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激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞的比较蛋白质组学研究 被引量：6
1
作者 程爱兰 黄卫国 +8 位作者 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 易红 李美香 陈主初 肖志强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期521-530,共10页
为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻... 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的分子标志物,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngal epithelial tissue,NNET)中切割纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot检测差异蛋白cytokeratin8(CK8)在LCM纯化的NPC细胞和NNEC以及具有不同分化程度或转移潜能的4株NPC细胞中的表达,免疫组织化学检测CK8在63例NPC、28例NNET及20例颈淋巴结转移NPC组织中的表达水平.建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了29个差异蛋白质,其中15个蛋白质只在NPC表达或表达明显增高,14个蛋白质在NPC中表达下调或缺失;Western blot结果显示,CK8的表达水平在NPC中较NNET明显下调,并与NPC细胞株的分化程度和转移潜能有关;免疫组织化学结果显示,CK8在NPC组织中的表达较NNET明显下调,在颈淋巴结转移NPC中的表达较原发NPC明显上调.研究结果提示,CK8与NPC分化及淋巴结转移相关,有望成为预测NPC转移和区别NPC分化程度的分子标志物. 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 鼻咽癌 蛋白质组学 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 Western blot 免疫组织化学
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非小细胞肺癌分泌蛋白的蛋白质组学研究(英文) 被引量：5
2
作者 黄凌瑾 陈胜喜 +3 位作者 罗万俊 蒋海河 张鹏飞 易红 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1361-1367,共7页
背景与目的:癌细胞分泌蛋白是潜在的血清标志物,而且对肿瘤的早期筛选也具有重要意义。因此,系统、全面地研究肿瘤细胞分泌蛋白对于肿瘤血清标志物的筛选具有重要意义。本研究旨在鉴定肺癌细胞分泌蛋白,为肺癌血清标志物筛选提供实验依... 背景与目的:癌细胞分泌蛋白是潜在的血清标志物,而且对肿瘤的早期筛选也具有重要意义。因此,系统、全面地研究肿瘤细胞分泌蛋白对于肿瘤血清标志物的筛选具有重要意义。本研究旨在鉴定肺癌细胞分泌蛋白,为肺癌血清标志物筛选提供实验依据。方法:用含胎牛血清的RPMI-1640培养液培养非小细胞肺癌细胞系A549细胞,收集A549细胞培养液中的蛋白及胎牛血清培养液中的蛋白(对照)进行蛋白双向电泳,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及生物信息学鉴定A549凝胶上特有的蛋白质点。筛选出人属的蛋白质点后,应用RT-PCR方法检测其在肺癌组织及配对远处肺组织中的表达差异;并检测培养液及血清中锰-超氧化物歧化酶(manganesesuperoxidedismutase,Mn-SOD)水平。结果:鉴定出人属的蛋白质点14个,包括肌动蛋白、!烯醇酶(alphaenolase,ENO1)、Mn-SOD、谷胱苷肽S转移酶P(glutathioneS-transferaseP,GSTP1-1)、二氢二醇脱氢酶(dihydrodioldehydrogenase,DDH)、磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglyceratemutase1,PGAM1)、葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体(glucose-dependentinsulinotropicproteinreceptor,GIPR)、肽基脯氨基顺反异构酶(peptidyl-prolylcis-transisomeraseA,PPIA)、磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolaminebindingprotein,PEBP)、蛋白基因产物9.5(ubiquitincarboxyl-terminalhydrolaseisozymeL1,PGP9.5)、peroxiredoxin1(PDX1)、galectin-1及专利蛋白WO0222660等。RT-PCR检测示ENO1、DDH、PEBP、PGP9.5、PDX1、PGAM1、PPIA在肺癌组织中高表达。酶活性检测发现A549培养液中存在Mn-SOD,且发现非小细胞肺癌患者血清中有高水平的Mn-SOD。结论:本研究首次对非小细胞肺癌细胞的分泌蛋白进行了鉴定;发现多种高表达的非小细胞肺癌分泌蛋白基因,其中首次发现ENO1及PEBP基因在非小细胞肺癌中高表达;Mn-SOD是非小细胞肺癌的分泌型血清标志物。该研究为非小细胞肺癌血清标志物的筛选提供了新的方法和候选分子。 展开更多
关键词 肺肿瘤 非小细胞性 分泌蛋白 血清标志物 蛋白质组学
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高脂性肥胖小鼠脂肪细胞大小与其血清胰岛素、瘦素水平相关性研究 被引量：7
3
作者 石柯 张畅 +5 位作者 段朝军 汤参娥 张赛 吴静 刘玮芳 苏涛 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第28期11-14,共4页
目的对脂肪细胞大小与血清胰岛素、瘦素水平的关系进行初步探讨。方法用高脂饲料喂养健康C57BL/6乳鼠建立肥胖小鼠动物模型,测量体重(Wt)、空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、血清胰岛素(FINS)及瘦素(LEP)水平,计算Lee’s指数及稳态模型胰... 目的对脂肪细胞大小与血清胰岛素、瘦素水平的关系进行初步探讨。方法用高脂饲料喂养健康C57BL/6乳鼠建立肥胖小鼠动物模型,测量体重(Wt)、空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、血清胰岛素(FINS)及瘦素(LEP)水平,计算Lee’s指数及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),脂肪组织HE染色观察脂肪细胞大小改变,统计学分析其相关性。结果与同周龄对照组小鼠相比,肥胖组小鼠Wt、FPG、TG、FINS、LEP和Lee’s指数及HOMA-IR均升高;相同放大倍数视野下,肥胖组小鼠脂肪细胞数目较正常组减少,脂肪细胞面积增大;统计学分析显示脂肪细胞大小与体重、血清胰岛素、瘦素和胰岛素抵抗指数呈正相关。结论肥胖小鼠脂肪细胞显著增大,易并发瘦素和胰岛素抵抗,且胰岛素抵抗严重程度与脂肪细胞大小呈高度正相关。 展开更多
关键词 肥胖 小鼠 胰岛素 瘦素 脂肪细胞
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人宫颈癌组织及癌旁正常组织蛋白质组的比较研究 被引量：4
4
作者 林英姿 陈仁 +3 位作者 杨文 李翠 罗鸣 卢伟英 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第17期1593-1596,共4页
目的:构建人宫颈癌组织及癌旁组织双向凝胶电泳图谱,筛选差异表达的蛋白质.方法:人宫颈癌组织及癌旁正常组织标本10例,应用固相pH梯度双向凝胶电泳后,Ima-geScanner扫描图像、ImageMaster2-DEElite4.01软件分析识别差异表达的蛋白质;应... 目的:构建人宫颈癌组织及癌旁组织双向凝胶电泳图谱,筛选差异表达的蛋白质.方法:人宫颈癌组织及癌旁正常组织标本10例,应用固相pH梯度双向凝胶电泳后,Ima-geScanner扫描图像、ImageMaster2-DEElite4.01软件分析识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱,联网ExPASY网站查询相关数据库鉴定获得的差异蛋白质点.结果:癌组织和癌旁正常组织凝胶的平均蛋白质点数分别为1285±85和1063±76,凝胶上蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦方向的偏差是(1.78±0.18)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.89±0.21)mm;比较10例宫颈癌组织及癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱,未匹配总点数为156±18,对31个差异蛋白质点进行肽质指纹图分析,初步鉴定了8个与肿瘤基因、细胞周期调控、信号转导等有关的蛋白质.结论:建立了分辨率高且重复性较好的人宫颈癌组织与癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱,并成功鉴定出部分与宫颈癌癌变相关的差异表达的蛋白质,为筛选宫颈癌特异性的诊断分子标志物奠定了的基础. 展开更多
关键词 宫颈癌 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离质谱 蛋白质组
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金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药机制的初步研究 被引量：1
5
作者 陈仁 范学工 +3 位作者 代洪 张艳 陈朝晖 唐祖胜 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第10期880-882,共3页
目的了解金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药机制。方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准,应用琼脂平板稀释法及MRSA特异性基因mecA的扩增鉴定MRSA,诱导产生万古霉素耐药株,然后以超声破碎法提取外膜蛋白(OMP),经聚丙烯酰胺凝胶电... 目的了解金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药机制。方法按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准,应用琼脂平板稀释法及MRSA特异性基因mecA的扩增鉴定MRSA,诱导产生万古霉素耐药株,然后以超声破碎法提取外膜蛋白(OMP),经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析OMP的成分,分光光度法扫描仪测定相关膜蛋白的相对含量。结果耐万古霉素金葡菌菌株中,分子量为45KD和14KD的膜蛋白的相对含量较金葡菌ATCC25923株和对万古霉素敏感的MRSA少。结论提示45KD和14KD膜蛋白减少或缺失与金葡菌对万古霉素耐药可能有密切关系。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 细菌膜蛋白质 万古零素
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冷藏对新鲜冰冻血浆诱导内皮细胞迁移的影响及其分子机制研究 被引量：1
6
作者 张春芳 谭潭 +3 位作者 李建国 马虹英 陈主初 段朝军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第6期528-535,共8页
探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首... 探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首先采用ELISA法分析当天解冻FFP(FFP Day 0)和解冻后4℃冷藏1～5天FFP中TGF-β含量,迁移实验及Western blot分析比较FFP(Day 0)和FFP(Day 5)处理人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)后的细胞迁移率及TGF-β信号通路Smad2和Smad3磷酸化,进一步采用ALK5-siRNA和ALK5特异性抑制剂阻断细胞TGF-βⅠ型受体ALK5的活性,分析下调TGF-β/Smad2/3信号传导后的内皮细胞迁移率.结果显示:随着冷藏时间的延长,FFP中TGF-β1水平逐渐增加,其增加率为244.31 ng/(L.d)(P<0.05);与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导内皮细胞HPMECs的TGF-β信号通路Smad2/3磷酸化显著增加(P<0.05);不管是FFP(Day 0)还是FFP(Day 5)体外均能诱导内皮细胞迁移,与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导细胞迁移能力显著降低(P<0.05);阻断TGF-βⅠ型受体ALK5的活性、下调Smad 3信号传导可恢复FFP(Day5)诱导细胞迁移能力.上述结果表明,FFP能显著诱导内皮细胞迁移,4℃冷藏增加FFP中TGF-β1水平并增加内皮细胞TGF-β1信号传导,进而降低FFP诱导内皮细胞迁移.提示,FFP复苏疗效的提高可能与增加内皮细胞迁移有关,冷藏导致内皮细胞迁移降低进而降低FFP复苏疗效. 展开更多
关键词 冷藏 新鲜冰冻血浆 内皮细胞 迁移 TGF—β/ALK5/Smad2/3
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新鲜冰冻血浆(FFP)通过AMPK/Akt/eNOS通路促肺内皮细胞一氧化氮释放及机制研究 被引量：1
7
作者 段朝军 何丹 +2 位作者 段红艳 刘斌 刘浩 《湖南大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第7期65-69,共5页
探讨新鲜冰冻血浆(FFP)对人肺正常微血管内皮细胞(HPMECs)一氧化氮(NO)释放的影响及其机制.采用NO/Nitrite/Nitrate分析法检测了体外培养内皮细胞HPMECs经FFP处理后不同时间点细胞上清NO含量.结果显示:与培养基空白对照组相比,FFP显著... 探讨新鲜冰冻血浆(FFP)对人肺正常微血管内皮细胞(HPMECs)一氧化氮(NO)释放的影响及其机制.采用NO/Nitrite/Nitrate分析法检测了体外培养内皮细胞HPMECs经FFP处理后不同时间点细胞上清NO含量.结果显示:与培养基空白对照组相比,FFP显著增加内皮细胞NO生成;采用磷酸化蛋白激酶抗体芯片和免疫印迹方法筛选和鉴定FFP处理后内皮细胞相关蛋白激酶磷酸化,结果为FFP显著增加内皮细胞AMPKα1,Akt1和eNOS蛋白的磷酸化.进一步分别采用Compound C(AMPK抑制剂),LY294002(PI3K/Akt抑制剂)或L-NAME(NOS抑制剂)预处理细胞,阻挡AMPKα1/Akt1/eNOS信号转导通路.结果显示上述三种抑制剂均能抑制FFP诱导eNOS激活和NO生成,表明AMPKα1/Akt1/eNOS信号转导通路介导FFP诱导NO分泌参与血管保护. 展开更多
关键词 一氧化氮 新鲜冰冻血浆 一氧化氮合成酶 内皮细胞
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骨形态发生蛋白-13生物学功能及其在肝病研究中的进展(英文) 被引量：2
8
作者 申竑 Frank J.Burczynski +1 位作者 巩跃文 LI Yining 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-5,共5页
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是属于TGF-β超家族成员的一组重要细胞因子,参与细胞分化、增殖和胚胎发育等生理过程。不同的BMPs在脊椎动物中具有不同的功能。在信号通路上,BMPs的功能主要由Smad家族蛋白介导,后... 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)是属于TGF-β超家族成员的一组重要细胞因子,参与细胞分化、增殖和胚胎发育等生理过程。不同的BMPs在脊椎动物中具有不同的功能。在信号通路上,BMPs的功能主要由Smad家族蛋白介导,后者包括8个成员,其中Smad1,Smad5和Smad8介导BMPs的信号转导,而Smad2和Smad3介导TGF-β的信号转导。虽然一些BMPs如BMP4和BMP9存在于肝脏,但肝脏中是否存在BMP13尚未有报道。BMP13,又名生长分化因子-6(growth differentiation factor 6,GDF6)或软骨来源的形态生成蛋白-2(cartilage-derivedmorphogenetic protein 2,CDMP2)。研究表明:BMP13参与骨和肌腱的修复,可刺激腱样细胞的增殖。笔者最新的研究结果揭示肝脏组织中有BMP13的表达并在肝脏代谢异常时具有差异表达。本文主要介绍BMP13生物功能研究的最新进展,尤其是BMP13在肝脏中的作用。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 SMAD 骨 肌腱
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长链非编码RNA在肿瘤研究中的进展 被引量：5
9
作者 何丹 段朝军 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2012年第4期297-301,共5页
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是细胞中一类转录本长度超过200个核苷酸的非编码RNA分子,本身并不编码蛋白或很少有编码蛋白质功能,在哺乳动物基因组普遍被转录。起初认为它是转录过程中的副产物,不具有生物学功能。随着研... 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是细胞中一类转录本长度超过200个核苷酸的非编码RNA分子,本身并不编码蛋白或很少有编码蛋白质功能,在哺乳动物基因组普遍被转录。起初认为它是转录过程中的副产物,不具有生物学功能。随着研究的深入,新的lncRNA不断被发现,越来越多的证据显示lncRNA具有复杂的生物学功能,并与人类疾病的发生关系密切。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 肿瘤 生物标志物
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鼻咽癌中EGFR调控APP信号通路的初步研究及其意义 被引量：1
10
作者 汤参娥 邹海燕 +5 位作者 李萃 易红 冯雪萍 彭芳 陈主初 肖志强 《山西医科大学学报》 CAS 2009年第8期706-708,F0003,共4页
目的探索鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)调控β淀粉样蛋白前体(amyloid beta A4protein,APP)的信号通路及其临床意义。方法采用转化生长因子(transforming growth fac... 目的探索鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)调控β淀粉样蛋白前体(amyloid beta A4protein,APP)的信号通路及其临床意义。方法采用转化生长因子(transforming growth factors-α,TGF-α)诱导CNE2细胞24h作为研究模型,分别采用EGFR酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂PD153035,MAPK抑制剂PD98059,PI3K抑制剂Wortmannin处理2h再用TGF-α作用24h作为实验组,Western blot检测阻断剂APP蛋白的表达和分泌变化情况。免疫组化检测EGFR和APP蛋白在NPC与慢性鼻咽炎症上皮组织中的表达差异。结果PD153035+TGF-α组APP蛋白表达与分泌有所下调,wortmannin+TGF-α组APP蛋白下调明显,PD98059+TGF-α组APP表达无明显变化。EGFR和APP在NPC组织中的表达高于鼻咽炎症上皮组织,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论NPC中APP蛋白主要受EGFR信号通路中的PI3K调控,EGFR和APP与NPC的发生有关。 展开更多
关键词 鼻咽癌 表皮生长因子受体 淀粉样蛋白前体 信号通路
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肾移植随访患者干预前后生活质量的研究
11
作者 张红 苏涛 +3 位作者 丁翔 姚慧 耿春密 刘玲 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第32期109-112,共4页
目的通过生活质量的干预研究,探讨提高肾移植患者生活质量的方法。方法通过问卷调查,分析肾移植患者生活质量的影响因素,评价干预前后肾移植患者生活质量的变化。结果干预策略实施半年后,生理维度、心理维度、社会维度、治疗维度、生活... 目的通过生活质量的干预研究,探讨提高肾移植患者生活质量的方法。方法通过问卷调查,分析肾移植患者生活质量的影响因素,评价干预前后肾移植患者生活质量的变化。结果干预策略实施半年后,生理维度、心理维度、社会维度、治疗维度、生活质量总评分差异均有统计学意义(P=0.000)。结论针对性的干预措施能有效提高肾移植患者的生活质量。 展开更多
关键词 肾移植 随访 干预 生活质量
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气相色谱-质谱法同时测定乳酸和7种糖的研究 被引量：10
12
作者 徐正华 李晓宁 +4 位作者 易伦朝 谭斌斌 梁逸曾 曾茂茂 何君 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期142-146,共5页
建立了气相色谱-质谱(GC-MS)法同时测定乳酸和葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸、果糖、半乳糖、乳糖、1,5-脱水山梨醇、山梨醇7种糖的方法。选择核糖醇为内标,进样前先进行肟化反应再进行硅烷化反应。采用DB-5熔融石英毛细管柱,升温程序为初始温... 建立了气相色谱-质谱(GC-MS)法同时测定乳酸和葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸、果糖、半乳糖、乳糖、1,5-脱水山梨醇、山梨醇7种糖的方法。选择核糖醇为内标,进样前先进行肟化反应再进行硅烷化反应。采用DB-5熔融石英毛细管柱,升温程序为初始温度70℃,保持4min,以8℃/min的速率升至300℃,保持3min。在优化测定条件下各对照品得到良好分离,且在测定范围内具有良好线性关系(r2>0.9983),平均加标回收率为74.5%～104.2%,日间相对标准偏差(RSD)与日内RSD小于9.2%。该方法简便、灵敏度高,已成功应用于2型糖尿病大鼠和健康大鼠血清中乳酸和糖类物质的定性定量分析。 展开更多
关键词 气相色谱-质谱 乳酸 糖 血清 2型糖尿病
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EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制研究 被引量：1
13
作者 程世越 李智 +1 位作者 卢建红 左埒莲 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第23期21-26,共6页
目的探讨EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制。方法在鼻咽癌细胞中转染EBERs,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中转移相关指标(如MMP)的相对表达量,同时Transwell检测EBERs对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。构建敲除EBERs的BAC-EBV(p2089)质粒,转... 目的探讨EBERs对鼻咽癌转移的作用及其机制。方法在鼻咽癌细胞中转染EBERs,荧光定量PCR(RT-PCR)检测细胞中转移相关指标(如MMP)的相对表达量,同时Transwell检测EBERs对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。构建敲除EBERs的BAC-EBV(p2089)质粒,转染鼻咽癌细胞,检测细胞的转移能力。转染EBERs后Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关指标,免疫荧光检测ZO-1的表达。结果鼻咽癌细胞转染EBERs质粒或p2089质粒后,RT-PCR检测发现转移相关指标表达升高,Transwell检测结果显示细胞迁移能力增强,而在干扰EBERs或转染敲除EBERs的p2089质粒后,转移能力减弱。转染EBERs后E-cadherin表达降低,Vimentin升高,同时免疫荧光检测发现ZO-1表达降低。结论 EBERs可能通过促进EMT高表达而促进鼻咽癌的转移。 展开更多
关键词 EBERs 鼻咽癌 转移 上皮间质转化
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钙信号与阿尔茨海默病研究进展 被引量：1
14
作者 卢北玲 李闻文 周军 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2017年第10期2567-2570,共4页
阿尔茨海默病（AD）按有无家族史可分为散发型（SAD）和家族遗传型（FAD）两种类型，临床以记忆障碍、语言障碍、失认、失用、淡漠及性格改变等为主要特征，目前越来越多的研究发现钙信号在AD病理进展中发挥重要作用，
关键词 阿尔茨海默病 钙信号 Β-淀粉样蛋白 钙超载
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小细胞肺癌细胞系NCI-H446蛋白质表达谱的建立 被引量：19
15
作者 李茂玉 肖志强 +7 位作者 李萃 吴晓英 冯雪萍 易红 李建玲 陈主初 陈平 梁宋平 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1116-1121,共6页
背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系N... 背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳技术(IPG-DALT)分离NCI-H446细胞总蛋白,凝胶银染显色,ImageMaster2D图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶平均蛋白质点数为1506±74,匹配点数为1412±56,匹配率达93.4%,三块胶蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是(0.96±0.27)mm,在SDS-PAGE方向偏差是(1.24±0.41)mm。胶内酶解-肽质指纹图分析鉴定了58个蛋白质,其中有原癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:建立了小细胞肺癌细胞系NCI-H446双向电泳参考图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 NCI 癌细胞系 蛋白质表达谱 双向凝胶电泳 相关蛋白 侵袭性 固相PH梯度 MALDI-TOF 双向电泳
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幽门螺杆菌对肝癌细胞HepG2的体外细胞毒作用 被引量：16
16
作者 陈仁 范学工 +2 位作者 黄燕 李宁 陈朝晖 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第1期44-49,共6页
背景与目的:幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因,人和动物胃肠外疾病亦与HP感染密切相关,本研究探讨HP对肝癌细胞株HepG2的形态和生长的影响。方法:利用体外细胞培养技术,将不同浓度的cagA(+)HP和cagA(... 背景与目的:幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因,人和动物胃肠外疾病亦与HP感染密切相关,本研究探讨HP对肝癌细胞株HepG2的形态和生长的影响。方法:利用体外细胞培养技术,将不同浓度的cagA(+)HP和cagA(-)HP与HepG2共同培养,应用细胞形态学观察、DNA电泳、透射电镜、MTT检测、酶学检测等技术,观察HP菌液对体外培养HepG2细胞的形态、生长速度和酶学改变的影响。结果:(1)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大和作用时间的延长,HepG2细胞形态由贴壁的梭形变为圆形,贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,并且细胞周围出现碎片;(2)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大,可见DNA条带;(3)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大和作用时间的延长,HepG2细胞核染色质浓缩,呈新月形聚集于核缘,胞质浓缩,可见空泡;(4)随着cagA(+)HP菌液浓度的增大,对HepG2细胞杀伤率逐渐增强(P<0.01);(5)与cagA(+)HP菌液共同孵育后,HepG2细胞出现ALT、LDH升高(P<0.01);(6)未发现cagA(-)HP对陈仁,等.幽门螺杆菌对肝癌HepG2细胞生长的影响。结论:cagA(+)HP对HepG2细胞具有明显的体外细胞毒作用,其毒性作用与HP菌液的浓度和作用时间呈明显正相关。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 肝癌 HEPG2 体外细胞毒作用 癌细胞
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应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质 被引量：5
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作者 易红 程爱兰 +7 位作者 黄卫国 张鹏飞 李茂玉 彭芳 李峰 李萃 陈主初 肖志强 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期375-383,共9页
目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal ep... 目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据。方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平。结果:建立了LCM纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失。Western印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致。结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础。 展开更多
关键词 鼻咽癌 激光捕获显微切割技术 蛋白质组学 二维凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 电喷雾电离串联质谱 免疫印迹 组织芯片
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人支气管上皮癌变各阶段组织蛋白质双向电泳图谱的差异分析 被引量：10
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作者 吴晓英 肖志强 +6 位作者 陈主初 李萃 李建玲 冯雪萍 易红 梁宋平 陈平 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第3期201-206,211,共7页
目的 :探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制。方法 :应用脱氧胆酸 三氯醋酸 (deoxycholate trichloroaeticacid ,DOC TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质 ,采用固相pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two dimens... 目的 :探讨肺鳞癌癌前病变恶性转化的机制。方法 :应用脱氧胆酸 三氯醋酸 (deoxycholate trichloroaeticacid ,DOC TCA)法提纯支气管上皮癌变各阶段组织总蛋白质 ,采用固相pH梯度 (immobilizedpHgradient,IPG)双向凝胶电泳 (two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)分离总蛋白质 ,凝胶经银染显色后 ,ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质 ,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (matrix assistedlaserdesorption/ionizationtime of flightmassspectrometry ,MALDI TOF MS)得到相应的肽质指纹图谱 (peptidemassfingerprint,PMF) ,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果 :①重复性检测表明同一例鳞状上皮化生组织的三块凝胶的平均点数为 12 16± 75,平均匹配点数为 10 82± 6 7,匹配率达 89.3% ,且 3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性 ,不同胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是 (0 .86 5± 0 .2 4 7)mm ,在SDS PAGE方向上的偏差为 (0 .971± 0 .10 4 )mm ,由此获得了分辨率较高、重复性较好的人支气管上皮癌变各阶段组织的双向凝胶电泳图谱 ,正常上皮、鳞状化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为 1190± 36、12 2 7± 39、12 72± 4 1、132 6± 5 2 ;? 展开更多
关键词 人支气管上皮 癌前病变 肺鳞癌 双向凝胶电泳 质谱分析 质量 蛋白质组
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通心络对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞活力及组织因子的影响 被引量：14
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作者 马琦琳 孙明 +5 位作者 杨天■ 李元建 汤参娥 彭振宇 贺石林 陈方平 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期485-489,共5页
目的:研究通心络对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheli-alcells,HUVECs)细胞活力(cell viability)及组织因子(tissue factor,TF)的影响和其作用机制。方法:分别用5%,10%,20%的通心络含药血浆预... 目的:研究通心络对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheli-alcells,HUVECs)细胞活力(cell viability)及组织因子(tissue factor,TF)的影响和其作用机制。方法:分别用5%,10%,20%的通心络含药血浆预处理内皮细胞30min后加入AngⅡ10-6mol/L孵育HUVECs24h,观察细胞活力变化的量效关系。选择一个最佳浓度的通心络含药血浆预处理内皮细胞30min后加入AngⅡ10-6mol/L孵育HU-VECs24h观察TF,AngⅡ1型受体(AT1) mRNA水平,一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮浓度(NO),并予NOS抑制剂(L-NAME)预处理内皮细胞30min后,再加入通心络含药血浆和AngⅡ,观察孵育24h细胞活力,TF,AT1,NOS及NO变化。结果:通心络能显著提高AngⅡ诱导的血管内皮细胞活力,以10%浓度作用最明显,通心络能降低TF及AT1水平及提高NOS活性和NO浓度;L-NAME可明显抑制通心络对血管内皮的作用。结论:通心络可能通过上调NOS-NO通路提高AngⅡ诱导的内皮细胞活力及抗血栓能力。 展开更多
关键词 通心络 血管紧张素Ⅱ 内皮细胞 细胞活力 组织因子 AngⅡ1型受体 NOS-NO通路
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siRNA抑制DJ-1基因表达对肺鳞癌SK-MES-1细胞生物学行为的影响 被引量：7
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作者 魏旺丽 汤参娥 +2 位作者 詹显全 易红 李萃 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期7-13,共7页
目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1中的表达,探讨DJ-1表达下调对SK-MES-1细胞生物学行为的影响,以期探讨DJ-1基因的功能。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体(重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框),感染SK-ME... 目的:采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞SK-MES-1中的表达,探讨DJ-1表达下调对SK-MES-1细胞生物学行为的影响,以期探讨DJ-1基因的功能。方法:构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体(重组慢病毒中有绿色荧光蛋白真核表达框),感染SK-MES-1细胞(DJ-1siRNA组),并设立慢病毒载体对照组(Control-siRNA组)及空白对照组。荧光显微镜下观察并计算感染效率,Western印迹检测各组细胞中DJ-1蛋白表达水平,M法检测细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞周期,Transwell小室实验检测细胞体外迁移侵袭能力。结果:与Control-siRNA组及空白对照组比较,DJ-1 siRNA组的DJ-1蛋白表达受到抑制、细胞增殖能力明显减弱(P<0.01)、G1/G2期细胞数增多和S期细胞数减少表明细胞周期受阻、细胞体外迁移和侵袭能力显著减弱(P<0.01)。结论:DJ-1基因具有促进肺鳞癌细胞SK-MES-1细胞的增殖和体外迁移侵袭的作用。 展开更多
关键词 肺癌 DJ-1 SIRNA 细胞增殖 细胞周期 细胞迁移
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