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不同单克隆抗体聚集与断裂行为的多维分析
1
作者 陆治锦 文玺凯 +5 位作者 刘鲁杰 王宜冰 沈春雷 伍维 沈智勇 赵黎明 《华东理工大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期42-49,共8页
采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关... 采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关修饰加速了聚集,并导致断裂的发生;40℃时ZG187样品在蛋氨酸430位点发生氧化修饰的比例增加了36.9%,相关修饰降低了蛋白的稳定性,导致了断裂的发生。研究结果为上述药物研发和生产过程中的聚集与断裂问题提供了检测和分析方法。 展开更多
关键词 单克隆抗体 聚集 断裂 脱酰胺 氧化
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高浓度重链抗体可变区-Fc融合蛋白稳定性影响因素分析
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作者 饶金瑞 王永红 +1 位作者 沈智勇 赵黎明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第3期273-279,共7页
目的分析高浓度重链抗体可变区-Fc(variable domain of heavy-chain antibody-Fc,VHH-Fc)融合蛋白稳定性的影响因素。方法设置振摇、光照、40℃高温3组强制降解试验,通过差式扫描荧光法、动态光散射法(dynamic light scattering,DLS)和... 目的分析高浓度重链抗体可变区-Fc(variable domain of heavy-chain antibody-Fc,VHH-Fc)融合蛋白稳定性的影响因素。方法设置振摇、光照、40℃高温3组强制降解试验,通过差式扫描荧光法、动态光散射法(dynamic light scattering,DLS)和超高效液相色谱-质谱(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)法检测3种强制降解条件对高浓度VHH-Fc融合蛋白构象稳定性、胶体稳定性、平均水化动力学直径及翻译后修饰的影响。结果光照条件下,高浓度VHH-Fc融合蛋白的构象展开起始温度(onset temperature of unfolding,Tonset)、熔解温度(melting temperature,Tm)和起始聚集温度(aggregation onset temperature,Tagg)降低幅度最大,Met160和Met266处的氧化比例大幅增加;振摇条件下,扩散相互作用系数(diffusion interaction parameter,kD)和平均水化动力学直径变化量最大。结论光照会显著降低高浓度VHH-Fc融合蛋白的构象稳定性并诱导甲硫氨酸氧化,振摇对其胶体稳定性影响最为显著且会促进聚集。 展开更多
关键词 重链抗体可变区 Fc片段 融合蛋白 构象稳定性 胶体稳定性 平均水化动力学直径 翻译后修饰
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强化会计信息化建设 提升企业管理水平
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作者 张丹洋 《大众商务》 2024年第16期0106-0108,共3页
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基于试验设计与响应面分析法的重组贝伐珠单抗细胞培养工艺优化
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作者 丁钰 杨倩倩 +2 位作者 沈智勇 赵瑾 邱树毅 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期721-728,共8页
本研究采用多因素试验设计结合响应面分析法,通过对初始活细胞密度、变温时活细胞密度、培养时间、基础培养基混合比例和五水合硫酸铜添加浓度的研究,优化了以中国仓鼠卵巢细胞培养重组贝伐珠单抗的细胞培养工艺。采用全因子试验设计和... 本研究采用多因素试验设计结合响应面分析法,通过对初始活细胞密度、变温时活细胞密度、培养时间、基础培养基混合比例和五水合硫酸铜添加浓度的研究,优化了以中国仓鼠卵巢细胞培养重组贝伐珠单抗的细胞培养工艺。采用全因子试验设计和中心复合设计,以抗体产量和乳酸浓度作为响应值进行模型拟合,应用MODDE软件对工艺参数模型进行预测,并对最佳工艺参数进行验证,得到的最优工艺参数为:初始时每1 ml含活细胞数(0.9±0.1)×10~6个、变温时每1 ml含活细胞数(20±2)×10~6个、BM01基础培养基占比75%、五水合硫酸铜浓度140μg/L、培养时间14 d,最终抗体产量高达5.3 g/L,同时收获时乳酸水平显著降低至0.4 g/L,降低了工艺失败的风险,提高了培养过程的耐受性。本研究为日后同类细胞培养工艺的开发或研究提供了参考。 展开更多
关键词 贝伐珠单抗 中国仓鼠卵巢细胞 试验设计 响应面分析 细胞培养工艺
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