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Cav1.2钙离子通道三维结构的同源建模及其应用 被引量：4
1
作者 雷明 苏敬阳 +4 位作者 李卓 晏珊 孙雪菲 朱彤 郝丽英 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期90-94,共5页
目的构建心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,检验模型的准确性与可靠性。方法利用SWISS-MODEL同源建模服务器,对豚鼠心肌细胞Cav1.2通道α1亚基进行同源建模,建模结果提交至加州大学蛋白质结构在线检测服务器进行检测评估,并对结构模型... 目的构建心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,检验模型的准确性与可靠性。方法利用SWISS-MODEL同源建模服务器,对豚鼠心肌细胞Cav1.2通道α1亚基进行同源建模,建模结果提交至加州大学蛋白质结构在线检测服务器进行检测评估,并对结构模型进行打分。利用MOE软件分子对接程序模拟阻断剂或药物与Cav1.2通道模型的结合,进一步验证通道模型的准确性与可靠性。结果在SWISS-MODEL服务器上搜寻到的模板序列Cav1.1α1S与目标序列Cav1.2α1C均为L型钙通道,序列比对结果显示其同源性高达71.5%,选择自动模式(automated mode)进行同源建模。L型钙通道阻断剂维拉帕米、硝苯地平、地尔硫卓能结合到Cav1.2通道三维结构模型的特定区域,而钠通道特异性阻断剂河豚毒素并未与该模型相结合,中药有效成份白花前胡甲素和小檗碱与该模型也有一定的结合。结论成功构建了心肌Cav1.2钙离子通道三维结构模型,为后续研究提供了可靠样本,也为同源建模在研究离子通道三维结构预测中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 离子通道 三维结构 同源建模 MOE软件 L型钙通道阻断剂 分子对接
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Cav1.2通道CT1片断突变体的质粒构建和蛋白表达
2
作者 雷明 赵美眯 +4 位作者 封瑞 王红梅 毛楠 朱彤 郝丽英 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期837-839,843,共4页
目的构建心肌Cav1.2通道CT1片段及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体,并进行蛋白表达和纯化。方法以豚鼠Cav1.2通道CT1质粒(p GEX-6p-3/CT1)为模板,采用定点突变技术构建CT1 T1603A和CT1 T1603D两种突变体质粒... 目的构建心肌Cav1.2通道CT1片段及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体,并进行蛋白表达和纯化。方法以豚鼠Cav1.2通道CT1质粒(p GEX-6p-3/CT1)为模板,采用定点突变技术构建CT1 T1603A和CT1 T1603D两种突变体质粒。转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后用IPTG诱导GST融合蛋白表达,分离纯化后采用SDS-PAGE检测CT1及其突变体蛋白的相对分子量和纯度。结果 CT1片段及其突变体融合蛋白得到了正确、大量表达,提取纯化后的CT1片段及其突变体融合蛋白具有较高的纯度。结论成功构建了Cav1.2通道CT1片断及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得了CT1突变体融合蛋白,为深入研究CT1片断在Cav1.2通道调节中的作用和机制奠定基础。 展开更多
关键词 融合蛋白 CT1 突变体
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