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基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
被引量：
5
1
作者
黄琦雯
王庆
+7 位作者
王英英
李莹莹
石存斌
任燕
高彩霞
吴杰兴
郑树城
曾伟伟
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第10期804-809,共6页
基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)是当前引起草鱼出血病暴发与流行的主要病原,为建立快速检测GCRV-Ⅱ的方法,本研究根据GCRV-ⅡRd Rp基因的保守区域序列设计引物及TaqMan探针,经反应参数优化,建立了检测GCRV-Ⅱ的荧光定量PCR方法。结果...
基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)是当前引起草鱼出血病暴发与流行的主要病原,为建立快速检测GCRV-Ⅱ的方法,本研究根据GCRV-ⅡRd Rp基因的保守区域序列设计引物及TaqMan探针,经反应参数优化,建立了检测GCRV-Ⅱ的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法仅对GCRV-Ⅱ的靶基因序列进行扩增,与其它非靶目标核酸均无交叉反应;其最低检出量为3拷贝/μL病毒核酸,比普通PCR的敏感度高100倍;组内和组间重复试验变异系数均小于1%。采用该方法检测60份草鱼出血病疑似样品,GCRV-Ⅱ阳性检出率为75%(45/60),与细胞分离结果一致。应用该方法分析了GCRV-Ⅱ在不同细胞和不同培养方式下病毒的增殖含量,结果显示GSB和PSF细胞增殖量最大,达106拷贝/μL^107拷贝/μL病毒核酸,转瓶接种比常规的细胞培养瓶和培养板接种其病毒含量低2个数量级。本研究建立的GCRV-ⅡTaqMan荧光定量PCR方法具有高效、特异、敏感、可重复性强的优点,适用于GCRV-Ⅱ的临床快速检测和病毒定量分析。
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关键词
草鱼呼肠孤病毒
基因Ⅱ型
TAQ
Man荧光定量
pcr
检测方法
在线阅读
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职称材料
检测鹅细小病毒的恒温隔绝式荧光PCR方法的建立及初步应用
2
作者
徐梦
汤承
+1 位作者
岳华
王远微
《西南民族大学学报（自然科学版）》
CAS
2023年第4期360-364,共5页
鹅细小病毒(GPV)是一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的病原,给养禽业带来了巨大的经济损失.利用GPV的VP3基因保守区域设计了一对引物和探针,经反应体系的优化,建立检测鹅细小病毒的恒温隔绝式荧光PCR方法(ii PCR方法),并与TaqMan荧光定量PCR方...
鹅细小病毒(GPV)是一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的病原,给养禽业带来了巨大的经济损失.利用GPV的VP3基因保守区域设计了一对引物和探针,经反应体系的优化,建立检测鹅细小病毒的恒温隔绝式荧光PCR方法(ii PCR方法),并与TaqMan荧光定量PCR方法比较.结果显示,该方法能特异性检出GPV,对其他常见无关病原不检出,特异性好;检测下限是38.1拷贝·μL-1,灵敏度高;批内、批间变异系数均小于5%,重复性好;该方法对31份临床疑似样本的检出率为93.54%,高于TaqMan荧光定量PCR方法的检出率(83.87%).本研究为鹅细小病毒的现场快速检测提供了新的技术手段.
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关键词
鹅细小病毒
ii
pcr
方法
荧光定量
pcr
特异性
灵敏性
重复性
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职称材料
题名
基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
被引量：
5
1
作者
黄琦雯
王庆
王英英
李莹莹
石存斌
任燕
高彩霞
吴杰兴
郑树城
曾伟伟
机构
中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室/广东省水生动物免疫重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第10期804-809,共6页
基金
广东省省级科技计划项目(2015A020209033)
广东省省级科技计划项目(2016B020234003)
+1 种基金
广东省渔港建设和渔业发展专项(B201601-08)
大宗淡水鱼产业技术体系(CARS-46-09)
文摘
基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)是当前引起草鱼出血病暴发与流行的主要病原,为建立快速检测GCRV-Ⅱ的方法,本研究根据GCRV-ⅡRd Rp基因的保守区域序列设计引物及TaqMan探针,经反应参数优化,建立了检测GCRV-Ⅱ的荧光定量PCR方法。结果显示,该方法仅对GCRV-Ⅱ的靶基因序列进行扩增,与其它非靶目标核酸均无交叉反应;其最低检出量为3拷贝/μL病毒核酸,比普通PCR的敏感度高100倍;组内和组间重复试验变异系数均小于1%。采用该方法检测60份草鱼出血病疑似样品,GCRV-Ⅱ阳性检出率为75%(45/60),与细胞分离结果一致。应用该方法分析了GCRV-Ⅱ在不同细胞和不同培养方式下病毒的增殖含量,结果显示GSB和PSF细胞增殖量最大,达106拷贝/μL^107拷贝/μL病毒核酸,转瓶接种比常规的细胞培养瓶和培养板接种其病毒含量低2个数量级。本研究建立的GCRV-ⅡTaqMan荧光定量PCR方法具有高效、特异、敏感、可重复性强的优点,适用于GCRV-Ⅱ的临床快速检测和病毒定量分析。
关键词
草鱼呼肠孤病毒
基因Ⅱ型
TAQ
Man荧光定量
pcr
检测方法
Keywords
grass carp reovirus
genotype
ii
TaqMan real-time
pcr
detection
method
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
检测鹅细小病毒的恒温隔绝式荧光PCR方法的建立及初步应用
2
作者
徐梦
汤承
岳华
王远微
机构
西南民族大学动物医学四川省高等学校重点实验室
出处
《西南民族大学学报（自然科学版）》
CAS
2023年第4期360-364,共5页
基金
四川省自然科学基金面上项目(2022NSFSC0584)
国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专项(SCCXTD-2020-18)。
文摘
鹅细小病毒(GPV)是一种主要侵害雏鹅和雏番鸭的病原,给养禽业带来了巨大的经济损失.利用GPV的VP3基因保守区域设计了一对引物和探针,经反应体系的优化,建立检测鹅细小病毒的恒温隔绝式荧光PCR方法(ii PCR方法),并与TaqMan荧光定量PCR方法比较.结果显示,该方法能特异性检出GPV,对其他常见无关病原不检出,特异性好;检测下限是38.1拷贝·μL-1,灵敏度高;批内、批间变异系数均小于5%,重复性好;该方法对31份临床疑似样本的检出率为93.54%,高于TaqMan荧光定量PCR方法的检出率(83.87%).本研究为鹅细小病毒的现场快速检测提供了新的技术手段.
关键词
鹅细小病毒
ii
pcr
方法
荧光定量
pcr
特异性
灵敏性
重复性
Keywords
goose parvovirus
ii pcr method
fluorescence quantitative
pcr
specificity
sensitivity
repeatability
分类号
S854.4 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
黄琦雯
王庆
王英英
李莹莹
石存斌
任燕
高彩霞
吴杰兴
郑树城
曾伟伟
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
检测鹅细小病毒的恒温隔绝式荧光PCR方法的建立及初步应用
徐梦
汤承
岳华
王远微
《西南民族大学学报（自然科学版）》
CAS
2023
0
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