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高危型HPV在宫颈癌发生中的作用 被引量：5
1
作者 刘水平 蒋海鹰 +2 位作者 郑晖 颜亚晖 冯德云 《实用预防医学》 CAS 2005年第5期1023-1024,共2页
本文利用PCR技术检测了44例宫颈癌患者和15例慢性宫颈炎患者病变组织中高危型HPV(16,18,31,33)的感染率,发现44例宫颈癌患者高危型HPV的阳性率高达91%(40/44),其中HPV16型感染率54.55%(24/44),HPV18型感染率18.2%(8/44),HPV31型感染率13... 本文利用PCR技术检测了44例宫颈癌患者和15例慢性宫颈炎患者病变组织中高危型HPV(16,18,31,33)的感染率,发现44例宫颈癌患者高危型HPV的阳性率高达91%(40/44),其中HPV16型感染率54.55%(24/44),HPV18型感染率18.2%(8/44),HPV31型感染率13.6%(6/44),HPV33型感染率4.55%(2/44);15例慢性宫颈炎患者有2例感染HPV16型。结果提示HPV16型是宫颈癌发生最常见的基因型,其次为HPV18型和HPV31型,故对育龄妇女定期进行高危型HPV感染的普查,在早期预防宫颈癌的发生具有十分重要的意义;联合采用分子生物学和宫颈脱落细胞学技术进行即定期普查,既能提高阳性率,又能对感染高危型HPV的慢性宫颈炎患者进行早期的有效预防。 展开更多
关键词 宫颈癌 人类乳头状瘤病毒 多聚酶链式反应
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大鼠脑组织中高质量RNA的提取 被引量：4
2
作者 刘水平 罗志勇 文斌 《实用预防医学》 CAS 2005年第3期511-512,共2页
目的为探讨Trizol试剂提取大鼠脑组织高质量RNA的最适取样量范围。方法在1mLTrizol试剂中分别加入100,50,25,12.5mg大鼠脑组织,提取其总RNA。结果每毫升Trizol中加入组织12.5mg时,提取的RNA完整性最好,纯度亦高。结论从大鼠脑组织中提... 目的为探讨Trizol试剂提取大鼠脑组织高质量RNA的最适取样量范围。方法在1mLTrizol试剂中分别加入100,50,25,12.5mg大鼠脑组织,提取其总RNA。结果每毫升Trizol中加入组织12.5mg时,提取的RNA完整性最好,纯度亦高。结论从大鼠脑组织中提取到高质量RNA,每毫升Trizol中加入脑组织最适取样量范围为10～20mg。 展开更多
关键词 人鼠脑组织 RNA 提取 TRIZOL 方法学
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5′和3′末端快速扩增法克隆多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2 被引量：3
3
作者 石奕武 罗赛群 胡维新 《解剖学研究》 CAS 2006年第1期8-11,共4页
目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与N... 目的在多发性骨髓瘤患者中KIAA0058基因序列表达明显下调,从正常人骨髓单个核细胞中克隆该序列全长cDNA,以期更好地研究该序列结构,获得其功能信息。方法采用末端快速扩增法(RACE),进行多轮RT-PCR后,对PCR产物进行测序、拼接、证实,与NCBI核酸数据库进行比对。结果该序列全长cDNA长度为1913bp,登陆号为AY430097,与来源于人睾丸cDNA文库的序列DAZAP2同源性高达99%以上。该序列具有较短的5′非翻译区及长的3′非翻译区,开放阅读框序列从第84位碱基至590位碱基,具有poly(A)尾。结论利用RACE法,从骨髓单个核细胞中成功克隆了DAZAP2全长cDNA。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 末端快速扩增法 骨髓单个核细胞 无精征缺失基因
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多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2蛋白高效表达和纯化 被引量：1
4
作者 石奕武 陈琼华 +1 位作者 罗赛群 胡维新 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2005年第5期376-378,共3页
目的在前期的研究中,DAZAP2基因在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者中表达明显下调,可能为MM的负性基因.须进一步获得DAZAP2蛋白,制备抗体,从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能.方法将原核重组质粒pQE30-DAZAP2转化大... 目的在前期的研究中,DAZAP2基因在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)患者中表达明显下调,可能为MM的负性基因.须进一步获得DAZAP2蛋白,制备抗体,从而在蛋白水平上研究DAZAP2的表达、结构和功能.方法将原核重组质粒pQE30-DAZAP2转化大肠杆菌,阳性菌株经1 mmol/L IPTG诱导表达目的蛋白,再经过纯化和透析.结果IPTG诱导4 hr时,得到大量重组目的蛋白,占可溶蛋白的20%左右,经过Ni-NTA层析柱纯化,获得分子量为17kD的DAZAP2蛋白浓度为0.97 mg/ml.结论DAZAP2蛋白获得高效表达,并且建立快速简便的纯化方法,目的蛋白可以用于下一步的实验. 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 DAZAP2蛋白 高效表达 纯化
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多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2表达载体的构建
5
作者 石奕武 胡维新 《实用医学杂志》 CAS 2006年第23期2711-2712,共2页
目的:构建DAZAP2原核表达重组质粒,以获得DAZAP2蛋白用于制备抗DAZAP2抗体。方法:提取一正常人骨髓总RNA,逆转录后,以其作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框,采用定向克隆法与原核表达载体连接,转染大肠杆菌,酶切及测序分析。结果:获得... 目的:构建DAZAP2原核表达重组质粒,以获得DAZAP2蛋白用于制备抗DAZAP2抗体。方法:提取一正常人骨髓总RNA,逆转录后,以其作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框,采用定向克隆法与原核表达载体连接,转染大肠杆菌,酶切及测序分析。结果:获得阳性重组质粒,读框没有发生改变。结论:成功获得DAZAP2的原核表达重组质粒,可以用于下一步实验。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 原核表达载体 重组
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多发性骨髓瘤负性相关基因DAZAP2的真核表达及定位
6
作者 石奕武 陈盛强 胡维新 《现代临床医学生物工程学杂志》 2006年第3期284-287,共4页
目的构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体,对基因进行细胞定位。方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA,以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF)。采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α... 目的构建无精症相关蛋白2(DAZAP2)真核表达重组载体,对基因进行细胞定位。方法提取1例正常人骨髓单个核细胞总RNA,以逆转录产物作为模板,PCR扩增DAZAP2的开放阅读框(ORF)。采用定向克隆法与真核表达载体pEGFP-N1连接,转染大肠杆菌DH5α,经双酶切及测序证实。脂质体法转染COS7细胞后,运用Western印迹及免疫定位技术检测表达产物。结果测序证实真核表达重组质粒的阅读框没有发生改变,转染重组质粒的细胞表达融合蛋白DAZAP2-EGFP,主要在COS7细胞质中表达。结论成功获得了DAZAP2真核表达重组质粒并有效地表达重组融合蛋白,DAZAP2主要定位在细胞质中的泡状分泌结构上。 展开更多
关键词 DAZAP2基因 真核表达 定位
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