文摘目的 探究单宁酸对缺氧诱导的H9c2心肌细胞的保护作用及机制。方法 体外培养大鼠H9c2细胞,利用条件培养基和缺氧小室建立缺氧诱导的H9c2细胞损伤模型,分为对照组、缺氧1组、低剂量单宁酸组(0.2μmol单宁酸)和高剂量单宁酸组(0.8μmol单宁酸)。利用鱼藤酮进行功能回复实验,分为缺氧2组、缺氧+鱼藤酮抑制剂组(50 nmol鱼藤酮)、缺氧+鱼藤酮抑制剂+高剂量单宁酸组(50 nmol鱼藤酮+0.8μmol单宁酸)、缺氧+高剂量单宁酸组(0.8μmol单宁酸)。细胞计数试剂盒8法和乳酸脱氢酶(LDH)评估细胞损伤;化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)、线粒体ROS;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达;酶联免疫吸附测定IL-1β分泌。结果 与对照组比较,缺氧1组H9c2细胞密度降低,贴壁不牢,细胞存活率显著降低,LDH活性、细胞凋亡率、NLRP3、裂解的(Cleaved)Caspases-1、Cleaved-GSDMD和Cleaved-IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧组1比较,低剂量单宁酸组、高剂量单宁酸组细胞存活率显著升高,LDH活性、细胞凋亡率、NLRP3、Cleaved-Caspases-1、Cleaved-GSDMD和Cleaved-IL-1β蛋白表达水平、分泌的IL-1β水平显著降低(P<0.05)。与缺氧2组比较,缺氧+鱼藤酮抑制剂组线粒体ROS、NLRP3、Cleaved-IL-1β蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧+高剂量单宁酸组比较,缺氧+鱼藤酮抑制剂+高剂量单宁酸组的线粒体ROS(0.85±0.02 vs 0.40±0.03)、NLRP3(0.61±0.03 vs 0.47±0.05)、Cleaved-IL-1β蛋白表达水平(0.70±0.06 vs 0.48±0.09)显著升高(P<0.05)。结论 单宁酸可通过抑制ROS/NLRP3通路介导的焦亡,减轻缺氧诱导的H9c2细胞损伤。
