表达核小体Th表位减毒鼠伤寒沙门菌株的构建 被引量：1

1

作者 周春丽 郝进 +5 位作者 唐书谦 钟白玉 叶庆佾 邓军 曾韦锟 郝飞 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期363-365,共3页

目的:构建表达核小体Th表位(H2B14-28)的口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法:将H2B14-28基因插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pH2B(pYA3149-H2B14-28)后,转入鼠沙门菌株X4550,斑点印迹鉴定表位肽的表达。观察X4550(pH2B)体内外携带重... 目的:构建表达核小体Th表位(H2B14-28)的口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法:将H2B14-28基因插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pH2B(pYA3149-H2B14-28)后,转入鼠沙门菌株X4550,斑点印迹鉴定表位肽的表达。观察X4550(pH2B)体内外携带重组质粒的稳定性。结果:酶切鉴定和基因测序显示pH2B构建成功。斑点印迹证实表位肽的表达。重组菌株在体内、外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。结论:成功构建了能稳定表达核小体Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株,为进一步直接应用减毒鼠伤寒沙门菌活菌苗在肠道内表达抗原诱导SLE免疫耐受奠定基础。 展开更多

关键词 伤寒沙门菌 鼠 减毒 th表位 核小体

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HPV18 E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位的预测与鉴定 被引量：2

2

作者 余剑琴 郑飞云 +2 位作者 徐云升 欧荣英 张乾 《温州医学院学报》 CAS 2008年第3期193-197,共5页

目的:初步鉴定人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-DRB1*0301限制性辅助T淋巴细胞(T-HelperCell)表位。方法:用SYFPEITHI软件预测HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位,候选表位分别命名为P1、P2、P3,以固相多肽合成技术合成,并运用HPLC进行... 目的:初步鉴定人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-DRB1*0301限制性辅助T淋巴细胞(T-HelperCell)表位。方法:用SYFPEITHI软件预测HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th表位,候选表位分别命名为P1、P2、P3,以固相多肽合成技术合成,并运用HPLC进行纯化和质谱法(MS)鉴定。以密度梯度法分离HLA-DRB1*0301阳性健康人外周血单核细胞(PBMC),合成肽刺激PBMC,用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)检测淋巴细胞增殖活性,流式细胞仪分析细胞表型。结果:多肽P1(HPV18E780-94)在体外刺激PBMC后能够有效诱导CD4+T淋巴细胞增殖。结论:P1(HPV18 E780-94)可能为HPV18E7抗原HLA-DRB1*0301限制性Th细胞表位。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 E7抗原 淋巴细胞 th表位

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表达pCDR1 Th表位减毒鼠伤寒沙门菌株的构建 被引量：1

3

作者 周春丽 郝进 +5 位作者 唐书谦 钟白玉 叶庆佾 邓军 曾韦锟 郝飞 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-202,共4页

目的构建表达pCDR1 Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法全基因合成pCDR1两条核苷酸链,在C端加上6-His标签,退火互补后插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pR1,将该重组质粒转入鼠沙门菌终宿主菌株X4550,获得杂合菌株X4550(pR1... 目的构建表达pCDR1 Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法全基因合成pCDR1两条核苷酸链,在C端加上6-His标签,退火互补后插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pR1,将该重组质粒转入鼠沙门菌终宿主菌株X4550,获得杂合菌株X4550(pR1)。体外诱导表达后斑点印迹鉴定表位肽的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。体外诱导后6 h细菌裂解上清液中,检测到表位肽的表达,该蛋白能与鼠抗His单克隆抗体特异结合。重组菌株在体外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。结论成功构建了能稳定表达pCDR1 Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株。 展开更多

关键词 pCDR1 th表位 减毒鼠伤寒沙门菌

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核小体Th表位和CTLA4Ig双基因共表达真核表达载体的构建 被引量：1

4

作者 周春丽 郝进 +2 位作者 郝飞 吴军 贺伟峰 《生物医学工程与临床》 CAS 2006年第6期387-390,F0003,共5页

目的将核小体Th表位与CTLA4Ig融合基因融合,研究CTLA4Ig作为真核表达载体的可行性。方法用touchdownPCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入核小体Th表位(H2B14-28)。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1穴+雪,构建pcDNA3.1穴+雪-CTLA4Ig-H2B。... 目的将核小体Th表位与CTLA4Ig融合基因融合,研究CTLA4Ig作为真核表达载体的可行性。方法用touchdownPCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入核小体Th表位(H2B14-28)。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1穴+雪,构建pcDNA3.1穴+雪-CTLA4Ig-H2B。将表达质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测转染细胞裂解上清中融合蛋白的表达。将构建表达CTLA4Ig-H2B的减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207喂饲BALB/c小鼠,取脾脏进行免疫组化鉴定重组蛋白在动物体内的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。在pcDNA3.1穴+雪-CTLA4Ig-H2B质粒转染后48h细胞裂解上清中,检测到CTLA4Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合。重组蛋白在BALB/c小鼠脾脏免疫细胞胞浆中有阳性表达。结论成功构建了能稳定表达核小体Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体。 展开更多

关键词 核小体 th表位 CTLA4IG 融合蛋白

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口蹄疫病毒3D蛋白C端Th表位的重组表达及免疫功能鉴定 被引量：1

5

作者 王世红 张改平 +4 位作者 卢清侠 金前跃 刘畅 常咏哲 王爱萍 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期11-16,共6页

为获得含有口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D蛋白C端多个Th表位的重组表达蛋白,根据口蹄疫3DC端160个氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET28a,构建原核表达质粒pET28a-C160,并将重组质粒转化BL2... 为获得含有口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D蛋白C端多个Th表位的重组表达蛋白,根据口蹄疫3DC端160个氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET28a,构建原核表达质粒pET28a-C160,并将重组质粒转化BL21(DE3),0.5mmol/L IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果显示,在25ku处有一条明显的蛋白表达条带,且重组蛋白能与豚鼠抗O型口蹄疫病毒阳性血清发生特异性反应。对表达产物进行可溶性分析,结果显示,表达蛋白全部以包涵体形式存在,经变复性后获得较高质量浓度的纯化蛋白。可见:用纯化的3DC160蛋白作为Th佐剂与口蹄疫主抗原混合制成疫苗,免疫后能刺激猪体产生较高水平的口蹄疫抗体。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 th表位 原核表达 蛋白纯化

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重组pCDR1 Th表位诱导SLE口服免疫耐受的实验研究

6

作者 周春丽 郝进 +2 位作者 唐书谦 钟白玉 郝飞 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期278-280,284,共4页

目的探讨直接应用活菌苗在肠道内表达pCDR1Th表位抗原诱导SLE口服免疫耐受的可行性。方法以同系凋亡淋巴细胞免疫BALB/c小鼠制备SLE样症状小鼠模型,喂饲构建的重组SL7207菌株进行免疫耐受的诱导。观察血清ANA、ds-DNA和抗核小体抗体等... 目的探讨直接应用活菌苗在肠道内表达pCDR1Th表位抗原诱导SLE口服免疫耐受的可行性。方法以同系凋亡淋巴细胞免疫BALB/c小鼠制备SLE样症状小鼠模型,喂饲构建的重组SL7207菌株进行免疫耐受的诱导。观察血清ANA、ds-DNA和抗核小体抗体等自身抗体、白细胞、蛋白尿和肾脏损伤情况。结果成功制备了SLE鼠模型。与阴性对照组相比,CTLA4-Ig-pCDR1能明显降低实验小鼠ANA、ds-DNA和抗核小体抗体等自身抗体的水平,对白细胞减少和蛋白尿有明显的改善作用,对肾脏损伤有明显的保护作用。结论利用减毒鼠伤寒沙门菌携带pCDR1Th表位诱导SLE的口服免疫耐受是可行的,这为口服诱导免疫耐受防治SLE提供了一个新的途径。 展开更多

关键词 系统性红斑狼疮 pCDR1 th表位 CTLA4-IG 减毒鼠伤寒沙门菌 口服免疫耐受

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Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析

7

作者 高会广 府伟灵 +4 位作者 李蓉芬 陈麟凤 邢效如 张艳 何凤田 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1-6,共6页

在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融... 在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上。包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均在90%以上。活性检测发现,所获重组蛋白均丧失了sBLyS所具有的生物学功能,这些工作的完成为进一步探讨其治疗作用打下了基础。 展开更多

关键词 th表位修饰 BLyS突变体 构建方法 生物学活性 B淋巴细胞刺激因子 肿瘤坏死因子

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pCDR1 Th表位和CTLA4Ig双基因共表达真核表达载体的构建

8

作者 周春丽 郝进 +1 位作者 李强 郝飞 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第22期2548-2549,2552,2637,共4页

目的构建能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体,探讨其在小鼠体内的表达并对表达产物进行鉴定。方法用Touchdown PCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入pCDR1Th表位。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-... 目的构建能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体,探讨其在小鼠体内的表达并对表达产物进行鉴定。方法用Touchdown PCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入pCDR1Th表位。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA4Ig-pCDR1。将构建表达CTLA4Ig-pCDR1减毒鼠伤寒沙门菌SL7207喂饲BALB/c小鼠,取脾脏进行免疫组化鉴定重组蛋白在动物体内的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。重组蛋白在BALB/c小鼠脾脏免疫细胞胞浆中有阳性表达。结论成功构建了能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体。 展开更多

关键词 pCDR1 th表位 CTLA4Ig融合基因 基因表达

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位优势Th表位的系统筛选与鉴定

9

作者 李滨 陈立 +6 位作者 杨武晨 李海波 胡健 何亚非 章金勇 赵卓 吴超 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期212-215,共4页

目的筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)中CD4+细胞优势应答表位,并确定其MHC限制性。方法以重组UreB蛋白(rUreB)与弗氏佐剂联合皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,从小鼠脾脏中体外扩增UreB特异性T淋巴细胞,采用步... 目的筛选幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)中CD4+细胞优势应答表位,并确定其MHC限制性。方法以重组UreB蛋白(rUreB)与弗氏佐剂联合皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,从小鼠脾脏中体外扩增UreB特异性T淋巴细胞,采用步移重叠合成肽法筛选CD4+T细胞优势应答表位,分析其MHC分子限制性。结果 18mer短肽筛选发现UreB403-420和UreB409-426可显著刺激UreB特异性CD4+T细胞产生IFN-γ。13mer短肽鉴定实验结果显示,UreB409-421可刺激产生与18mer短肽UreB403-420和UreB409-426等同的应答强度。同时抗体阻断实验表明,抗H-2d(I-A)单克隆抗体能有效阻断该表位的应答。结论 UreB403-420和UreB409-426为UreB抗原中的优势Th表位,其刺激免疫反应的核心位置为UreB409-421,且存在H-2d(I-A)限制性。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位 th表位

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幽门螺杆菌尿素酶B亚单位Th表位的免疫学特性研究

10

作者 石云 吴超 +1 位作者 周维英 邹全明 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期177-181,共5页

采用MHC限制性分析、ELISA方法、淋巴细胞增殖实验等方法研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H- 2~d限制性Th表位U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)的免疫学特性。发现抗I-E^d抗体能够抑制U_(546-561)对CD4^+T淋巴细胞的刺激,... 采用MHC限制性分析、ELISA方法、淋巴细胞增殖实验等方法研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H- 2~d限制性Th表位U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)的免疫学特性。发现抗I-E^d抗体能够抑制U_(546-561)对CD4^+T淋巴细胞的刺激,抗I-A^d抗体能够抑制U_(229-244)、U_(237-251)对CD4^+T淋巴细胞的刺激作用。U_(229-244)、U_(229-244)能刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IL-4和IL-10,U_(237-251)刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2,且U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)三个表位肽免疫BALB/c小鼠能够引起针对各自免疫多肽和rUreB的CD4^+T细胞应答。结果表明U_(546-561)为I-E^d限制性Th2表位,U_(229-244)为I-A^d限制性Th2表位、U_(237-251)为I-A^d限制性Th1表位。三个表位之间具有协同刺激效应,可以用于Hp表位疫苗的研究。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 尿素酶B亚单位 th表位 BALB/c(H-2d)小鼠

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Th表位肽与聚肌胞苷酸对猪O型口蹄疫合成肽疫苗的免疫增强作用 被引量：3

11

作者 魏冰 陈文娟 +5 位作者 朱琳 李建军 吕传忠 任东兴 陈庚 付旭彬 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期163-168,共6页

[目的]本文旨在研究Th表位肽和聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]2种免疫增强剂对猪O型口蹄疫合成肽抗原细胞免疫和体液免疫的增强作用。[方法]将上述2种免疫增强剂分别与O型口蹄疫病毒(FMDV)合成肽抗原混合乳化,分组免疫Balb/c小鼠,分别在免疫后7... [目的]本文旨在研究Th表位肽和聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]2种免疫增强剂对猪O型口蹄疫合成肽抗原细胞免疫和体液免疫的增强作用。[方法]将上述2种免疫增强剂分别与O型口蹄疫病毒(FMDV)合成肽抗原混合乳化,分组免疫Balb/c小鼠,分别在免疫后7、14、21和28 d检测小鼠血清中的VP1抗体、IL-4和IFN-γ水平,以及脾脏中T淋巴细胞转化率及脾脏组织形态变化。[结果]免疫后14 d Th表位肽疫苗组和Poly(I:C)疫苗组血清VP1抗体水平显著高于普通疫苗组(P<0.05),免疫后28 d Th表位肽疫苗组显著高于Poly(I:C)疫苗组和普通疫苗组(P<0.05)。细胞因子检测结果显示:免疫后14、21 d Th表位肽与Poly(I:C)疫苗组IL-4含量显著高于普通疫苗组(P<0.05),免疫后14 d Th表位肽疫苗组IFN-γ含量明显高于其他组(P<0.05),免疫后21 d Th表位肽与Poly(I:C)疫苗组IFN-γ含量显著高于普通疫苗组(P<0.05)。Th表位肽与Poly(I:C)均可使试验小鼠脾脏白髓区增大,着色加深,动脉周围淋巴鞘胀大,Poly(I:C)疫苗组淋巴细胞增殖系数显著高于其他各试验组(P<0.05)。[结论]Th表位肽和Poly(I:C)对猪O型口蹄疫合成肽抗原均有显著免疫增强作用,而Th表位肽可延长体液免疫持续时间。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 th表位肽 聚肌胞苷酸 疫苗免疫增强剂 合成肽疫苗

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H3N2流感病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响

12

作者 袁栋波 陈瑶 +3 位作者 龙兆钇 钟源 谢爽 黄俊琼 《遵义医科大学学报》 2023年第4期343-348,共6页

目的探讨H3N2病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响,为后续研究通用流感疫苗奠定基础。方法利用NetMHCⅡpan-4.0软件预测H3N2疫苗株A/Kansas/14/2017 HA的Th表位,以IC 50<500 nM为标准筛选阳性预测表位;采用SWISS-MODLE对... 目的探讨H3N2病毒HA保守Th表位对CD4^(+)T细胞活化及分化的影响,为后续研究通用流感疫苗奠定基础。方法利用NetMHCⅡpan-4.0软件预测H3N2疫苗株A/Kansas/14/2017 HA的Th表位,以IC 50<500 nM为标准筛选阳性预测表位;采用SWISS-MODLE对A/Kansas/14/2017 HA进行同源建模,在3D模型上定位保守Th表位,根据表位的亲和力、保守性及核心序列的位置筛选高保守表位;合成6个非重叠的高保守Th表位,用保守Th表位体外刺激健康人外周血单核细胞,流式细胞术分析CD4^(+)T细胞表面分子CD69及细胞因子IFN-γ、IL-4的表达。结果在A/Kansas/14/2017 HA中共筛选到48个阳性预测Th表位,其中33个在H3-HA中是保守的;成功构建A/Kansas/14/2017 HA 3D模型,27个保守Th表位位于HA头部,其余6个位于杆部;人外周血PBMC经保守Th表位刺激后,CD69分子表达增加,细胞因子IFN-γ和IL-4合成增加。结论筛选到的6个H3N2 HA高保守Th表位具有免疫原性,可刺激CD4^(+)T细胞活化及分化。 展开更多

关键词 流感病毒 血凝素 th表位 CD4^(+)T细胞 活化

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异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys构建及融合蛋白表达

13

作者 王坤 薛士杰 +2 位作者 金静君 何萍 赖力 《福建医药杂志》 CAS 2011年第2期12-16,共5页

目的构建异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys的原核表达质粒,并在E.coliBL21中诱导融合蛋白表达,初步检测蛋白特性。方法采用PCR法从质粒pCMV-sBlys扩增sBlys片段,将与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位重组后的msBlys连接CTLA4-Ig片段,克... 目的构建异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys的原核表达质粒,并在E.coliBL21中诱导融合蛋白表达,初步检测蛋白特性。方法采用PCR法从质粒pCMV-sBlys扩增sBlys片段,将与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位重组后的msBlys连接CTLA4-Ig片段,克隆入pGEX-KG原核表达载体,用LB固体培养基抗生素筛选、酶切并经琼脂糖凝胶电泳鉴定;将质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys转入E.coliBL21菌株中,实现插入基因的融合表达,用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物。结果 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys构建正确且最终转入E.coliBL21,得到融合蛋白的表达;CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白在E.coli中获得表达,表达产物的相对分子质量同预期值一致。结论成功构建原核表达质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,并在E.coliBL21表达CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白,为下一步探讨Blys在自身免疫性疾病患者的治疗作用奠定了基础。 展开更多

关键词 BLYS CTLA4-IG th表位 融合蛋白

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狂犬病“靶向性”Th表位DNA疫苗的构建与瞬时表达研究 被引量：2

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作者 肖跃强 管宇 +4 位作者 谢金文 郭广君 魏风 刘吉山 沈志强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期176-181,共6页

用RT-PCR扩增BALB/c小鼠P31基因,在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;采用定向克隆方法将狂犬病病毒核蛋白、糖蛋白及NS蛋白主要Th抗原表位核苷酸序列替换P31序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应获得带有K... 用RT-PCR扩增BALB/c小鼠P31基因,在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;采用定向克隆方法将狂犬病病毒核蛋白、糖蛋白及NS蛋白主要Th抗原表位核苷酸序列替换P31序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应获得带有Kozak调控序列的P31-Th分子,以增加目的基因的表达量,并将含有Kozak序列的P31-Th分子克隆入真核表达载体pCI-neo多克隆位点,通过PCR与限制性内切酶酶切方法进行鉴定;最后将各Th表位表达载体转染COS-7细胞,Western-blot检测目的基因的瞬时表达。测序分析结果表明,BALB/c小鼠P31基因CDS区长648bp,编码215个氨基酸,与Gen-Bank中登录的Ii分子(NM_010545)的核苷酸序列、氨基酸序列均存在多个位点差异;定点突变后获得了P31分子突变体,经PCR及限制性内切酶酶切方法证明,成功构建了携带P31-Th分子的真核表达载体;Western-blot分析证实,各P31-Th分子均在COS-7细胞中获得瞬时表达,且表达的目的产物能够与兔抗P31多克隆抗体发生抗原抗体结合反应。结果表明,作者成功构建了狂犬病病毒主要Th抗原表位的"靶向性"核酸疫苗,为开展在小鼠的免疫学试验奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒th表位 BALB/c小鼠恒定链 定点突变 定向克隆 瞬时表达

原文传递

兔出血症病毒VP60抗原优势区和Th细胞表位融合蛋白的原核表达及免疫效力测定 被引量：2

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作者 孟春春 程英杰 +5 位作者 李传峰 王玢瑸 缪秋红 陈宗艳 吴润 刘光清 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期239-242,共4页

为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB... 为检测兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60两个抗原优势区串联通用Th细胞表位的融合蛋白AB-Th的免疫效力,本研究采用融合PCR的方法以pBL-RHDV为模板扩增AB-Th基因并亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,大量表达AB-Th融合蛋白。结果显示,融合蛋白以包涵体形式表达,并且具有良好的免疫原性。使用纯化后的融合蛋白免疫实验兔,并分别利用ELISA方法和MTS法检测兔免疫后的抗体水平和淋巴细胞增殖能力。结果表明该融合蛋白能够使兔产生针对RHDV VP60蛋白的特异性抗体和导致高水平的淋巴细胞增殖,并能够为实验兔提供100%的保护。 展开更多

关键词 VP60优势抗原区 th细胞表位 原核表达 免疫效力测定

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一种新的病毒蛋白Th细胞表位预测方法 被引量：1

16

作者 吴玉章 朱锡华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期120-123,共4页

调查了病毒蛋白６３个Ｔｈ细胞表位以分析其氨基酸顺序特征。一个由５个氨基酸组成的模板出现于９６％的表位中。将此模板应用于ＨＢｓＡｇ／Ｐ２５（ａｙｗ）和Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白（ａｄｒ，ａｙｗ，ａｄｗ＿２）的Ｔｈ细胞表位预... 调查了病毒蛋白６３个Ｔｈ细胞表位以分析其氨基酸顺序特征。一个由５个氨基酸组成的模板出现于９６％的表位中。将此模板应用于ＨＢｓＡｇ／Ｐ２５（ａｙｗ）和Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白（ａｄｒ，ａｙｗ，ａｄｗ＿２）的Ｔｈ细胞表位预测，发现所有已经实验证实的表位均可由该模板识别出，提示该模板可能是病毒蛋白Ｔｈ细胞表位的一种重要顺序特征，并可应用于病毒蛋白Ｔｈ细胞表位的预测中。 展开更多

关键词 病毒蛋白 th细胞表位 预测

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复合通用CD4^+Th细胞表位基因的原核表达及免疫学特性 被引量：1

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作者 刘汉平 方志正 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期452-456,共5页

目的构建复合通用CD4+Th细胞表位基因的原核表达载体,检测表达蛋白的免疫学特性,并探讨其作为载体蛋白的可能性。方法以限制性核酸内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒pUC19-Pep10,回收长度为650bp左右的目的片段,插入原核表达载体pQE30... 目的构建复合通用CD4+Th细胞表位基因的原核表达载体,检测表达蛋白的免疫学特性,并探讨其作为载体蛋白的可能性。方法以限制性核酸内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒pUC19-Pep10,回收长度为650bp左右的目的片段,插入原核表达载体pQE30中,获得重组质粒pQE30-Pep10,转化大肠杆菌M15后进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Westernblot分析后,进行亲和层析纯化及透析复性,获得重组蛋白Pep10,将Pep10和TT分别免疫雌性BALB/c小鼠,以间接ELISA法和流式细胞术分别检测其免疫原性和淋巴细胞增殖效应。结果SDS-PAGE显示重组蛋白Pep10相对分子质量约为23000,表达量达41%,主要以包涵体形式表达,Westernblot检测可见特异性染色条带,纯化后纯度达94%,共获得42mg重组蛋白。其体外淋巴细胞增殖效应与TT相当,增殖指数分别为4.216和4.736,而免疫原性远低于TT,特异性IgG几何平均滴度(GMT)分别为1∶15758.65和1∶67558.81。结论已成功构建重组原核表达载体pQE30-Pep10,并在大肠杆菌中高效表达,且表达的重组蛋白Pep10具有良好的淋巴细胞增殖效应和较低的免疫原性,有可能作为一种新型载体蛋白,用于多糖结合疫苗的研制。 展开更多

关键词 CD4^+th细胞表位 原核表达 免疫原性 载体蛋白

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单纯疱疹病毒Ⅰ型的Th细胞和B细胞表位重组核酸疫苗的构建及真核表达 被引量：2

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作者 刘贤洁 孙原 马小力 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期796-798,802,共4页

目的构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(g B)和糖蛋白D(g D)的Th细胞和B细胞表位重组串联核酸疫苗,并鉴定其真核表达。方法利用生物信息学分析软件预测HSV-1 g B和g D的Th细胞表位和B细胞表位,结合已发表文献,设计合成HSV-1的Th细胞和... 目的构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(g B)和糖蛋白D(g D)的Th细胞和B细胞表位重组串联核酸疫苗,并鉴定其真核表达。方法利用生物信息学分析软件预测HSV-1 g B和g D的Th细胞表位和B细胞表位,结合已发表文献,设计合成HSV-1的Th细胞和B细胞表位重组串联抗原基因(Th/B基因)。将Th/B基因定向克隆入真核表达载体p VAX1,构建真核表达质粒p VAX1-Th/B。用制备的质粒转染COS-7细胞,裂解细胞后经Western blot鉴定其蛋白表达。结果预测得到了HSV-1 g B和g D的Th细胞和B细胞表位,成功构建真核表达质粒p VAX1-Th/B,经测序确认序列正确。SDS-PAGE分离出相应大小的蛋白表达片段,经Western blot鉴定并证实该重组核酸疫苗能够在体外真核细胞中表达。结论成功构建HSV-1 Th细胞和B细胞表位重组串联核酸疫苗,并能够在体外真核细胞中表达,为HSV-1核酸疫苗的进一步研究打下基础。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒 th细胞和B细胞表位 核酸疫苗

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含有Th细胞表位的合成PCV2 ORF2 Cap多肽抗原的表达及免疫原性分析 被引量：3

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作者 陈善真 赵焱 +4 位作者 李中圣 罗均 陈克宏 王贵平 李其昌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2273-2281,共9页

拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞... 拟测定在PCV2ORF2Cap P1多肽抗原中添加从PCV2ORF1、ORF3中筛选的Th细胞表位多肽在促进其免疫原性中的作用,以及合成表达的PCV2ORF2Cap P1多肽抗原作为疫苗抗原的可行性。采用生物信息学及分子生物学方法,筛选获得1条泛宿主新型Th细胞表位多肽和3条PCV2特异的含有Th细胞抗原表位的多肽序列,然后将这4条Th细胞多肽氨基酸序列与筛选自ORF2Cap1上的1条B细胞表位多肽序列进行串联组合,密码子优化,插入酶切位点、终止密码子,然后进行密码子适应指数和分布频率分析,预测可以实现高效表达后再进行化学合成。合成的P1多肽抗原连接到pET-30a表达载体,并转化至BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建表达工程菌BL21(DE3)pLysS-pET-30a-P1。经IPTG诱导表达后P1可实现高效表达,SDS-PAGE鉴定表达量,Western Blot鉴定其生物活性,然后分别免疫小鼠和猪,测定小鼠免疫后的抗体水平以及猪免疫后P1合成多肽抗原对外周血淋巴细胞的刺激增殖情况。结果表明,设计合成表达的PCV2P1多肽抗原序列,密码子适应性指数为0.89,能够实现高水平表达,目的片段大小约为28.29ku,具有良好的免疫原性;MTT试验结果表明,P1多肽抗原免疫后机体内IFN-γ和IL-4的表达量明显增加,且与对照组差异显著(P<0.05)。这说明P1能够诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应,为其作为疫苗用抗原的进一步研究奠定了理论基础。 展开更多

关键词 PCV2 th细胞表位多肽 CAP蛋白

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小鼠I-A^kII类分子限制性MAGE-3T表位筛选 被引量：3

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作者 李强 张轶 +5 位作者 张奕 陈雪华 李建芳 顾琴龙 朱正纲 刘炳亚 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期19-23,共5页

为了筛选小鼠MAGE-3抗原来源的MHCII类分子限制性多肽表位。用计算机模拟设计,从MAGE-3中选取得分最高的5个候选表位。根据诱导T淋巴细胞增殖能力、对肿瘤细胞的特异性识别及释放细胞因子能力评价多肽的免疫原性及免疫反应性。结果DC负... 为了筛选小鼠MAGE-3抗原来源的MHCII类分子限制性多肽表位。用计算机模拟设计,从MAGE-3中选取得分最高的5个候选表位。根据诱导T淋巴细胞增殖能力、对肿瘤细胞的特异性识别及释放细胞因子能力评价多肽的免疫原性及免疫反应性。结果DC负载MAGE-322-36能够强效诱导T淋巴细胞增殖,DC负载MAGE-322-36诱导的T细胞以MHCII类分子限制性方式、特异性识别表达MAGE-3抗原的肿瘤细胞。DC负载MAGE-322-36诱导的T细胞群主要为CD4+Th1细胞,同时天然免疫系统中的NK、NKT、γ/δT细胞也得到活化。从小鼠MAGE-3抗原中筛选出MHCII类分子限制性多肽表位MAGE-322-36。 展开更多

关键词 MAGE-3 th表位 筛选

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