生生长因子 sirna表达质粒 克隆构建 测序鉴定 growth factor PDGF-B链 small interfering RNA gel electrophoresis 测序结果 基因功能 插入片段 RNA interference 琼脂糖凝胶电泳 gene sequence 转化大肠杆菌 小分子干扰 序列 设计合成 酶切位点
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抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强抗肿瘤药物的抑癌作用 被引量：3
3
作者 李莉萍 罗超权 +1 位作者 张志珍 梁念慈 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期163-166,共4页
目的探讨抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强对肿瘤化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/hIAP-2质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒... 目的探讨抑制hIAP-2在MCF-7乳腺癌细胞中的表达增强对肿瘤化疗药物抑癌作用的影响。方法采用MTT法检测mU6/hIAP-2质粒与多种常规肿瘤化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的联合作用。结果比较单纯化疗药物作用组的各相应浓度点,siRNA表达质粒mU6/hIAP-2与化疗药物顺铂、环磷酰胺或5-氟尿嘧啶合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率均明显提高,差异有统计学意义(P<0.01),但与秋水仙碱合用组对乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖抑制率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);对靶向DNA药物如顺铂、环磷酰胺和5-氟尿嘧啶的抗癌性能具有协同增强作用(二者合用效应Q值均≥1),但对靶向微管的药物秋水仙碱具有拮抗作用(Q值<1)。结论在敲除乳腺癌细胞中人凋亡抑制蛋白-2功能的基础上进行药物化疗,可能是乳腺癌治疗的一个新的可行方向。 展开更多
关键词 hIAP-2 sirna表达质粒 抗肿瘤化疗药物 联合作用
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成釉细胞瘤中MMP-2的表达及RNA干扰的抑制作用 被引量：5
4
作者 曾东林 黄洪章 +2 位作者 张彬 潘朝斌 梁蔚文 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2005年第4期315-319,共5页
目的:研究MMP-2在成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法:培养成釉细胞瘤细胞,应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达;体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体,将siRNA质粒表达载体转染原代... 目的:研究MMP-2在成釉细胞瘤中的表达和RNA干扰对成釉细胞瘤细胞中MMP-2基因的沉默效应。方法:培养成釉细胞瘤细胞,应用免疫组织化学方法检测成釉细胞瘤中MMP-2的表达;体外构建MMP-2靶向siRNA质粒表达载体,将siRNA质粒表达载体转染原代培养的成釉细胞瘤细胞,激光共聚焦显微镜检测siRNA质粒表达载体的转染效率,RT-PCR检测成釉细胞瘤细胞中MMP-2mRNA的改变,明胶酶谱法检测MMP-2的变化,应用SPSS11.0统计软件中的t检验对结果进行统计学分析。结果:成釉细胞瘤中MMP-2呈阳性表达,siRNA质粒表达载体对原代培养的成釉细胞瘤细胞的转染率为41.8%;转染后,成釉细胞瘤细胞的MMP-2mRNA表达水平显著降低,酶原性MMP-2和活性MMP-2显著减少,P<0.05。结论:体外构建的MMP-2靶向siRNA质粒表达载体可以转染体外培养的成釉细胞瘤细胞,并导致MMP-2基因沉默。 展开更多
关键词 MMP-2 RNA干扰 转染 sirna质粒表达载体 基因沉默 抑制作用 成釉细胞瘤
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